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【发明公布】一种HCV四受体转基因合并STAT1敲除小鼠的制备方法_中国医学科学院病原生物学研究所_202011565016.9 

申请/专利权人:中国医学科学院病原生物学研究所

申请日:2020-12-25

公开(公告)日:2022-07-01

公开(公告)号:CN114686517A

主分类号:C12N15/85

分类号:C12N15/85;C12N15/89;C12N15/90;C12N15/113;C12N15/12;A01K67/027

优先权:

专利状态码:在审-实质审查的生效

法律状态:2022.07.19#实质审查的生效;2022.07.01#公开

摘要:本发明提供了一种CD81、CLDN1、OCLN、SRB1四受体转基因合并CRISPRCas9技术构建STAT1基因敲除小鼠简称4hEFTgSTAT1‑‑小鼠的构建方法,根据转基因技术和显微注射法获得四受体转基因小鼠,基于CRISPERCas9系统设计靶基因sgRNA经显微注射法获得STAT1敲除小鼠;将四受体转基因小鼠与STAT1敲除小鼠杂交得到杂合F1代,再通过F1代自交获得纯合4hEFTgSTAT1‑‑小鼠,即本发明小鼠,可用于建立慢性HCV感染小鼠模型。

主权项:1.一种CD81、CLDN1、OCLN、SRB1四受体转基因合并CRISPRCas9技术构建STAT1基因敲除小鼠的构建方法,其特征在于:1CD81、CLDN1、OCLN、SRB1四受体转基因小鼠构建;将pFUW-CSCO-4hEF表达质粒酶切;得到线性化DNA片段显微注射入ICR小鼠受精卵,植入假孕小鼠子宫内;子鼠出生后经基因组PCR方法鉴定基因型,获得阳性4hEFTg小鼠;2STAT1敲除小鼠构建;针对STAT1基因第一外显子和第二外显子序列,设计2对sgRNA序列,通过构建STAT1基因敲除载体并体外转录获得sgRNA;合成的sgRNA单链通过退火复性结合成小片段,插入BSAⅠ线性化的pUC57-sgRNA载体,通过体外转录成为可注射的sgRNA;pST1374-NLS-flag-linker-Cas9载体通过体外转录成为可注射的Cas9-RNA。经显微注射入ICR小鼠受精卵;受精卵移植入ICR假孕雌鼠子宫;小鼠出生后经基因组PCR方法检测,得到阳性F0代小鼠;F0代小鼠经自交获得纯合STAT1--小鼠;34hEFTgSTAT1--小鼠构建;将纯合STAT1--小鼠与4hEFTg小鼠杂交,出生小鼠经PCR检测,获得含CD81、CLDN1、OCLN、SRB1四受体转基因阳性STAT1杂合敲除的F1代4hEFTgSTAT1+-小鼠;F1代4hEFTgSTAT1+-小鼠自交,出生小鼠经PCR扩增测序检测,鉴定基因型,获得含CD81、CLDN1、OCLN、SRB1四受体转基因阳性合并STAT1纯合敲除的F2代4hEFTgSTAT1--小鼠,即为小鼠动物模型。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 中国医学科学院病原生物学研究所 一种HCV四受体转基因合并STAT1敲除小鼠的制备方法

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