申请/专利权人：至善时代智能科技(北京)有限公司;至微生物智能科技(厦门)有限公司

申请日：2021-03-10

公开（公告）日：2021-04-09

公开（公告）号：CN112626183A

主分类号：C12Q1/6851(20180101)

分类号：C12Q1/6851(20180101);C12Q1/02(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2021.06.29#授权;2021.04.27#实质审查的生效;2021.04.09#公开

摘要：一种检测紫外照射后基因组损伤的方法，由双通道TaqMan荧光探针定量检测微生物基因组损伤，包括以下制备步骤：用相应培养基培养得到所需微生物培养液；定量取得所述微生物培养液经裂解离心获得上清液分别作为对照组和实验组模板进行荧光定量PCR扩增，其中实验组培养液经一定紫外强度下照射；采集所述第一对照组、第二对照组和实验组各子组的荧光信号CT值；进而得到第二对照组各子组的ΔCTCK值的标准偏差s和检测限L、实验组各子组CT差值（ΔCTuv）和第一对照组各子组的CT差值的平均值（ΔCTCK‑）；ΔΔCT=ΔCTuv‑ΔCTCK‑作为实验组损伤判据。所述荧光探针定量检测微生物基因组损伤的方法具有较强的特异性和较高的灵敏度，能够用于快速检测紫外照射后的微生物基因组损伤的鉴定。

主权项：1.一种检测紫外照射后基因组损伤的方法，其特征在于，通过双通道TaqMan探针荧光定量PCR技术检测微生物基因组损伤，包括以下反应步骤：步骤1，用相应培养基培养得到所需微生物培养液；步骤2，定量取得一定体积所述微生物培养液作为第一培养液，不做额外处理；定量取得一定体积所述微生物培养液作为第二培养液，在一定紫外强度下照射一段时间；步骤3，向所述第一培养液和第二培养液分别加入裂解原料配制成裂解混合溶液，分别裂解3-10min，在转速6000-10000rpm下离心5-10min，获得所述第一培养液和第二培养液的上清液；所述第一培养液上清液作为第一对照组双通道TaqMan探针荧光定量PCR的模板；所述第二培养液上清液作为第一实验组双通道TaqMan探针荧光定量PCR的模板；步骤4，分别量取定量的步骤3中所述第一对照组的PCR模板，分为相同体积的若干子组并分别加入独立的PCR扩增反应体系中；任一个加入所述第一对照组的模板的PCR扩增反应体系内同时进行长片段和短片段的扩增；所述PCR扩增反应体系组成包括，10X浓度的Taqbuffer、1-5mM的Mg2+盐、0.2-0.4uM的第一探针、0.2-0.4uM的第二探针、0.2mM的dNTPs、0.2-0.4uM的短片段引物对P1、0.2-0.4uM的长片段引物对P2、适量的DNA聚合酶及灭菌水；所得各子组PCR扩增反应体系反应产物共同构成所述第一对照组；步骤5，分别量取定量的步骤3中所述第一实验组的PCR模板，分为相同体积的若干子组并分别加入独立的PCR扩增反应体系中；任一个加入所述第一实验组的模板的PCR扩增反应体系内同时进行长片段和短片段的扩增；所述PCR扩增反应体系组成包括，10X浓度的Taqbuffer、1-5mM的Mg2+盐、0.2-0.4uM的第一探针、0.2-0.4uM的第二探针、0.2mM的dNTPs、0.2-0.4uM的短片段引物对P1、0.2-0.4uM的长片段引物对P2、适量的DNA聚合酶及灭菌水；所得各子组PCR扩增反应体系反应产物共同构成所述第一实验组；步骤6，使用所述双通道探针采集所述第一对照组和所述第一实验组中各子组的荧光信号CT值；步骤7，所述第一对照组各子组的CT差值计算方法为ΔCTCK=CT长-CT短；所述第一实验组各子组的CT差值计算方法为ΔCTuv=CT长-CT短；根据ΔΔCT=ΔCTuv-ΔCTCK-判断所述第一实验组各子组微生物基因组DNA损伤程度；其中所述ΔCTCK-为第一对照组各子组数值的平均值。

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