申请/专利权人：深圳海普洛斯医学检验实验室

申请日：2020-12-30

公开（公告）日：2021-04-27

公开（公告）号：CN112708939A

主分类号：C40B50/06(20060101)

分类号：C40B50/06(20060101);C40B40/06(20060101)

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2021.05.14#实质审查的生效;2021.04.27#公开

摘要：本公开提供了一种构建DNA文库的试剂盒及方法，其中试剂盒包括混合酶液、混合缓冲液、连接酶和连接缓冲液，混合酶液包含核酸内切酶、T4DNA聚合酶、Klenow片段、TaqDNA聚合酶和T4多聚核苷酸激酶，混合缓冲液和连接缓冲液包含DTT和PEG8000，混合酶液和混合缓冲液用于形成第一反应体系，连接酶和连接缓冲液用于形成第二反应体系，在第一反应体系中，核酸内切酶的工作浓度为0.01至0.05UμL，T4DNA聚合酶的工作浓度为0.04至0.1UμL，Klenow片段的工作浓度为0.005至0.02UμL，TaqDNA聚合酶的工作浓度为0.025至0.075UμL，T4多聚核苷酸激酶的工作浓度为0.1至0.5UμL，DTT的工作浓度为5至10mM，PEG8000的工作浓度为1至10％。根据本公开，能够提供一种提高建库效率的构建DNA文库的试剂盒及方法。

主权项：1.一种构建DNA文库的试剂盒，其特征在于，包括：混合酶液、混合缓冲液、连接酶和连接缓冲液，所述混合酶液包含核酸内切酶、T4DNA聚合酶、Klenow片段、TaqDNA聚合酶和T4多聚核苷酸激酶，所述混合缓冲液包含DTT和PEG8000，所述连接缓冲液包含DTT和PEG8000，所述混合酶液和所述混合缓冲液用于形成第一反应体系，所述第一反应体系用于DNA的片段化、末端修复和加A反应，所述连接酶和所述连接缓冲液用于形成第二反应体系，所述第二反应体系用于连接测序接头，在所述第一反应体系中，所述核酸内切酶的工作浓度为0.01至0.05UμL，所述T4DNA聚合酶的工作浓度为0.04至0.1UμL，所述Klenow片段的工作浓度为0.005至0.02UμL，所述TaqDNA聚合酶的工作浓度为0.025至0.075UμL，所述T4多聚核苷酸激酶的工作浓度为0.1至0.5UμL，所述DTT的工作浓度为5至10mM，所述PEG8000的工作浓度为1至10％，在所述第二反应体系中，所述连接酶的工作浓度为15至60UμL，所述DTT的工作浓度为0.5至2mM，所述PEG8000的工作浓度为5至15％。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 深圳海普洛斯医学检验实验室 构建DNA文库的试剂盒及方法

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