申请/专利权人:百沃特(北京)生物技术有限公司
申请日:2020-10-23
公开(公告)日:2021-04-20
公开(公告)号:CN112680543A
主分类号:C12Q1/70(20060101)
分类号:C12Q1/70(20060101);C12Q1/686(20180101);C12N15/11(20060101)
优先权:
专利状态码:失效-发明专利申请公布后的驳回
法律状态:2023.11.17#发明专利申请公布后的驳回;2021.05.07#实质审查的生效;2021.04.20#公开
摘要:本发明提供一种动物体内新型冠状病毒的荧光PT‑PCR检测方法,包括以下步骤:S1、样本采集:从动物体内采集待检测样本;S2、核酸提取:在待检测样本中加入内标,使用核酸提取试剂盒提取待检测样本中的RNA得到样本;S3、PCR试剂准备:在试剂盒中按体积比4:1量取PCR反应液A和PCR反应液B置于离心管中震荡混匀后离心2~10s按15μL管分装至PCR反应管中得到PCR试剂;S4、PCR扩增检测:将样本、阴性对照、阳性对照各15μL分别加入PCR试剂,震荡混匀后离心2~10s,在荧光PCR仪上进行扩增检测;S5、质量判断:判断实验结果是否有效;S6、结果判定:对检测结果进行判断。本发明所述的一种动物体内新型冠状病毒的荧光RT‑PCR检测方法及试剂盒,具有较高的灵敏度,其检测限可达1拷贝μL。
主权项:1.一种动物体内新型冠状病毒的荧光PT-PCR检测方法,其特征在于:包括以下步骤:S1、样本采集:从动物体内采集待检测样本,在2~8℃下保存12h;S2、核酸提取:在所述待检测样本中加入内标,使用核酸提取试剂盒提取所述待检测样本中的RNA,得到样本并将所述样本冷冻保存;S3、PCR试剂准备:在试剂盒中按体积比4:1量取PCR反应液A和PCR反应液B置于离心管中震荡混匀后离心2~10s,按15μL管分装至PCR反应管中,得到所述PCR试剂;S4、PCR扩增检测:将所述样本、阴性对照、阳性对照分别加入所述PCR试剂,震荡混匀后离心2~10s,在荧光PCR仪上进行扩增检测;S5、质量判断:根据以下条件判断实验结果是否有效,判断条件一:所述阴性对照的结果为阴性;判断条件二:所述阳性对照的结果为阳性;当同时满足上述两个判断条件时,实验结果判断为是,进入步骤S6;当上述两个判断条件有任意一条不满足时,实验结果判断为是,返回步骤S3;S6、结果判定:阳性判断条件:FAM通道Ct值<38且有扩增曲线;阴性判断条件:FAM通道Ct值≥38无扩增曲线,且ROX通道Ct值≤36有明显扩增曲线。
全文数据:
权利要求:
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