申请/专利权人：华中农业大学

申请日：2021-01-27

公开（公告）日：2021-04-30

公开（公告）号：CN112725505A

主分类号：C12Q1/6895(20180101)

分类号：C12Q1/6895(20180101);C12N15/11(20060101);A01H1/04(20060101);A01H1/02(20060101);A01H5/00(20180101);A01H6/82(20180101)

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2021.05.21#实质审查的生效;2021.04.30#公开

摘要：本发明提供了一种抗晚疫病马铃薯野生种资源的发掘方法，通过大量资源筛选和测序得到一份含有广谱抗病基因Rpi‑Pat1的优异晚疫病抗性野生种质资源，并设计了Rpi‑Pat1基因特异引物，可用于监测该抗病基因转育。通过大量亲本和多次授粉技术，首次获得了该野生种与栽培种的有性杂种后代，通过有性杂交和分子标记辅助选择将来自野生种的Rpi‑Pat1成功导入栽培种中。本申请创制的资源材料和标记可用于马铃薯晚疫病抗病育种。

主权项：1.一种抗晚疫病马铃薯野生种资源的发掘方法，包括：1资源材料的发掘：资源材料为本实验室保存的S.papitaRvdb2n＝4X＝48；利用强毒力晚疫病菌小种HB0914-2和3928A本实验室保存经过多轮晚疫病离体叶片鉴定，筛选出一份起源于墨西哥的野生种材料S.papita-2S.papitaRvdb，高抗晚疫病，该材料植株表型接近栽培种，块茎性状比较好，薯块小，薯形圆形，流式细胞仪鉴定倍性为4倍体2n＝4X＝48；2抗病基因诊断：利用抗病基因组捕获测序技术对该材料进行抗病基因诊断，发现该材料含有晚疫病广谱抗病基因Rpi-Pat1，利用抗病基因组捕获测序获得的数据与Rpi-Blb1序列进行比较，结果显示Rpi-Pat1与Rpi-Blb1在编码区5’端存在差异，在1％碱基错配率下无法完全匹配，在野生种S.papita-2材料中诊断出的抗病基因与已报道Rpi-Pat1存在3个单碱基突变SNP；3Rpi-Pat1标记设计：利用已报道Rpi-Blb1基因特异引物进行扩增，结果表明该对引物无法扩增；再根据对野生种材料S.papita-2抗病基因测序结果，对抗病基因Rpi-Pat1及其同源抗病基因类似物进行了系统分析，设计了抗病基因位点特异引物Pat1F和Pat1R，以RP2-F和RP2-R扩增内参基因RNAPolymeraseII,RP2；22个马铃薯材料中，只有在S.papita-2材料中扩增出预期大小条带，在含有Rpi-Blb1基因的材料J101K27中仅扩增出很弱条带，表明引物对Rpi-Pat1基因扩增具有很高的特异性，可用于对Rpi-Pat1基因在转育过程中进行分子标记辅助选择跟踪；4Rpi-Pat1基因有性杂交转育：通过大量亲本组配，以S.papita为父本，收集其花粉，采用多次给母本授粉，最后发现只有一个组合Brigus×S.papita杂交成功，总计获得24粒实生种子，将这24粒种子发芽，移栽实生苗，分别抽提两个亲本和24个杂交后代单株基因组DNA，用Rpi-Pat1特异引物和内参引物进行扩增，发现9个后代中可以检测到Rpi-Pat1标记；5杂交后代抗性鉴定：采用强毒力晚疫病菌小种HB09-14-2和3828A对24个单株分别进行离体叶片鉴定，结果显示9个能扩增出标记的单株表现高抗，其余表现感病，与标记检测结果一致；总体上，杂交后代单株植株表型更趋向于栽培种，植株明显特征是茎秆叶柄基部有肾形环抱小叶，块茎近圆形，表皮较光滑，表现比较理想的杂交亲本材料特点，用其中几个抗性单株花粉与其他栽培种授粉杂交，可以获得回交二代种子，表明该材料具有很好的交配亲和性，可用于广谱抗病基因Rpi-Pat1向马铃薯栽培种正常转育，培育抗晚疫病马铃薯新品种。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 华中农业大学 一种抗晚疫病马铃薯野生种资源的发掘方法

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