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【发明公布】一种富硒螺旋藻蛋白分离纯化的方法_广西大学_202011591415.2 

申请/专利权人:广西大学

申请日:2020-12-29

公开(公告)日:2021-04-13

公开(公告)号:CN112645999A

主分类号:C07K1/14(20060101)

分类号:C07K1/14(20060101);C07K1/18(20060101);C07K1/30(20060101);C07K1/34(20060101);C07K1/36(20060101)

优先权:

专利状态码:有效-授权

法律状态:2023.07.18#授权;2021.04.30#实质审查的生效;2021.04.13#公开

摘要:本发明公开了一种富硒螺旋藻蛋白分离纯化的方法,包含以下操作步骤:1取藻粉,加入PBS缓冲液,反复冷冻、融解,超声,得到藻细胞破碎液,离心,取上清液,盐析至饱和度,离心,获得粗蛋白,加PBS缓冲液溶解粗蛋白,透析脱盐后真空冷冻干燥,得到富硒螺旋藻总蛋白粉末;2加PBS缓冲液溶解,超声,离心,过滤,收集滤液得富硒螺旋藻蛋白溶液;3选择弱阴离子DEAE作为离子交换剂,梯度洗脱分离样品。本发明方法能够分离出5个蛋白组,分离效果好,纯度高,总蛋白含硒量高达66.15%;进一步的本发明分离出的5个蛋白组份,其抗氧化活性具有显著差异,本发明可分离出活性高的目的蛋白,操作相对简洁,成本相较低。

主权项:1.一种富硒螺旋藻蛋白分离纯化的方法,其特征在于,包含以下操作步骤:1取藻粉,加入PBS缓冲液,冷冻,融解,反复冷冻、融解,超声裂解藻体,得到藻细胞破碎液,离心所得藻细胞破碎液,取上清液,用硫酸铵在过夜盐析至饱和度,离心,收集沉淀获得粗蛋白,向粗蛋白中加入PBS缓冲液溶解粗蛋白,透析脱盐后真空冷冻干燥,得到富硒螺旋藻总蛋白粉末;2称取步骤1所得富硒螺旋藻总蛋白粉末至PBS缓冲液,溶解,超声促溶后离心,再过滤上清液,收集滤液获得富硒螺旋藻蛋白溶液;3选择弱阴离子DEAE作为离子交换剂,用PBS缓冲液平衡层析柱,将40mL3.0mgmL富硒螺旋藻蛋白溶液上柱,先用PBS缓冲液洗脱结合柱子,再依次分别用0.12M、0.2M、0.4M、0.6M、0.8M的NaCl-PBS缓冲液梯度洗脱分离样品,以洗脱体积为横坐标,波长280nm处吸光度为纵坐标,绘制蛋白洗脱曲线,收集同一个NaCl-PBS缓冲液洗脱梯度的样品作为一个组份,即0.12M、0.2M、0.4M、0.6M、0.8M的NaCl-PBS分别对应Se-SP1,Se-SP1,2,Se-SP3,Se-SP4,Se-SP5,即可分离出5个蛋白组,浓缩、透析脱盐,真空冷冻干燥,得到纯化的含硒蛋白组份。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 广西大学 一种富硒螺旋藻蛋白分离纯化的方法

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