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【发明授权】使用CD24蛋白治疗瘦素缺乏病状_肿瘤免疫股份有限公司_201780008474.2 

申请/专利权人:肿瘤免疫股份有限公司

申请日:2017-02-02

公开(公告)日:2021-09-21

公开(公告)号:CN109069583B

主分类号:A61K38/17(20060101)

分类号:A61K38/17(20060101);C07K14/00(20060101);C07K14/435(20060101);C07K14/705(20060101)

优先权:["20160202 US 62/290,202"]

专利状态码:失效-未缴年费专利权终止

法律状态:2024.02.09#未缴年费专利权终止;2019.02.19#实质审查的生效;2018.12.21#公开

摘要:本发明涉及通过增加循环瘦素的含量而使用CD24蛋白治疗瘦素缺乏病状,如脂质营养不良。

主权项:1.CD24融合蛋白在制备用于增加个体的血流中循环瘦素水平的药物中的用途,其中所述CD24融合蛋白由aSEQIDNO:1或2所示的成熟人CD24多肽;和b人Ig蛋白的Fc区组成,其中所述Fc区在所述CD24融合蛋白的C端融合。

全文数据:使用CD24蛋白治疗瘦素缺乏病状技术领域本发明涉及用于治疗瘦素缺乏病状的CD24蛋白。背景技术因瘦素基因、下丘脑性闭经及脂质营养不良综合征lipodystrophysyndrome,LS中的突变而导致的瘦素缺乏病状,如瘦素缺乏症表征为部分或完全不存在脂肪组织和衍生自脂肪组织的激素,最重要的是瘦素Rodriguez等人2015。在那些病症中,皮下脂肪组织最受影响,并且脂肪在非脂肪组织中积聚。脂肪萎缩为在描述脂肪从一个区域通常为面部损失时使用的更具体的术语。患者缺乏瘦素呈现多种严重代谢异常,如高血糖症、高甘油三酯血症和肝性脂肪变性,其可分别发展成糖尿病、急性胰腺炎和肝硬化。脂质营养不良还可导致骨硬化。全身性脂质营养不良为脂质营养不良的最显著形式,并且可为后天性或先天性的。后天性脂质营养不良可由使用高活性逆转录病毒治疗HAART或潜在的HIV感染脂质营养不良的最常见形式或自身免疫病状发展而来。脂质营养不良的先天性形式的发病机制通过协调脂肪细胞分化、脂滴形态和脂质代谢的数种基因中分子缺乏症而确定。LS的临床表现主要通过部分或完全缺乏白色脂肪组织、导致低含量或不可检测的含量的脂肪衍生的细胞因子瘦素确定。瘦素此前被称为脂肪细胞因子,其调节数种代谢过程,包括葡萄糖稳态、胰岛素敏感性和脂肪酸氧化。见于脂质营养不良中的瘦素缺乏症的病况导致罹患数种代谢异常,并且大致80%的患有脂质营养不良的患者满足代谢综合征的诊断标准。治疗瘦素缺乏病状如脂质营养不良的现行审批通过的方法涉及瘦素替代治疗LRT,如用瘦素类似物美曲普汀metreleptinMYALEPT。然而,LRT与罹患中和抗药物抗体和淋巴瘤相关的风险有关,并且当前仅审批通过全身性非HIV脂质营养不良的病例。此外,由于其低半衰期,美曲普汀必须每天一次或两次通常在一天的同一时间施用来模拟天然瘦素昼夜周期。因此,需要治疗LS和瘦素缺乏症的替代性方法,尤其对于患有HIV的患者。发明内容本发明描述一种通过向有需要的个体施用CD24蛋白来治疗个体的瘦素缺乏病状的新颖方法。还提供一种通过向有需要的个体施用CD24蛋白来治疗或预防患有HIV的患者的脂质营养不良的方法。CD24蛋白可包含成熟人类CD24的序列或其变异体。成熟人类CD24可包含SEQIDNO:1或2的序列。CD24蛋白可包含人类CD24的胞外域中的任一个或全部。CD24蛋白可包含SEQIDNO:4的信号序列以使从表达蛋白的细胞中分泌。信号肽序列可为发现于其它跨膜或分泌蛋白上的序列,或由所属领域中已知的现有信号肽修饰的序列。CD24蛋白可为可溶性的和或可被糖基化。CD24蛋白可使用真核蛋白表达系统产生,所述系统可包含中国仓鼠卵巢细胞系中含有的载体或复制缺陷型逆转录病毒载体。复制缺陷型逆转录病毒载体可稳定地整合到真核细胞的基因组中。CD24蛋白可包含蛋白标签,其可在CD24蛋白的N端或C端融合。蛋白可包含哺乳动物免疫球蛋白Ig部分,其可为人类Ig蛋白的Fc部分。人类Ig蛋白可包含人类Ig蛋白的铰链区和CH2域以及CH3域,并且人类Ig蛋白可为IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgA。Fc部分还可包含IgM的铰链区和CH3域以及CH4域。CD24蛋白可包含SEQIDNO:5、6、8或9的序列。附图说明图1A展示全长CD24融合蛋白、CD24IgG1Fc在本文中也称为CD24FcSEQIDNO:5的氨基酸组合物。带下划线的26个氨基酸为CD24SEQIDNO:4的信号肽,其在从表达蛋白的细胞中分泌的期间裂解,并且因此从蛋白SEQIDNO:6的成熟形式缺失。序列的粗体部分为用于融合蛋白SEQIDNO:2的成熟CD24蛋白的胞外域。通常存在于成熟CD24蛋白中的最后一个氨基酸A或V已从构筑体中删除以避免免疫原性。不带下划线的、非粗体的字母为IgG1Fc的序列,包括铰链区和CH1域以及CH2域SEQIDNO:7。图1B展示CD24VFcSEQIDNO:8的序列,其中成熟人类CD24蛋白粗体为SEQIDNO:1的缬氨酸多态变异体。图1C展示CD24AFcSEQIDNO:9的序列,其中成熟人类CD24蛋白粗体为SEQIDNO:1的丙氨酸多态变异体。图1B和图1C中的融合蛋白的各种部分和在图1A中一样被标记,并且变异体缬氨酸丙氨酸氨基酸带双下划线的。图2展示相比于第-1天预治疗,在CD24Fc治疗后第3天健康人类个体的血清中的瘦素比率。在第0天施用药物。数据由CD24Fc给药组表示;0mgkg组表示安慰剂对照组。具体实施方式本文中我们描述出人意料发现:向人类个体施用CD24蛋白引起血液内瘦素的循环含量增加。这适用于通过增加循环瘦素的含量来治疗瘦素缺乏病状,如脂质营养不良。在一具体实施例中,本发明涉及治疗患有HIV的患者的脂质营养不良的方法。如本文中更详细地描述,CD24为在造血和非造血细胞当中广泛表达的小糖基-磷脂酰基-肌醇GPI锚定的糖蛋白,其由240个碱基对的编码序列编码。在80个氨基酸中,前26个构成信号肽,而后23个用作裂解的信号以使GPI尾端连接。因此,成熟人类CD24分子仅具有31个氨基酸。在成熟CD24蛋白的31个氨基酸中,最后一个C端氨基酸在人类群体当中为多态的。核苷酸226处的C到T转换导致用缬氨酸v取代丙氨酸a。由于这一残基为立刻N端到裂解位点,并且由于替代为非保守性的,这两个等位基因可在细胞表面上以不同效率表达。CD24已知为多发性硬化症MS、类风湿性关节炎RA和系统性红斑狼疮SLE的遗传修饰因子。在群体水平,CD24vv基因型大于正常群体中的频率的两倍。在多元MS家族当中,与健康对照相比,CD24v等位基因优选地被传送到MS患者。此外,在患有疾病的更严重形式当患者失去独立行走的能力时,扩展失能状态量表[EDSS]为6.0或超过6.0的MS患者当中,CD24vv个人平均花7年从第一临床症状达到EDSS6.0,但CD24av或CD24aa个人在13到15年后达到EDSS6.0。反之,CD24信使核糖核酸mRNA的3'非翻译区中的二核苷酸删除,其降低CD24mRNA稳定性并且因此减少CD24表达,保护人类免患MS和其它自身免疫疾病。迄今为止,CD24尚未展示会影响脂质含量。1.定义.本文所使用的术语仅出于描述特定实施例的目的,并且不意图为限制性的。除非上下文另外明确规定,否则如说明书和所附权利要求书中所用的单数形式“一个种aan”和“所述the”包括多个指示物。为了叙述本文的数值范围,明确涵盖它们之间具有相同精确度的每一个插入数值。举例来说,对于范围6-9,除了6和9之外涵盖数值7和8,并且对于范围6.0-7.0,明确涵盖数值6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9以及7.0。“肽”或“多肽”为氨基酸的联接序列,并且可为天然的、合成的或修饰或天然和合成的组合。“基本上相同”可意指第一和第二氨基酸序列在1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290或300个氨基酸的区域内为至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%。“治疗treatmenttreating”在指代保护人类或动物不患疾病时意指预防、遏制、抑制或完全消除疾病。预防疾病涉及在疾病发作之前向人类或动物施用本发明的组合物。遏制疾病涉及在疾病诱发之后但在其临床表现之前向人类或动物施用本发明的组合物。抑制疾病涉及在疾病的临床表现之后向人类或动物施用本发明的组合物。“变异体”可意指通过插入、删除或保守性取代氨基酸但保留一些生物活性而氨基酸序列不同的肽或多肽。CD24的“生物活性”的代表性实例包括与凝集素确切地说,Siglec唾液酸结合免疫球蛋白型凝集素结合的能力,以及与特异性抗体结合的能力。变异体还可意指氨基酸序列与参考蛋白基本上一致并且氨基酸序列保留至少一种生物活性的蛋白。氨基酸的保守取代,即,用具有类似特性例如亲水性、程度以及带电区域的分布的不同氨基酸替代氨基酸在所属领域中认为是通常涉及次要改变。这些次要改变可如所述领域中所理解通过考虑氨基酸的亲水指数来部分地识别。氨基酸的亲水指数是基于其疏水性和电荷的考虑。具有类似亲水指数的氨基酸可被取代并且仍保留蛋白功能在所属领域中已知。在一个方面,取代亲水指数为±2的氨基酸。氨基酸的亲水性也可用于展示会产生保留生物功能的蛋白的取代物。在肽准许计算所述肽的最大局部平均亲水性的情形下考虑氨基酸的亲水性,适用的测量已报导良好地与抗原性和免疫原性相关。美国专利第4,554,101号以引用的方式完全并入本文中。如本领域中所了解,具有类似亲水性值的氨基酸的取代可导致肽保留生物活性,例如免疫原性。取代可用亲水性值在彼此的±2内的氨基酸进行。氨基酸的疏水性指数和亲水性值受所述氨基酸的特定侧链影响。与观测的一致,与生物功能相容的氨基酸取代理解为视氨基酸、并且尤其那些氨基酸的侧链的相对类似性而定,如由疏水性、亲水性、电荷、尺寸和其它特性展示。2.CD24本文提供CD24蛋白,其可包含成熟人类CD24的氨基酸序列或来自其它哺乳动物的那些氨基酸序列,所述氨基酸序列对应于胞外域ECD或其变异体。如上所述,成熟人类CD24蛋白的序列为具有可变丙氨酸a的31个氨基酸长,其中缬氨酸v残基在其C端末端:SETTTGTSSNSSQSTSNSGLAPNPTNATTKVASEQIDNO:1C端缬氨酸或丙氨酸可为免疫原性的,并且可从CD24蛋白中省略以降低其免疫原性。因此,在另一实施例中,CD24蛋白可包含缺乏C端氨基酸的氨基酸序列或成熟人类CD24:SETTTGTSSNSSQSTSNSGLAPNPTNATTKSEQIDNO:2尽管来自小鼠和人类的成熟CD24蛋白的氨基酸序列中有大量序列变异,其功能上等效为人类CD24Fc已展示为在小鼠中具有活性。人类CD24ECD的氨基酸序列展示小鼠蛋白的一些序列保守性39%同一性;基因库寄存编号NP_033976。然而,不出人意料的是,同一性百分比不会更高,因为CD24ECD仅为长度视物种而定的27-31个氨基酸,并且结合到其受体中的一些如Siglec10G通过其唾液酸和或糖蛋白的半乳糖介导。人类Siglec-10基因库寄存编号AF310233的胞外域与其鼠类同系物Siglec-G基因库寄存编号NP_766488受体蛋白之间的氨基酸序列一致性为63%。由于小鼠与人类CD24之间的序列保守性主要在C端中并且以糖基化位点的丰度,因此成熟CD24蛋白的显著变化可容许使用CD24蛋白,尤其在那些变化不影响C端中保守的残基或不影响来自小鼠或人类CD24的糖基化位点的情况下。因此,CD24蛋白可包含成熟鼠类CD24的氨基酸序列:NQTSVAPFPGNQNISASPNPTNATTRGSEQIDNO:3。人类CD24ECD的氨基酸序列展示食蟹猕猴蛋白52%同一性;UniProt寄存编号UniProtKB-I7GKK1相比于小鼠有更多的序列保守性。同样,鉴于因为ECD仅为这些物种中的长度的29-31个氨基酸以及结合到其受体的糖残基的作用,同一性百分比并没有更高,这并不出人意料。食蟹猕猴Siglec-10受体的氨基酸序列尚未确定,但人类与恒河猴Siglec-10基因库寄存编号XP_001116352蛋白之间的氨基酸序列一致性为89%。因此,CD24蛋白还可包含成熟食蟹猕猴或恒河猴CD24的氨基酸序列:TVTTSAPLSSNSPQNTSTTPNPANTTTKASEQIDNO:10CD24蛋白可为可溶性的。CD24蛋白可进一步包含N端信号肽以使从表达蛋白的细胞中分泌。信号肽序列可包含氨基酸序列MGRAMVARLGLGLLLLALLLPTQIYSSEQIDNO:4,其来自内源性人类CD24信号肽。或者,信号序列可以是发现于其它跨膜或分泌蛋白上的那些或由所属领域中已知的现有信号肽修饰的那些中的任一者。a.融合CD24蛋白可在其N端或C端末端融合成蛋白标签,其可包含一部分哺乳动物Ig蛋白,其可为人类或小鼠。所述部分可包含Ig蛋白的Fc区。Fc区可包含Ig蛋白的铰链区和CH2域以及CH3。Ig蛋白可为人类IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM或IgA。Fc部分可包含人类免疫球蛋白G1IgG1同种型SEQIDNO:7。Ig蛋白还可为IgM,并且Fc部分可包含IgM的铰链区和CH3域以及CH4域。蛋白标签还可包含GST、His或FLAG。制造融合蛋白和纯化融合蛋白的方法在所属领域中是众所周知的。基于我们的临床前研究,对于实例中识别的融合蛋白CD24Fc的构筑体,我们已选择使用30个氨基酸的天然CD24分子的截短形式,其在GPI信号裂解位点SEQIDNO:2之前缺乏最终多态氨基酸。这一蛋白与人类IgG1Fc结构域SEQIDNO:7稠合。全长CD24Fc融合蛋白以SEQIDNO:5图1提供,并且从细胞即缺乏裂解的信号序列中分泌的CD24Fc融合蛋白的成熟形式以SEQIDNO:6提供。与IgG1Fc稠合的成熟CD24即具有SEQIDNO:1的成熟CD24蛋白的经处理多态变异体可包含SEQIDNO:11或12。b.产生本文所述的CD24蛋白可被严重糖基化,并且糖部分可涉及CD24的生物活性,如免疫细胞共刺激、与Siglec唾液酸结合免疫球蛋白型凝集素的相互作用以及与损坏相关联分子模式分子DAMP的相互作用。CD24蛋白可使用真核表达系统制备。表达系统可引起来自哺乳动物细胞,如中国仓鼠卵巢CHO细胞的表达。系统还可为病毒载体,如可用于感染真核细胞的复制缺陷型逆转录病毒载体。CD24蛋白还可由从载体或已整合到细胞基因组中的一部分载体中表达CD24蛋白的稳定细胞系产生。稳定的细胞系可从整合的复制缺陷型逆转录病毒载体中表达CD24蛋白。表达系统可为GPExTM。c.医药组合物本文所述的CD24蛋白可含于医药组合物中,其可包含至少一种医药学上可接受的赋形剂。医药组合物可包含溶剂,其可在延长的时段内使CD24蛋白保持稳定。溶剂可为PBS,其可在约-20℃15到-25℃下将CD24蛋白保持稳定达66个月。溶剂可能能够适应与另一种药物组合的CD24蛋白。d.剂量CD24蛋白的剂量最终可通过临床试验确定来确定伴随有可接受的毒性和临床功效的剂量。最初的临床剂量可通过鼠虫和非人类灵长类动物中的药物动力学和毒性研究估算。视瘦素增加的所需量和施用途径而定,CD24蛋白的剂量可为0.01mgkg到1000mgKg,并且可为1到500mgkg。CD24蛋白可通过静脉内输注或皮下或壁内注射施用,并且剂量可为10-100,000mg、10-10,000mg、10-1000mg、10-500mg、10-240mg、10-120mg、or10、30、60、120或240mg,其中个体为人类。3.治疗方法CD24蛋白可向需要增加瘦素含量的个体施用,如患有瘦素缺乏病状的那些个体,如由于瘦素基因中的次形态突变或表观遗传沉默、下丘脑性闭经和包括脂肪萎缩的脂质营养不良综合征LS的瘦素缺乏症。此外,个体可患有为后天性或先天性的全身性脂质营养不良。后天性脂质营养不良包括使用高活性逆转录病毒治疗HAART的那些个体或患有潜在的HIV感染脂质营养不良的最常见形式或自身免疫病状的个体。先天性脂质营养不良包括在协调脂肪细胞分化、脂滴形态和脂质代谢的数种基因中的任一者中患有分子缺乏症的那些个体。个体可为哺乳动物,如人类。个体可能已事先用瘦素替代药物治疗,如瘦素替代治疗LRT或增加血液中瘦素含量的药物。LRT治疗的具体实例为瘦素类似物美曲普汀Myalept,AegerionPharmaceuticals,Inc.,Cambridge,MA,USA。a.施用医药组合物的施用途径可为肠胃外的。肠胃外施用包括但不限于静脉内、动脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、鞘内、关节内和直接注射到受影响的关节中。对于兽用,试剂可根据正常兽医实践施用为合适地可接受的配制物。兽医可易于决定最适于特定动物的投药方案和施用途径。医药组合物可向人类患者、猫、狗、大型动物或禽类施用。CD24蛋白可同时或与其它治疗有节奏地施用。如本文所用,术语“同时simultaneoussimultaneously”意指在彼此的48小时、优选24小时、更优选12小时、但更优选6小时、并且最优选3小时或更少内施用CD24蛋白和其它治疗。如本文中所用,术语“有节奏地”意指不同于其它治疗的时间并且以相对于重复施用的某一频率施用试剂。CD24蛋白可在包括约120hr、118hr、116hr、114hr、112hr、110hr、108hr、106hr、104hr、102hr、100hr、98hr、96hr、94hr、92hr、90hr、88hr、86hr、84hr、82hr、80hr、78hr、76hr、74hr、72hr、70hr、68hr、66hr、64hr、62hr、60hr、58hr、56hr、54hr、52hr、50hr、48hr、46hr、44hr、42hr、40hr、38hr、36hr、34hr、32hr、30hr、28hr、26hr、24hr、22hr、20hr、18hr、16hr、14hr、12hr、10hr、8hr、6hr、4hr、3hr、2hr、1hr、55min、50min、45min、40min、35min、30min、25min、20min、15min、10min、9min、8min、7min、6min、5min、4min、3min、2min以及1min的另一治疗之前的任一点施用。CD24蛋白可在包括约120hr、118hr、116hr、114hr、112hr、110hr、108hr、106hr、104hr、102hr、100hr、98hr、96hr、94hr、92hr、90hr、88hr、86hr、84hr、82hr、80hr、78hr、76hr、74hr、72hr、70hr、68hr、66hr、64hr、62hr、60hr、58hr、56hr、54hr、52hr、50hr、48hr、46hr、44hr、42hr、40hr、38hr、36hr、34hr、32hr、30hr、28hr、26hr、24hr、22hr、20hr、18hr、16hr、14hr、12hr、10hr、8hr、6hr、4hr、3hr、2hr、1hr、55min、50min、45min、40min、35min、30min、25min、20min、15min、10min、9min、8min、7min、6min、5min、4min、3min、2min以及1min的CD24蛋白的第二治疗之前的任一点施用。CD24蛋白可在包括约1min、2min、3min、4min、5min、6min、7min、8min、9min、10min、15min、20min、25min、30min、35min、40min、45min、50min、55min、1hr、2hr、3hr、4hr、6hr、8hr、10hr、12hr、14hr、16hr、18hr、20hr、22hr、24hr、26hr、28hr、30hr、32hr、34hr、36hr、38hr、40hr、42hr、44hr、46hr、48hr、50hr、52hr、54hr、56hr、58hr、60hr、62hr、64hr、66hr、68hr、70hr、72hr、74hr、76hr、78hr、80hr、82hr、84hr、86hr、88hr、90hr、92hr、94hr、96hr、98hr、100hr、102hr、104hr、106hr、108hr、110hr、112hr、114hr、116hr、118hr以及120hr的另一治疗之后的任一点施用。CD24蛋白可在包括约120hr、118hr、116hr、114hr、112hr、110hr、108hr、106hr、104hr、102hr、100hr、98hr、96hr、94hr、92hr、90hr、88hr、86hr、84hr、82hr、80hr、78hr、76hr、74hr、72hr、70hr、68hr、66hr、64hr、62hr、60hr、58hr、56hr、54hr、52hr、50hr、48hr、46hr、44hr、42hr、40hr、38hr、36hr、34hr、32hr、30hr、28hr、26hr、24hr、22hr、20hr、18hr、16hr、14hr、12hr、10hr、8hr、6hr、4hr、3hr、2hr、1hr、55min、50min、45min、40min、35min、30min、25min、20min、15min、10min、9min、8min、7min、6min、5min、4min、3min、2min以及1min的先前CD24治疗之前之后的任一点施用。b.组合治疗CD24蛋白可与另一种药物或治疗方案合并,如瘦素替代治疗LRT,或增加血液中瘦素含量的药物。LRT治疗的具体实例为瘦素类似物美曲普汀Myalept,AegerionPharmaceuticals,Inc.,Cambridge,MA,USA。CD24蛋白和其它药物可一起或依序施用。本发明具有多个方面,通过以下非限制性实例说明。实例实例1本实例证明CD24Fc增加循环瘦素含量。瘦素在血浆中从基线的改变在临床研究中分析,其更详细地描述于下文参见本实例的方法章节。使用基于路明克斯Luminex珠的免疫检定,血浆瘦素含量从40个接受CD24Fc或安慰剂的健康个体中在第-1天预治疗和第3天后治疗获得的80个样品中测定。数据概述在表1中。表1个体血浆中的瘦素含量。分析灵敏度或检测极限LOD以在位于高于平均背景二十个零标准复制的2个标准偏差的点处从标准曲线中计算的值确定。定量的下限LLOQ使用经不同的三轮重复三次检定的标准稀释剂中的2倍稀释系列的标准品确定,并且定义为测量的变化系数CV时的点为30%。CV针对浓度计算和绘制,并且LLOQ从图中插入。检定效能特征为如下表2中。表2分析物瘦素单位pgmlLOD8.1LLOQ18.2标准曲线范围7.7-600,000图2显示对于通过给药组分组的患者在第3天第-1天瘦素的比率。如图所示,在CD24Fc治疗后并且在0、60、120和240mg组之间相对量的循环瘦素中有向上趋势,这一增加在统计学上显著0.009397,剂量依赖性一般线性模型回归,证明剂量依赖性增量高于60mg。此外,相比于安慰剂0mgP=0.05,如通过史都登氏StudentT测试测定,在240mg组中在CD24Fc施用后瘦素的含量在统计学上显著增加,指示CD24Fc对于增加人类患者的瘦素是有效的。方法这为阶段I、随机的、双盲的、安慰剂控制的、单个递增剂量研究以评估健康男性和女性成年个体中CD24Fc的安全性、耐受性和PK。5组的8个个体中总共40个个体每一个都参与本研究。每组中的8个个体中的六个接受研究药物,并且2个个体接受安慰剂0.9%氯化钠,生理盐水。第一组给药10mg,并且后续组接受30mg、60mg、120mg和240mg的CD24Fc或符合条件的安慰剂。给药基于固定量的CD24Fc并且不基于重量或BSA。相隔至少3周向个体给药以使检视每个事先组的安全性和耐受性数据。仅当已证明恰当的安全性和耐受性时才准许向新组的个体施用下一较高剂量。在每组中,最初的2个个体在第1天为1个研究药物受体和1个安慰剂受体。第3到第5和第6到第8个个体在第7天之子组之间最少相隔24小时后给药。每个个体在相同子组中至少相隔1小时给药。必要时,其余个体的给药延迟未决检视任何显著安全性问题,其可已在涉及所述组中的第一子组或第二子组的给药后时段期间出现。后续组在事先组之后给药至少3周。筛选期:筛选问诊问诊1在开始活性治疗期之前出现至多21天数。在提供知情同意书之后,个体为入选经历筛选程序。治疗期:在第-1天问诊2允许个体临床药理学单元CPU,并且随机治疗期在最少10小时的隔夜禁食后的第1天开始。个体随机指派给用CD24Fc或安慰剂以单个剂量治疗。个体保持被限制直到第4天的早晨。跟踪:所有个体在第7天、第14天、第21天、第28天和第42±1天天回到CPU以用于跟踪问诊问诊3、问诊4、问诊5、问诊6和问诊7。问诊7为所有个体的最终问诊。治疗持续时间:每个个体的全部研究持续时间为至多63天。单个剂量施用出现在第1天。个体数量:计划:40个个体筛选:224个个体随机:40个个体完成:39个个体中断:1个个体包括的诊断和主要标准:本研究的群体为18岁与55岁包括端值之间、身体质量指数在18kgm2与30kgm2包括端值之间的健康男性和女性。研究性产物和比较物信息:CD24Fc:通过IV输注施用的10mg、30mg、60mg、120mg或240mg的单个剂量;批号:09MM-036。CD24Fc为由人类CD24的胞外域和人类免疫球蛋白G1的片段可结晶区IgG1Fc组成的完全人类化的融合蛋白。以无菌、澄清、无色、无防腐剂、水溶液提供CD24Fc以用于IV施用。CD24Fc配制为以10mgmL的浓度和7.2的pH的单个剂量注射溶液。每个CD24Fc小瓶含有16mL±0.2mL的CD24Fc中的160mg的CD24Fc、5.3mg的氯化钠、32.6mg的磷酸钠二元七水合物以及140mg的磷酸二氢钠单水合物。在具有氯丁基橡胶塞子和铝轻拍式封口物的澄清硼硅玻璃小瓶中提供CD24Fc。符合条件的安慰剂0.9%氯化钠,生理盐水通过IV输注施用;批次号:P296855、P311852、P300715、P315952。意向治疗ITT群体由接受至少1个剂量的研究药物的所有个体组成。ITT群体为个体信息和安全性评估的主要分析群体。在第1天预给药、在第天给药和在第2天、第3天、第4天、第7天、第14天、第21±1天、第28±1天以及第42±1天收集血浆样品。所列参考:RodriguezAJ,MastronardiCA,Paz-FilhoGJ.《治疗全身性脂质营养不良的新进展:美曲普汀的作用Newadvancesinthetreatmentofgeneralizedlipodystrophy:roleofmetreleptin》.《治疗法和临床风险管理TherapeuticsandClinicalRiskManagement》.2015;11:1391-1400.doi:10.2147TCRM.S66521。序列表110OncoImmune,Inc.Liu,YangZheng,Pan120使用CD24以降低低密度脂蛋白胆固醇含量130060275.0500.01PC00150621581571512015-05-0716012170PatentInversion3.5210121131212PRT213智人220221X22231..31223缬氨酸或丙氨酸4001SerGluThrThrThrGlyThrSerSerAsnSerSerGlnSerThrSer151015AsnSerGlyLeuAlaProAsnProThrAsnAlaThrThrLysXaa202530210221130212PRT213智人4002SerGluThrThrThrGlyThrSerSerAsnSerSerGlnSerThrSer151015AsnSerGlyLeuAlaProAsnProThrAsnAlaThrThrLys202530210321127212PRT213小家鼠4003AsnGlnThrSerValAlaProPheProGlyAsnGlnAsnIleSerAla151015SerProAsnProThrAsnAlaThrThrArgGly2025210421126212PRT213智人4004MetGlyArgAlaMetValAlaArgLeuGlyLeuGlyLeuLeuLeuLeu151015AlaLeuLeuLeuProThrGlnIleTyrSer20252105211287212PRT213人工220223融合蛋白4005MetGlyArgAlaMetValAlaArgLeuGlyLeuGlyLeuLeuLeuLeu151015AlaLeuLeuLeuProThrGlnIleTyrSerSerGluThrThrThrGly202530ThrSerSerAsnSerSerGlnSerThrSerAsnSerGlyLeuAlaPro354045AsnProThrAsnAlaThrThrLysProLysSerCysAspLysThrHis505560ThrCysProProCysProAlaProGluLeuLeuGlyGlyProSerVal65707580PheLeuPheProProLysProLysAspThrLeuMetIleSerArgThr859095ProGluValThrCysValValValAspValSerHisGluAspProGlu100105110ValLysPheAsnTrpTyrValAspGlyValGluValHisAsnAlaLys115120125ThrLysProArgGluGluGlnTyrAsnSerThrTyrArgValValSer130135140ValLeuThrValLeuHisGlnAspTrpLeuAsnGlyLysGluTyrLys145150155160CysLysValSerAsnLysAlaLeuProAlaProIleGluLysThrIle165170175SerLysAlaLysGlyGlnProArgGluProGlnValTyrThrLeuPro180185190ProSerArgAspGluLeuThrLysAsnGlnValSerLeuThrCysLeu195200205ValLysGlyPheTyrProSerAspIleAlaValGluTrpGluSerAsn210215220GlyGlnProGluAsnAsnTyrLysThrThrProProValLeuAspSer225230235240AspGlySerPhePheLeuTyrSerLysLeuThrValAspLysSerArg245250255TrpGlnGlnGlyAsnValPheSerCysSerValMetHisGluAlaLeu260265270HisAsnHisTyrThrGlnLysSerLeuSerLeuSerProGlyLys2752802852106211261212PRT213人工220223融合蛋白4006SerGluThrThrThrGlyThrSerSerAsnSerSerGlnSerThrSer151015AsnSerGlyLeuAlaProAsnProThrAsnAlaThrThrLysProLys202530SerCysAspLysThrHisThrCysProProCysProAlaProGluLeu354045LeuGlyGlyProSerValPheLeuPheProProLysProLysAspThr505560LeuMetIleSerArgThrProGluValThrCysValValValAspVal65707580SerHisGluAspProGluValLysPheAsnTrpTyrValAspGlyVal859095GluValHisAsnAlaLysThrLysProArgGluGluGlnTyrAsnSer100105110ThrTyrArgValValSerValLeuThrValLeuHisGlnAspTrpLeu115120125AsnGlyLysGluTyrLysCysLysValSerAsnLysAlaLeuProAla130135140ProIleGluLysThrIleSerLysAlaLysGlyGlnProArgGluPro145150155160GlnValTyrThrLeuProProSerArgAspGluLeuThrLysAsnGln165170175ValSerLeuThrCysLeuValLysGlyPheTyrProSerAspIleAla180185190ValGluTrpGluSerAsnGlyGlnProGluAsnAsnTyrLysThrThr195200205ProProValLeuAspSerAspGlySerPhePheLeuTyrSerLysLeu210215220ThrValAspLysSerArgTrpGlnGlnGlyAsnValPheSerCysSer225230235240ValMetHisGluAlaLeuHisAsnHisTyrThrGlnLysSerLeuSer245250255LeuSerProGlyLys2602107211231212PRT213智人4007ProLysSerCysAspLysThrHisThrCysProProCysProAlaPro151015GluLeuLeuGlyGlyProSerValPheLeuPheProProLysProLys202530AspThrLeuMetIleSerArgThrProGluValThrCysValValVal354045AspValSerHisGluAspProGluValLysPheAsnTrpTyrValAsp505560GlyValGluValHisAsnAlaLysThrLysProArgGluGluGlnTyr65707580AsnSerThrTyrArgValValSerValLeuThrValLeuHisGlnAsp859095TrpLeuAsnGlyLysGluTyrLysCysLysValSerAsnLysAlaLeu100105110ProAlaProIleGluLysThrIleSerLysAlaLysGlyGlnProArg115120125GluProGlnValTyrThrLeuProProSerArgAspGluLeuThrLys130135140AsnGlnValSerLeuThrCysLeuValLysGlyPheTyrProSerAsp145150155160IleAlaValGluTrpGluSerAsnGlyGlnProGluAsnAsnTyrLys165170175ThrThrProProValLeuAspSerAspGlySerPhePheLeuTyrSer180185190LysLeuThrValAspLysSerArgTrpGlnGlnGlyAsnValPheSer195200205CysSerValMetHisGluAlaLeuHisAsnHisTyrThrGlnLysSer210215220LeuSerLeuSerProGlyLys2252302108211288212PRT213人工220223融合蛋白4008MetGlyArgAlaMetValAlaArgLeuGlyLeuGlyLeuLeuLeuLeu151015AlaLeuLeuLeuProThrGlnIleTyrSerSerGluThrThrThrGly202530ThrSerSerAsnSerSerGlnSerThrSerAsnSerGlyLeuAlaPro354045AsnProThrAsnAlaThrThrLysValProLysSerCysAspLysThr505560HisThrCysProProCysProAlaProGluLeuLeuGlyGlyProSer65707580ValPheLeuPheProProLysProLysAspThrLeuMetIleSerArg859095ThrProGluValThrCysValValValAspValSerHisGluAspPro100105110GluValLysPheAsnTrpTyrValAspGlyValGluValHisAsnAla115120125LysThrLysProArgGluGluGlnTyrAsnSerThrTyrArgValVal130135140SerValLeuThrValLeuHisGlnAspTrpLeuAsnGlyLysGluTyr145150155160LysCysLysValSerAsnLysAlaLeuProAlaProIleGluLysThr165170175IleSerLysAlaLysGlyGlnProArgGluProGlnValTyrThrLeu180185190ProProSerArgAspGluLeuThrLysAsnGlnValSerLeuThrCys195200205LeuValLysGlyPheTyrProSerAspIleAlaValGluTrpGluSer210215220AsnGlyGlnProGluAsnAsnTyrLysThrThrProProValLeuAsp225230235240SerAspGlySerPhePheLeuTyrSerLysLeuThrValAspLysSer245250255ArgTrpGlnGlnGlyAsnValPheSerCysSerValMetHisGluAla260265270LeuHisAsnHisTyrThrGlnLysSerLeuSerLeuSerProGlyLys2752802852109211288212PRT213人工220223融合蛋白4009MetGlyArgAlaMetValAlaArgLeuGlyLeuGlyLeuLeuLeuLeu151015AlaLeuLeuLeuProThrGlnIleTyrSerSerGluThrThrThrGly202530ThrSerSerAsnSerSerGlnSerThrSerAsnSerGlyLeuAlaPro354045AsnProThrAsnAlaThrThrLysAlaProLysSerCysAspLysThr505560HisThrCysProProCysProAlaProGluLeuLeuGlyGlyProSer65707580ValPheLeuPheProProLysProLysAspThrLeuMetIleSerArg859095ThrProGluValThrCysValValValAspValSerHisGluAspPro100105110GluValLysPheAsnTrpTyrValAspGlyValGluValHisAsnAla115120125LysThrLysProArgGluGluGlnTyrAsnSerThrTyrArgValVal130135140SerValLeuThrValLeuHisGlnAspTrpLeuAsnGlyLysGluTyr145150155160LysCysLysValSerAsnLysAlaLeuProAlaProIleGluLysThr165170175IleSerLysAlaLysGlyGlnProArgGluProGlnValTyrThrLeu180185190ProProSerArgAspGluLeuThrLysAsnGlnValSerLeuThrCys195200205LeuValLysGlyPheTyrProSerAspIleAlaValGluTrpGluSer210215220AsnGlyGlnProGluAsnAsnTyrLysThrThrProProValLeuAsp225230235240SerAspGlySerPhePheLeuTyrSerLysLeuThrValAspLysSer245250255ArgTrpGlnGlnGlyAsnValPheSerCysSerValMetHisGluAla260265270LeuHisAsnHisTyrThrGlnLysSerLeuSerLeuSerProGlyLys2752802852101021129212PRT213食蟹猴40010ThrValThrThrSerAlaProLeuSerSerAsnSerProGlnAsnThr151015SerThrThrProAsnProAlaAsnThrThrThrLysAla202521011211262212PRT213人工220223融合蛋白40011SerGluThrThrThrGlyThrSerSerAsnSerSerGlnSerThrSer151015AsnSerGlyLeuAlaProAsnProThrAsnAlaThrThrLysValPro202530LysSerCysAspLysThrHisThrCysProProCysProAlaProGlu354045LeuLeuGlyGlyProSerValPheLeuPheProProLysProLysAsp505560ThrLeuMetIleSerArgThrProGluValThrCysValValValAsp65707580ValSerHisGluAspProGluValLysPheAsnTrpTyrValAspGly859095ValGluValHisAsnAlaLysThrLysProArgGluGluGlnTyrAsn100105110SerThrTyrArgValValSerValLeuThrValLeuHisGlnAspTrp115120125LeuAsnGlyLysGluTyrLysCysLysValSerAsnLysAlaLeuPro130135140AlaProIleGluLysThrIleSerLysAlaLysGlyGlnProArgGlu145150155160ProGlnValTyrThrLeuProProSerArgAspGluLeuThrLysAsn165170175GlnValSerLeuThrCysLeuValLysGlyPheTyrProSerAspIle180185190AlaValGluTrpGluSerAsnGlyGlnProGluAsnAsnTyrLysThr195200205ThrProProValLeuAspSerAspGlySerPhePheLeuTyrSerLys210215220LeuThrValAspLysSerArgTrpGlnGlnGlyAsnValPheSerCys225230235240SerValMetHisGluAlaLeuHisAsnHisTyrThrGlnLysSerLeu245250255SerLeuSerProGlyLys26021012211262212PRT213人工220223融合蛋白40012SerGluThrThrThrGlyThrSerSerAsnSerSerGlnSerThrSer151015AsnSerGlyLeuAlaProAsnProThrAsnAlaThrThrLysAlaPro202530LysSerCysAspLysThrHisThrCysProProCysProAlaProGlu354045LeuLeuGlyGlyProSerValPheLeuPheProProLysProLysAsp505560ThrLeuMetIleSerArgThrProGluValThrCysValValValAsp65707580ValSerHisGluAspProGluValLysPheAsnTrpTyrValAspGly859095ValGluValHisAsnAlaLysThrLysProArgGluGluGlnTyrAsn100105110SerThrTyrArgValValSerValLeuThrValLeuHisGlnAspTrp115120125LeuAsnGlyLysGluTyrLysCysLysValSerAsnLysAlaLeuPro130135140AlaProIleGluLysThrIleSerLysAlaLysGlyGlnProArgGlu145150155160ProGlnValTyrThrLeuProProSerArgAspGluLeuThrLysAsn165170175GlnValSerLeuThrCysLeuValLysGlyPheTyrProSerAspIle180185190AlaValGluTrpGluSerAsnGlyGlnProGluAsnAsnTyrLysThr195200205ThrProProValLeuAspSerAspGlySerPhePheLeuTyrSerLys210215220LeuThrValAspLysSerArgTrpGlnGlnGlyAsnValPheSerCys225230235240SerValMetHisGluAlaLeuHisAsnHisTyrThrGlnLysSerLeu245250255SerLeuSerProGlyLys260

权利要求:1.一种用于增加个体的血流中循环瘦素含量的方法,所述方法包含向有需要的个体施用CD24蛋白。2.根据权利要求1所述的方法,其中所述个体具有减少的瘦素。3.根据权利要求2所述的方法,其中所述个体具有脂质营养不良。4.根据权利要求2所述的方法,其中所述个体具有HIV。5.根据权利要求2所述的方法,其中所述个体已接受抗病毒治疗。6.根据权利要求1所述的方法,其中所述CD24蛋白包含成熟人类CD24的序列或其变异体。7.根据权利要求6所述的方法,其中所述成熟人类CD24包含选自由SEQIDNO:1和2的序列组成的组的序列。8.根据权利要求6所述的方法,其中所述CD24蛋白包含人类CD24的胞外域。9.根据权利要求7所述的方法,其中CD24蛋白进一步包含蛋白标签,其中所述蛋白标签在所述CD24蛋白的N端或C端融合。10.根据权利要求9所述的方法,其中所述蛋白标签包含哺乳动物免疫球蛋白Ig部分。11.根据权利要求10所述的方法,其中所述Ig部分为人类免疫球蛋白的Fc部分。12.根据权利要求11所述的方法,其中所述Fc部分包含所述人类Ig蛋白的铰链区和CH2域以及CH3域,并且其中所述Ig选自由以下组成的组:IgG1、IgG1、IgG3、IgG4和IgA。13.根据权利要求11所述的方法,其中所述Fc部分包含IgM的铰链区和CH3域以及CH4域。14.根据权利要求11所述的方法,其中CD24蛋白包含SEQIDNO:6的序列。15.根据权利要求1所述的方法,其中所述CD24蛋白是使用真核蛋白表达系统产生。16.根据权利要求15所述的方法,其中所述表达系统包含中国仓鼠卵巢细胞系中含有的载体。17.根据权利要求16所述的方法,其中CD24蛋白包含SEQIDNO:4的信号序列。18.根据权利要求16所述的方法,其中信号肽序列获自天然蛋白序列或功能上等效的变异体。19.根据权利要求1所述的方法,其中所述CD24蛋白为可溶性的。20.根据权利要求1所述的方法,其中所述CD24蛋白被糖基化。21.一种用于治疗或预防个体的脂质营养不良综合征的方法,所述方法包含向有需要的个体施用CD24蛋白。22.一种用于治疗或预防患有HIV的个体的脂质营养不良的方法,所述方法包含向有需要的个体施用CD24蛋白。23.一种用于治疗或预防接受抗病毒治疗的个体的脂质营养不良综合征的方法,所述方法包含向有需要的个体施用CD24蛋白。24.一种用于增加个体的血流中循环瘦素含量的方法,所述方法包含向有需要的个体施用SEQIDNO:6的CD24蛋白。25.一种用于治疗或预防个体的脂质营养不良综合征的方法,所述方法包含向有需要的个体施用SEQIDNO:6的CD24蛋白。26.一种用于治疗或预防患有HIV的个体的的脂质营养不良的方法,所述方法包含向有需要的个体施用SEQIDNO:6的CD24蛋白。27.一种用于治疗或预防接受抗病毒治疗的个体的的脂质营养不良综合征的方法,所述方法包含向有需要的个体施用SEQIDNO:6的CD24蛋白。

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