申请/专利权人：安徽师范大学

申请日：2019-02-19

公开（公告）日：2021-06-08

公开（公告）号：CN109892344B

主分类号：A01N65/08(20090101)

分类号：A01N65/08(20090101);A01N37/36(20060101);A01P13/00(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2021.06.08#授权;2019.07.12#实质审查的生效;2019.06.18#公开

摘要：本发明公开了陆生植物源抑藻剂及其制备方法，所述的抑藻剂为木槿花乳酸提液、金银花乳酸浸提液。本发明与现有技术相比，采用乳酸萃取陆生植物有效成分来制备抑藻剂，所制的木槿花乳酸浸提液抑藻剂高浓度处理组在第4天对铜绿微囊藻细胞的抑制率达到了80％以上，而金银花乳酸浸提液抑藻剂高浓度处理组在第4天对铜绿微囊藻细胞的抑制率达到了90％以上。

主权项：1.陆生植物源抑藻剂，其特征在于：所述的抑藻剂为木槿花乳酸浸提液。

全文数据：陆生植物源抑藻剂及其制备方法技术领域本发明属于抑藻剂及其制备方法，特别属于陆生植物源抑藻剂及其制备方法。背景技术在我国南方农村，蓝绿藻广泛存在于池塘、河滨等水体，目前发现能产生微囊藻毒素Microcystin的藻属有微囊藻、鱼腥藻及颤藻，而我国发现的大多数水华都是微囊藻。微囊藻产生的微囊藻毒素危害极大，探索发现一种高效的，生态风险小的抑藻方法是当前治理的突破点。发明内容本发明所要解决的技术问题第1个是提供一种生态安全性好，用于微囊藻的陆生植物源抑藻剂。本发明所要解决的技术问题第2个是上述陆生植物源抑藻剂的制备方法。本发明解决技术问题的技术方案为：陆生植物源抑藻剂，所述的抑藻剂为木槿花乳酸浸提液、金银花乳酸浸提液。优选的抑藻剂为金银花乳酸浸提液所述的木槿花乳酸浸提液，通过以下方法制备：将木槿花粉碎至小于200目，将粉碎好的木槿花按1:5-8的比例与乳酸gml混合，于摇床上室温浸提3-5天，取上层清液，即可。所述的金银花乳酸浸提液，通过以下方法制备：将金银花粉碎至小于200目，将粉碎好的金银花按1:5-8的比例与乳酸gml混合，于摇床上室温浸提3-5天，取上层清液，即可。所述的藻为铜绿微囊藻。所述的藻密度为1-9*106个毫升。本发明中木槿花为我国原产，是木槿属锦葵科木本植物木槿HibiscussyfiacusL.的干燥花。其又名木锦、荆条、藩篱草、平条树等，属于锦葵科木槿属落叶灌木或小乔木植物，高约2～6m，花单生叶腋，具有短梗，花有白、紫、红等颜色，是钟状花。金银花LonicerajaponicaThunb为忍冬科Caprifoliaceae忍冬属LoniceraLinn,植物忍冬LonicerajaponicaThunb的干燥花蕾，为常用中药，应用历史悠久，有清热解毒，凉散风热之功效,具有很强的抗病原微生物作用。虽然利用高等植物化感物质抑藻是当前研究热点之一，但由于化感物质多为有机化合物，不溶于水；而采用有机溶剂来分离提取化感物质后必须将有机溶剂挥干才能使用，并且有机溶剂对环境有毒，而挥干有机溶剂的化感物质必须溶解才得以在实践中使用，因此如何解决化感物质溶解性问题成了化感物质有效应用的瓶颈，为此，通过本发明根据相似相溶原理以及环境安全无二次污染的需要，采用同样是植物代谢次生产物的乳酸作为溶解剂以及增效剂，收到了非常好的效果，为化感物质抑藻的实施开启了一个新途径。乳酸Lacticacid，学名为2-羟基丙酸2-hydroxypropionicacid，是一种α-羟酸AHA，分子量为90.08，分子式是C3H6O3。乳酸是一种天然有机酸，与水能任意混合，是无色澄清或微黄色的粘性液体，无臭，味微酸。主要来源于乳酸菌的合成、也是动物和少数植物的无氧呼吸产物。乳酸在食品工业中有广泛的应用，可作为防腐剂、食品添加剂以及酸味剂，酸奶以及乳酸饮料中含有丰富的乳酸，因此，利用乳酸促进化感物质溶解以及增效制备成生态抑藻剂环境安全性高。本发明与现有技术相比，采用乳酸萃取陆生植物有效成分来制备抑藻剂，所制的木槿花乳酸浸提液抑藻剂高浓度处理组在第4天对铜绿微囊藻细胞的抑制率达到了80％以上，而金银花乳酸浸提液抑藻剂高浓度处理组在第4天对铜绿微囊藻细胞的抑制率达到了90％以上。附图说明图1不同浓度乳酸对铜绿微囊藻生长的影响。图2不同浓度实施例7所制木槿花水浸提液对铜绿微囊藻的影响。图3不同浓度实施例8所制金银花水浸提液对铜绿微囊藻的影响。图4不同浓度实施例2所制的木槿花乳酸浸提液对铜绿微囊藻的抑制率％。图5不同浓度实施例5所制的金银花乳酸浸提液对铜绿微囊藻的抑制率％。具体实施方式下面结合实施例对本发明作详细的说明。本发明中所用藻种铜绿微囊藻FACHB-942购于中国科学院武汉水生生物研究所，使用BG-11培养基培养。培养条件：温度25℃，光照强度4000lx，光暗周期为12h：12h，扩大培养一周，使铜绿微囊藻达到对数生长期，用BG-11培养基稀释成初始藻密度为3.6×106个mL。木槿花、金银花购于芜湖市老百姓大药房。乳酸为分析纯的乳酸。铜绿微囊藻抑制率的计算公式为：其中：IR—抑制率，N—实验组藻细胞数，N0—对照组藻细胞数。实施例1：将木槿花粉碎至小于200目，将粉碎好的木槿花按1:5的比例与乳酸gml混合，于摇床上室温浸提3天，取上层清液，即可。实施例2：将木槿花粉碎至小于200目，将粉碎好的木槿花按1:6的比例与乳酸gml混合，于摇床上室温浸提4天，取上层清液，即可。实施例3：将木槿花粉碎至小于200目，将粉碎好的木槿花按1:8的比例与乳酸gml混合，于摇床上室温浸提5天，取上层清液，即可。实施例4将金银花粉碎至小于200目，将粉碎好的金银花按1:5的比例与乳酸gml混合，于摇床上室温浸提3天，取上层清液，即可。实施例5将金银花粉碎至小于200目，将粉碎好的金银花按1:6的比例与乳酸gml混合，于摇床上室温浸提4天，取上层清液，即可。实施例6将金银花粉碎至小于200目，将粉碎好的金银花按1:8的比例与乳酸gml混合，于摇床上室温浸提5天，取上层清液，即可。实施例7:除所用溶剂为水外，其余与实施例2相同。实施例8:除所用溶剂为水外，其余与实施例4相同。实施例9：将对数生长期的铜绿微囊藻加入250mL锥形瓶中，再向其中添加BG-11培养基使得各组培养基，起始藻密度为3.2×106cellsmL，溶液的体积为100mL，向各锥形瓶中分别加入单纯的乳酸、实施例2所制的木槿花乳酸浸提液、实施例5所制的金银花乳酸浸提液、实施例7所制的木槿花水浸提液、实施例8所制的金银花水浸提液，使各组锥形瓶中乳酸、木槿花或金银花乳酸浸提液和木槿花或金银花水浸提液最终浓度分别为25μLL、50μLL、75μLL、100μLL，同时设定不加抑制剂的对照组，每组设定3个平行，每隔24h用细胞计数显微镜进行藻细胞计数，连续测定5d。各组的培养条件为：光照强度4000lx，光暗比为12h：12h，温度25±1℃。每天摇动3-5次。如图1、2、3显示：单纯的乳酸在此藻密度下对铜绿微囊藻具有较强的抑制作用，其最大抑制率为最高浓度组100μLL出现在第5d，达到了66.49％，木槿花水浸提液在此作用浓度下，对铜绿微囊藻几乎没有影响，金银花水浸提液在与乳酸相同浓度下表现出一定的抑制效应，最大抑制率为最高浓度组100μLL出现在第5d，达到了62.53％表1不同浓度木槿花以及金银花乳酸浸提液对铜绿微囊藻的抑制率％由表1、图4、图5可知，木槿花乳酸浸提液以及金银花乳酸浸提液对铜绿微囊藻的抑制率随着时间的延长均呈增大趋势，表现出明显的浓度效应。虽然木槿花的水浸提液几乎没有抑藻作用，但其乳酸浸提液在低浓度时就表现出了抑制效应，木槿花乳酸浸提液高浓度处理组在第4天对铜绿微囊藻细胞的抑制率达到了83.17％，而金银花乳酸浸提液高浓度处理组在第4天的抑制率达到了94.47％，显著好于单独的乳酸或者金银花抑藻，说明乳酸的浸提一方面有可能是促进了金银花和木槿花抑藻成分的溶出，另一方面乳酸与这些抑藻成分发挥了协同抑藻效应。

权利要求：1.陆生植物源抑藻剂，其特征在于：所述的抑藻剂为木槿花乳酸浸提液、金银花乳酸浸提液。2.根据权利要求1所述的陆生植物源抑藻剂，其特征在于：所述的抑藻剂为金银花乳酸浸提液。3.根据权利要求1所述的陆生植物源抑藻剂，其特征在于：所述的藻为铜绿微囊藻。4.根据权利要求3所述的陆生植物源抑藻剂，其特征在于：所述的藻密度为1-9*106个毫升。5.权利要求1所述的陆生植物源抑藻剂，通过以下方法制备：所述的木槿花乳酸浸提液，通过以下方法制备：将木槿花粉碎至小于200目，将粉碎好的木槿花按1:5-8的比例与乳酸gml混合，于摇床上室温浸提3-5天，取上层清液，即可。6.权利要求1所述的陆生植物源抑藻剂，通过以下方法制备：所述的金银花乳酸浸提液，通过以下方法制备：将金银花粉碎至小于200目，将粉碎好的金银花按1:5-8的比例与乳酸gml混合，于摇床上室温浸提3-5天，取上层清液，即可。

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