申请/专利权人：郑州大学第一附属医院

申请日：2022-07-22

公开（公告）日：2022-09-23

公开（公告）号：CN115094026A

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;G06V20/69;G06V10/26;G06V10/28

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的撤回

法律状态：2023.02.28#发明专利申请公布后的撤回;2022.10.14#实质审查的生效;2022.09.23#公开

摘要：本发明公开了一种用于中耳胆脂瘤角质细胞的分离提取培养系统，包括无菌操作台、组织分离模块、细胞提取模块、废弃液留存腔、细胞培养模块、培养提取模块和培养控制模块，所述组织分离模块包括组织剪碎单元和消化离心单元，所述细胞培养模块包括培养基座和接种单元，所述培养提取模块包括细胞集簇中心定位单元、定型圆环和表层吸取单元，所述培养控制模块包括角质细胞识别单元及培养基补充单元，本发明中，实现对培养的中耳胆脂瘤角质细胞集簇进行重复利用，且对中耳胆脂瘤角质细胞进行不同区域的抑制，既方便对超出选定范围的中耳胆脂瘤角质细胞进行吸取研究，又可以避免中耳胆脂瘤角质细胞的过度增殖。

主权项：1.一种用于中耳胆脂瘤角质细胞的分离提取培养系统，其特征在于：包括无菌操作台、组织分离模块、细胞提取模块、废弃液留存腔、细胞培养模块、培养提取模块和培养控制模块；所述组织分离模块包括位于无菌操作台上的组织剪碎单元和与组织剪碎单元相通的消化离心单元，所述组织剪碎单元剪碎中耳胆脂瘤部分表皮组织，所述消化离心单元进行中耳胆脂瘤角质细胞的分离，所述消化离心单元的具体分离处理过程如下：步骤一：将细胞放入0.25%的胰酶细胞消化液内，在常温状态下放置10分钟；步骤二：添加胰酶终止液，并将细胞收集；步骤三：将收集的细胞放入离心机内，将离心机两侧配平，选取1000r分钟，离心5分钟；步骤四：将离心后的上清液采用移液枪吸取，并转移至废弃液留存腔内；所述细胞提取模块将组织分离模块处理的中耳胆脂瘤角质细胞提取并将提取的中耳胆脂瘤角质细胞制作为细胞悬液；所述废弃液留存腔用于细胞分离模块、细胞提取模块内的废弃液体进行留存；所述细胞培养模块包括培养基座和接种单元，所述接种单元用于接收细胞提取模块的细胞悬液并吸取转移至培养基内接种，所述接种单元的具体接种过程如下：向细胞培养瓶器皿内加入10%胎牛血清，1%青链霉菌双抗的DMEM高唐培养基作为底液，将细胞悬液移入细胞培养瓶器皿中，细胞培养瓶器皿平放于无菌操作台，呈“十”字型轨迹缓慢摇匀；所述培养提取模块包括细胞集簇中心定位单元、定型圆环和表层吸取单元，所述细胞集簇中心定位单元对接种单元的接种中心进行定位，并带动定型圆环位于接种中心外侧，所述表层吸取单元用于将超出定型圆环范围的中耳胆脂瘤角质细胞及培养基进行吸取；所述培养控制模块包括角质细胞识别单元及培养基补充单元，所述角质细胞识别单元用于对培养过程中的中耳胆脂瘤角质细胞集簇大小进行识别，所述培养控制模块的具体控制处理过程如下：步骤一：角质细胞识别单元对中耳胆脂瘤角质细胞的集簇大小进行图像识别，并对图像分割，确定中耳胆脂瘤角质细胞集簇在定型圆环围绕范围内的占比P实；步骤二：预设中耳胆脂瘤角质细胞集簇的占比控制范围P预，培养基补充单元以5分钟为周期进行定时验证，将P预与P实之间进行比对，连续三次比对结果为P预P实状态下，向细胞培养瓶器皿增加胎牛血清的含量，并重置培养基补充单元的验证周期；步骤三：等待细胞培养瓶器皿内中耳胆脂瘤角质细胞增殖，保持培养基补充单元的定时验证，比对结果为P实∈P预状态下，停止胎牛血清的补充，并根据补充的胎牛血清采用完美培养基对细胞培养瓶器皿进行稀释；步骤三：提取中耳胆脂瘤角质细胞进行实验，将细胞培养瓶器皿盖盖放，保持培养基补充单元的定时验证，比对结果为P实P预状态下，以定型圆环围绕范边的边缘位置为轨迹，根据中耳胆脂瘤角质细胞培养扩张状态，在需要进行取样研究时向扩张空白处滴加浓度为10umolmL紫草素溶液，在取样结束后向扩张处滴加浓度为10umolmL紫草素溶液；所述培养基补充单元用于对定型圆环围绕范围内的中耳胆脂瘤角质细胞集簇信息进行定时验证，验证通过时即向培养基座内补充紫草素溶液抑制中耳胆脂瘤角质细胞的异常增殖行为或控制中耳胆脂瘤角质细胞的增殖方向，验证未通过时即不进行补充，连续验证不通过时即向培养基座内补充胎牛血清促进中耳胆脂瘤角质细胞的增殖。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 郑州大学第一附属医院 一种用于中耳胆脂瘤角质细胞的分离提取培养系统

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