申请/专利权人：哈尔滨商业大学

申请日：2020-12-17

公开（公告）日：2021-04-27

公开（公告）号：CN112710721A

主分类号：G01N27/48(20060101)

分类号：G01N27/48(20060101);G01N27/327(20060101);G01N27/38(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2024.01.12#发明专利申请公布后的驳回;2021.05.14#实质审查的生效;2021.04.27#公开

摘要：本发明涉及电化学生物传感器领域，公开了一种用于检测毛油中磷脂的三维石墨烯修饰电极的制备方法及电极。该修饰电极的制备方法如下：首先采用一步热还原法制备三维石墨烯，利用戊二醛将辣根过氧化物酶交联在三维石墨烯修饰的丝网印刷电极的表面，再将壳聚糖添加到表面，然后，采用戊二醛再将胆碱氧化酶交联在电极表面，构建了三维石墨烯双酶修饰的生物酶电极。以获得的修饰电极为工作电极，银氯化银电极为参比电极，三维石墨烯双酶修饰的生物酶电极为对电极，构成三电极体系，利用计时电流法实现一定浓度范围内的毛油中磷脂溶液的检测，且该修饰电极具有较好的选择性和较高的灵敏度。

主权项：1.用于检测毛油中磷脂的三维石墨烯修饰电极的制备方法及电极，其特征在于三维石墨烯修饰电极的制备以及毛油中磷脂的检测方法通过以下步骤实现：步骤一：采用一步热还原的方法制备三维石墨烯；合成步骤如下:将30~50mg氧化石墨烯分散在15~25mL水中，超声10min使之分散均匀，形成2mgmL的分散液；将分散液转移到高压水热反应釜中，160℃烘箱中反应12h，冷却至室温，将得到的固体冷冻干燥，最终产物即为三维石墨烯；步骤二：将丝网印刷电极放入100毫升的烧杯中；烧杯中加入40~60毫升1mmolL氢氧化钠溶液，超声波清洗5min；然后，取下电极，用双蒸水冲洗，然后用氮气吹干；然后用同样的方法，将固相萃取放入40~60mL、1mmolL盐酸溶液中，超声波清洗5min，双蒸水冲洗，氮气吹干；电极用无水乙醇冲洗，氮气干燥，在PBS缓冲液中进行循环伏安曲线扫描，扫描电压范围为−0.2~0.6V，扫描速度为50mVs，将4~6mL三维石墨烯溶液滴覆在丝网印刷电极表面；修饰后的SPE在PBS缓冲液中进行循环伏安CV曲线扫描；将不同材料的改性固相萃取电极连接到CHI660D电化学工作站，插入50mmolL的铁氰化钾溶液中；频率范围为1~106Hz；对改性后的丝网印刷电极进行了电化学阻抗谱测试，以选择最佳的改性丝网印刷电极材料；步骤三：辣根过氧化物酶的固定：制备含100mgLPC的PBS缓冲液作为试验基液；将辣根过氧化物酶溶液4~8μL，浓度4U滴在用所选改性材料改性的固相萃取电极表面，放置在4℃下静置干燥；待电极表面变薄后，加入5~10μL戊二醛，37℃交联30min，然后用PBS缓冲液清洗电极表面，去除游离的辣根过氧化物酶；然后在酶修饰电极表面加入1~5μL的壳聚糖醋酸溶液，静置干燥；步骤四：胆碱氧化酶5~10μL，浓度1~8U滴于修饰后电极上；当电极表面变薄时，将5~10μL戊二醛滴在电极表面，37℃交联30min，用PBS缓冲液清洗电极表面，除去电极表面的游离胆碱氧化酶；获得的生物酶丝网印刷电极在用N2吹干后保存在4℃的冰箱中；将丝网印刷电极加入pH为6.5~8.5、硫堇含量为1.0mmolL的试验溶液中，加入100μL的3mgmL磷脂酶D（PLD）溶液，富集时间为30s，电压范围为0.5~0.5V，扫描增量为10mV，进行方波伏安扫描，记录峰值电流；考察了胆碱氧化酶浓度和pH对丝网印刷电极还原峰电流的影响；步骤五：将裸丝网印刷电极和生物酶丝网印刷电极分别插入含1mmolL硫堇的PBS缓冲液和试验液中；采用循环伏安法，在扫描速度为50mVs，电压范围为0.2~0.6V的条件下，获得了稳定的循环伏安曲线，用来测试生物酶丝网印刷电极对PC的电化学响应；步骤六：将PC40~60mg加入装有90~110mL一级大豆油的容器中，充分搅拌，制备大豆毛油；然后，将其分成5个样品，稀释成不同浓度的PBS缓冲液；制备了5个不同PC含量的大豆毛油样品，加入90~110μL、3mgmLPLD溶液后，加入1%Triton-X100作为乳化剂，在37℃下搅拌30min，在最佳条件下，将三维石墨烯修饰电极加入10~30mL大豆毛油中，用方波伏安法测定其还原峰电流，得到5个样品的PC含量。

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百度查询： 哈尔滨商业大学 用于检测毛油中磷脂的三维石墨烯修饰电极的制备方法及电极

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