申请/专利权人：潍坊医学院

申请日：2021-07-15

公开（公告）日：2021-11-02

公开（公告）号：CN113584117A

主分类号：C12Q1/04(20060101)

分类号：C12Q1/04(20060101);G01N33/569(20060101);G01N33/68(20060101);C12R1/32(20060101)

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2021.11.19#实质审查的生效;2021.11.02#公开

摘要：本发明涉及病原菌鉴定技术领域，且公开了一种高通量鉴定病原菌与宿主分子之间的相互作用的方法，利用宿主细胞的模式识别受体和宿主免疫系统中的一些关键受体信号和传导分子等基因，敲除宿主信息分子分离出巨噬细胞，使用含有报告基因质粒的病原菌感染经过基因组RNA干扰转染的巨噬细胞，进一步利用基因敲除宿主信息分子获得感染模型，检测分析宿主感染病原菌后的存活变化及功能。通过研究病原菌蛋白和宿主蛋白相互作用网络，非编码RNA和蛋白相互作用，重点发现和研究新的病原菌因子和宿主因子，新的调控机制，确定侵入和存活缺陷突变株，高通量地分析菌体分泌蛋白在宿主细胞中的诱导表达。

主权项：1.一种高通量鉴定病原菌与宿主分子之间的相互作用的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、通过利用宿主细胞的模式识别受体和宿主免疫系统中的一些关键受体信号和传导分子等基因，敲除宿主信息分子分离出巨噬细胞；S2、挑选S1中获得的巨噬细胞感染病原菌，使用含有报告基因质粒的病原菌感染经过基因组RNA干扰转染的巨噬细胞，选择3-6个巨噬细胞表面细胞受体，通过RNA干扰或基因敲除后研究其病原菌在侵入和在细胞内存活的作用机制；S3、进一步利用基因敲除宿主信息分子获得感染模型，检测分析宿主感染病原菌后的存活、细胞因子和免疫细胞亚群数量的变化及功能；S4、将针对在宿主细胞内特异表达的靶蛋白的编码基因采用敲除、互补等遗传分析方法，构建相应的基因工程菌株，通过质粒转染表达在相关的细胞模型和动物模型中，进一步鉴定和确认靶蛋白与病原菌的胞内生存是否相关；S5、采用RNA干扰和抗体干扰等技术，阐明宿主细胞蛋白在病原菌感染中的应答及信号路调控机制，利用荧光标记、免疫组化以及细胞实时成像等技术，研究病原菌在细胞内所分泌蛋白的定向运输和分布定位。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 潍坊医学院 高通量鉴定病原菌与宿主分子之间的相互作用的方法

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