申请/专利权人：中国人民解放军总医院;曹丰

申请日：2020-03-02

公开（公告）日：2021-04-27

公开（公告）号：CN111317817B

主分类号：A61K49/22(20060101)

分类号：A61K49/22(20060101);A61K49/00(20060101);A61K47/42(20170101);A61K41/00(20200101);A61P9/10(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-未缴年费专利权终止

法律状态：2024.03.15#未缴年费专利权终止;2021.04.27#授权;2020.07.17#实质审查的生效;2020.06.23#公开

摘要：本发明公开一种可同时实现靶向识别并能够用于光声成像的纳米探针，还相应提供一种便捷高效、经济环保的纳米探针制备方法，用于动脉粥样硬化易损斑块内部新生血管的检测，以便提供更及时的治疗。本申请中以ICG作为光声检测的造影剂，为动脉粥样硬化易损斑块的检测提供了一种新的检测手段。

主权项：1.一种靶向光声成像纳米分子探针的制备方法，其特征在于包括如下步骤：将HSA通过Sulfo-SMCC耦联RGD活性短肽，其中，HSA与RGD活性短肽耦联方法如下：1RGD活性短肽的巯基化：RGD活性短肽与Traut'sReagent摩尔比为1:2，分别称取0.02mmolRGD活性短肽50mg与0.04mmolTraut'sReagent5.6mg，将50mgRGD活性短肽溶于5mLSBBuffer，将5.6mgTraut'sReagent溶于1mLSBBuffer，将两者混合后，室温震荡反应1h，移至4℃保存待用；2HSA与Sulfo-SMCC连接：Sulfo-SMCC与HSA摩尔比为7.5:1，称取40mgHSA溶于PBS溶液，取2mgSulfo-SMCC溶于0.2mLDMSO，混合后室温下搅拌反应30min，而后使用分子量为30KD的超滤管离心纯化三次，以除去游离的Sulfo-SMCC；3HSA-SMCC上的马来酰亚胺与RGD活性短肽上的巯基耦联：取1.8mL第1步巯基化后的RGD活性短肽溶液加入4mLHSA-SMCC溶液中，室温下搅拌反应2h，然后使用分子量为30KD的超滤管离心纯化三次，最终溶于4mL的超纯水中，此时HSA-RGDpeptide终浓度为10mgmL；制备ICG-HSA-RGDpeptide纳米探针fNPs，方法如下:4配制10％HSA溶液1mL；5设定HSA-RGDpeptide，10％HSA两种溶液中HSA的质量比为5：2，HSA总质量为30mg，根据其各自浓度算出相应体积；6高温消毒蒸干后的玻璃小瓶中放入磁子，依次加入上一步算得体积的两种溶液，然后加入PBS溶液，使溶液总体积为3mL，将小瓶置于磁力搅拌器上搅拌；7称取2mgICG超声震荡溶于20μLDMSO；8将10μLICG溶液在搅拌状态下逐滴缓慢加入第6步HSA溶液中；9将20μL戊二醛加入2mLPBS溶液中，充分震荡溶解后，取200μL缓慢加入上述溶液中，避光搅拌30h，10使用分子量为100KD的超滤管离心纯化三次，最终溶于PBS溶液中；最终形成纳米分子探针；其中，所述SBBuffer为0.2M,pH8的SBBuffer，所述PBS溶液为0.1M，pH7.4的PBS溶液。

全文数据：

权利要求：

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