【发明授权】T细胞受体及其用途_癌症研究科技有限公司_201680079010.6 

申请/专利权人:癌症研究科技有限公司

申请日:2016-11-15

公开(公告)日:2022-08-12

公开(公告)号:CN108602875B

主分类号:C07K14/725

分类号:C07K14/725;A61K38/17

优先权:["20151116 GB 1520191.6"]

专利状态码:有效-授权

法律状态:2022.08.12#授权;2018.10.26#实质审查的生效;2018.09.28#公开

摘要:本发明涉及一种T细胞受体及其用途,包括治疗EBV+肿瘤,所述T细胞受体包含:aα链,所述α链包含如SEQIDNo.1所示的氨基酸序列或其功能等同物;和或bβ链,所述β链包含如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列或其功能等同物。

主权项:1.一种T细胞受体,包含:a.α链,所述α链包含SEQIDNo.1所示的氨基酸序列;和b.β链,所述β链包含SEQIDNo.2所示的氨基酸序列。

全文数据:T细胞受体及其用途[0001]本发明涉及编码T细胞受体TCR的多肽和多核苷酸及其在治疗Epstein-Barr病毒阳性EBV+肿瘤例如鼻咽癌、NKT细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、移植后淋巴增生性疾病、弥漫性大B细胞淋巴瘤和一些胃癌中的用途。[0002]背景[0003]鼻咽癌NPC在整个东南亚地区特别是在中国南部尤其常见,在那里它是男性中第三大常见癌症,年发病率高达28例100,000名男性(1。早期疾病对放疗+-化疗响应良好,但对2687例在香港接受治疗的患者进行的研究表明,超过一半的患有晚期疾病(III-IV期)的这些患者具有仅72%的5年的疾病特异性存活率2。存活者也处于治疗相关毒性,包括继发性恶性肿瘤的风险中(3。因此,对开发针对这种癌症的改进疗法存在明确需求。[0004]Epstein-Barr病毒EBV在患有未分化的NPC患者的恶性细胞中被始终如一地检测到,并且与该肿瘤和其他人类肿瘤的发病机制密切相关4。尽管EBV具有致癌潜力,但EBV在人群中无处不在,并且它通常作为在病毒特异性T细胞的控制下的无症状的终生感染持续存在4。因此,该病毒在NPC中的存在提高了基于T细胞的疗法用于该疾病的可能性。[0005]基于输注肿瘤特异性T细胞的治疗已在一些癌症中产生了令人印象深刻的临床响应。事实上,一些最早的支持该方法的数据来自靶向EBV+淋巴瘤的试验。输注EBV特异性多克隆T细胞系作为用于发生在移植受体中的罕见EBV+淋巴瘤的治疗性和预防性处理高度有效5。然而,为了将该处理扩展到更常见的EBV+肿瘤诸如NPC,必须解决两个问题。首先,最初用于治疗EBV+淋巴瘤的多克隆T细胞系使用自体EBV转化的类淋巴母细胞系LCL在体外再活化。在LCL和大多数移植后EBV+淋巴瘤)内,该病毒表达至少六种核抗原£8嫩-1、£8謹_2、EBNA-3A、EBNA-3B、EBNA-3C、EBNA-LP和两种潜伏膜蛋白LMP1和LMP2。其中,EBNA3家族的成员是CD8+T细胞的免疫显性抗原。然而,在NPC中,EBV蛋白表达限于EBNAKLMP1可变和LMP2。尽管如此,通过输注LCL再活化的T细胞系来治疗NPC的尝试己在少数患者中产生客观响应6-9。低频率的LMP2特异性T细胞在一些输注的细胞制品中是可检测的,并且这些可具有介导的抗肿瘤效应,但是由于大多数病毒特异性T细胞靶向的EBV基因在肿瘤中未表达,所以该程序明显不是最佳的(7、9。其次,通过LCL再活化产生T细胞需要超过2个月的体外培养,包括建立LCL以及随后选择性扩增EBV特异性效应细胞所需的时间。这是劳动密集型的,并且并不总是产生可检测的NPC相关EBV抗原特异性的T细胞应答7-9。最近,使用重组病毒载体或肽尝试了靶向NPC相关EBV抗原的T细胞的选择性再活化10-12,但是这又需要数周的体外培养和或经常导致具有非常低频率的肿瘤特异性T细胞的产物。[0006]因此,需要更快和更容易的方法来提供用于治疗或改善EBV+肿瘤,特别是表达LMP2并且是HLAA*1101的那些EBV+肿瘤的药物。合适地,EBV+肿瘤可包括鼻咽癌、NKT细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、移植后淋巴增生性疾病、弥漫性大B细胞淋巴瘤和一些胃癌。优选地,NPC。[0007]本公开内容的简述[OOOS]在一个方面中,本发明提供了一种T细胞受体,包含:[0009]a.a链,所述a链包含如SEQIDNo.丨所示的氨基酸序列或其功能等同物;和或[0010]b_f3链,所述P链包含如SEQIDNo.2所示的氨基酸序列或其功能等同物。[0011]合适地,T细胞受体的a链和0链可通过接头例如猪porcine接头连接。[0012]合适地,T细胞受体可包含如SEQIDNo.3所示的氨基酸序列或其功能等同物。[0013]合适地,1'细胞受体可包含与如5£010吣.1、8£010恥.2和或3£01〇如.3所示的氨基酸序列至少95%相同的氨基酸序列。[0014]合适地,除去一个或数个修饰,T细胞受体可包含如以下任一个所示的序列:SEQIDNo.1、SEQIDNo.2和SEQIDNo.3。优选地,所述一个或数个修饰是取代并且可优选地在可变区内进行。[0015]合适地,本发明的T细胞受体可在等同于a链的可变区的位置48的位置处包含半胱氨酸残基在图1中以粗体和下划线显示),并在等同于0链的可变区的位置57的位置处包含半胱氨酸残基在图2中以粗体和下划线显示)。[0016]合适地,T细胞受体可由包含以下的核苷酸序列编码:[0017]a.SEQIDNo.4至6的任一个;[0018]b•由于遗传密码简并性而等同于SEQIDNo.4至6的任一个的核苷酸序列;[0019]c•编码功能上等同于由包含SEQIDNo.4至6的任一个的核苷酸序列编码的T细胞受体并且与其具有至少90%同一性的T细胞受体的核苷酸序列;或[0020]d•由于遗传密码简并性而等同于根据以上C的核苷酸序列的核苷酸序列。[0021]在另一个方面中,本发明涉及针对癌症的免疫动员单克隆TCRImmTaC,其包含可溶性的根据本发明的TCR。合适地,ImmTac可包含抗⑶3scFv。[0022]在另一个方面中,本发明提供一种包含以下的核酸序列:[0023]a.SEQIDNo.4至6的任一个;[0024]b•由于遗传密码简并性而等同于SEQIDNo.4至6的任一个的核苷酸序列;[0025]c•编码功能上等同于由包含SEQIDNo.4至6的任一个的核苷酸序列编码的T细胞受体并且与其具有至少90%同一性的TCR受体的核苷酸序列;或[0026]d.由于遗传密码简并性而等同于根据以上c的核苷酸序列的核苷酸序列。[0027]在另一个方面中,本发明提供了包含本发明的核酸序列的载体。[0028]在另一个方面中,本发明提供了用本发明的核酸序列或本发明的载体转化或转染的宿主细胞;优选地宿主细胞是T细胞,例如CD8+或CD4+T细胞。合适地,宿主细胞可以是来自待治疗患者的分离的T细胞。[0029]在又另一个方面中,本发明提供了包含以下的组合物:[0030]a.本发明的T细胞受体;[0031]b.本发明的ImmTac;[0032]c.本发明的核酸序列;[0033]d•本发明的载体;或[0034]e.本发明的宿主细胞。[0035]在另一个方面中,本发明提供了本发明的T细胞受体;本发明的ImmTac;或本发明的组合物,用于在治疗或预防EBV+肿瘤中使用。合适地,EBV+肿瘤可表达LMP2并且是HLAA*1101。合适地,EBV+肿瘤可包括鼻咽癌、NKT细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、移植后淋巴增生性疾病、弥漫性大B细胞淋巴瘤和一些胃癌。优选地,EBV+肿瘤是鼻咽癌,优选地未分化的鼻咽癌。[0036]合适地,T细胞受体或药物组合物可以被配制为提供至少1〇8个或至少1〇9个包含T细胞受体的T细胞的剂量。[0037]在另一个方面中,本发明提供了本发明的T细胞受体或本发明的组合物在制备用于治疗或预防EBV+肿瘤的药物中的用途。合适地,EBV+肿瘤可表达LMP2并且是HLAA*1101。合适地,EBV+肿瘤可包括鼻咽癌、NKT细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、移植后淋巴增生性疾病、弥漫性大B细胞淋巴瘤和一些胃癌。优选地,EBV+肿瘤是鼻咽癌,优选地未分化的鼻咽癌。[0038]合适地,T细胞受体或药物组合物可以被配制为提供至少108个或至少109个包含T细胞受体的T细胞的剂量。[0039]在另一个方面中,本发明提供了制备包含本发明的T细胞受体的T细胞的体外方法,包括:用本发明的核酸序列转染或转化T细胞例如CD8+或CD4+T细胞样品。[0040]在另一个方面中,本发明提供了治疗或预防受试者中的EBV+肿瘤的方法,包括施用治疗有效量的:a本发明的T细胞受体;b本发明的ImmTac;或c本发明的组合物。合适地,EBV+肿瘤可表达LMP2并且是HLAA*1101。合适地,EBV+肿瘤可包括鼻咽癌、NKT细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、移植后淋巴增生性疾病、弥漫性大B细胞淋巴瘤和一些胃癌。优选地,EBV+肿瘤是鼻咽癌,优选地未分化的鼻咽癌。[0041]合适地,受试者自体的T细胞可以用本发明的T细胞受体或本发明的组合物转化或转染,并且治疗有效量的经转化的T细胞被施用。因此,可将包含本发明的T细胞受体的自体T细胞施用至受试者。[0042]适当地,可以施用至少108或109个T细胞。优选地,施用通过输注进行。[0043]附图简述[0044]参考附图,在下文中进一步描述本发明的实施方案,在附图中:[0045]图1显示了本发明的TCR的a链的氨基酸序列(SEQIDNo.1。呈粗体的序列表示在前的)恒定区与(接下来的)可变区之间的连接区域。“g’表示可变区的位置48,此处氨基酸被改变为半胱氨酸。[0046]图2显示了本发明的TCR的P链的氨基酸序列(SEQIDNo.2。呈粗体的序列表示在前的)恒定区与接下来的)可变区之间的连接区域。“g’表示可变区的位置57,此处氨基酸被改变为半胱氨酸。[0047]图3显示了本发明的TCR的全长氨基酸序列(SEQIDNo.3。呈粗体的序列代表将在前的a链连接到接下来的e链的猪接头。[0048]图4显示了编码由SEQIDNo.1表示的本发明的TCR的a链的密码子优化的核苷酸序列(SEQIDNo.4。(在前的)恒定区与接下来的)可变区之间的连接区域的核苷酸序列以粗体显示。[0049]图5显示了编码由SEQIDNo.2表示的本发明的TCR的P链的密码子优化的核苷酸序列(SEQIDNo.5。(在前的恒定区与(接来下的)可变区之间的连接区域的核苷酸序列呈粗体显示。合适地,贯穿始终提及SEQIDNo.5是指图5中显示的序列,但没有加下划线的终止密码子。[0050]图6显示了编码由SEQIDNo.3表示的本发明的全长TCR的密码子优化的核苷酸序列(SEQIDNo.6。(在前的)编码a链的核苷酸序列与(接下来的)编码0链的核苷酸序列之丨曰J的接头的核苷酸序列以粗体显示。_1]图7显示了A*1101限制性SSC特异性CD8+细胞毒性T细胞克隆的表征。(a通过细胞毒性测定E:T二3:1确定对SSC肽的亲合力。⑹通过IFNy产生来测量对在携带来自高加索人或中国人人群的EBV毒株的A*1101匹配或不匹配的LCL中表达的LMP2的应答。单独的靶细胞产生108-101个细胞患者),而不论患者预先存在的免疫组库如何的方法。例如,逆转录病毒转导可仅要求预活化T细胞的48小时的培养。此外,大量的自体T细胞可以通过白细胞去除术从受试者的血液样品获得。因此,在几天内工程化1〇8_1〇9个转化或转染的T细胞用于输注可以是可能的。该T细胞水平大大超过通过用LCL再活化的T细胞的过继性疗法成功治疗NPC患者所使用的剂量7。[0079]不希望受理论束缚,认为用本发明的T细胞受体(例如如SEQIDNo.3中列出的TCR转导的T细胞含有幼稚细胞、中枢记忆细胞和效应记忆细胞的混合物,这表明它们应在体内持续存在并表现出更大程度的抗肿瘤应答30。[0080]合适地,CD8+或⑶4+T细胞可以用包含编码本发明的TCR的核酸序列的载体转染。合适地,宿主细胞可以是来自待治疗患者的分离的T细胞。合适地,T细胞的混合物可以通过白细胞去除术从血液样品分_。[0081]适当地,在本发明的第二医药用途和治疗方法中,药物可以包含至少108个表达本发明的TCR的T细胞。合适地,药物可以包含至少1〇9或至少101°或至少1011个细胞,优选地所述T细胞可以是⑶8+和或CD4+T细胞。[0082]适当地,在本发明的第二医药用途和治疗方法中,药物可以呈双特异性免疫治疗剂的形式,例如ImmTAC针对癌症的免疫动员TCRLiddy等,(2〇l2NatMed18:980-987或BiTE双特异性T细胞衔接抗体)(Baeuerle等,(2〇09.CurrOpinMolTher111:22-30。[0083]在另一个方面中,本发明提供了一种治疗或预防受试者中的EBV+肿瘤诸如鼻咽癌)的方法,包括施用治疗有效量的:a本发明的T细胞受体;b本发明的ImmTac;或c本发明的组合物。合适地,受试者自体的T细胞可以用本发明的T细胞受体或本发明的组合物转化或转染,并且治疗有效量的转化的T细胞被施用。因此,可将包含本发明的T细胞受体的自体T细胞施用至受试者。合适地,患者群体可以是中国来源的。优选地,通过输注进行施用。[0084]除非另外定义,否则与本发明关联使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。此外,除非上下文另有要求,单数形式的术语应包括复数形式,且复数形式的术语应包括单数形式。[0085]与重组DNA、寡核苷酸合成、组织培养和转化例如,电穿孔、脂质体转染)、酶促反应和纯化技术关联使用的示例性技术是本领域已知的。许多这样的技术和程序例如在Sambrook等人MolecularCloning:ALaboratoryManual第3版,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N_Y.2001等中描述。[0086]定义[0087]根据本发明,除非另有说明,下列术语应被理解为具有以下含义:[0088]术语“功能等同物”是指对LMP2具有特异性的变体TCR,其具有至少8〇%或至少85%或至少90%或至少95%或至少97%或至少99%或100%的具有如SEQIDNo.l-3优选地SEQIDNo.3所示的氨基酸序列或由如SEQIDNo.4_6优选地SEQIDNo.6所示的核酸序列编码的氨基酸序列的TCR的亲合力抗原特异性功能。在一个实施方案中,亲合力抗原特异性功能关于以下一项或更多项被测量:增殖、细胞毒性、细胞因子释放或LMP2+肿瘤生长的抑制。在一个实施方案中,测量功能等同物对LMP2的特异性和对LMP2+肿瘤生长的抑制。[0089]术语“核酸分子”和“多核苷酸”可以可互换地使用,并且指核苷酸的聚合物。这样的核苷酸的聚合物可以含有天然和或非天然核苷酸,并且包括但不限于丽^謂人和™^“核酸序列”是指构成核酸分子或多核苷酸的核苷酸的线性序列。[0090]术语“多肽”和“蛋白”可以可互换地使用,指氨基酸残基的聚合物。这样的氨基酸残基的聚合物可以含有天然或非天然氨基酸残基,并且包括但不限于肽、寡肽、氨基酸残基的二聚体、三聚体和多聚体。全长蛋白和其片段都涵盖在该定义中。该术语还包括多肽的表达后修饰,例如糖基化、唾液酸化、乙酰化、磷酸化等。此外,在本发明的上下文中,“多肽”是指包括对天然序列的修饰例如缺失、添加和取代本质上通常是保守的取代)的蛋白,只要所述蛋白保持所需的活性即可。这些修饰可以是有意的,例如通过定点诱变发生的修饰,或者可以是偶然的,例如通过产生蛋白的宿主的突变的修饰或由于PCR扩增引起的错误的修饰。[0091]“天然序列”多肽包含具有与天然发现的多肽相同的氨基酸序列的多肽。因此,天然序列多肽可以具有来自任何哺乳动物的天然存在的多肽的氨基酸序列。这样的天然序列多肽可以从自然界分离或可以通过重组或合成手段产生。术语“天然序列”多肽特别包括天然存在的截短或分泌形式的多肽例如,细胞外结构域序列)、天然存在的变体形式例如,可变剪接的形式的多肽和多肽的天然存在的等位基因变体。[0092]多肽“变体”意指在对序列进行比对并引入空位如果需要)以实现最大百分比序列同一性并且不考虑任何保守取代作为序列同一性的部分之后,与天然序列多肽具有至少约80%氨基酸序列同一性的生物活性多肽。这样的变体包括例如其中在多肽的N端或C端添加或缺失一个或更多个氨基酸残基的多肽。在一些实施方案中,变体将具有至少约80%的氨基酸序列同一性。在一些实施方案中,变体将具有至少约90%的氨基酸序列同一性。在一些实施方案中,变体与天然序列多肽将具有至少约95%的氨基酸序列同一性。在一些实施方案中,变体与天然序列多肽将具有至少约97%或98%或99%的氨基酸序列同一性。[0093]如本文所用的,关于肽、多肽或抗体序列的“百分比(%氨基酸序列同一性”和“同源性”被定义为在对序列进行比对并引入空位如果需要)以实现最大百分比序列同一性并且不考虑任何保守取代作为序列同一性的部分之后,候选序列中与特定肽或多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定百分比氨基酸序列同一性的目的的比对可以以本领域技术范围内的各种方式实现,例如使用公众可用的计算机软件诸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGNTMDNASTAR软件。本领域技术人员可以确定用于测量比对的适当参数,包括实现跨越所比较的序列的全长的最大比对所需的任何算法。[0094]术语“抑制(inhibition”或“抑制(inhibit”是指任何表型特征的减少或停止,或者指该特征的发病率、程度或可能性的减少或停止。优选地,“减少”或“抑制”是指引起20%或更大的减少;优选地引起50%或更大的减少的能力。优选地,“减少”或“抑制”是指引起75%、85%、90%、95%或更大的总体减少的能力。[0095]术语“受试者”和“患者”在本文可互换地使用,指人类。在一些实施方案中,还提供了治疗其他哺乳动物包括但不限于啮齿动物、类人猿下目的动物simians、猫科动物、犬科动物、马科动物、牛科动物、猪科动物、绵羊ovines、山羊caprines、哺乳动物实验室动物、哺乳动物农场动物、哺乳动物运动动物和哺乳动物宠物的方法。在一些情况下,“受试者”或“患者”是指需要治疗疾病或紊乱的受试者或患者。[0096]遍及本说明书的描述和权利要求,词语“包括”和“包含”及它们的变化形式意指“包括但不限于”,并且它们不意图(并且不排除其他部分、添加物、组分、整数或步骤。遍及本说明书的描述和权利要求,单数形式涵盖复数形式,除非上下文另有要求。具体地,在使用不定冠词时,应理解本说明书预期了复数形式以及单数形式,除非上下文另有要求。[0097]与本发明的特定方面、实施方案或实例关联描述的特征、整数、特性、化合物、化学部分或基团应理解为可应用于本文描述的任何其他方面、实施方案或实例,除非与其不相容。在本说明书包括任何随附的权利要求、摘要和附图)中公开的所有特征和或如此公开的任何方法或程序的所有步骤可以以任何组合方式被组合,其中此类特征和或步骤中的至少一些相互排斥的组合除外。本发明不受任何前述实施方案的细节的限制。本发明扩展至在本说明书包括任何随附的权利要求、摘要和附图)中公开的特征的任何新颖的特征或任何新颖组合,或扩展至如此公开的任何方法或程序的步骤的任何新颖的步骤或任何新颖的组合。[0098]读者的注意力被引导到与本说明书同时递交或在本说明之前递交的、与本申请有关的并且与本说明书向公众开放供查阅的所有论文和文献,并且所有此类论文和文献的内容通过引用并入本文。实施例[0099]材料和方法[0100]细胞和细胞系[0101]通过在lymphoprepAxisShield,Oslo,Norway上的密度梯度离心从肝素化的血液分离外周血单核细胞PBMC。使用高加索人B95.8或中国人CKL原型1EBV毒株产生LCL15jhoenix兼嗜性包装细胞由GaryNolanStanfordUniversity友情提供。用HLAA*1101基因转导的T2细胞系由M.MasucciKarolinskaInstitute,Stockholm,Sweden友情提供。用我们已经将编码HLAA*1101的基因克隆到其中的逆转录病毒分别为pQCXIH和pQCXIN;Cl〇nteCh,CA转导NPC细胞系HK1I6和c666.lI7。然后分别使用20ygml潮霉素或5〇ygmlG418LifeteChnologies,UK在药物选择下培养这些细胞系。虽然最初被描述为NPC细胞系,并在本文使用,但因为它天然表达HLAA*1101,mNE-l现在表现为是Hela相关的体细胞杂合体(18。用分别携带编码HLAA*1101、LMP2和萤光素酶的基因的三种逆转录病毒pQCXIH、pLXSN和pMSCV转导乳腺癌细胞系MDA-MB-23119,并使用300ugml潮霉素、600ygmlG418和lygml嘌呤霉素在药物选择下培养。所有上述细胞系在含有10%胎牛血清FBS;PAA,PaschingAustria、2mM谷氨酰胺、100IUml青霉素和100pgml链霉素的RPMI1640Sigma标准培养基)中培养。成纤维细胞从在如上所述补充的DMEMSigma,UK中培养的皮肤活组织检查物生长。所有的T细胞、B细胞和成纤维细胞的细胞系来源于健康供体或已知HLA类型的NPC患者。通过短串联重复序列分析验证所有癌细胞系,并在实验前传代少于6个月。本研宄的人体材料的使用得到了英国国家研究伦理服务处theNationalResearchEthicsService,U.K.和香港联合中文大学-新界东集群临床研究伦理委员会theJointChineseUniversityofHongKong-NewTerritoriesEastClusterClinicalResearchEthicsCommittee的批准。研究根据赫尔辛基协议的声明进行,且所有供体提供了书面知情同意书。[0102]合成肽和重组痘苗病毒[0103]肽由AltaBi〇ScienCe,Birmingham,UK使用芴基甲氧基羰基化学反应合成。表达LMP2和相应的对照载体的重组痘苗病毒和修饰的安卡拉痘苗病毒先前已有描述20、21。[0104]TCR基因克隆[0105]使用RNeasymini试剂盒Qiagen,UK从T细胞克隆分离RNA并进行逆转录。然后用BDSMART™RACEcDNA扩增试剂盒BDBiosciences,SanJose,CA根据制造商的说明使用以下引物扩增TCR-a和TCR-P基因:TCRaf旦定区:f5’-agcacaggctgtcttacaatcttgc-3’(SEQ1〇如_7;1^即2恒定区:5’-883〇3〇8831^88838〇388-3’(3£〇101\10.8。将1'0?基因亚克隆到pCR2.1LifeTechnologies载体中并测序。然后将TCR-aTCRVA22和TCR-PTRBV4.01链克隆到逆转录病毒pMP"71-PRE载体2¾由C.Baum,Hannover,Germany友情提供)中,它们被来自猪捷申病毒teschovirus的2A妝接头隔开。由GeneArtRegensburg,Germany设计和产生了修饰的TCR基因。[0106]人类T细胞的逆转录病毒转导[0107]使用FuGENEHDRoche,根据制造商的说明用PMP71逆转录病毒载体和PCLamphoImgenex转染Phoenix兼嗜性包装细胞,且48小时后收获逆转录病毒上清液。使用抗CD3抗体(0KT3;30ngml和白介素-2IL2;600Uml;Chiron,Emeryvi11e,CA,在含有1%人类AB血清(TCSBiosciences,Buckingham,UK的标准培养基中将PBMC预活化48小时。然后使用retronectin包被的〇'£11^^31118,允?116孔板根据制造商的说明用逆转录病毒上清液转导这些细胞或用来自未转染的phoenix细胞的条件上清液conditionedsupernatant模拟转导这些细胞)。然后将细胞维持在含有血清和IL2100Uml的标准培养基中。[0108]流式细胞术[0109]根据制造商的说明,用HLA-A*1101SSC五聚体5ugml;ProImmune,Oxford,UK在室温将细胞染色10分钟。然后洗涤细胞并在冰上用pr〇5FluorotagAPC或R-PE标记的;Prolmmune和饱和浓度的抗CD3PE缀合的)、抗CD4FITC缀合的)(Pharmingen和抗CD8三色或ECD缀合的)(Caltag抗体染色30分钟。对于细胞内细胞因子染色,将T细胞通过用或未用SSC肽(5ugml预脉冲的T2-A11细胞刺激2小时。然后加入布雷菲德菌素A10ugml,Sigma,并且培养细胞持续另外的5小时。[0110]然后如以上所描述的用五聚体和针对表面标志物的抗体CD4-FITC、CD8-ECD,BDPharmingen对细胞染色。根据制造商的说明用固定和透化缓冲液E-bioscience,SanDiego,CA处理后,将细胞与抗细胞因子抗体(IL2-PE、IFNy_PECy7和TNFa-APC或同种型和浓度匹配的对照抗体BDPharmingen—起在4°C孵育30分钟,然后在PBS中洗涤两次。使用LSRII细胞仅(BectonDickinson,FranklinLakes,NJ和Flowjo软件(TreeStar,Ashland,OR分析细胞。[0111]CFSE标记[0112]用PBS洗涤T细胞两次,并与2.5iiM羧基荧光素琥珀酰亚胺酯CFSE—起在37°C孵育10分钟。通过加入含有10%FBS的RPMI-1640使标记反应停止。洗涤细胞,以2X106个细胞ml重悬于标准生长培养基中,与用SSC肽(10ugml预脉冲的T2-A*1101细胞共培养5天,然后如以上所描述的通过流式细胞术分析。[0113]IFN丫释放测定[0114]将刺激物细胞5xl04?L以如指明的应答者:刺激物的比与T细胞一起一式三份共培养。在37°C5%C〇2将细胞在100ul孔的补充有10%FBS和IL225Uml的Iscove改良的Dulbecco培养基(LifeTechnologies中孵育。18小时后,使用ELISAPierceEndogen,Rockford,IL根据制造商的说明测试培养物上清液的分泌的IFNy。[0115]细胞毒性测定[0116]使用痘苗病毒感染的或肽脉冲的靶以已知的效应物:靶的比(2500个靶?L设置铬释放测定并在5或8小时后收获。这些方案之前已详细描述23。[0117]体内肿瘤保护实验[0118]将6-8周龄雌性NSG小鼠(Char1esRiverLaboratories用基质胶(BDBiosciences中表达A*1101、LMP2和萤光素酶的MDA-MB-231细胞在胁腹进行皮下接种5x10s个细胞小鼠)。一天后,小鼠静脉内接受107个TCR转导的域模拟转导的)T细胞。在第2、4、7、9和11天给予腹膜内注射104个单位的IL2。使用卡尺和生物发光成像(IVISSpectrum,CaliperLifeSciences以盲式测量肿瘤生长。所有实验在英国内政部(UKHomeOffice授权下进行。[0119]结果[0120]野生型HLAA*1101限制性LMP2特异性TCR的表达和功能[0121]将来自健康中国人供体的EBV特异性T细胞用自体LCL在体外再活化,并如之前所描述的通过有限稀释克隆23。筛选克隆以确定对A*1101限制性LMP2表位SSC的反应性,并选择了克隆85。使用细胞毒性测定用滴定浓度的肽脉冲的a*11〇1+靶来确定该CD8+克隆对SSC肽的亲合力。该克隆表现出高亲合力,明确识别用仅10-1QM肽脉冲的靶细胞图7a。当测试响应于A*1101匹配的和不匹配的LCL靶的IFNy产生时,观察到明确的A*1101限制性应答图7b。重要的是,该克隆不仅识别携带标准EBV毒株B95.8来源于高加索人群体)的A*1101+LCL,而且还识别携带来自中国人群体的最具有NPC风险的EBV毒株的組101+LCL。[0122]分离编码来自克隆85的TCR-a和TCR-P链的基因并克隆到同一MP71逆转录病毒表达载体中,由来自猪捷申病毒的2A肽接头隔开以确保这些链的等摩尔表达(图8a。然后用重组逆转录病毒转导来自健康供体和NPC患者的活化的T细胞,并使用A*1101SSC五聚体确定SSC特异性TCR的表面表达。图8b显示来自患有晚期NPC的患者的T细胞的结果。SSC特异性T细胞在大多数NPC患者和健康的病毒携带者中是罕见不可检测的(如由模拟转导的细胞所示出的),但在用重组逆转录病毒转导后3天,SSC特异性TCR的表面表达在13.6%CD8+T细胞中清楚地可检测。注意,12%的CD4+T细胞在转导后也表达该TCR。这些数据代表来自9名健康供体和5名NPC患者的数据。[0123]该野生型TCR的功能测试使用转导的多克隆T细胞开始,以探讨其响应于以滴定浓度的SSC肽脉冲的T2:A*1101细胞产生IFNy的能力。TCR转导的T细胞明确识别以低至1〇-10M肽的肽脉冲的靶,而模拟转导的T细胞在任何测试的肽浓度都不应答图8c。以与转导的t细胞内的SSC特异性效应物相同的输入细胞数目测试克隆85TCR基因来源于其产生几乎相同的结果(图8C。与针对用空对照载体感染的成纤维细胞相比,当针对表达来自重组痘苗病毒载体的LMP2蛋白的自体成纤维细胞测试时,转导的T细胞也介导了特异性细胞毒性功能(图8d。[0124]TCR基因构建体的优化•[0125]我们产生了我们的野生型ssc特异性TCR的两种变体,密码子优化的形式c〇TCR和其中TCR-a链的氨基酸残基48和1^心|3链的残基57都被改变为半胱氨酸,因此引入第二个一硫键的笛码子优化的TCRcoTCRcys25。然后一系列实验比较了这两种变体与野生型SSC特异性TCRWTTCR的表达和功能。观察到的主要差异是TCR表面表达。用递增体积的平行产生的三种逆转录病毒上清液转导的CD8+T细胞的五聚体染色显示,WTTCR和coTCR的表达相似,但用coTCRcys构建体观察到明显增加的表达图9a。用CD4+T细胞获得了相似的结果数据未显示)^oTCRcys受体不仅在更大比例的T细胞上表达,而且个体细胞上的表达水平也增加(图9b_。用针对VM_1的抗体染色转导的细胞显示与用SSC五聚体染色的相同细胞相似的结果未不出),表明该外源性0链和内源性a链之间存在很少如果有的话的错配。[0126]虽然用coTCRcys改善了表达,当测试每种TCR构建体的等同数目的转导效应物时,T细胞功能不受影响(图gc。尽管单独的密码子优化coTCR既不影响表面表达也不影响功能活性图9,但其他研究已经显示,尽管缺乏这样的体外作用,密码子优化仍然能够改善输注后可检测到的TCR-修^的T细胞的频率和体内抗肿瘤活性二者26、27。分析coTCRcys转导的细胞的分化状态显示,它们含有主要是幼稚细胞、中枢记忆细胞和效应记忆细胞的混合物未显示)。[0127]CD8+和CD4+T细胞中coTCRcys的功能分析[0128]优化了SSC特异性TCR的表达后,我们确定了coTCRcys转导的T细胞识别LCL中在生理水平表达的LMP2蛋白的能力。为此,我们使用TCR转导的细胞的克隆群体来研究CD8+细胞和⑶4+细胞中的功能活性,CD8+细胞可具有直接的体内抗肿瘤作用,⑶4+细胞可以帮助产生和维持有效的⑶8+应答并且也可以是细胞毒性的。为了确保SSC特异性⑶8+克隆已被工程化并且不是天然存在的效应物,我们使用PCR来检测逆转录病毒构建体数据未显示)。当针对A*1101匹配的和不匹配的LCL的一个组测试时,工程化的⑶8+和CD4+细胞二者以A*1101限制性的方式通过IFNy产生来应答图l〇a。因此,该TCR能够以独立于⑶8的方式起作用。[0129]使用CFSE标记,我们研宄了coTCRcys转导的T细胞在抗原遭遇后增殖的能力。(与单独的T2-A*1101相比)工程化的CD8+和CD4+T细胞在用SSC肽负载的T2_A*1101细胞刺激后经历几轮分裂(图l〇b。此外,工程化的CD8+和CD4+T细胞二者是细胞毒性的,在添加或不添力口SSC肽的情况下裂解表达来自重组痘苗病毒载体的LMP2的A*1101阳性H0NE1细胞(图10c〇[0130]具有细胞因子产生的多功能能力的CD4T细胞的频率增加与改善的一些感染的控制相关28。使用细胞内染色,我们显示coTCRcys转导的CD4+T细胞在抗原特异性刺激后能够同时产生多种细胞因子IL2、IFNy、TNFa图11。[0131]用LMP2+上皮肿瘤模型的体内研究[0132]我们将另一种人类上皮肿瘤MDA-MB-231工程化为共表达LMP2和A*1101以及萤光素酶进行生物发光成像。将携带这种肿瘤的免疫缺陷小鼠用表达coTCRcys的T细胞处理。流式细胞术分析显示输注的T细胞含有3:2的CD4:CD8的比,50%的CD4和60%的CD8T细胞表达SSC特异性TCR。与接受模拟转导的T细胞的对照小鼠相比,这些小鼠中的肿瘤生长显著减少(图12。[0133]来自晚期NPC患者的T细胞的TCR转导和NPC细胞系的识别[0134]我们力图确定coTCRcys转导的来自晚期NPC患者的T细胞是否能够对表达LMP2的NPC细胞系产生应答。除C666•1之外,所有NPC肿瘤都是EBV+,c666•1是一种体外建立的丢失EBV基因组的NPC细胞系;c666•1甚至不表达LMP2蛋白。因此,通过逆转录病毒转导将限制性HLA等位基因引入C666.1中后(c666•1A*1101,我们在添加或不添加SSC肽的情况下表达了来自重组修饰的痘苗病毒安卡拉载体的LMP2。转导的来自两名晚期NPC患者的T细胞以抗原特异性的方式通过产生IFNy对表达LMP2的c666•1A*1101细胞清楚地产生应答。用抗原负载的A*1101匹配的成纤维细胞和H0NE1细胞观察到相似水平的应答图13a。还测试了这些T细胞针对NPC细胞系的细胞毒性活性,并且在本文我们包括了第二种NPC系HK1,其同样必须被转导以表达A*1101HK1A*1101。转导的(但不是模拟转导的)T细胞以LMP2特异性的方式裂解HK1A*1101和c666.1A*1101细胞二者(图13b。[0135]我们力图确定coTCRcys转导的来自晚期NPC患者的T细胞是否能够对表达LMP2的NPC细胞系产生应答。除C666.1之外,所有NPC肿瘤都是EBV+,c666•1是一种体外建立的丢失EBV基因组的NPC细胞系;C666.1甚至不表达LMP2蛋白。因此,通过逆转录病毒转导将限制性HLA等位基因引入c666.1中后(c666.1A*1101,我们在添加或不添加SSC肽的情况下表达了来自重组修饰的痘苗病毒安卡拉载体的LMP2。转导的来自两名晚期NPC患者的T细胞以抗原特异性的方式通过产生IFNy对表达LMP2的c666.1A*1101细胞清楚地产生应答。用抗原负载的A*1101匹配的成纤维细胞和H0NE1细胞观察到相似水平的应答(图13a。还测试了这些T细胞针对NPC细胞系的细胞毒性活性,并且在本文我们包括了第二种NPC系HK1,其同样必须被转导以表达A*1101HK1A*1101。转导的(但不是模拟转导的)T细胞以LMP2特异性的方式裂解HK1A*1101和c666.1A*1101细胞二者(图13b。[0136]讨论[0137]从使用过继性T细胞疗法的研究明显的是,NPC对基于EBV特异性T细胞的疗法有响应6-9。然而,目前生成用于输注的此类细胞的方法既费时又不可靠。我们利用了TCR基因转移,这是一种能够在几天内可靠地生成大量特异性T细胞,而不论患者预先存在的免疫应答如何的技术。鉴定出对HLAA*1101限制性LMP2表位SSC具有高亲合力的T细胞克隆后,我们克隆了编码TCR的基因,并通过逆转录病毒介导的基因转移将它们在来自健康供体和晚期NPC患者的T细胞中表达。被工程化为表达修饰形式的TCR的来自健康供体的T细胞以抗原特异性的方式通过增殖、产生细胞因子(IFNy、TNFa和IL2、裂解靶细胞和抑制体内LMP2+肿瘤生长产生应答。TCR转导的来自晚期NPC患者的T细胞也能够识别表达LMP2蛋白的NPC细胞系。[0138]如在方法中描述的,逆转录病毒转导仅要求培养48小时以预活化T细胞,并通过用通过白细胞去除术从患者可得的大量(1〇9_1〇1T细胞开始按比例放大该过程,应该有可能在几天内工程化108-109个T细胞用于输注。包括另外几天用于体外扩增,TCR基因转移的试验产生输注的1〇9-1011个T细胞患者(13、14。这大大超过了通过用1^^-再活化的1'细胞的过继性疗法成功治疗NPC患者所使用的剂量7,在所述过继性疗法中,患者仅接受4X107-4X108个细胞m2,并且LMP特异性和SSC特异性T细胞分别构成该产物的s⑴]•06-886:8850102HaHXONflMIrVWONIDHVDIVHONAHVHdOSVNIVNOIOayODOlHUMSXNaiXVdNISaSNOdSHHivoiNnoaaNivxsnsnishoshhsnaoxouioads-AagdoHadSNVHXaAixdoav'ivZ3dn‘3N3M39‘SIil腦VNNa‘W3ammoaldOH丄VVMS‘fl3SlflOU[Z9l0]•2£-226:9115010200019•SXN3IdI〇aHXNVldSNVHXNIHSVHSiaaAIXVHaHnOHdOHdlAlra丄VI刖-AM1V3My〇1N3A耶dUSNOISMNITI33-1OldlOMSA93HOswooinoMraionotivxh^vohxiws^vnvHssnoH^voaivH^vwaind^sMaoaois^aHaoisHH's[z9i0]•ooi-SS9Sd’ZOOtSNIiniMdNVSWVITIIMLL03NIddn:VIHd13aV1IHd_RLSamiOA•人901〇yiASai3Id‘SnyiAMV9-NI3丄Sd3‘WdA31M0H‘Wa3dIN[‘3dd3n‘gvNOSNDDiy汴[1910]•18-822:Z8:0002MaONVOTXNrSflHIAMVa-NIHXSd3HXIMNOIXVIDOSSVHIHHXONVVW0NI3HV3IVHONAHVHdOSVNHXIISXNHIXVdNISHOWOlXNVN0I1VWONOOaS'lV13^SAONVHO^DXN3H3MS331flSH^IWNHHO^OONVM'C[OS10]•91^011:1959002SAHd101910DN0XViaVHTXNrHDNHIHHdXHONOX9N0HHHX:VHaNH3a〇WHHXNIVW0NI3HV3IVHONAHVHdOSVNHOdSHOSHHtMmATturr\Tt•n\jt^rnuo'mNaam^aii^hnavomsnH'se:[6lo]'Zf-f££:^U'-OIOZNflMISaNaO'NOIXVindOdasaNIHONHaHinosvnivwoniohvoivaoNAHYHdosvNoxAxniaixdaosnsvihiNHaNaaaa-HdAXOldVH'lV13'AONHHZ^NVn〇aIXHVW^NOSSIOd^AONSZ^WONVX'TC[8Z10]•92-9T9T:SIT^002XS3ANINH3rSTlHO1+833I3MMSNVMAlSAIldOdVHOA3V3IiM3HOMUUNVOAIANI3HXSHIVdWIAnVOIXOaVHVdOHXIANINOIXONfU^0X33^311MHONOIXISinOOVIV13‘ZM‘I順Visimx‘3IXSNIS3ZM‘3aHariVd‘V3iM0NV931[‘lINONIUVfTOS[m0]•Z^-Zei^'SZT^OOSlONflMIrVWOHdWAlaNVVWONIOyVDIVHONAHVHdOSVNHAIXISOd-AgaHXIISXNaiXVdm^dsmil113NIAXIOIHIOHdS2NIHXOHdaNVH9WaWXN3XV1HONOIXVZIHaXOVHVHO'lVxa^aHdoisaH^HWsioh^onoiAVi^iavzna^wvNaai^oxhohxvvhxs'62[9u0]•〇s-e^8:ei:zoosamxvN-y〇rvwviNviHsiaixsnivovNoixoaxonamivKmw-SNiDDVAdov3NiH3aslimthiivNouDNMuiniriviH^faNNAUMaahavo^mhAvsaNn'wdvomHa^xalaxvd^vdHVMva'82[suo]•sz-wee=011^002aooia-vw〇NviawhoAd\maHXHNHOHOdSHDXaHSSHHdXH-nHMONVHNIiMVA1H9IHONIXOaiaS'lV13^11SlOVIXOa‘igozi3i33isviganvamygooernaNVi^ma-zawofrvvwsiiimora[vao]•98-8219:18158002lONOMITSliaOxaHDnasNvnxhdxjoSHSNOdSHHyomxixNVHMi3aiMahohsiNawaHinogyivitw31dN3a‘Wygil〇a‘mM〇aN3dNVA‘Vy3SIVM‘VVWSIIMOPVW3LLIM3T9S[£L10]•8e-is82:601^002aooia'snHDxNvmHoxniaaonaoMNisnivhdhdxjoNoissHHdXHonvoNinivdaaHoxvwoNixvxmovH'iv1r-16r\\THii^TTT\TOOr\ATiir\TTTATnnr\ii^TATTt^too^atC^T^nrnnM•nn80:8263-66.[0184]37.HUIEP,TAYL0RGS,JIAH,MABB,CHANSL,H0R,ETAL.PHASEITRIALOFRECOMBINANTMODIFIEDVACCINIAANKARAENCODINGEPSTEIN-BARRVIRALTUMORANTIGENSINNASOPHARYNGEALCARCINOMAPATIENTS.CANCERRES2013;73:1676-88.[0185]38.0GIN0T,MORIAIS,ISHIDAY,ISHIIH,KATAYAMAA,MIYOKAWAN,ETAL.ASSOCIATIONOFIMMUNOESCAPEMECHANISMSWITHEPSTEIN-BARRVIRUSINFECTIONINNASOPHARYNGEALCARCINOMA.INTJCANCER2007;120:2401-10•[0186]39.LAUKM,CHENGSH,LOKW,LEESA,WOOJK,VANHASSELTCA,ETAL.INCREASEINCIRCULATINGF0XP3+CD4+CD25HIGHREGULATORYTCELLSINNASOPHARYNGEALCARCINOMAPATIENTS.BRJCANCER2007;96:617-22.[0187]40.XUJ,AHMADA,JONESJF,DOLCETTIR,VACCHERE,PRASADU,ETAL.ELEVATEDSERUMTRANSFORMINGGROWTHFACTORBETA1LEVELSINEPSTEIN-BARRVIRUS-ASSOCIATEDDISEASESANDTHEIRCORRELATIONWITHVIRUS-SPECIFICIMMUNOGLOBULINAIGAANDIGM.JVIROL2000;74:2443-6.[0188]41.LEESP,CHANAT,CHEUNGST,THOMASWA,CROOMCARTERD,DAWSONCW,ETAL.CTLCONTROLOFEBVINNASOPHARYNGEALCARCINOMANPC:EBV-SPECIFICCTLRESPONSESINTHEBLOODANDTUMORSOFNPCPATIENTSANDTHEANTIGEN-PROCESSINGFUNCTIONOFTHETUMORCELLS.JIMMUNOL2000;165:573-82.[0189]42.BOLLARDCM,ROSSIGC,CALONGEMJ,HULSMH,WAGNERHJ,MASSAGUEJ,ETAL.ADAPTINGATRANSFORMINGGROWTHFACTORBETA-RELATEDTUMORPROTECTIONSTRATEGYTOENHANCEANTITUMORIMMUNITY.BLOOD2002;99:3179-87.[0190]43.ENGELSB,ENGELHARDVH,SIDNEYJ,SETTEA,BINDERDC,LIURB,ETAL.RELAPSEORERADICATIONOFCANCERISPREDICTEDBYPEPTIDE-MAJORHISTOCOMPATIBILITYCOMPLEXAFFINITY.CANCERCELL2013;23:516-26.[0191]44.BAB⑶CKGJ,DECKERLL,FREEMANRB,THORLEY-LAWSONDA.EPSTEIN-BARRVIRUS-INFECTEDRESTINGMEMORYBCELLS,NOTPROLIFERATINGLYMPHOBLASTS,ACCUMULATEINTHEPERIPHERALBLOODOFIMMUNOSUPPRESSEDPATIENTS.』EXPMED1999;190:567-76.[0192]45.BENDLEGM,LINNEMANNC,HOOIJKAASA1,BIESL,DEWITTEMAJORRITSMAA,ETAL.LETHALGRAFT-VERSUS-HOSTDISEASEINMOUSEMODELSOFTCELLRECEPTORGENETHERAPY.NATMED2010;16:565-70,IPFOLLOWING570.[0193]46.BUNSEM,BENDLEGM,LINNEMANNC,BIESL,SCHULZS,SCHUMACHERTN,ETAL.RNAI-MEDIATEDTCRKNOCKDOWNPREVENTSAUTOIfflUNITYINMICECAUSEDBYMIXEDTCRDIMERSFOLLOWINGTCRGENETRANSFER.MOLTHER2014;22:1983-91.[0194]47.DISTASIA,TEYSK,DOTTIG,FUJITAY,KENNEDY-NASSERA,MARTINEZC,ETAL.INDUCIBLEAPOPTOSISASASAFETYSWITCHFORADOPTIVECELLTHERAPY.NENGLJMED2011;365:1673-83.[0195]48•FRANKELTL,BURNSWR,PENGPD,YUZ,CHINNASAMYD,WARGOJA,ETAL_BOTHCD4ANDCD8TCELLSMEDIATEEQUALLYEFFECTIVEINVIVOTUMORTREATMENTWHENS9-LO6LO=1:寸ooCNIlom画IAsXVNMSNOdssTIS-x+ooaoMHXoNIdlMH.fsNVAMa.oLOrr^s•olo-zco9=zocniotocniaMsdxMrsxsoHoINMdoHdsAlOXNIHSSNVMHMxdvVS0NV1SaMHsngvxsMSHVl3xvoIavH3aNVAXIAIX3V3IX0X0XA3dolMAMasnsX+KD3AIX3V§-H0,XJVXM.XNvirfHMalA^gnoHoHars}!SS3CTMNosdsISsVavz3n5.6寸〔§5〕86-88694'8ToTOCNIloNn_IrasvNISOMXoNIXSHVXsxaiAVAIHOIHVHEassNIoNaK6T6TV9z8g980Tzo

权利要求:1.一种T细胞受体,包含:_a.a链,所述a链包含SEQIDNo.1所示的氨基酸序列或其功能等同物;和或b.{3链,所述13链包含SEQIDNo.2所示的氨基酸序列或其功能等同物。、2.根据权利要求1所述的T细胞受体,其中所述a链和所述杉链通过接头连接。3.根据权利要求1或权利要求2所述的T细胞受体,其中所述接头是猪接头。4.根据权利要求1至3的任一项所述的T细胞受体,其中所述T细胞受体包含SEQIDNo.3所示的氨基酸序列或其功能等同物。5.根据前述任一项权利要求所述的T细胞受体,其中所述T细胞受体包含与现9IDN〇.l、SEQIDNo.2和或SEQIDNo.3所示的氨基酸序列至少95%相同的氨基酸序列。6.根据前述任一项权利要求所述的T细胞受体,其中除去一个或数个修饰,所述T细胞受体包含以下任一个所示的序列:SEQIDNo_l、SEQIDNo_2和SEQIDNo.3。7.根据权利要求6所述的T细胞受体,其中所述一个或数个修饰是取代。8.根据权利要求6或权利要求7所述的T细胞受体,其中所述一个或数个修饰在可变区内。9.根据前述任一项权利要求所述的T细胞受体,其中所述T细胞受体包含在所述a链的可变区的位置48处的半胱氨酸残基和在所述0链的可变区的位置57处的半胱氨酸残基。10.根据前述任一项权利要求所述的T细胞受体,其中所述T细胞受体由包含以下的核苷酸序列编码:a.SEQIDNo.4至6的任一个;b.由于遗传密码简并性而等同于SEQIDNo.4至6的任一个的核苷酸序列;c.编码功能上等同于由包含SEQIDNo.4至6的任一个的核苷酸序列编码的T细胞受体并且与其具有至少90%同一性的T细胞受体的核苷酸序列;或d.由于遗传密码简并性而等同于根据以上c的核苷酸序列的核苷酸序列。11.一种针对癌症的免疫动员单克隆TCR,包含可溶性的根据权利要求1至10的任一项所述的TCR。12.根据权利要求11所述的针对癌症的免疫动员单克隆TCR,其中所述针对癌症的免疫动员单克隆TCR包含抗CD3scFv。13.—种核酸序列,包含:a.SEQIDNo.4至6的任一个;b.由于遗传密码简并性而等同于SEQIDNo.4至6的任一个的核苷酸序列;c•编码功能上等同于由包含SEQIDNo_4至6的任一个的核苷酸序列编码的T细胞受体并且与其具有至少90%同一性的T细胞受体的核苷酸序列;或d.由于遗传密码简并性而等同于根据以上c的核苷酸序列的核苷酸序列。14.一种载体,所述载体包含根据权利要求13所述的核酸序列。15.—种用根据权利要求13所述的核酸序列或根据权利要求14所述的载体转化或转染的宿主细胞。16.—种组合物,包含:a.根据权利要求1至1〇的任一项所述的T细胞受体;b.根据权利要求11或权利要求12所述的针对癌症的免疫动员单克隆TCR;C.根据权利要求13所述的核酸序列;d.根据权利要求14所述的载体;或e.根据权利要求15所述的宿主细胞。17.根据权利要求1至10的任一项所述的T细胞受体、根据权利要求11或权利要求12所述的针对癌症的免疫动员单克隆TCR、或根据权利要求16所述的组合物,用于在治疗或预防EBV+肿瘤中使用。18.根据权利要求17所述的用于使用的T细胞受体或组合物,其中所述EBV+肿瘤选自由以下组成的组:鼻咽癌、NKT细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、移植后淋巴增生性疾病、弥漫性大B细胞淋巴瘤和胃癌。19.根据权利要求17或权利要求18所述的用于使用的T细胞受体或组合物,其中所述EBV+肿瘤是鼻咽癌,诸如未分化的鼻咽癌。20.根据权利要求17至19的任一项所述的用于使用的T细胞受体或组合物,其中所述T细胞受体或药物组合物被配制为提供至少1〇8个包含所述T细胞受体的T细胞的剂量。21.根据权利要求1至10的任一项所述的T细胞受体、根据权利要求11或权利要求12所述的针对癌症的免疫动员单克隆TCR、或根据权利要求16所述的组合物在制备用于治疗或预防EBV+肿瘤的药物中的用途。22.根据权利要求21所述的用途,其中所述EBV+肿瘤选自由以下组成的组:鼻咽癌、NKT细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、移植后淋巴增生性疾病、弥漫性大B细胞淋巴瘤和胃癌。23.根据权利要求21或权利要求22所述的用途,其中所述EBV+肿瘤是鼻咽癌,诸如未分化的鼻咽癌。24.根据权利要求21至23的任一项所述的用途,其中所述T细胞受体或组合物被配制为提供至少1〇8个包含所述T细胞受体的T细胞的剂量。25.—种制备包含根据权利要求1至10的任一项所述的T细胞受体的T细胞的体外方法,包括:用根据权利要求13所述的核酸序列或根据权利要求14所述的载体转染或转化T细胞样品。26.—种治疗或预防受试者中的EBV+肿瘤的方法,包括向所述受试者施用治疗有效量的:a.根据权利要求1所述的T细胞受体;b.根据权利要求11所述的针对癌症的免疫动员单克隆TCR;或c•根据权利要求16所述的组合物。27.根据权利要求26所述的方法,其中所述EBV+肿瘤选自由以下组成的组:鼻咽癌、NKT细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、移植后淋巴增生性疾病、弥漫性大B细胞淋巴瘤和胃癌。28.根据权利要求26所述的方法,其中所述EBV+肿瘤是鼻咽癌。29.根据权利要求26所述的方法,其中向所述受试者施用包含根据权利要求1所述的T细胞受体的自体T细胞。30.根据权利要求29所述的方法,其中至少1〇8个T细胞被施用。31.根据权利要求26所述的方法,其中所述施用是通过输注。32.根据权利要求1所述的且基本上如本文参考实施例和附图教导的T细胞受体。33.根据权利要求11所述的且基本上如本文参考实施例和附图教导的针对癌症的免疫动员单克隆TCR。34.根据权利要求16所述的且基本上如本文参考实施例和附图教导的组合物。

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