申请/专利权人：安徽师范大学

申请日：2017-10-13

公开（公告）日：2021-04-13

公开（公告）号：CN107694538B

主分类号：B01J20/285(20060101)

分类号：B01J20/285(20060101);B01J20/30(20060101);B01D15/08(20060101);C08F222/38(20060101);C08F228/02(20060101);C08F8/34(20060101);C08J9/26(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2021.04.13#授权;2018.03.16#实质审查的生效;2018.02.16#公开

摘要：本发明公开了一种嗜硫多孔材料和嗜硫色谱整体材料及其制备方法和应用，该制备方法包括在引发剂和致孔剂存在的条件下，将二乙烯基砜、N,N‑二甲基双丙烯酰胺和2‑巯基烟酸于有机溶剂中进行聚合反应的步骤。本发明通过在引发剂和致孔剂存在的条件下，将二乙烯基砜、N,N‑二甲基双丙烯酰胺和2‑巯基烟酸于有机溶剂中进行聚合反应，形成交联的骨架结构和相互贯穿的通透孔道，将2‑巯基烟酸作为间隔臂通过在自由基聚合反应条件下引入嗜硫多孔材料中，增大了嗜硫多孔材料的比表面积、孔径和渗透率。与现有技术相比，该嗜硫多孔材料对含有二硫键化合物的更优异的富集与分离效果。

主权项：1.一种嗜硫多孔材料的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括在引发剂和致孔剂存在的条件下，将二乙烯基砜、N,N-二甲基双丙烯酰胺和2-巯基烟酸于有机溶剂中进行聚合反应的步骤；所述制备方法包括以下步骤：（1）在引发剂和致孔剂存在的条件下，将二乙烯基砜和2-巯基烟酸进行预反应，得预反应液Y1；（2）将预反应液Y1、N,N-二甲基双丙烯酰胺、致孔剂和有机溶剂接触进行所述聚合反应，得嗜硫多孔材料M1。

全文数据：嗜硫多孔材料和嗜硫色谱整体材料及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及亲和嗜硫材料，具体地，涉及一种嗜硫多孔材料和嗜硫色谱整体材料及其制备方法和应用。背景技术[0002]生命体中的二硫键即S-S键，是肽链内或肽链间两个半胱氨酸的巯基氧化而成的键。二硫键能够让蛋白质中肽链之间变得更加紧密，为维持蛋白质的高级结构，天然构象和生物活性提供了重要的基础。含有二硫键的生物分子在生命科学领域分布非常广泛，包括原核和真核生物的激素、酶、免疫球蛋白、血浆、抑制剂和毒液等，其中的大部分已成为疾病诊断的重要标志物。但是这些样品组成复杂，丰度低，检测难度大。因此，采用合适的方法对其进行富集、浓缩、纯化等前处理，对提高检测灵敏度与消除干扰具有非常重要的意义。[0003]亲和色谱的用途非常广泛（参见《JournalofBiologicalChemistry》1970年第245期第3059-3065页），可用来分离纯化细胞提取物中核酸、蛋白、血浆中抗体、重组蛋白等。嗜硫色谱法就是一类亲和色谱，可有效的富集、浓缩与纯化含二硫键的化合物。嗜硫色谱发展最早于1985年，Porath参见《FEBSletters》1985年第185期第306-310页）。在2004年，Yannick等（参见《JournalofChromatographyB》2004年第808期第51-56页）利用二乙稀基砜在空纤维膜上修饰砜-硫醚基团，成功在复杂体系中富集纯化了含二硫键的IgG。在2005年，Lakhiar等（参见《JournalofChromatographyB》2005年第818期第53-59页）在娃球引入嗜硫基团与乙酰基神经氨酸，对老鼠腹水中的抗体的进行了有效的富集与纯化。[0004]好的色谱分离材料应该具有机械强度高，表面易改性的特点。然而，现有的嗜硫色谱材料存在明显的不足，例如机械性能低无法承受高压，功能基团易流失，重复性差等缺点。毛细管整体柱作为第四代分离介质，不但省去了繁琐填装的过程，而且毛细管整体柱中特有的穿透孔和骨架孔为液体的流动提供了稳定的大孔通道，让对流传质过程代替了缓慢的扩散传质过程，使得传质阻力明显降低。为此，本发明提供一种比表面积大，孔径大，富集效果更好的嗜硫毛细管整体柱的制备方法并考察其应用。发明内容[0005]本发明的目的是提供一种嗜硫多孔材料和嗜硫色谱整体材料及其制备方法和应用，通过该方法制得的嗜硫多孔材料具有更大的比表面积、孔径、更高的渗透性，该嗜硫多孔材料对于含二硫键的化合物具有更好的富集与分离效果。[0006]为了实现上述目的，本发明提供了一种嗜硫多孔材料的制备方法，所述制备方法包括在引发剂和致孔剂存在的条件下，将二乙烯基砜、N，N_二甲基双丙烯酰胺和2-巯基烟酸于有机溶剂中进行聚合反应的步骤。[0007]本发明还提供一种嗜硫多孔材料，根据前文所述的制备方法制备得到。[0008]另外，本发明还提供一种嗜硫色谱整体材料的制备方法，包括前文所述的制备方法，其中，聚合反应在内壁衍生双键的毛细管中进行。[0009]不仅如此，本发明还提供一种嗜硫色谱整体材料，通过前文所述的制备方法制备得到。[0010]另外，本发明还提供一种前文所述的嗜硫多孔材料和或前文所述的嗜硫色谱整体材料在对含二硫键的化合物进行富集与分离中的应用。[0011]通过上述技术方案，本发明通过在引发剂和致孔剂存在的条件下，将二乙烯基砜、N，N_二甲基双丙烯酰胺和2-巯基烟酸于有机溶剂中进行聚合反应，形成交联的骨架结构和相互贯穿的通透孔道，将2-巯基烟酸作为间隔臂通过在自由基聚合反应条件下引入嗜硫多孔材料中，增大了嗜硫多孔材料的比表面积、孔径和渗透率。实现了在高浓度盐存在下，该嗜硫多孔材料可与含有二硫键的化合物上的二硫键发生相互作用，在低浓度盐条件下进行洗脱。该嗜硫多孔材料对含有二硫键化合物的更优异的富集与分离效果。[0012]本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。附图说明[0013]附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：[0014]图1为嗜硫多孔材料的制备机理图；[0015]图2为实施例1中制得的嗜硫多孔材料的傅里叶变换红外光谱图；[0016]图3a是实施例4中制得的嗜硫色谱整体材料放大1200倍的扫描电镜图；[0017]图3⑹是实施例4中制得的嗜硫色谱整体材料放大3000倍的扫描电镜图；[0018]图3c是实施例4中制得的嗜硫色谱整体材料放大6000倍的扫描电镜图；[0019]图4是嗜硫色谱整体材料在应用例1中对含二硫键化合物特异性分离与富集的色谱图；[0020]图5嗜硫色谱整体材料在应用例2中对含二硫键化合物富集效果比较图。具体实施方式[0021]以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。[0022]本发明提供了一种嗜硫多孔材料的制备方法，所述制备方法包括在引发剂和致孔剂存在的条件下，将二乙烯基砜、N，N_二甲基双丙烯酰胺和2-巯基烟酸于有机溶剂中进行聚合反应的步骤。[0023]通过上述技术方案，本发明通过在引发剂和致孔剂存在的条件下，将二乙烯基砜、N，N-二甲基双丙烯酰胺和2-巯基烟酸于有机溶剂中进行聚合反应，形成交联的骨架结构和相互贯穿的通透孔道，将2-巯基烟酸作为间隔臂通过在自由基聚合反应条件下引入嗜硫多孔材料中，增大了嗜硫多孔材料的比表面积、孔径和渗透率。实现了在高浓度盐存在下，该嗜硫多孔材料可与含有二硫键的化合物上的二硫键发生相互作用，在低浓度盐条件下进行洗脱。该嗜硫多孔材料对含有二硫键化合物的更优异的富集与分离效果。[0024]所述引发剂可以为本领域常规使用的引发剂类型，例如，可以为有机过氧化物引发剂、无机过氧化物引发剂、偶氮类引发剂或是氧化还原引发剂，当然，在本发明的一种优选的实施方式中，考虑到反应温度的温和性，所述引发剂可以进一步选择为偶氮类引发剂，这里的具体种类可以根据实际需要进行选择，例如，在本发明的一种更为优选的实施方式中，为了进一步提高引发效率，引发剂为偶氮二异丁腈AIBN、偶氮二异戊腈和偶氮二异丁酸二甲酯中的一种或多种。[0025]这里的有机溶剂可以为本领域常规使用的有机溶剂类型，本领域技术人员可以根据实际需要进行选择，例如，在本发明的一种优选的实施方式中，为了提高共聚反应的产率，有机溶剂为二甲基亚砜、十二醇和丙酮中的一种或多种。[0026]致孔剂可以为本领域常规使用的致孔剂，本领域技术人员可以根据实际需要进行选择，为了增大嗜硫多孔材料的比表面积、孔径和渗透率，优选地，致孔剂为二甲基亚砜。[0027]各原料的用量可以根据实际需要进行调节，在本发明的一种优选的实施方式中，为了使得产率更高且更节约原料，降低生产成本，相对于1重量份的二乙烯基砜，N，N_二甲基双丙烯酰胺的用量为1-5份，2-巯基烟酸的用量为0.1-1份，引发剂的用量为0.07-0.15份，致孔剂的用量为1-10份，有机溶剂的用量为1-10份。[0028]在上述技术方案中，为了使得产率更高，且增大嗜硫多孔材料的比表面积、孔径和渗透率，优选地，所述制备方法包括以下步骤：（1在引发剂和致孔剂存在的条件下，将二乙烯基砜和2-巯基烟酸进行预反应，得预反应液Yl;2将预反应液Y1、N，N-二甲基双丙烯酰胺、致孔剂和有机溶剂接触进行所述聚合反应，得嗜硫多孔材料Ml。[0029]步骤2中在进行聚合反应之前，也可将原料进行混合、脱气，对此，可灵活选择，不影响本发明最终的效果。为了使聚合液均匀以便更好的制备孔径均匀的嗜硫多孔材料，优选地，在进行所述聚合反应之前，还包括对接触后的预反应液Y1、N，N-二甲基双丙烯酰胺、致孔剂和有机溶剂行混合，脱气的步骤。[0030]当然，步骤⑴中进行预反应之前，也可将原料进行混合、脱气，对此，可灵活选择，不影响本发明最终的效果。[0031]在上述技术方案中，混合的方式可以有多种选择，例如搅拌，震荡，涡旋震荡等，可以根据本领域的常规技术手段中选择，只要将原料混合均匀均不影响本发明的结果，在后文的实施例中，不例以渦旋振荡的方式进行。[0032]在本发明中，共聚反应的反应容器可以是本领域中常规的玻璃容器，如烧瓶、试管和色谱柱，但是为了得到特定形状的嗜硫多孔材料，优选地，共聚反应在离心管中进行。这样在离心管中的嗜硫多孔材料为块状，然后通过研磨成粉状的嗜硫多孔材料，该粉状嗜硫多孔材料可以灌注至色谱柱中，从而应用于对混合样品的富集与分离。当然除了块状的嗜硫多孔材料，通过在密封的毛细管中进行共聚反应，这样制得的嗜硫多孔材料便固定于毛细管中，这样的嗜硫多孔材料可以在毛细管中可以进行重复使用。[0033]当然，在本发明的一种更为优选的实施方式中，为了除去制得的嗜硫多孔材料上附着的未反应的小分子物质，进一步提高制得的嗜硫多孔材料的纯度，所述制备方法还包括对步骤⑵中得到的嗜硫多孔材料Ml进行清洗、烘干的步骤。当然，这里的清洗可以选择萃取和淋洗方式，也可以按照本领域常规采用的方式进行操作，例如，萃取可以通过索氏提取器进行操作，淋洗可以通过柱层析的方式进行，当然，本发明并不局限于此，本领域常规使用的此类方法在本发明中均可以使用，本发明在此不一一赘述。[0034]清洗使用的清洗液可以为本领域常规使用的有机溶剂类型，但是，在本发明的一种优选的实施方式中，为了提高对未反应的小分子物质的去除效果，大大提高制得的嗜硫多孔材料的纯度，所述清洗液可以进一步选择为甲醇、乙腈和乙醇中的一种或多种。[0035]在上述反应中，烘干是为了将清洗的溶剂除去，因此，烘干方式和条件可在本领域常规技术手段中灵活选择，本发明在此不一一赘述。[0036]在上述技术方案中，步骤1中的致孔剂和步骤2中的致孔剂的含量可在较宽内调整，只要其添加的总量与前文所述的致孔剂的量相同即可。在本文优选的实施方式中，为了增大嗜硫多孔材料的比表面积、孔径和渗透率，优选地，步骤1与步骤⑵中致孔剂的用量比为：1:1-30。[0037]上述技术方案中的反应条件可以不作限定，在本发明的一种优选的实施方式中，为了使二乙烯基砜和2-巯基烟酸进行充分预反应，优选地，步骤（1中预反应的温度为65-l〇〇°C，预反应时间为l-6h。[0038]当然，上述预反应条件可通过多种方式实现，如水浴加热，油浴加热，恒温箱等，可灵活选择，只要能将温度设定在预定的温度即可实现本发明，在后文的实施例中，选择在水浴锅中加热的方式进行。[0039]当然，步骤2中的反应条件可以不作限定，在本发明的一种优选的实施方式中，为了使预反应液Y1、N，N_二甲基双丙烯酰胺进行充分反应，以进一步提高产率，优选地，步骤2中聚合反应温度为65-100°C，反应时间为6-16h。[0040]在上述技术方案中，脱气条件可在较宽范围内选择，为了使聚合液均匀以便更好的制备组成恒定的嗜硫多孔材料，对聚合液进行超声脱气操作，使之混合更加均匀，优选地，脱气时间为5-60min。[0041]更进一步地，脱气方式可在本领域常规技术手段中进行选择，为了使聚合液均匀以便更好的制备孔径均匀的嗜硫多孔材料，优选地，脱气方式为超声脱气。[0042]本发明还提供一种嗜硫多孔材料，根据前文所述的制备方法制备得到。[0043]本发明通过在引发剂和致孔剂存在的条件下，将二乙烯基砜、N，N_二甲基双丙烯酰胺和2-巯基烟酸于有机溶剂中进行聚合反应，形成交联的骨架结构和相互贯穿的通透孔道，将2-巯基烟酸作为间隔臂通过在自由基聚合反应条件下引入嗜硫多孔材料中，增大了嗜硫多孔材料的比表面积、孔径和渗透率。实现了在高浓度盐存在下，该嗜硫多孔材料可与含有二硫键的化合物上的二硫键发生相互作用，吸附该含有二硫键的化合物，在低浓度盐条件下进行洗脱。该嗜硫多孔材料对含有二硫键化合物的更优异的富集与分离效果。[0044]另外，本发明还提供一种嗜硫色谱整体材料的制备方法，包括前文所述的制备方法，其中，包括前往所述的制备方法，其中，所述的聚合反应在内壁衍生双键的毛细管中进行。[0045]该反应条件及原料的用量如上所述，不同的是，仅将聚合反应使用的容器变更为内壁衍生双键的毛细管，这样，二乙烯砜能够与毛细管内壁上的双键基团进行反应，同时，上文所述的聚合反应也在同时进行，使制得的嗜硫多孔材料固定于毛细管中，这样的嗜硫多孔材料在毛细管中可以进行重复使用。[0046]其中，内壁衍生双键的毛细管可在现有技术中进行常规选择，在优选的实施方式中，使用的内壁衍生双键的毛细管的制备方法为:将清洗后的毛细管在有机溶剂存在的条件下置于3-甲基丙烯酰氧）丙基三甲氧基硅烷中进行接触反应。当然，这里的有机溶剂可以为本领域常规采用的类型，例如，在本发明的一种优选的实施方式中，该有机溶剂可以选自乙腈、丙酮、甲醇和乙醇中的一种或多种。[0047]当然，这里的3_甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷和有机溶剂的用量可以根据实际情况进行选择，例如，在本发明的一种优选的实施方式中，相对于1重量份的所述3_甲基丙烯酰氧丙基三甲氧基硅烷，所述第二有机溶剂的用量为0.5-10重量份。[0048]这里的接触反应条件可以不作限定，为了进一步提高反应速率，在本发明的一种更为优选的实施方式中，所述接触反应可以为置于40-95Γ的条件下放置8_12h。[0049]当然，毛细管的类型可以根据实际需要进行选择，例如，在本发明的一种优选的实施方式中，毛细管的直径可以选自25μπι、75μπι、ΙΟΟμπι、150·Ομπι和250μπι中的一种或多种。[0050]为了使制得的嗜硫色谱整体材料能够更好地富集和分离含有二硫醚基团的化合物和抗体，毛细管的直径可以进一步选择为75μπι。[0051]不仅如此，本发明还提供一种嗜硫色谱整体材料，通过前文所述的制备方法制备得到。[0052]在上述技术方案中，嗜硫多孔材料中的基团与改性毛细管上基团发生了反应，使嗜硫多孔材料与毛细管成为一个整体，这样的嗜硫多孔材料在毛细管中可以进行重复使用。[0053]另外，本发明还提供一种前文所述的嗜硫多孔材料和或前文所述的嗜硫色谱整体材料在对含二硫键的化合物进行富集与分离中的应用。[0054]该嗜硫多孔材料和嗜硫色谱整体材料中的嗜硫多孔材料具有较大的比表面积、孔径和渗透率。实现了在高浓度盐存在下，该嗜硫多孔材料可与含有二硫键的化合物上的二硫键发生相互作用，吸附该含有二硫键的化合物，并在低浓度盐条件下能够洗脱，对含有二硫键化合物的更优异的富集与分离效果。[0055]以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，红外图谱参数通过傅里叶-红外光谱仪IR-21，日本岛津公司）测得，扫描电镜图谱参数和X射线能谱参数均通过场发射扫描电镜（S-4800,日本日立公司Hitachi测得，液相谱图是通过微柱液相TriSep2000,通威分析技术有限公司）测得。电泳参数通过毛细管电泳仪PACEtmMDQ，美国贝克曼公司）测得。[0056]制备例1:内壁衍生双键的毛细管的制备方法[0057]将毛细管依次用Na0H0.1M、水、HCl0.1M、水和甲醇冲洗30min;接着将冲洗后的毛细管的内壁用氮气流吹10.Oh干燥;然后在50°C下，将干燥后的毛细管置于γ-MAPS和CH3OH的混合溶液（γ-MAPSCH30H为vvl:1中接触反应12.Oh，反应结束后用甲醇冲洗毛细管，氮气吹干，得到内壁衍生双键的毛细管。[0058]实施例1[0059]1将50mg的二乙烯基砜、12mg的2-巯基烟酸、4mg的引发剂AIBN和44mg二甲基亚砜置于IOmL离心管中，经涡旋振荡、超声脱气，得到均一澄清的溶液，在95°C的水浴锅中反应4h，制得预反应液Π;[0060]⑵再将N，N-二甲基双丙烯酰胺128mg与预反应液Yl混合，依次加入致孔剂二甲基亚砜303mg和十二醇283.2mg，涡旋、振荡进行充分混合，超声脱气，脱气时间为20min，得到混合均匀的聚合液Jl，继续在95°C水浴锅中反应12h制得块状嗜硫色谱材料Ml，在此过程中，反应容器为离心管；[0061]⑶称取3g块状材料Ml切成小块，放入索氏提取器中，加入50mL甲醇，在100°C下提取24h，冲洗出去残留的致孔剂以及未反应物，得到块状材料M2;将块状材料M2置于真空干燥箱中，在100°C下干燥12h，即可得到嗜硫多孔材料A1，即共聚物P〇IyMBAA-c〇-DVS-MPCA〇[0062]实施例2[0063]1将50mg的二乙烯基砜、2-巯基烟酸5mg、引发剂AIBN3.5mg和二甲基亚砜15mg，于65°C进行预反应，预反应时间为Ih，得预反应液Yl;[0064]2将N，N-二甲基双丙烯酰胺50mg、预反应液Yl、二甲基亚砜50mg和有机溶剂50mg进行涡旋振荡，超声脱气，脱气时间为5min，再于65°C，反应6h，制得嗜硫多孔材料Ml，在此过程中，反应容器为离心管；[0065]3对嗜硫多孔材料Ml用甲醇进行清洗，之后于100°C干燥3h，得嗜硫多孔材料A2。[0066]实施例3[0067]1将50mg的二乙烯基砜、2-巯基烟酸50mg、引发剂AIBN7.5mg和二甲基亚砜45mg，于100°C进行预反应，预反应时间为6h，得预反应液Π;[0068]2将N，N-二甲基双丙烯酰胺250mg、预反应液Y1、二甲基亚砜250mg和有机溶剂500mg进行涡旋振荡，超声脱气，脱气时间为60min，然后于100°C，反应16h，制得嗜硫多孔材料Ml，在此过程中，反应容器为离心管；[0069]3对嗜硫多孔材料Ml用甲醇进行清洗，之后于100°C干燥14h，得嗜硫多孔材料A3〇[0070]实施例4[0071]1将二乙稀基砜12·5mg，2-疏基烟酸3mg，AIBNImg和二甲基亚砜4·4mg混合，经涡旋振荡、超声脱气，得到均一澄清的溶液，在95°C的水浴锅中反应4h，制得预反应液Yl;[0072]2将N，N-二甲基双丙烯酰胺30mg溶于预反应液Yl中，加入致孔剂二甲基亚砜31mg和十二醇70.8mg混合，经渦旋振荡、超声脱气20min，得到均一的澄清的聚合溶液Jl，接着将Jl迅速注入到内壁衍生双键的毛细管中，毛细管的直径为75μπι，长度为15cm和30cm两种，用硅橡胶将毛细管两端封口，在95°C的烘箱中恒温共聚反应12h;[0073]3取出上述毛细管，接在高压液相色谱栗上，以甲醇为流动相冲洗毛细管制得嗜硫色谱整体材料Bl。[0074]实施例5[0075]按照实施例2的方法制备嗜硫色谱整体材料，不同的是，将步骤2中超声脱气后的聚合溶液迅速注入到内壁衍生双键的毛细管中，毛细管的直径为75μπι，长度为15cm和30cm两种，用硅橡胶将毛细管两端封口，在65°C的烘箱中恒温共聚反应6h;取出上述毛细管，接在高压液相色谱栗上，以甲醇为流动相冲洗毛细管制得嗜硫色谱整体材料B2。[0076]实施例6[0077]按照实施例3的方法制备嗜硫色谱整体材料，不同的是，将步骤2中超声脱气后的聚合溶液迅速注入到内壁衍生双键的毛细管中，毛细管的直径为75μπι，长度为15cm和30cm两种，用硅橡胶将毛细管两端封口，在100°C的烘箱中恒温共聚反应16h;取出上述毛细管，接在高压液相色谱栗上，以甲醇为流动相冲洗毛细管制得嗜硫色谱整体材料B3。[0078]对比例1[0079]按照实施例1的方法进行制备嗜硫色谱多孔材料Dl，所不同的是，不再添加2-巯基烟酸，为了保证实验能够继续，将步骤（1和步骤2中的反应温度均改为85°C，且步骤2中致孔剂二甲基亚砜的添加量变更为308mg和十二醇的添加量变更为306.5mg。[0080]对比例2[0081]按照实施例4的方法进行制得嗜硫色谱整体材料D2,所不同的是，不再添加2-巯基烟酸，为了保证实验能够继续，将步骤（1和步骤2中的反应温度均改为85°C，且步骤2中致孔剂二甲基亚砜的添加量变更为30.8mg和十二醇的添加量变更为76.6mg。[0082]检测例1[0083]对实施例1中制备的嗜硫色谱多孔材料Al进行红外光谱检测，结果如图2所示，2-巯基烟酸MPCA具有吡啶基团的特征吸收峰，二乙烯基砜DVS中具有砜基三个特征吸收峰。聚合反应结束后，发现了吡啶基团特征吸收峰，和砜基小幅度蓝移的特征吸收峰，证明2-巯基烟酸与二乙烯基砜成功的发生了聚合反应，再结合N，N-二甲基双丙烯酰胺MBAA的红外光谱检测曲线，证明制备了嗜硫多孔材料PolyMBAA-co-DVS-MPCA。[0084]反应原理如图1所示，2-巯基烟酸在聚合物中起间隔臂的作用。[0085]按照相同的方法对实施例2至实施例6中制备的A2、A3及BI-B3进行检测，均出现图2所示的特征峰。[0086]检测例2[0087]对实施例4中制备的嗜硫色谱整体材料Bl进行扫描电镜检测，结果见图3a、图3⑹和图3c，由该3幅扫描电镜图可知，实施例4中制备的嗜硫色谱整体材料Bl具有均匀连续的孔隙结构，且与毛细管内壁牢牢的结合在一起。[0088]检测例3[0089]对实施例1-实施例3制备的嗜硫色谱多孔材料Al-A3及对比例1中制备的嗜硫色谱多孔材料Dl进行氮吸附法检测，以检测其孔径与比表面积，结果如表1所示，A1-A3比Dl具有更大的比表面积和更大的平均孔径。[0090]表1[0091][0092]检测例4[0093]1微柱液相检测条件，TriSep2000分离系统，配有二梯度洗脱装置，I.OyL定量环。分别取15cm长的毛细管嗜硫色谱整体材料Bl和D2为色谱柱，以水为流动相，逐渐增加流速，记录微柱液相的柱后压力，根据达西公式计算渗透性系数，结果如表2所示。[0094]2由表2可知，添加了2-巯基烟酸的毛细管嗜硫色谱整体材料BI比没有没有添加2-巯基烟酸的毛细管嗜硫色谱整体材料D2的渗透性系数增加接近50%。[0095]表2[0096][0097]制备例2:应用例中待测溶液的制备[0098]10.lmgmL的双（4-羟基苯基）二硫醚（2S-0H标准溶液的制备：在25°C下，将I.Omg的2S-0H溶解于10.OmL的0.5M硫酸钠水溶液含5%的乙腈）中制得0.lmgmL的2S-0H标准溶液。[0099]20·lmgmL的双4-羟基苯基）甲烷2-⑽标准溶液的制备:在25°C下，将1·Omg的双4-羟基苯基）甲烷溶解于IOmL的0.5M硫酸钠水溶液含5%的乙腈）中制得0.lmgmL的2-OH标准溶液。[0100]30·lmgmL的2S-0H和2-0H混合溶液的制备:在25°C下，将1.0mg2S-0H和2-0H分别溶解于10.OmL的0.5M硫酸钠水溶液含5%的乙腈）中制得0.lmgmL的2S-0H和2-0H混合溶液。[0101]4上样液的制备:在25°C下，将0.716g磷酸氢二钠和0.355g硫酸钠溶于45.OmL的蒸馏水中，接着用IM的柠檬酸水溶液调节至pH为6.2，然后定容至50.OmL得到上样液。[0102]5洗脱液的制备:在25°C下，将0.716g磷酸氢二钠45mL的蒸馏水中，接着用IM的柠檬酸水溶液调节至PH为8.5,然后定容至50mL得到洗脱液。[0103]制备例3:应用例中所用溶液的制备[0104]1上样液的制备:在25°C下，将0.716g磷酸氢二钠和3.551g硫酸钠溶于45.OmL的蒸馏水中，接着用IM的柠檬酸水溶液调节至pH为6.2，然后定容至50.OmL得到上样液。[0105]2洗脱液的制备:在25°C下，将0.716g磷酸氢二钠45mL的蒸馏水中，接着用IM的柠檬酸水溶液调节至PH为6.2，然后定容至50.OmL得到洗脱液。[0106]3电泳分离缓冲液的制备:将1.95g的磷酸氢二钠、0.73g氯化钠和7.21g十二烷基硫酸钠溶解在240.OmL蒸馏水中，用I.OmolL氢氧化钠水溶液调节溶液至pH为6.5，定容至250.OmL，制得电泳分离缓冲溶液。[0107]4电泳分离缓冲溶液的制备:将1.950g的磷酸氢二钠、0.731g氯化钠、7.210g十二烷基硫酸钠溶解在240mL蒸馏水中，用IM的NaOH水溶液调节溶液至pH为6.5，定容至250mL制得电泳分离缓冲溶液。[0108]标准溶液的制备与制备例2相同，所不同的是，将2S-0H改为3，3-二硫二丙酸2S-COOH，浓度相同。[0109]应用例1[0110]1微柱液相检测条件，Trisep2000分离系统，配有二梯度洗脱装置，I.OyL定量环，检测波长214nm。取30cm长的毛细管嗜硫色谱整体材料Bl为色谱柱。上样液与洗脱液采用制备例1中的方法制备;流动相流速:4.OyLmin。[0111]2取上述的制备例2中的0.lmgmL的双4-羟基苯基）二硫醚2S-0H标准溶液，0·lmgmL的双4-羟基苯基）甲烷2-0H标准溶液，0·lmgmL的2S-0H和2-0H混合溶液1·OuL依次于上述微柱液相检测条件下，进行检测。[0112]结果如图4所示，a曲线是以溶解样品的0.5molmLNa2S〇4作为空白，b曲线是以0.lmgmL的2S-0H作为样品，c曲线是0.lmgmL2-0H溶液作为样品，d曲线是0.lmgmL2S-OH和0.lmgmL2-0H的混合溶液作为样品。在相同条件下，2-0H在高浓度盐条件下无法被整体柱特异性保留，而2S-0H能被特异性保留。当流动相切换以后，可以顺利将2S-0H洗脱下来。结果表明，嗜硫色谱整体材料中PolyMBAA-co-DVS-MPCA对含二硫键的化合物有很好的特异性富集效果。[0113]应用例2[0114]用嗜硫色谱整体材料对2S-C00H的富集并进行毛细管电泳检测。[0115]上样液与洗脱液采用制备例3中的方法制备。[0116]2将I.OmL的上样液注入嗜硫色谱材料A2中平衡60min，接着注入50yL的lmgmL的2S-C00H标准溶液固载30min;[0117]3将20yL的上样液注入嗜硫色谱材料A2将未被固载的2S-C00H冲洗除去，将6yL的洗脱液注入嗜硫色谱材料A2将2S-C00H洗脱下来制得2S-C00H洗脱液；[0118]4通过毛细管电泳仪PACEtmMDQ，美国贝克曼公司）对2S-C00H洗脱液进行电泳检测，具体的检测条件为:在内径为75.Ομπι的熔融石英毛细管（总长度为56.5cm，有效长度为50cm中进行;红外检测波长为214nm，进样量为5sX0.5psi。[0119]结果如图5所示，附图中a，b，c为PolyMBAA-co-DVS-MPCASPBl对2S-C00H平行富集三次的效果图；d，e，f为PoIyMBAA-co-DVSSPD2对2S-C00H平行富集三次的效果图。由图5可见，毛细管嗜硫色谱整体材料Bl对2S-C00H的富集达到了57.2倍，静态保留容量达至IJ2.45mgg，而毛细管嗜硫色谱整体材料D2对2S-C00H的富集仅为32.8倍，静态保留容量仅为I.40mgg。[0120]毛细管嗜硫色谱整体材料BI对含二硫键的化合物具有更好的富集与分离效果。[0121]以上结合附图详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。[0122]另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。[0123]此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

权利要求：1.一种嗜硫多孔材料的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括在引发剂和致孔剂存在的条件下，将二乙烯基砜、N，N-二甲基双丙烯酰胺和2-巯基烟酸于有机溶剂中进行聚合反应的步骤。2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，以重量份计，相对于1重量份的二乙烯基砜，N，N-二甲基双丙烯酰胺的用量为1-5份，2-巯基烟酸的用量为0.1-1份，引发剂的用量为0.07-0.15份，致孔剂的用量为I-10份，有机溶剂的用量为I-10份。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其中，所述制备方法包括以下步骤：1在引发剂和致孔剂存在的条件下，将二乙烯基砜和2-巯基烟酸进行预反应，得预反应液Yl;2将预反应液Y1、N，N-二甲基双丙烯酰胺、致孔剂和有机溶剂接触进行所述聚合反应，得嗜硫多孔材料Ml;优选地，所述制备方法还包括对步骤⑵中得到的嗜硫多孔材料Ml进行清洗、烘干的步骤;和或，在进行所述聚合反应之前，还包括对接触后的预反应液Y1、N，N-二甲基双丙烯酰胺、致孔剂和有机溶剂进行混合，脱气的步骤。4.根据权利要求3所述的制备方法，其中，步骤（1与步骤2中致孔剂的用量比为：1:1-30〇5.根据权利要求3所述的制备方法，其中，步骤1中预反应的温度为65-100°C，预反应时间为l-6h;和或，步骤⑵中聚合反应温度为65-100°C，反应时间为6-16h;和或，脱气时间为5_60min;和或，脱气方式为超声脱气。6.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其中，引发剂为偶氮二异丁腈、偶氮二异戊腈和偶氮二异丁酸二甲酯中的一种或多种；和或，致孔剂为二甲基亚砜；和或，有机溶剂为二甲基亚砜、十二醇和丙酮中的一种或多种。7.—种嗜硫多孔材料，其特征在于，根据权利要求1-6中任一项所述的制备方法制备得到。8.—种嗜硫色谱整体材料的制备方法，其特征在于，包括权利要求1-6中任意一项所述的制备方法，其中，所述的聚合反应在内壁衍生双键的毛细管中进行。9.一种嗜硫色谱整体材料，其特征在于，通过权利要求8所述的制备方法制备得到。10.权利要求7所述的嗜硫多孔材料和或权利要求9所述的嗜硫色谱整体材料在对含二硫键的化合物进行富集与分离中的应用。

百度查询： 安徽师范大学 嗜硫多孔材料和嗜硫色谱整体材料及其制备方法和应用

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