申请/专利权人：艾利妥

申请日：2016-06-11

公开（公告）日：2022-09-23

公开（公告）号：CN107922480B

主分类号：C07K16/00

分类号：C07K16/00;C07K16/28;A61K39/00

优先权：["20150612 US 62/175,152","20151014 US 62/241,701"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.09.23#授权;2018.07.06#实质审查的生效;2018.04.17#公开

摘要：本公开大体上涉及包含抗体的组合物，所述抗体例如特异性地结合CD33蛋白，例如人CD33或哺乳动物CD33内的一个或多个表位的单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、抗体片段等；以及此类组合物在预防、降低风险、或治疗有需要的个体方面的用途。

主权项：1.一种分离的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包含由氨基酸序列SEQIDNO:10组成的HVR-L1、由氨基酸序列SEQIDNO:13组成的HVR-L2和由氨基酸序列SEQIDNO:72组成的HVR-L3；且其中所述重链可变结构域包含由氨基酸序列SEQIDNO:231组成的HVR-H1、由氨基酸序列SEQIDNO:23组成的HVR-H2和由氨基酸序列SEQIDNO:27组成的HVR-H3。

全文数据：抗CD33抗体及其使用方法[0001]相关申请的交叉引用[0002]本申请要求2015年6月12日提交的美国临时申请号62175，152和2015年10月14日提交的美国临时申请号62241,701的权益，所述申请中的每一个均特此以引用的方式整体并入。[0003]以ASCII文本文件提交序列表[0004]以下以ASCII文本文件提交的内容以引用的方式整体并入本文:计算机可读形式CRF的序列表文件名：735022000740SEQLISTING·TXT，记录日期：2016年6月11日，大小：200KB〇发明领域[0005]本公开涉及抗⑶33抗体和此类抗体的治疗性用途。[0006]发明背景[0007]骨髓细胞表面抗原CD33前体CD33还称为唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-3是在免疫细胞和造血细胞包括未成熟和成熟骨髓细胞、树突细胞和小神经胶质细胞上表达的1型免疫球蛋白样跨膜蛋白。（Crocker等人（2007NatRevImmunol.7:255-266;McMillan和Crocker2008CarbohydrRes.343:2050-2056;VonGunten和Bochner2008AnnNYAcadSci.ll43:61-82;Handgretinger等人（1993ImmunolLett.37:223_228;以及；等人（2006JLeukocBiol.79:46-58、紫杉烷类、紫杉醇fTaxol®、多西他赛Taxotere®、5-氟尿嘧啶（5-FU、环磷酰胺Cytoxan®、卡铂_P_ara；pl_atin®.、以及其任何组合。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述药剂表现出选自由以下组成的组的一种或多种活性：（a增加肿瘤浸润CD3+τ细胞的数量；（b降低非致瘤性CD14+骨髓细胞中的CD33的细胞水平，任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞是肿瘤浸润细胞或者任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞存在于血液中；（c减少非致瘤性CD14+骨髓细胞的数量，任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞是肿瘤浸润细胞或者任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞存在于血液中；（d降低一种或多种细胞中的PD-Ll水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;e降低一种或多种细胞中的TO-L2水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;f降低一种或多种细胞中的B7-H2水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;g降低一种或多种细胞中的B7-H3水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;h降低一种或多种细胞中的CD200R水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;i降低一种或多种细胞中的CD163水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;j降低一种或多种细胞中的CD206水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;GO降低实体瘤的肿瘤生长速率；（1减小肿瘤体积；（m增加一种或多种PD-I抑制剂的效力；（η增加一种或多种检查点抑制剂疗法和或免疫调节疗法的效力，任选地其中所述一种或多种检查点抑制剂疗法和或免疫调节疗法靶向以下中的一种或多种：CTL4、腺苷途径、PD-Ll、PD-L2、0X40、TIM3、LAG3、或其任何组合；（ο增加一种或多种化疗剂的效力，任选地其中所述化疗剂中的一种或多种是吉西他滨、卡培他滨、蒽环类药物、多柔比星（Adrianiycin"、表柔比星EllenceCRJ、紫杉烷类、紫杉醇Taxol®、多西他赛Taxotere®、5-氟尿嘧啶（5-FU、环磷酰胺Cytoxan|;,卡铂Paraplatinκ、以及其任何组合；（p在非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC存在下增加T细胞的增殖；以及q抑制非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC的分化、存活、和或一种或多种功能；以及ω当偶联到化学毒素或放射性毒素时杀灭实体瘤和相关联的血管中的CD33表达免疫抑制骨髓细胞和或CD14表达细胞。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述疾病、病症或损伤是感染。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述感染选自由以下组成的组:CNS疱瘆、寄生虫感染、锥虫感染、Cruzi感染、铜绿假单胞菌感染、杜氏利什曼原虫感染、B族链球菌感染、空肠弯曲杆菌感染、脑膜炎奈瑟氏球菌感染、I型HIV、以及流感嗜血杆菌。[0038]本公开的其他方面涉及一种预防、降低风险、或治疗癌症的方法，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用、或两者的药剂。本公开的其他方面涉及一种降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用、或两者的药剂，其用于预防、降低风险、或治疗有需要的个体中的癌症。本公开的其他方面涉及降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用、或两者的药剂在制造用于预防、降低风险、或治疗有需要的个体中的癌症的药品中的用途。在一些实施方案中，所述药剂选自由以下组成的组：抗体、可溶性CD33受体、CD33-FC融合蛋白、CD33免疫粘附素、结合一种或多种CD33配体的可溶性唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素受体、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-Fc融合蛋白、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素免疫粘附素、反义分子、siRNA、小分子抑制剂、蛋白质、以及肽。在一些实施方案中，所述药剂是分离的抗CD33抗体。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体是如前述实施方案中任一项所述的抗CD33抗体。在一些实施方案中，所述癌症选自由以下组成的组:膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞白血病ALL、急性骨髓性白血病AML、慢性淋巴细胞白血病CLL、慢性骨髓性白血病CML、以及多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，所述癌症是表达CD33的癌症。在一些实施方案中，所述癌症包括表达CD33的肿瘤。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述药剂抑制选自由以下组成的组的一种或多种CD33活性：（a促进以下中的一种或多种的增殖、成熟、迀移、分化和或功能性:免疫抑制树突细胞、免疫抑制巨噬细胞、免疫抑制嗜中性粒细胞、非致瘤性骨髓来源的抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞、、非致瘤性CD14+骨髓细胞、以及调节性T细胞；（b增强以下中的一种或多种到肿瘤中的浸润：免疫抑制树突细胞、免疫抑制巨噬细胞、免疫抑制嗜中性粒细胞、非致瘤性骨髓来源的抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞、以及调节性T细胞；（c增加肿瘤中、外周血中或其他淋巴样器官中的促进肿瘤的骨髓粒细胞性免疫抑制性细胞和或非致瘤性CD14+骨髓细胞的数量；⑹增强非致瘤性骨髓来源的抑制细胞和或非致瘤性CD14+骨髓细胞的促进肿瘤的活性e增加肿瘤中或外周血中的促进肿瘤的细胞因子的表达，任选地其中所述促进肿瘤的细胞因子是TGF-βSlL-10;⑴增加促进肿瘤的FoxP3+调节性T淋巴细胞的肿瘤浸润；（g减少具有肿瘤杀伤潜力的肿瘤特异性T淋巴细胞的活化；Oi减少具有肿瘤杀伤潜力的肿瘤特异性T淋巴细胞的浸润；⑴减少具有肿瘤杀伤潜力的肿瘤特异性NK细胞的浸润；（j降低NK细胞的肿瘤杀伤潜力；k减少具有增强免疫应答的潜力的肿瘤特异性B淋巴细胞的浸润；（1增加肿瘤体积；（m增加肿瘤生长速率；（η增加转移；（〇增加肿瘤复发率；（p增加一种或多种PD-I配体的表达；（q降低调节抗肿瘤T细胞应答的一种或多种免疫疗法或一种或多种癌症疫苗的效力，任选地其中所述一种或多种免疫疗法是靶向选自由以下组成的组的一种或多种蛋白质的免疫疗法：CD40、0X40、IC0S、CD28、CD1374-lBB、CD27、GITR、PD-Ll、CTLA4、PD-L2、PD-l、B7-!13、87-!14、见^]\〇1'1^、111?、6厶1^9、1'頂3、厶2厶1?、1^6、01?-5、了1«]\11、了1«]\12、〇5卩-1受体、以及其任何组合；（r抑制PLCγPKC钙动员；（s抑制PI3KAkt、RasMAPK信号传导；以及⑴降低一种或多种化疗剂的效力，任选地其中所述化疗剂中的一种或多种是吉西他滨、卡培他滨、蒽环类药物、多柔比星Adriamycin®、表柔比星Ellence®、紫杉烷类、紫杉醇Taxol®、多西他赛Taxotereii.、5-氟尿嘧啶（5-FU、环磷酰胺Cytoxan®、卡铂P^araplatin®、以及其任何组合。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述药剂表现出选自由以下组成的组的一种或多种活性：（a增加肿瘤浸润CD3+τ细胞的数量；（b降低非致瘤性CD14+骨髓细胞中的CD33的细胞水平，任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞是肿瘤浸润细胞或者任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞存在于血液中；（c减少非致瘤性CD14+骨髓细胞的数量，任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞是肿瘤浸润细胞或者任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞存在于血液中；（d降低一种或多种细胞中的PD-Ll水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;e降低一种或多种细胞中的TO-L2水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;f降低一种或多种细胞中的B7-H2水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;g降低一种或多种细胞中的B7-H3水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;h降低一种或多种细胞中的CD200R水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;i降低一种或多种细胞中的CD163水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;j降低一种或多种细胞中的CD206水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;00降低实体瘤的肿瘤生长速率；（1减小肿瘤体积；（m增加一种或多种PD-I抑制剂的效力；（η增加一种或多种检查点抑制剂疗法和或免疫调节疗法的效力，任选地其中所述一种或多种检查点抑制剂疗法和或免疫调节疗法靶向以下中的一种或多种：CTL4、腺苷途径、PD-Ll、PD-L2、0X40、TIM3、LAG3、或其任何组合；（ο增加一种或多种化疗剂的效力，任选地其中所述化疗剂中的一种或多种是吉西他滨、卡培他滨、蒽环类药物、多柔比星.Atfciamycin®_、表柔比星EllencetsO、紫杉烷类、紫杉醇CTaxo]®、多西他赛Taxotere®、5-氟尿嘧啶5-FU、环磷酰胺Cytoxan15〕、卡铂Paraplatin®、以及其任何组合；（p在非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC存在下增加T细胞的增殖；以及q抑制非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC的分化、存活、和或一种或多种功能；以及ω当偶联到化学毒素或放射性毒素时杀灭实体瘤和相关联的血管中的CD33表达免疫抑制骨髓细胞和或CD14表达细胞。[0039]本公开的其他方面涉及一种诱导或促进有需要的个体中的一种或多种免疫细胞的存活、成熟、功能性、迀移、或增殖的方法，其包括向所述个体施用治疗有效量的降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用、或两者的药剂。本公开的其他方面涉及一种降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用、或两者的药剂，其用于诱导或促进有需要的个体中的一种或多种免疫细胞的存活、成熟、功能性、迀移、或增殖。本公开的其他方面涉及降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用、或两者的药剂在制造用于诱导或促进有需要的个体中的一种或多种免疫细胞的存活、成熟、功能性、迀移、或增殖的药品中的用途。在一些实施方案中，所述药剂选自由以下组成的组:抗体、可溶性CD33受体、CD33-FC融合蛋白、CD33免疫粘附素、结合一种或多种CD33配体的可溶性唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素受体、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-Fc融合蛋白、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素免疫粘附素、反义分子、SiRNA、小分子抑制剂、蛋白质、以及肽。在一些实施方案中，所述药剂是分离的抗CD33抗体。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体是如前述实施方案中任一项所述的抗CD33抗体。在一些实施方案中，所述一种或多种免疫细胞选自由以下组成的组:树突细胞、巨噬细胞、小神经胶质细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、以及其任何组合。[0040]本公开的其他方面涉及一种降低有需要的个体中的以下各项的活性、功能性、或存活的方法:调节性T细胞、肿瘤包埋的免疫抑制树突细胞、肿瘤包埋的免疫抑制巨噬细胞、非致瘤性骨髓来源的抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞、急性骨髓性白血病AML细胞、慢性淋巴细胞白血病CLL细胞、或慢性骨髓性白血病CML细胞，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的结合CD33或与CD33相互作用的药剂。本公开的其他方面涉及一种用于降低有需要的个体中的以下各项的活性、功能性、或存活的结合CD33或与CD33相互作用的药剂:调节性T细胞、肿瘤包埋的免疫抑制树突细胞、肿瘤包埋的免疫抑制巨噬细胞、非致瘤性骨髓来源的抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞、急性骨髓性白血病AML细胞、慢性淋巴细胞白血病CLL细胞、或慢性骨髓性白血病CML细胞。本公开的其他方面涉及结合CD33或与CD33相互作用的药剂在制造用于降低有需要的个体中的以下各项的活性、功能性、或存活的药品中的用途:调节性T细胞、肿瘤包埋的免疫抑制树突细胞、肿瘤包埋的免疫抑制巨噬细胞、非致瘤性骨髓来源的抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞、急性骨髓性白血病AML细胞、慢性淋巴细胞白血病CLL细胞、或慢性骨髓性白血病CML细胞。在一些实施方案中，所述药剂选自由以下组成的组:抗体、拮抗剂抗体、惰性抗体、激动剂抗体、CD33配体、CD33配体激动剂片段、CD33免疫粘附素、CD33配体模拟物、可溶性⑶33受体、CD33-FC融合蛋白、结合一种或多种CD33配体的可溶性唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素受体、结合一种或多种CD33配体的唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-Fe融合蛋白、以及小分子化合物。在一些实施方案中，所述药剂是分离的抗CD33抗体或抗CD33抗体偶联物。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体偶联物包含偶联到可检测的标记物、毒素、或治疗剂的抗CD33抗体。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体偶联物包含偶联到选自由以下组成的组的毒素的抗CD33抗体:蓖麻毒素、蓖麻毒素A-链、多柔比星、柔红霉素、美登木素生物碱、紫杉酚、溴化乙锭、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春花碱、秋水仙碱、二羟基炭疽菌素二酮、放线菌素、白喉毒素、假单胞杆菌外毒素PEA、PE40、相思豆毒素、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、α-帚曲菌素、白树毒素、丝林霉素、局限曲霉素、酚霉素、依诺霉素、麻疯树毒蛋白、巴豆毒蛋白、加利车霉素、肥皂草抑制剂、糖皮质激素、奥瑞斯他汀、金霉素、钇、铋、考布他汀、多卡霉素、多拉司它汀、ccl065、以及顺铂。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗CD33抗体是如前述实施方案中任一项所述的不显著降低CD33的细胞表面水平和或不抑制⑶33与一种或多种⑶33配体之间的相互作用的抗⑶33抗体。[0041]本公开的其他方面涉及一种在有需要的个体中的一种或多种细胞上降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用、或两者的方法，其包括向所述个体施用治疗有效量的分离的抗CD33抗体。本公开的其他方面涉及一种用于在有需要的个体中的一种或多种细胞上降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用、或两者的分离的抗CD33抗体。本公开的其他方面涉及分离的抗CD33抗体在制造用于在有需要的个体中的一种或多种细胞上降低CD33的细胞水平、抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用、或两者的药品中的用途。在一些实施方案中，所述一种或多种细胞选自树突细胞、骨髓衍生的树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞、以及巨噬细胞；和或细胞系。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体降低体内CD33的细胞水平。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗⑶33抗体以65ρΜ至20ρΜ范围内的EC50降低CD33的细胞水平。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗⑶33抗体以以下EC5q降低⑶33的细胞水平:65ρΜ或更小、60ρΜ或更小，55ρΜ或更小，50ρΜ或更小，45ρΜ或更小、40ρΜ或更小、35ρΜ或更小、30ρΜ或更小、25ρΜ或更小、24ρΜ或更小、23ρΜ或更小、22ρΜ或更小、2IpM或更小、20ρΜ或更小、IOpM或更小、9ρΜ或更小、8ρΜ或更小、7ρΜ或更小、6ρΜ或更小、或5ρΜ或更小。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗CD33抗体以65ρΜ至22ρΜ范围内、或小于22ρΜ的EC5q降低CD33的细胞水平。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗⑶33抗体以约8.Omgkg至约2.Omgkg范围内的EC5q降低体内CD33的细胞水平。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗⑶33抗体对于人⑶33具有300nM至IOpM范围内的解离常数Kd，其中Kd在大约25°C的温度下确定。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗CD33抗体对于人CD33具有小于300pM的解离常数Kd，其中Kd在大约25°C的温度下确定。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，Kd使用单价抗体来确定。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，Kd使用呈单价形式的全长抗体来确定。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗CD33抗体以200pM至IOpM范围内的EC50结合到人树突细胞，其中EC5q在大约4°C的温度下确定。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗CD33抗体以小于200pM的EC5q结合到人树突细胞，其中EC5q在大约4°C的温度下确定。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体选自由以下组成的组:诘抗剂抗CD33抗体、惰性抗CD33抗体、以及激动剂抗CD33抗体。在一些实施方案中，所述抗CD33抗体是如前述实施方案中任一项所述的抗CD33抗体。[0042]在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述个体包含CD33的变体。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述变体包含选自由以下组成的组的一种或多种多态性：（aSNPrs3865444AG;bSNPrs3865444GG;cSNPrs35112940GGaA、AG;⑹SNPrsl2459419GG、GlWT;以及其任何组合。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述方法还包括向所述个体施用特异性地结合到抑制性检查点分子的至少一种抗体和或一种或多种标准或研究性抗癌疗法。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，特异性地结合到抑制性检查点分子的至少一种抗体与所述抗CD33抗体组合施用。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，特异性地结合到抑制性检查点分子的至少一种抗体选自由以下组成的组：抗PD-L1抗体、抗CTLA4抗体、抗TO-L2抗体、抗TO-1抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、以及抗HVEM抗体、抗B淋巴细胞和T淋巴细胞衰减因子BTLA抗体、抗杀伤细胞抑制性受体KIR抗体、抗GAL9抗体、抗ΊΊΜ3抗体、抗A2AR抗体、抗LAG-3抗体、抗磷脂酰丝氨酸抗体、抗CD27抗体、抗TNFa抗体、抗唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-5抗体、抗唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-7抗体、抗唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-9抗体、抗唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-11抗体、拮抗性抗TREMl抗体、拮抗性抗TREM2抗体、以及其任何组合。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述一种或多种标准或研究性抗癌疗法选自由以下组成的组:放射疗法、细胞毒性化学疗法、靶向疗法、伊马替尼疗法、曲妥珠单抗疗法、依那西普疗法、过继细胞移植ACT疗法、嵌合抗原受体T细胞移植CAR-T疗法、疫苗疗法、以及细胞因子疗法。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述方法还包括向所述个体施用特异性地结合到抑制性细胞因子的至少一种抗体。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，特异性地结合到抑制性细胞因子的至少一种抗体与所述抗CD33抗体组合施用。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，特异性地结合到抑制性细胞因子的至少一种抗体选自由以下组成的组:抗CCL2抗体、抗CSF-1抗体、抗IL-2抗体、以及其任何组合。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述方法还包括向所述个体施用特异性地结合到刺激性检查点蛋白的至少一种激动性抗体。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，特异性地结合到刺激性检查点蛋白的至少一种激动性抗体与抗CD33抗体组合施用。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，特异性地结合到刺激性检查点蛋白的至少一种激动性抗体选自由以下组成的组:激动剂抗CD40抗体、激动剂抗0X40抗体、激动剂抗ICOS抗体、激动剂抗CD28抗体、激动性抗TREMl抗体、激动性抗TREM2抗体、激动剂抗CD1374-1BB抗体、激动剂抗CD27抗体、激动剂抗糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白GITR抗体、以及其任何组合。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述方法还包括向所述个体施用至少一种刺激性细胞因子。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述至少一种刺激性细胞因子与抗CD33抗体组合施用。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述至少一种刺激性细胞因子选自由以下组成的组：IFN-a4、IFN-b、IL-10、TNF-a、IL-6、IL-8、〇^、11^-20家族成员、1^1卩、1卩1丫、05]\^町卩、61-〇5卩、11^-11、11^-12、11^-17、11^-18、11^-23、CXCL1O、IL-33、CRP、IL-33、MCP-1、MIP-1_0、以及其任何组合。[0043]本公开的其他方面涉及一种选择有需要的受试者以供用结合CD33或与CD33相互作用的药剂治疗的方法，所述方法包括:a.从受试者获得样品；b.检测存在于受试者中的CD33等位基因；以及c.选择受试者以供用结合CD33或与CD33相互作用的药剂治疗，所述受试者具有一种或多种⑶33等位基因，其中所述一种或多种⑶33等位基因选自由rs3865444Ae和rs3865444e%l成的组。本公开的其他方面涉及一种评估有需要的受试者对于结合CD33或与CD33相互作用的药剂的应答性的方法，所述方法包括:a.在向受试者施用抗CD33抗体之前测量从受试者获得的血液样品中的非致瘤性骨髓细胞上的CD45+和CD14+的表达水平;b.向受试者施用治疗有效量的药剂；以及c.在施用抗CD33抗体之后测量从受试者获得的血液样品中的非致瘤性骨髓细胞上的CD45+和CD14+的表达水平，其中在施用抗CD33抗体之后非致瘤性骨髓细胞上的CD45+CD14+水平降低指示受试者对于药剂具有应答性。在一些实施方案中，评估应答性的方法还包括施用一份或多份额外的治疗有效量的药剂。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述药剂选自由以下组成的组:抗体、可溶性CD33受体、CD33-Fc融合蛋白、CD33免疫粘附素、可溶性唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素受体、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-Fc融合蛋白、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素免疫粘附素、反义分子、siRNA、小分子抑制剂、蛋白质、以及肽。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述药剂是分离的抗CD33抗体或抗CD33抗体偶联物。在可与前述实施方案中的任一项组合的一些实施方案中，所述抗CD33抗体是如前述实施方案中任一项所述的抗⑶33抗体。[0044]附图简述[0045]图1示出CD33的结构和描绘CD33的结构域结构的方案以及参与磷酸化或泛素化事件或鉴定为相对频繁的非同义单核苷酸多态性SNP的个别氨基酸。缩写:CBL:CasitaSB-谱系淋巴瘤E3泛素连接酶;C2:C2型Ig样结构域;ECS:延伸蛋白BC-滞蛋白（CulIin-5SPRY结构域泛素连接酶;P:磷酸-;PKC:蛋白激酶C;SFK:Src家族激酶;SHP-12:包含Src同源区2结构域的磷酸酶-1和包含Src同源区2结构域的磷酸酶-2;S0CS3:细胞因子信号传导抑制子3;Ub:泛素；V:V型Ig样结构域。（Cowan等人，（2013FrontiersinBiosciencel8:1311_1334〇[0046]图2描绘人CD33SEQIDN0:1与小鼠CD33SEQIDN0:2、大鼠CD33SEQIDN0:3、黑猩猩CD33SEQIDΝ0:4、恒河猴CD33SEQIDΝ0:5、狗CD33SEQIDΝ0:6、牛CD33SEQIDN0:7、以及斑马鱼CD33SEQIDN0:8之间的氨基酸序列比对。星号（“*”）指示具有单一的完全保守的残基的位置；冒号指示具有强相似特性在GonnetPAM250矩阵中得分0.5的组之间的保守；并且句号指示具有弱相似特性在GonnetPAM250矩阵中得分=〈〇.5的组之间的保守。[0047]图3示出人唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素蛋白（诸如CD33的聚糖结合特异性。此图示出最常研究的唾液酸化聚糖的最常报道的特异性的汇总。每种唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素的研究内的相对结合指示为++，强结合;+，可检测的结合；以及_，非常弱或不可检测的结合。未示出h唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-8和m唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-F对于6硫酸化-唾液酸化-路易斯XsLex和h唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-9对于6-唾液酸化-sLex的最近报道的强结合偏好。在一些例外CD22和MAG的情况下，通过不同的研究人员使用不同的测定法所得的人唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素的结合特异性研究的结果显著地变化。除测定形式和聚糖接头问题之外，所研究的配体的密度和布置可负责此变化Varki等人，（2006Glycobiol.16:1R-27R。[0048]图4示出哺乳动物脑中神经节苷脂的结构和代谢。附图中的神经节苷脂的命名遵循Svennerholm系统（1964J.LipidRes.5:145-155ArigaT等人（2008J.LipidRes.49:1157-1175〇[0049]图5Α描绘证明人原代免疫细胞中的CD33表达的FACS分析的结果。图5Β描绘示出CD33抗体1A8对于纯化的CD33-his标记蛋白的结合亲和力的BIAcore传感图。图5C描绘示出⑶33抗体2E12对于纯化的⑶33-his标记蛋白的结合亲和力的BIAcore传感图。图5D描绘示出CD33抗体2F5对于纯化的CD33-his标记蛋白的结合亲和力的BIAcore传感图。图5E描绘示出CD33抗体6A3对于纯化的CD33-his标记蛋白的结合亲和力的BIAcore传感图。图5F描绘示出CD33抗体6C7对于纯化的CD33-his标记蛋白的结合亲和力的BIAcore传感图。图5G描绘示出CD33抗体吉妥珠单抗对于纯化的CD33-his标记蛋白的结合亲和力的BIAcore传感图。图5H描绘CD33抗体2F5和6C7结合到人原代树突细胞上的CD33的结合曲线。图51描绘CD33抗体吉妥珠单抗和林妥珠单抗结合到人原代树突细胞上的CD33的结合曲线。[0050]图6A和图6B描绘人CD33蛋白上的抗体结合位点。图6A示出利用本公开的抗CD33抗体获得的抗CD33抗体的线性表位结合位点。CD33主链以透明灰色表示呈现。针对抗体鉴定的线性结合区域在附图中列出。图6B描绘针对抗体1A8的不连续表位的结合位点的卡通透视图。不连续结合区域39vpctffhpipyyd51、88grfrllgdpsor98、以及11qrrdngsyffrm12Q在附图中列出。图6C描绘对本公开的抗体的野生型CD33与CD33突变体的结合反应性百分比WT。图6D描绘指示抗体结合中涉及的氨基酸残基的CD33模型。[0051]图7描绘示出树突细胞上的唾液酸CD3配体在与人原代细胞的混合淋巴细胞反应期间限制T细胞增殖的FACS分析。[0052]图8描绘示出树突细胞上的唾液酸⑶33配体在混合淋巴细胞反应期间限制T细胞增殖的结果。[0053]图9A-图9F描绘示出通过各种刺激诱导的人骨髓细胞上的⑶33和⑶33配体表达增加的结果。图9A和图9B描绘示出在使用肿瘤上清液进行处理之后人原代树突细胞上的CD33表达增加的结果。图9C和图9D描绘示出在LPS诱导的炎症期间人树突细胞上的CD33表达增加的结果。图9E和图9F描绘示出在LPS诱导的炎症期间人骨髓细胞上的唾液酸表达增加的结果。[0054]图10描绘示出从大肠杆菌去除CD33配体的唾液酸酶处理增加通过人原代树突细胞进行的吞噬作用的结果。[0055]图IlA和图IlB描绘示出抗⑶33抗体引起通过原代人巨噬细胞进行的对大肠杆菌的吞噬作用增加的结果。图IlA描绘生物颗粒对照、mlgGl同种型对照抗体和抗⑶33抗体2E12。图IIB描绘抗CD33抗体2F5、抗CD33抗体6A3和抗CD33抗体6C7。[0056]图12A和图12B描绘来自阿尔茨海默氏病大脑AD和健康大脑非AD的大脑切片中的⑶33配体表达。图12A描绘AD和非AD大脑中的⑶33-Fc的免疫组织化学染色。对照IgGl-Fc不结合到这些细胞。图12B描绘对来自5个AD大脑样品和5个非AD大脑样品的CD33-Fc和对照受体染色的单因素ANOVA统计分析的结果，其指示抑制性CD33配体促成AD病变。[0057]图13A和图13B描绘来自阿尔茨海默氏病大脑AD和健康大脑非AD的大脑切片中的⑶33受体表达。图13A描绘AD和非AD大脑切片中与同种型对照相比⑶33抗体的免疫组织化学染色。图13B描绘对来自5个AD大脑样品和5个非AD大脑样品的⑶33抗体和同种型对照染色的单因素ANOVA统计分析的结果。[0058]图14A-图14D描绘培养物中和体内肿瘤细胞中的CD33和抑制性CD33配体的表达。图14A描绘示出抑制性CD33配体的表达在黑素瘤细胞、肺肿瘤细胞和结肠癌细胞中增加大约20倍的结果。图14B描绘示出人免疫细胞中的CD33表达的结果，所述人免疫细胞来自外周血和脾以及细胞浸润物，所述细胞浸润物来自缺少成熟小鼠T细胞、B细胞和NK细胞的移植有人CD45+免疫细胞和移植有患者衍生的黑素瘤的免疫缺陷小鼠模型的患者衍生的黑素瘤。图14C描绘示出⑶3+T细胞、CDllb+免疫细胞和Grl+⑶Ilb+免疫细胞中的⑶33表达的结果，所述细胞来自脾和来自小鼠肿瘤模型的乳腺癌肿瘤EMT-6的细胞浸润物。图14D描绘示出⑶45-T细胞、Grl+细胞和Grl-⑶Ilb-免疫细胞中的⑶33表达的结果，所述细胞来自脾和来自小鼠肿瘤模型的乳腺癌肿瘤EMT-6的细胞浸润物。所述结果指示CD33和CD33免疫抑制性配体在对多种类型的实体瘤的免疫应答中发挥作用。[0059]图15A-图15E描绘示出CD33通过遗传手段被中和的小鼠中的结肠癌肿瘤生长的抑制的结果。图15A描绘具有正常⑶33表达的对照小鼠（WT小鼠）。图15B描绘⑶33在遗传上失活的小鼠（CD33K0小鼠）。图15C描绘图15A和图15B的结果的汇总，其示出中位肿瘤体积。图15D描绘证明患有结肠癌的CD33K0小鼠比患有结肠癌的对应的WT小鼠更好地存活的Kaplan-Meier存活曲线图。图15E描绘小鼠⑶33表达的FACS分析。对来自WT小鼠和⑶33K0小鼠的脾和肿瘤、以及初次接受实验的脾执行特定细胞群体分析。所述结果指示阻断CD33功能遗传上或药理学上在癌症中引起有益结果。图15F描绘免疫人源化小鼠中的患者衍生的癌症的小鼠模型的PD-1CD33组合抗体治疗方案。图15G描绘在移植有来自人供体165547112和17509112的免疫干细胞的个体小鼠中进行抗体治疗之后的肿瘤体积。小鼠使用Keytmda®派姆单抗抗ro-i抗体单独进行治疗或与抗CD33抗体2F5组合进行治疗。图15H描绘在移植来自人供体165547112和17509112的人免疫干细胞的小鼠中使用Keytruda®派姆单抗抗PD-I抗体单独进行治疗或与抗CD33抗体2F5组合进行治疗25天之后的平均肿瘤体积。图151描绘在移植有来自人供体165547112、17509112和984480112的免疫干细胞的个体小鼠中使用Keytmda®派姆单抗抗PD-I抗体单独进行治疗或使用Keytruda®派姆单抗抗TO-I抗体与抗CD33抗体2F5—起进行治疗之后的肿瘤体积。对于2F5相对于同种型对照，*:p〈0.05;#:p〈0.01;:p〈0.001。呈现每个治疗组的平均值。误差棒代表SEM。图15J描绘使用Keytruda®派姆单抗）抗PD-I抗体单独进行治疗或与抗⑶33抗体2F5组合进行治疗之后小鼠中的平均肿瘤体积。对于2F5相对于同种型对照，*:p〈0.05;:p〈0.01;***:p〈0.001。呈现每个治疗组的平均值。误差棒代表SEM。图15K描绘在移植来自人供体984480112的人免疫干细胞的小鼠中使用Keytratia®派姆单抗抗ro-1抗体单独进行治疗或与抗CD33抗体2F5组合进行治疗之后的平均肿瘤体积。图15L描绘在移植来自人供体165547112和17509112的人免疫干细胞的小鼠中使用Keytruda®派姆单抗）抗PD-I抗体单独进行治疗或与抗CD33抗体2F5组合进行治疗28天之后的平均肿瘤体积。图15M描绘使用Keytruda®派姆单抗抗ro-l抗体单独进行治疗或与抗CD33抗体2F5组合进行治疗的小鼠的体内肿瘤生长速率。**:P〈〇.Ol;+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15N描绘来自使用Keytruda®派姆单抗抗PD-I抗体单独进行治疗或与抗CD33抗体2F5组合进行治疗的小鼠的外周血人⑹CD45+CD14+骨髓细胞中CD33的细胞表面水平的体内降低。+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图150描绘来自使用Keytruda®派姆单抗）抗PD-I抗体单独进行治疗或与抗CD33抗体2F5组合进行治疗的小鼠的肿瘤浸润人⑹CD45+CD14+骨髓细胞中的体内降低。:p〈0.01;:p〈0.001;+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数。图15p描绘来自使用Keytruda㊣（派姆单抗）抗Η-1抗体单独进行治疗或与抗CD33抗体2F5组合进行治疗的小鼠的肿瘤浸润人hCD45+⑶3+T细胞中的体内增加。对于2F5相对于同种型对照，（*:?〈0.10，**:?〈0.01，校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15Q描绘来自使用Keytruda㊣（派姆单抗抗TO-I抗体单独进行治疗或与抗CD33抗体2F5组合进行治疗的小鼠的外周血人⑹CD45+CD14+骨髓细胞中的体内降低。对于2F5相对于同种型对照，:p〈0.001;#:p〈0.01;*:p〈0.05，校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15R描绘免疫人源化小鼠中的患者衍生的癌症的小鼠模型的抗CD33抗体治疗方案。图15S描绘使用抗CD33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗之后个体小鼠中的肿瘤体积。对于2F5相对于同种型对照，*:p〈0.05;:p〈0.01;***:p〈0.001。呈现每个治疗组的平均值。误差棒代表SEM。图15T描绘使用抗⑶33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗之后小鼠中的平均肿瘤体积。对于2F5相对于同种型对照，*:p〈〇.05;:p〈0.01;***:p〈0.001。呈现每个治疗组的平均值。误差棒代表SEM。图15U描绘使用抗⑶33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的体内肿瘤生长速率。对于2F5相对于同种型对照，#:p〈0.01;:p〈0.001，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15V描绘含有阿尔茨海默氏病⑶33等位基因rs3865444AA等位基因、AC等位基因和CC等位基因中的任一个并且使用抗CD33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的体内肿瘤生长速率。对于2F5相对于同种型对照，*:p〈0·05;林:p〈0·01;:p〈0·001，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15W描绘含有阿尔茨海默氏病rs3865444CC等位基因的小鼠的体内肿瘤生长速率。对于2F5相对于同种型对照，*:p〈0.05;:p〈0.01;***:p〈0.001，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15X描绘含有阿尔茨海默氏病rs3865444AA等位基因的小鼠的体内肿瘤生长速率。对于2F5相对于同种型对照，*:?〈0.05;**:?〈0.01;#*:?〈0.001，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15Y描绘来自使用抗CD33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的外周血人hCD45+CD14+骨髓细胞中CD33的细胞表面水平的体内降低。对于2F5相对于同种型对照，**:p〈0.001，校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15Z描绘含有阿尔茨海默氏病⑶33等位基因rs3865444AA等位基因、AC等位基因和CC等位基因中的任一个并且使用抗⑶33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的外周血人⑹⑶45+CD14+骨髓细胞中⑶33的细胞表面水平的体内降低。对于2F5相对于同种型对照，***:p〈0.OO1，校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数（第25和第75百分位数）。图15AA描绘来自含有阿尔茨海默氏病rs3865444CC等位基因并且使用抗⑶33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的外周血人⑹CD45+CD14+骨髓细胞中CD33的细胞表面水平的体内降低。对于2F5相对于同种型对照，:p〈〇.〇〇1，校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15BB描绘含有阿尔茨海默氏病rs3865444AA等位基因并且使用抗⑶33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的外周血人⑹CD45+CD14+骨髓细胞中CD33的细胞表面水平的体内降低。“n.s.”：统计学上不显著;+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15CC描绘来自使用抗CD33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的肿瘤浸润人⑹⑶45+⑶14+骨髓细胞中⑶33的细胞表面水平的体内降低。对于2F5相对于同种型对照，:p〈0.001，校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15DD描绘含有阿尔茨海默氏病⑶33等位基因rs3865444AA等位基因、AC等位基因和CC等位基因中的任一个并且使用抗⑶33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的肿瘤浸润人hCD45+CD14+骨髓细胞中CD33的细胞表面水平的体内降低。对于2F5相对于同种型对照，:p〈0.001，校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15EE描绘来自含有阿尔茨海默氏病rs3865444CC等位基因并且使用抗⑶33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的肿瘤浸润人⑹⑶45+⑶14+骨髓细胞中⑶33的细胞表面水平的体内降低。对于2F5相对于同种型对照，:p〈0.001，校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15FF描绘含有阿尔茨海默氏病rs3865444AA等位基因并且使用抗⑶33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的肿瘤浸润人⑹⑶45+CD14+骨髓细胞中CD33的细胞表面水平的体内降低。“n.s.”：统计学上不显著;+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15GG描绘来自使用抗CD33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的肿瘤浸润人（hCD45+CD14+骨髓细胞中的体内降低。对于2F5相对于同种型对照，***:ρ〈〇.〇1;***:p〈〇.001，校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15HH描绘含有阿尔茨海默氏病⑶33等位基因rs3865444AA等位基因、AC等位基因和CC等位基因中的任一个并且使用抗⑶33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的肿瘤浸润人hCD45+CD14+骨髓细胞中的体内降低。对于2F5相对于同种型对照，p〈0.001，校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图1511描绘来自含有阿尔茨海默氏病rs3865444CC等位基因并且使用抗CD33抗体2F5或同种型对照（Ctl抗体进行治疗的小鼠的肿瘤浸润人h⑶45+CD14+骨髓细胞中的体内降低。对于2F5相对于同种型对照，#:p〈0.Ol，校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数（第25和第75百分位数）。图15JJ描绘含有阿尔茨海默氏病CD33等位基因rs3865444AA等位基因并且使用抗⑶33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的肿瘤浸润人Oi⑶45+CD14+骨髓细胞中的体内降低。*:p〈0.05，校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15KK描绘来自使用抗⑶33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的肿瘤浸润人⑹⑶45+CD3+T细胞中的体内增加。对于2F5相对于同种型对照，⑷：p〈0.10，:p〈0.01，校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15LL描绘含有阿尔茨海默氏病⑶33等位基因rs3865444AA等位基因、AC等位基因和CC等位基因中的任一个并且使用抗CD33抗体2F5或同种型对照（Ctl抗体进行治疗的小鼠的肿瘤浸润人h⑶45+⑶3+T细胞中的体内增加。对于2F5相对于同种型对照，⑷：p〈0.10,校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数（第25和第75百分位数）。对于^38654444^等位基因，？=0.0042，并且对于rs3865444CC等位基因，p=0.59。图15MM描绘来自含有阿尔茨海默氏病rs3865444CC等位基因并且使用抗CD33抗体2F5或同种型对照（Ctl抗体进行治疗的小鼠的肿瘤浸润人hCD45+CD3+T细胞中的体内增加。“n.s.”：统计学上不显著;+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15NN描绘含有阿尔茨海默氏病rs3865444AA等位基因并且使用抗⑶33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的肿瘤浸润人hCD45+CD3+T细胞中的体内增加。对于2F5相对于同种型对照，**:p〈〇.001，校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图1500描绘来自使用抗⑶33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的外周血人⑹⑶45+CD14+骨髓细胞中的体内降低。对于2F5相对于同种型对照，*:p〈0.05，校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15PP描绘含有阿尔茨海默氏病⑶33等位基因rs3865444AA等位基因、AC等位基因和CC等位基因中的任一个并且使用抗⑶33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的外周血人⑹CD45+CD14+骨髓细胞中的体内降低。对于2F5相对于同种型对照，*:p〈〇.05,校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15QQ描绘来自含有阿尔茨海默氏病rs3865444CC等位基因并且使用抗⑶33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的外周血人⑹CD45+CD14+骨髓细胞中的体内降低。对于2F5相对于同种型对照，*:p〈0.05,校正供体和动物处死天数，+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。图15RR描绘含有阿尔茨海默氏病rs3865444AA等位基因并且使用抗⑶33抗体2F5或同种型对照Ctl抗体进行治疗的小鼠的外周血人⑹CD45+CD14+骨髓细胞中的体内降低。“n.s.”：统计学上不显著;+:平均值;盒形图中线：中值;盒的上边界和下边界对应于第一四分位数和第三四分位数第25和第75百分位数）。[0060]图16A-图16J描绘示出各种原代免疫细胞上的CD33的细胞表面水平降低的结果。图16A-图16C描绘示出使用抗CD33抗体进行处理的人原代小神经胶质细胞上的CD33的细胞表面水平降低的结果。图16A描绘非抗体对照非mAb和同种型对照抗体（同种型）。图16B描绘抗CD33抗体1A81A8.2、2E12和2F5。图16C描绘抗CD33抗体6A3和6C76C7.2。图16D描绘示出使用抗CD33抗体2E12、6A3和6C7进行处理的人原代单核细胞上CD33的细胞表面水平的剂量依赖性降低的结果。图16E描绘示出使用抗CD33抗体2E12、6A3和6C7进行处理的人原代树突细胞上CD33的细胞表面水平的剂量依赖性降低的结果。图16F-图16H描绘示出使用去糖基化抗⑶33抗体1A81A8.2、2E12、6A3、以及6C76C7.2进行处理的人原代树突细胞上CD33的细胞表面水平降低的结果。图16F描绘从患者供体258获得的人原代树突细胞上CD33的细胞表面水平的降低。图16G描绘从患者供体259获得的人原代树突细胞上CD33的细胞表面水平的降低。图16H描绘来自使用抗CD33抗体处理的供体258和259的细胞之间的细胞表面降低（下调）的变化百分比（A%。图161和图16J描绘从使用抗CD33抗体2F5或同种型对照抗体mlgGl进行处理的表达人IL3、GM-CSF和SCFNSGS的NOD-scidIL2Rgnull-3GMSF、NSG-SGM3、三重转基因NSG-SGM3NSGS小鼠分离的人单核细胞中的⑶33表达和唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-9表达的FACS分析。图161描绘示出用于减少CD33的细胞表面表达的⑶33抗体2F5、6C7、吉妥珠单抗、以及林妥珠单抗的半数最大浓度EC5q的12点滴定曲线。图16J描绘示出用于减少CDllc的细胞表面表达的CD33抗体2F5、6C7和吉妥珠单抗的半数最大浓度EC5q的12点滴定曲线。图16K示出在体内抗体处理之后CD33的细胞表面水平的体内降低。图16L示出非相关受体唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-9的表达。唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-9用作对照。唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-9的细胞表面水平在体内抗体处理之后未改变。图16M示出在使用40mgkg、8·Omgkg、1·6mgkg、或0·3mgkgCD33抗体2F5进行体内处理之后CD33的细胞表面水平的体内降低。图16N示出在使用40mgkg、8.0mgkg、l.6mgkg、或0.3mgkg033抗体2F5进行体内处理之后对照抗体（唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-9的体内细胞表面水平。[0061]图17A描绘在不同抗体浓度下结合到人原代单核细胞的CD33抗体。在附图中，针对每个指示的浓度从左至右按顺序是以下抗体：小鼠同种型对照抗体mlgGl、抗CD33抗体2F5C-2F5、抗CD33抗体2E12C-2E12、抗CD33抗体6A3C-6A3·1、抗CD33抗体6C7C-6C7.2、人同种型对照抗体人同种型）、抗⑶33抗体C-64、抗⑶33抗体吉妥珠单抗、以及抗CD33抗体林妥珠单抗。图17B描绘在使用不同抗体浓度下的CD33抗体进行处理之后人原代单核细胞中CD33的细胞表面水平。图17C描绘在使用不同抗体浓度下的CD33抗体进行处理之后人原代单核细胞中CD14的细胞表面水平。[0062]图18A描绘野生型和⑶33敲除THP-I细胞中⑶33的表达水平。图18B描绘野生型和⑶33敲除THP-I细胞中⑶14的表达水平。图18C描绘使用不同浓度的LPS或使用IL-6、IL-8和GM-CSF处理的野生型和⑶33敲除THP-I细胞中细胞因子的水平。图18D描绘使用不同浓度的LPS或使用IL-6、IL-8和GM-CSF处理的野生型和⑶33敲除THP-I细胞中活化标记物的水平。[0063]图19A描绘使用抗⑶33抗体2F5处理的骨髓来源的抑制细胞MDSC中⑶33和I3D-Ll的表达水平。在附图中，“未处理的MDSC”是指未使用抗体处理的细胞，“MDSC+同种型”是指使用同种型对照抗体处理的细胞;并且“MDSC+C-2F5”是指使用抗⑶33抗体2F5处理的细胞。图19B描绘使用同种型对照抗体处理的骨髓来源的抑制细胞MDSC与使用抗⑶33抗体2F5处理的细胞之间的〇163、〇33工0206、？0-12工02001?、87!13、以及^-11的表达的变化的定量图19：描绘由未经过处理或使用抗⑶33抗体2F5、小鼠同种型对照抗体mlgGl、或抗H-Ll抗体PDLl处理的骨髓来源的抑制细胞MDSC诱导的CD3+T细胞增殖和CD8+T细胞增值的百分比。MDCS与T细胞在宫颈癌细胞条件培养基中进行共同培养。**:p〈0.01。图19D描绘由未经过处理或使用抗⑶33抗体2F5、小鼠同种型对照抗体mlgGl、或抗H-L1抗体PDLl处理的骨髓来源的抑制细胞MDSC诱导的CD3+T细胞增殖和CD8+T细胞增值的百分比。#:p〈0.01^DCS与T细胞在胶质母细胞瘤细胞条件培养基中进行共同培养。[0064]图20描绘示出抗CD33抗体选择性地杀灭非致瘤性骨髓来源的抑制细胞的结果。顶行:通过细胞形态进行的活死设门：使用C-6C7的死细胞门增加。中间行:使用染料对活死细胞进行设门：染料高阳性细胞是死的，染料低细胞是活的。在6C7处理的细胞中死细胞增加30%。柱状图：示出呈柱状图形式的活死细胞染料，2F5中没有峰，其他mAb中死细胞的峰。[0065]发明详述[0066]通用技术[0067]本文描述或提到的技术和程序一般是本领域技术人员使用常规方法众所周知并且常用的，如例如以下描述的广泛利用的方法：Sambrook等人，MolecularCloning:ALaboratoryManual第3片反（2001ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，N.Y.;CurrentProtocolsinMolecularBiologyF.M.Ausubel等人编，（2003;theseriesMethodsinEnzymologyAcademicPress公司）：PCR2：APractical八卩卩1'〇。11]\1.0.20D的克隆用于下一轮测试中。在筛选抗原上对阳性培养物进行再测试以确认分泌，并且在非相关抗原人转铁蛋白）上对阳性培养物进行再测试以消除非特异性或“粘性”mAb并排除假阳性。通过抗体捕获ELISA对感兴趣的全部克隆进行同种型分型以确定它们是IgG同种型或IgM同种型。[0583]杂交瘤细胞培养[0584]转移到96孔板后，将感兴趣的杂交瘤细胞系维持在24孔培养板中的培养物中32天。这称为稳定性期，并且测试克隆是否保持稳定和分泌。在此稳定期时间期间，由感兴趣的全部克隆制备临时冷冻的细胞系备份以供于_80°C存储存活6个月）。在此时间段期间针对分泌和特异性周期性地测试杂交瘤。[0585]亚克隆[0586]对顶部杂交瘤细胞系克隆进行亚克隆以确保单克隆性。通过再次使用单一步骤克隆系统对亲本克隆进行铺板来执行亚克隆。将24个与90个之间的亚克隆转移到96板培养板。通过间接ELISA和抗体捕获ELISA筛选亚克隆。将每个亲本的顶部亚克隆用于在培养物中进行扩增。对〈50%无性系的任何亲本克隆执行第二轮的亚克隆。[0587]然后针对CD33结合筛选抗体。针对阻断配体结合的能力和降低多种细胞类型中的CD33的表面水平的能力对结合到人CD33阳性的抗体进行测试。[0588]抗体重链和轻链可变结构域序列[0589]使用标准技术，确定编码所生成的抗体的轻链可变结构域和重链可变结构域的氨基酸序列。抗体的EU或Kabat轻链CDR序列在表1中阐述。抗体的EU或Kabat重链CDR序列在表2中阐述。抗体的EU或Kabat轻链框架FR序列在表3A中阐述。抗体的EU或Kabat重链框架FI?序列在表3B中阐述。[0590]表1:抗CD33抗体的EU或Kabat轻链HVR序列[0592]表2:抗CD33抗体的EU或Kabat重链HVR序列[0595]表3A:小鼠抗CD33抗体的EU或Kabat轻链框架序列[0597]表3B:小鼠抗⑶33抗体的EU或Kabat重链框架序列[0600]⑶33抗体结合的表征[0601]CD33抗体的初始表征涉及确定其结合在CHO细胞系上、在人原代单核细胞、人原代树突细胞、以及人原代巨噬细胞上表达的CD33的能力。收获细胞，在96孔板中以IO6个ml铺板，并且在冰中在含有2%FBS、2mMEDTA和10ygml抗体和Fc阻断试剂的ΙΟΟμΙPBS中孵育1小时。洗涤细胞两次，并且在冰上在含有2%FBS、2mMEDTA和5ygmlPE偶联的二抗的ΙΟΟμΙPBS中孵育30分钟。在冷I3BS中洗涤细胞两次，并且在BDFACSCanto上通过流式细胞术进行分析。使用FlowjoTreeStar软件版本10.0.7执行数据分析和平均荧光强度MFI值的计算。[0602]FACS染色分析指示⑶33在原代骨髓和淋巴样细胞上表达，所述细胞包括人原代单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、CD4+T细胞、以及嗜中性粒细胞图5A。[0603]表4证明抗体结合到表达重组人⑶33CH0hCD33的CHO细胞系。CD33抗体所结合的细胞类型的阳性结合百分比和平均荧光强度MFI值在表4中列出。结合与亲本CHO细胞系进行比较。在表4中，“同种型”是指同种型mlgGl对照抗体。[0604]表4:结合到CHO细胞的⑶33抗体[0607]CD33抗体所结合的细胞类型的阳性结合百分比和平均荧光强度MFI值在表5中列出。结合与同种型对照进行比较。所述抗体结合到人原代单核细胞、人原代树突细胞和人原代巨噬细胞。在表5中，“同种型”是指同种型mlgGl对照抗体;并且“DC”是指树突细胞。[0608]表5A:结合到人原代细胞的CD33抗体[0610]然后确定⑶33抗体的表观亲和力常数。在BiaCoreT200仪器上在25°C下以IOHz的速率采集SPR数据。使用BiaCoreT200评价软件版本2.0执行数据分析。使用HBS-EP+IOOmMHEPES，1.5MNaCl，30mMEDTA，0.5%vv表面活性剂P20，pH7.4作为运行缓冲液并且用于制备试剂。在固定有抗小鼠IgG的CM5传感器芯片GEHealthcare上捕集抗⑶33抗体1A8、2E12、2F5、6A3、6C7、以及吉妥珠单抗20nM中的每一种60s接触时间，30yLmin流速，Os稳定化时间）。然后使20nM组氨酸标记的人⑶33SinoBiological在捕集的抗⑶33表面上流过（120s接触时间，30yLmin流速，300s缔合时间）。执行一式两份的单一浓度试验并且通过空白（OnM抗原）样品进行分类。使用IOmM甘氨酸-HCl，pH1.7在循环之间再生成芯片表面60s接触时间，30yLmin流速，60s稳定化时间）。获得所得的SPR信号作为对空白流动细胞执行的测量的应答差异。使用1:1相互作用模型执行单一浓度动力学分析Canziani等人AnalyticalBiochemistry3252004，301-307来提取每种抗体的缔合速率常数和解离速率常数分别是k^Pkd。根据kdka比率计算表观亲和力常数Kd。在先前的一组实验中使用多浓度方法使用五个浓度的抗原，加上一个空白）验证单一浓度分析。结果在图5B-图5G和表5B中描绘。[0611]表5B:结合到人⑶33的⑶33抗体[0613]还通过使用范围是大约0.003nM至大约3nM的抗体浓度的结合曲线确定⑶33抗体2F5、6C7、吉妥珠单抗、以及林妥珠单抗结合到人原代树突细胞的半数最大有效浓度EC50。如图5H所示，CD33抗体以小于200pM的EC5q结合到人原代树突细胞。具体地，抗体2F5以138.2pM的EC5q进行结合，并且抗体6C7以166.2pM的EC5q进行结合（图5H。相比之下，商业抗体吉妥珠单抗和林妥珠单抗分别以612.5pM和845.3pM的EC5q结合到人原代树突细胞（图51。图5H和图51中的结果证明抗体2F5和6C7以比商业抗体吉妥珠单抗和林妥珠单抗低的EC5q对于人细胞例如，原代树突细胞具有提高的结合。所述结果还指示抗体2F5和6C7与商业抗CD33抗体相比在人原代骨髓细胞中具有提高的靶标接合。[0614]抗体人源化[0615]抗体人源化用于转化在不同物种中生成的抗体以通过序列和结构关系与人抗体最佳地相似，以便在人施用中防止免疫原性。来自不同物种的抗体共享允许非人抗体的特异性决定区（SDR移植到人抗体框架上的特征性序列和结构特征。这使得非人抗体保持特异性。人源化过程涉及非人抗体序列和特征包括框架区和SDR的鉴定。使用以下准则来对抗体进行人源化：1非人抗体与已知人抗体之间的框架区的相似性百分比，2非人抗体与已知人抗体之间的SDR的长度相似性，3用于生成人抗体的框架区的基因，以及4人抗体框架在人源化中的先前使用并用作治疗剂。框架区和SDR长度的相似性是重要的，因为差异可生成可改变抗体的特异性的抗体结构差异。已知用于生成人抗体的框架的特定基因对于抗体的稳定性或特异性是有益的或有害的，并且因此被选择性地使用或避免。最后，具有良好半衰期的耐受性很好的先前成功的人源化框架包括在人治疗剂中使用的那些是未来成功的人源化的可能候选物。[0616]如表6A和表6B所示，对于抗体1A8鉴定四个人源化轻链和重链可变区序列;对于抗体2E12鉴定七个轻链可变区序列和四个重链可变区序列；对于抗体6A3鉴定五个轻链可变区序列和四个重链可变区序列;对于抗体6C7鉴定一个重链可变区序列；并且对于抗体3A12鉴定一个重链可变区序列。在表6A和表6B中，粗体字母指示CDR序列。[0617]表6A:人源化轻链可变区[0624]表6B:人源化重链可变区[0632]实施例2:CD33抗体的表位作图[0633]测试⑶33抗体跨越整个人⑶33结合15或25-mer肽的能力。也通过确定其⑶33结合区将CD33抗体与参考CD33抗体进行比较。[0634]方法[0635]基于人⑶33的序列（SEQIDNO:1合成线性15-mer肽，其中具有14个残基重叠。此夕卜，基于人CD33的序列（SEQIDN0:1或小鼠CD33的序列（SEQIDN0:2合成线性25-mer肽，其中具有单一残基移位。在基于ELISA的方法中测试CD33抗体与合成的肽中的每一个的结合。在此测定中，将肽阵列与一抗溶液一起孵育在4°C下孵育过夜）。在洗涤之后，在25°C下将肽阵列与11000稀释的抗体过氧化物酶偶联物（SBA，目录号2010-05—起孵育一小时。在洗涤之后，添加过氧化物酶底物2，2连氮基-二-3-乙基苯并噻唑啉磺酸酯ABTS和2μIml的3%H2O2。一小时之后，测量显色。使用电荷耦合器件CCD照相机和图像处理系统对显色进行定量。[0636]使用标准夹心形式分组测定在ForteBioOctetRed384系统（PallForteBioCorporation,MenloPark,CA上执行抗体的表位分组Epitopebinning参见Estep等人，（2013MAbs5⑵：270-8。将对照抗靶IgG装载至AHQ传感器上并用不相关人IgGl抗体阻断该传感器上未被占据的Fc结合位点。然后，使传感器依序暴露于IOOnM祀抗原和第二抗靶抗体。使用7.0版ForteBio数据分析软件处理数据。在抗原缔合后该第二抗体的额外结合指示未被占据的表位非竞争剂），而没有结合指示表位阻断竞争剂）。[0637]可替代地，为了重建靶标分子的表位，合成环状和组合肽的文库。通过与专有亲水性聚合物制剂接枝、接着使用二环己基碳二亚胺DCC和N-羟基苯并三唑HOBt与叔丁氧基羰基-六亚甲基二胺BocHMDA反应并且随后使用三氟乙酸TFA进行Boc基团的裂解来获得氨基官能化的聚丙烯支持物。使用标准Fmoc肽合成来通过定制改良的JANUS液体处理站PerkinElmer在氨基官能化的固体支持物上合成肽。[0638]使用Pepscan的专有的支架上的化学合成肽（Pepscan’sproprietaryChemicallylinkedpeptidesonScaffolds,CLIPS技术来进行结构模拟物的合成。CLIPS技术允许将肽构成单环和双环。将CLIPS模板偶合到半胱氨酸残基。将肽中的多个半胱氨酸的侧链偶合到一个或两个CLIPS模板。例如，在碳酸氢铵20mM，pH7.8乙腈（1:3八）中溶解0.51^的11^2^1?52,6-双溴甲基吡啶）溶液。将此溶液添加到肽阵列上。CLIPS模板将结合到如存在于肽阵列的固相结合肽中的两个半胱氨酸的侧链具有3μ1孔的455孔板）。在溶液中轻轻摇动肽阵列30至60分钟，同时完全覆盖在溶液中。最后，使用过量的Η20充分洗涤肽阵列，并且在70°C下在PBSρΗ7.2中的含有1%SDS0.1巯基乙醇的破坏缓冲液中进行超声处理30分钟，接着在Η20中再进行超声处理45分钟。以相似的方式制备携带T3CLIPS2，4，6-三溴甲基吡啶）的肽，但是现在使用三个半胱氨酸。[0639]环状肽:长度17的约束肽。位置2-16是源自靶标序列的15-mer。天然Cys残基被乙酰氨基甲基ACM保护。位置1和17是通过mP2CLIPS部分连接的Cys。[0640]组合肽（不连续模拟物）：长度33的约束肽。位置2-16和位置18-32是源自具有被ACM保护的天然Cys残基的靶标序列的15-mer肽。位置1、17和33是通过T3CLIPS部分连接的Cys0[0641]在基于PEPSCAN的ELISA中测试抗体与合成的肽中的每一个的结合。将肽阵列与由实验优化浓度的测试抗体和阻断溶液构成的测试抗体溶液例如，在rosl%TWeen80中的4%马血清、5%卵清蛋白（wv—起孵育。在4°C下将肽阵列与测试抗体溶液一起孵育过夜。在使用洗涤缓冲液（1\?83,0.05%1'仰61180充分洗涤之后，在25°：下将肽阵列与11000稀释的适当的抗体过氧化物酶偶联物一起孵育一小时。在使用洗涤缓冲液洗涤之后，添加过氧化物酶底物2，2’_连氮基-二-3-乙基苯并噻唑啉磺酸酯（ABTS和2ylml的3%Η202。一小时之后，测量显色。使用电荷耦合器件CCD照相机和图像处理系统对显色进行定量。[0642]可替代地，使用质谱法来鉴定构象表位。为了在高分辨率的情况下确定抗⑶33抗体结合到的CD33蛋白上的构象表位的关键残基，将抗体抗原复合物与氘化交联剂一起孵育并且经受多酶促蛋白水解裂解。在交联肽富集之后，通过高分辨率质谱nLC-OrbitrapMS分析样品，并且使用XQuest软件分析所生成的数据。具体地，通过将等摩尔的CD33抗原和抗体溶液各自在5yl中是4μΜ混合来生成CD33ECD抗体复合物。在乙腈水（1:1，vv、TFA0.1%K200MALDI试剂盒）中将Ιμΐ所获得的混合物与由重结晶的芥子酸基质构成的1μ1基质（lOmgml混合。混合之后，将Ιμΐ的每个样品点样在MALDI板SCOUT384上。在室温下结晶之后，将板引入在MALDI质谱仪中并且立即进行分析。以一式三份重复所述分析。以预测的分子量检测代表单体抗体、抗原、和抗体以及抗原抗体复合物的峰。[0643]然后确定构象结合中的表位是否与通过蛋白水解生成的非结构化的Clq肽竞争。具体地，为了确定CD33ECD抗体复合物是否可与线性肽竞争，使用固定胃蛋白酶消化⑶33E⑶抗原。将ΙΟμΜ浓度的25μ1抗原与5μΜ固定胃蛋白酶混合，并且在室温下孵育30分钟。孵育时间之后，对样品进行离心并且移取上清液。通过线性模式的高质量MALDI质谱控制蛋白水解的完成。优化胃蛋白酶蛋白水解，以便获得l〇〇〇_3500Da范围的大量肽。接下来，将通过蛋白水解生成的5yl的抗原肽与5μ1的抗体8μΜ混合，并且在37°C下孵育6小时。抗体与⑶33抗原肽孵育之后，将5μ1的混合物与5μ1的完整⑶33抗原4μΜ混合，使得最终混合物含有2μΜ2μΜ2.5μΜ的⑶33抗体CD33抗原肽。使用具有标准氮激光器的CovalX’SΗΜ3相互作用模块并且集中在范围是〇至2000kDa的不同质量上，执行MALDIToFMS分析。对于所述分析，将以下参数应用于质谱仪:线性和阳性模式;离子源l:20kV;离子源2:17kV;脉冲离子提取:40〇118;对于腿3:增益电压：3.141^;增益电压：3.141^;加速电压：201^。为了校准仪器，应用使用胰岛素、BSA和IgG的簇集的外部校准。针对每个样品，分析3个点300个激光照射点）。所呈现的光谱对应于300个激光照射的总和。使用ComplexTracker分析软件版本2.0CovalX公司）分析MS数据。为了鉴定结合到抗体的CD33的构象表位，使用化学交联、高质量MALDI质谱和nLCOrbitrap质谱，在抗原与抗体之间的相互作用界面遵循以下程序。将5μΐ的样品抗原4μΜ浓度与5μ1的样品抗体4μΜ浓度混合，以便获得具有2μΜ2μΜ最终浓度的抗体抗原混合物。在37°C下孵育混合物180分钟。在第一步骤中，将Img的二琥珀酰胺辛二酸盐H12DSS-H12交联剂与Img的二琥珀酰胺辛二酸盐D12DSS-D12交联剂混合。将2mg所制备的与Iml的DMF混合，以便获得2mgml的DSSHl2D12溶液。将先前制备的10μ1的抗体抗原混合物与所制备的Ιμΐ的交联剂d0dl2溶液（2mgml混合。将溶液在室温下孵育180分钟，以便实现交联反应。[0644]为了有助于蛋白水解，需要使存在于蛋白质中的二硫键还原。将交联样品与20μ1的碳酸氢铵25mM，pH8.3混合。混合之后，将2.5μ1的DTT500mM添加到溶液中。然后在55°C下孵育混合物1小时。孵育之后，添加2·5μ1的碘乙酰胺（iodioacetamideIM，之后在暗室中在室温下孵育1小时。孵育之后，通过添加用于蛋白水解的120μ1缓冲液来以15稀释溶液。将145μ1的还原的烷基化的交联样品与2μ1的胰蛋白酶Sigma，Τ6567混合。在37°C下孵育蛋白水解混合物过夜。对于a-胰凝乳蛋白酶蛋白水解，蛋白水解的缓冲液是1^_HCL100mM，CaC1210mM，pH7.8。将145μ1的还原的烷基化的交联复合物与2μ1的200μΜα-胰凝乳蛋白酶混合并且在30°C下孵育过夜。对于此分析，使用与Orbitrap质谱组合的nLC。使用Xquest版本2.0和stavrox软件分析交联剂肽。然后鉴定肽和交联氨基酸。[0645]结果[0646]确定4种抗⑶33抗体的⑶33结合区。结合区在表7A中列出。图6A和图6B示出人⑶33的示意图，其指示抗CD33抗体所结合的区域。[0647]表7A:⑶33抗体结合区[0649]如表7A所指示的，抗体3A12、6C7和1A8显示排他地对于⑶33的细胞外免疫球蛋白样可变型（IgV结构域内的肽的稳健结合。[0650]如表7A所指示的，抗体3A12和6C7所识别的肽对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基48-54,并且具有以下氨基酸序列:PYYDKNS。抗体AF5所识别的肽对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基137-147,并且具有以下氨基酸序列：HVTDLTHRPKI。抗体1A8所识别的肽对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基39-51、88-98、110-120和112-122,并且具有以下氨基酸序列：VPCTFFHPIPYYD、GRFRLLGDPSR、RRDNGSYFFRM、以及DNGSYFFRMER。[0651]每种抗体所结合的肽在图6A和图6B中描绘。[0652]官能作图[0653]使用⑶33蛋白的丙氨酸扫描文库执行抗⑶33抗体2E12、2F5、6C7、以及6A3的鸟枪诱变表位作图。使编码C-末端V5表位标签的⑶33表达构建体UniprotidP20138经受高通量丙氨酸扫描诱变以生成综合突变文库（Davidson和Doranz，（2014Immunology143:13-20。将代表CD33细胞外结构域的残基8至259中的每一个主要突变为丙氨酸，而丙氨酸密码子突变为丝氨酸。总体上，生成252个CD33突变体表达构建体，进行序列确认并且排列至IJ384孔板中，每孔一个突变体。[0654]将排列在384孔微板中的⑶33突变文库克隆单个地转染到HEK-293T细胞中并且使其表达22小时。然后将细胞与在10%正常山羊血清NGSSigma-Aldrich，St.Louis，M0中稀释的抗CD33抗体孵育。在进行文库筛选之前，使用针对表达野生型CD33WT的细胞的独立的免疫荧光滴定曲线确定一抗筛选浓度，这鉴定最佳的信噪比（5:1并且确保信号在线性检测范围内。使用在10%呢5中的3.75以81111厶1613?111〇1488偶联的二抗（加〇180%WT的残基。以蓝色显示的残基是额外的二级残基，所述二级残基不满足阈值准则，但是其降低的结合活性和与关键残基的邻近性指示它们可以是抗体表位的一部分（图6C。图6D描绘唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-7的IgV结构域的晶体结构模型PDBIDINKO5Dimasi等人，2004，其将关键残基指示为红色球体，并且将二级残基指示为蓝色球体。对于抗体结合重要的氨基酸残基以及二级残基在表7B中列出。[0657]表7B:参与抗⑶33抗体结合的残基[0659]如表7B所指示的，参与抗体2E12和2F5进行的结合的关键⑶33残基对应于SEQIDN0:1的氨基酸残基Y49和K52;并且参与抗体2E12和2F5进行的结合的二级残基对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基Y50。参与抗体6C7进行的结合的关键⑶33残基对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基Y49和N53;并且参与抗体6C7进行的结合的二级残基对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基Y50和K52。参与抗体6A3进行的结合的关键⑶33残基对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基D18、N20、F21、以及P46;并且参与抗体6A3进行的结合的二级残基对应于SEQIDN0:1的氨基酸残基P19和F44。[0660]实施例3:CD33抗体诱导的体外和体内CD33的细胞表面水平的降低[0661]CD33的体外表达[0662]以下实施例的目的在于测试抗CD33和或CD33双特异性抗体是否降低单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、和或小神经胶质细胞上的CD33的细胞表面水平。[0663]评价抗⑶33抗体降低以下各项上的⑶33的细胞表面水平的能力：组织细胞淋巴瘤细胞系U937、以及人原代单核细胞、衍生自外周血单核细胞的人原代树突细胞DC、衍生自外周血单核细胞的人原代巨噬细胞、以及衍生自人单核细胞的人原代小神经胶质细胞。[0664]根据在Etemad等人，JI2012，和Ohgidani等人，ScientificReports2014中所描述的方案，通过在具有1%青霉素链霉素、1〇即111161-〇3?、1〇1^11111-〇3?、1〇1^1111|3-NGF、100ngmlCCL-2、100ngmlIL-34的不含血清的RPMI中进行培养来从外周血单核细胞制备人小神经胶质细胞。当分支形态出现时，在第7-10天收获细胞。使用RosetteSep™单核细胞分离抗体混合物（StemCellTechnologies分离来自外周人血液样品的单核细胞，并且使用GM-CSF和IL-4PeproTech分化为树突细胞并且培养5天。将细胞铺板在培养皿上含有10%胎牛血清Hyclone的RPMI培养基（Invitrogen中，并且在37°C下在5%C02中进行培养。收集未贴壁细胞，并且用于吞噬作用实验。为了生成人巨噬细胞，分离来自外周人血液样品的单核细胞，并且使用50ygmlM-CSF分化为巨噬细胞或使用lOOygmlGM-CSF和100ygmlIL-4分化为树突细胞，进行5天。[0665]在补充有IO^HycloneFBS、2mM谷氨酰胺、青霉素链霉素、以及非必需氨基酸的2ml的RPMI中，将细胞样品以200，000个细胞ml铺板在24孔板中或以500，000个细胞ml铺板在6孔皿中。以1.0ygml添加⑶33抗体或对照同种型，并且在37°C下使用5%C02孵育24小时。[0666]为了评估受体动力学，使抗体结合细胞一小时，进行洗涤并且在24小时和48小时后确定CD33的表面水平。[0667]通过FACS分析检测细胞表面受体表达。在黑暗中在冰上将细胞与抗⑶33-FITC克隆HM3-4以及对照表面标记物U937:唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-5、人单核细胞：CD14、人树突细胞:CDllc、人巨噬细胞:CDllb—起孵育30分钟。2X在FACS缓冲液PBS+2%FBS，2mMEDTA中洗涤细胞两次，并且在BDFACSCanto上执行流式细胞术。使用TreeStarFlowjo软件分析数据。使用相应荧光团的MFI值将数据计算为在抗体不存在的情况下受体表达的百分比。[0668]表8A描绘来自人细胞的CD33细胞表面水平的结果。在表8A中，“同种型”是指同种型mIgG1对照抗体。[0669]表8A:⑶33抗体降低人细胞上的⑶33的细胞表面水平[0671]表8B描绘来自人小神经胶质细胞的CD33细胞表面水平的结果。在表8B中，“同种型”是指同种型mlgGl对照抗体;并且“ND”是指未确定。[0672]表8B:⑶33抗体降低人小神经胶质细胞上的⑶33的细胞表面水平[0674]如表8A和表8B以及图16A-图16H所示，抗体IA8、2E12、2F5、3A12、6A3和6C7、以及在较小程度上的2B4能够降低多种类型的人细胞上的CD33的细胞表面水平。[0675]另外，执行体外表面⑶33下调研究，其中将⑶33抗体2F5、6C7、吉妥珠单抗、以及林妥珠单抗针对12点曲线滴定2倍（图161。对对照受体CDllc执行相似的滴定曲线（图16J。然后如在实施例1中所描述的执行半数最大有效浓度EC5q计算。如图16J所示，使用抗体中的任一种不调节对照受体⑶Ilc的细胞表面表达。所述结果显示⑶33抗体2F5以21.47pM的EC5Q降低⑶33的细胞表面表达，⑶33抗体6C7以34.81pM的EC5q降低⑶33的细胞表面表达，并且商业抗体吉妥珠单抗以107.5pM的EC5q降低CD33的细胞表面表达（图161。所述结果指示抗体2F5和6C7在所测试的大部分浓度下在降低CD33的细胞表面表达方面比商业抗体吉妥珠单抗或林妥珠单抗更强效且稳健图161。[0676]CD33的体内表达[0677]为了测试CD33抗体降低体内CD33的细胞表面水平的能力，利用人源化NSGS小鼠hu-NSGSC3Hu-NSGS小鼠（也称为NOD-scidIL2Rgnull-3GMSF是在CMV启动子的控制下表达人IL-3、人CSF2和人KITL转基因的转基因NSG小鼠。Hu-NSGS小鼠还移植有人⑶34+造血干细胞。雌性Hu-NSGS小鼠购自Jax并且移植有人细胞之后15周被利用。小鼠在第0天接受40mgKg抗CD33抗体2F5或同种型对照小鼠IgGl抗体克隆M0PC-21的腹膜内注射。在第-7天、第1天、第3天和第7天，将血液样品从小鼠抽取到肝素中并且进行处理以用于FACS分析。简而言之，首先将血液样品在冰冷的ACK裂解缓冲液中孵育5分钟以使红细胞裂解，并且然后使用冷PBS充分洗涤。重复此程序两次。然后在Fc阻断溶液的存在下在冰上在抗人CD45-Pe_Cy7、抗小鼠CD45-APC-Cy7、抗人CD3-PerCP-Cy5·5、抗人CD14-FITC、抗人CD11c-PB、抗CD33-PE、抗唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-9-APC、以及成活力染料（LifeTechnologies，Cat#L34957的存在下在FACS缓冲液PBS+2%FBS，2mMEDTA中孵育细胞，然后使用冷FACS缓冲液洗涤两次。然后获取4%PFA固定的样品。在KFACSCANTO™II细胞仪BectonDickinson上获取数据并且使用FlowJo软件进行分析。确定hCD45+、hO14+细胞群体中的CD33和抗唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素9的表达水平。[0678]如图16K和图16L所示，当与对照抗体处理和预处理水平进行比较时，使用抗⑶33抗体2F5的处理能够降低处理的hu-NSGS小鼠的外周血的细胞中的CD33的细胞表面水平。在抗体处理后的第1天⑶33表达就降低约80%并且保持很低，直至测试的最后时间点（处理之后7天为止。作为比较，与预处理水平相比，不相关的表面受体唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-9的细胞表面表达保持不变。[0679]另外，执行体内表面CD33下调研究，其中对CD33抗体2F5进行滴定以确定降低外周单核细胞上的细胞表面表达的半数最大有效浓度EC5q。对来自Taconic的NOG人源化小鼠注射40mgkg、8.0mgkg、1.6mgkg、或0·3mgkg的CD33抗体2F5的单一腹膜内注射。在以下时间点处通过FACS测量CD33和对照受体唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-9的细胞表面水平。处理前7天第-7天）、处理后第1天、以及之后的每周，直至第35天。通过FACS在外周人CD45+CD14+单核细胞上评估CD33和唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-9的细胞表面水平。使用第-7天的MFI来设定100%细胞表面表达的基线以计算降低％。如图16M所示，在所测试的所有抗体浓度下，抗体2F5随时间持续降低人源化小鼠中外周单核细胞上的体内CD33的细胞表面水平。在40mgkg、8.Omgkg和1.6mgkg的抗体浓度下观察到CD33的细胞表面水平的50%降低，但是未观察到对照受体的细胞表面水平的50%降低（图16M和图16N。[0680]实施例4:⑶33抗体与⑶33配体竞争结合到人⑶33[0681]以下实施例的目的在于测试抗CD33抗体是否识别CD33上的配体结合位点并且与在CD33受体上结合的配体竞争。[0682]为了确定哪些抗体与结合到CD33的配体竞争，根据标准方案进行红细胞RBC固体粘附测定Kelm等人，CurrentBiology，1994。红细胞被含有唾液酸的糖蛋白高度装饰，因此抗体阻断RBC结合到固定⑶33的能力可用于确定配体干扰。简而言之，将5ygml⑶33-Fc在RT下过夜涂覆在96孔Immunolon板中，然后使用PBS洗涤，使用结合缓冲液（含有％0·25BSAImMCaCl2的I3BS阻断一小时。CD33抗体（0·5ygml或1·Oygml或Fab25ygml在RT下在轻轻摇动的情况下结合一小时。去除未结合的抗体之后，将红细胞以3.OxlO6个细胞ml的浓度添加到每个孔，并且在RT下孵育一小时。然后使用PBS仔细洗涤未结合的RBC三次，并且将水添加到每个孔以用于结合的RBC的低渗裂解。将板转移至-80°C持续10分钟，接着转移至37°C持续15分钟。通过过氧化物酶活性检测结合的RBC，接着通过2N硫酸使反应停止。在450nM处检测信号。将数据计算为在抗体不存在的情况下结合到板结合的CD33-FC的RBC的百分比。[0683]配体竞争测定的结果在表9中描绘。在表9中，“同种型”是指同种型mlgGl对照抗体。[0684]表9:⑶33抗体与配体结合竞争[0686]如表9所示，抗体1A8、2E12、2F5、3A12、6A3和6C7、以及在较小程度上的2B4能够阻断RBC结合到CD33,从而指示所述抗体竞争性结合到CD33上的配体结合位点以及其抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用（S卩，阻断配体结合到CD33的能力。[0687]实施例5:⑶33抗体功能性研究的汇总。[0688]表10汇总在以上实施例3和实施例4中所描述的细胞表面表达和配体结合研究的结果。如表10所指示的，存在一类通用的CD33抗体。此类抗体降低CD33的细胞表面水平并且抑制⑶33与一种或多种⑶33配体之间的相互作用。[0689]降低⑶33的细胞表面水平并且抑制⑶33与一种或多种⑶33配体之间的相互作用的此类抗体中的抗体包括：IA8、2B4、2E12、2E12·I、2F5、2F5·I、3A12a、3A12b、6A3a、6A3b、6C7a、6C7b、以及6C7.2。[0690]表10:⑶33抗体功能性研究[0693]实施例6:结合到树突细胞上的CD33的配体抑制T细胞增殖和吞噬作用[0694]使用GM-CSF和IL-4从外周血单核细胞分化人树突细胞DC并且培养5天。收获未成熟的（悬浮液DC并且以200，000个细胞ml的密度铺板在12孔皿中。使用TNFa50ygml、IL-Ιβ50ygml、IL-6150ngml、以及前列腺素E2lygml的细胞因子混合物使DC活化24小时。使用1^1〇113、!11^-01?、〇86、以及〇83的可商业获得的抗体出08丨〇8^61«^8通过流式细胞术确定树突细胞成熟。在即将与同种异体分离的T细胞共培养之前，在不含血清的培养基中使用来自霍乱弧菌Vibriocholera的100mUml的神经氨酸酶在37°C下对活化的DC进行唾液酸酶处理2小时或不进行处理。通过添加含有血清的培养基来淬灭酶活性，将细胞沉淀并且重悬浮在完全培养基中。将唾液酸酶活化的、未处理活化的、或未活化的DC在1:10的比率下与同种异体CFSE标记的T细胞共培养。将⑶3⑶28Dynal珠粒单独添加到T细胞作为阳性对照。五天之后在BDFACSCanto上通过CFSE稀释液测量T细胞增殖。[0695]图7和图8示出树突细胞上的唾液酸在混合淋巴细胞反应MLR期间限制T细胞增殖。图8示出正常表达抑制性配体的DC诱导低水平的T细胞增殖（左图），而去除DC上的抑制性配体增加T细胞增殖右图）。[0696]如图7和图8所示，当与未处理活化的DC进行比较时，从活化的DC酶促去除唾液酸增加T细胞增殖。这些结果指示当与同种异体DC共培养时，存在于DC上的唾液酸以抑制性方式作用于T细胞来限制T细胞增殖。这些结果指示阻断T细胞或树突细胞上的CD33的抗体增强T细胞和或树突细胞功能性。使用CD3CD28Dynal珠粒作为阳性对照。此外，这些结果指示阻断唾液酸与DC或任何其他细胞或生物源的相互作用可增加T细胞功能。[0697]实施例7:炎性病状诱导骨髓细胞中的CD33表达[0698]使用GM-CSF和IL-4从外周血单核细胞分化人树突细胞DC并且培养5天。在第5天收获未成熟DC并且与来自1316、1^¥丨8肺、]\^38肿瘤上清液的无菌过滤的上清液或1〇1^1111LPS共培养。24小时之后，使用直接偶联的⑶33-PE抗体通过流式细胞术确定⑶33表达。通过在冰上与50ygml融合到人IgGl-Fc的可溶性⑶33孵育30分钟来评估唾液酸配体表达，在人Fc阻断的存在下单独使用IgGl-Fc作为阴性对照。在洗涤步骤并且在冰上与偶联到PE的抗人二抗孵育30分钟之后检测可溶性受体与细胞上的唾液酸的结合。在BDFACSCanto上执行流式细胞术分析。[0699]为了引发原代巨噬细胞，分离来自外周人血液样品的人单核细胞，并且直接使用或使用50ygmlM-CSF分化为巨噬细胞，持续5天。为了确定CD33在炎性细胞因子产生中的作用，将人巨噬细胞与各种炎性介质一起培养，并且在细胞上清液中测量细胞因子水平。为了生成人巨噬细胞，分离来自外周人血液样品的单核细胞，并且直接使用或使用50ygmlM-CSF分化为巨噬细胞或使用100ygmlGM-CSF和100ygmlIL-4分化为树突细胞，持续5天。将细胞培养5天，并且使用I3BS中的ImMEDTA使贴壁细胞脱离。以IO5个细胞孔将细胞铺板在96孔板上并且使其在37°C下粘附4h。然后使用TLR激动剂LPS马流产沙门氏菌Salmonellaabortusequi或酵母聚糖（酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae在范围是0.01-100ngmlLPS或0.Ol-lOOygml酵母聚糖）的浓度下刺激细胞。可替代地，在l〇ngml的细胞因子IL-4或50ngml的IFN-g的存在下培养巨噬细胞。在刺激之后24小时或48小时收集细胞培养上清液，并且根据制造商的方案通过使用细胞计数珠粒阵列炎症试剂盒BD测量1~?、11^-6丄-10、以及1«^-1细胞因子的水平。当使用0033拮抗性抗体或使用去除抑制性乙二醇配体的酶处理时，期待使用炎性介质LPS或酵母聚糖刺激的巨噬细胞分泌更多炎性细胞因子TNFa、IL-6、IL-10、以及MCP-1。[0700]图9A和图9B示出在暴露于肿瘤上清液之后，人树突细胞上的⑶33表达增加。图9C和图9D示出在LPS诱导的炎症期间，人树突细胞上的CD33表达增加。图9E和图9F示出LPS诱导的炎症增加唾液酸CD33配体的表达。[0701]这些结果指示炎性病状和肿瘤环境导致CD33和唾液酸配体两者的上调。所述结果还证明增加的CD33功能可免疫抑制人原代树突细胞。这些结果指示使用下调或阻断抗体抑制CD33可缓解免疫抑制骨髓来源细胞或肿瘤相关骨髓细胞并且恢复免疫功能。这些结果还指示阻断骨髓细胞上的CD33的抗体增强骨髓细胞功能性。[0702]实施例8:在用唾液酸酶处理的情况下树突细胞进行的大肠杆菌吞噬作用增加[0703]以下实施例的目的在于测试拮抗性抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体是否诱导对来自骨髓谱系的细胞诸如单核细胞、树突细胞、巨噬细胞以及小神经胶质细胞）中的以下各项的吞噬作用：凋亡神经元、神经组织碎片、非神经组织碎片、细菌、其他异物、以及致病性蛋白（诸如Αβ肽、α突触核蛋白（alphasynuclain口1'〇七6；[11、111蛋白、10?-43蛋白、月元病毒蛋白、亨廷顿蛋白）RNA、翻译产物抗原（包括由甘氨酸-丙氨酸GA、甘氨酸-脯氨酸GP、甘氨酸-精氨酸GR、脯氨酸-丙氨酸PA、或脯氨酸-精氨酸PR构成的二肽重复序列DPR肽）。双特异性抗体可以是识别CD33抗原和第二抗原的抗体，所述第二抗原包括但不限于CD3、A抑太、抗原或α突触核蛋白抗原、或Tau蛋白抗原、或TDP-43蛋白抗原、或朊病毒蛋白抗原、或亨廷顿蛋白抗原、或RNA、翻译产物抗原，包括由甘氨酸-丙氨酸GA、甘氨酸-脯氨酸GP、甘氨酸-精氨酸®R、脯氨酸-丙氨酸PA、或脯氨酸-精氨酸PR构成的二肽重复序列DPR肽）。[0704]使用RosetteSep™单核细胞分离抗体混合物（StemCellTechnologies分离来自外周人血液样品的单核细胞，并且使用GM-CSF和IL-4PeproTech分化为树突细胞并且培养5天。将细胞铺板在培养皿上含有10%胎牛血清Hyclone的RPMI培养基（Invitrogen中，并且在37°C下在5%C02中进行培养。收集未贴壁细胞，并且用于吞噬作用实验。[0705]为了实施细菌吞噬作用测定，收获树突细胞并且铺板在没有细胞因子的96孔平底板中持续2小时。根据制造商的方案重悬浮pHrodo标记的大肠杆菌生物颗粒并且使用0.2Uml或0.4Uml来自霍乱弧菌的唾液酸酶或单独使用I3BS在37°C下处理2.5小时。洗涤生物颗粒，重悬浮在RPMI中并且以20yg孔添加。将树突细胞和大肠杆菌细胞混合、沉淀并且在37°C下孵育30分钟。以ΙΟμΜ将细胞松弛素D添加到对照孔。在即将进行FACS分析之前，将细胞转移到冰并且在4°C下在FACS缓冲液中洗涤2次。在BDFACSCanto上通过流式细胞术在PE通道中检测PHrod标记的大肠杆菌吞噬作用。[0706]图10示出唾液酸酶处理增加对大肠杆菌的树突细胞介导的吞噬作用。这些结果指示例如降低CD33的细胞表面表达和或抑制一种或多种CD33配体与CD33的结合的拮抗性抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体也可用于诱导或以其他方式增加吞噬作用。[0707]图IlA和图IlB示出⑶33抗体2F5和6C7增加巨噬细胞对大肠杆菌的吞噬作用。这些结果指示下调CD33的细胞表面水平的CD33抗体可使巨噬细胞变得更具吞噬性，并且在CD33抗体的存在下增加细菌基质的摄入，但是在同种型对照的存在下并非如此。所述结果还指示由于降低的CD33表达和因此降低的CD33功能，巨噬细胞增加其吞噬功能。[0708]实施例9:CD33配体在阿尔茨海默氏病患者的大脑切片中的增加的表达[0709]使用生物素酰化的⑶33-FcRD和IgGl-Fc作为阴性对照，通过免疫组织化学检测正常患者和阿尔茨海默氏病AD患者的大脑中的唾液酸配体表达。根据制造商的说明书，使用EZ-连接磺基-NHS-生物素ThermoScientific使CD33-Fc和对照IgG-Fc蛋白生物素酰化。在振动器上执行IHC程序，过夜孵育除外。将样品在I3BS中的10%MeOH、3%H2O2中孵育15分钟，接着在具有4%血清的PBS中洗涤3次。接下来，将样品在PBS中的0.2%triton-X、4%血清、0.019%L-赖氨酸中孵育30分钟，接着在一抗中孵育一小时，然后在具有4%血清的PBS中孵育过夜。在第二天将样品放置在振动器上一小时，接着洗涤3次，然后将样品在ABC缓冲液中孵育一小时并且洗涤3次。使用VectorDAB过氧化物酶试剂盒使样品显色，洗涤3次并且脱水并且使用具有彩色照相机、200倍放大率的尼康90i显微镜成像。使用尼康ElementsBR图像分析软件执行定量。[0710]图12A和图12B示出唾液酸⑶33配体在来自AD患者的大脑切片中上调。通过单因素ANOVA显示，来自5个AD和5个非AD人大脑的数据显示⑶33唾液酸配体表达的统计学上显著的增加，P=O.0002,与对照试剂IgGl-Fc相比，p=0.1842图12B。图13A和图13B示出与正常患者（非AD相比，CD33表达在来自AD患者的大脑切片中增加。图13B中的数据来自5个AD和5个非AD人大脑。[0711]遗传数据鉴定与全长⑶33表达增加相关联的SNP增加AD风险。图12和图13中所描绘的结果指示除在一些AD大脑中的⑶33上调之外，⑶33的唾液酸配体在AD大脑中也增加。[0712]这些结果指示从细胞表面去除CD33或阻断增加的配体相互作用的抗体可缓解大脑中的小神经胶质细胞或其他骨髓细胞上的抑制性CD33依赖性信号传导并且恢复这些细胞的正常功能，对于阿尔茨海默氏病具有有益作用。[0713]实施例10:CD33和CD33配体在癌细胞中的增加的表达和CD33切除的作用[0714]体外研究[0715]通过在冰上与50ygml融合到人IgGl-FcRD的可溶性⑶33受体孵育30分钟来评估Bl6、Lewis肺和MC38结肠癌细胞上的唾液酸配体表达，在人Fc阻断的存在下单独使用IgGl-Fc作为阴性对照。洗涤步骤并且在冰上与偶联到PE的抗人二抗孵育30分钟之后检测可溶性受体与细胞上的唾液酸的结合。在BDFACSCanto上执行流式细胞术分析。[0716]图14A示出抑制性⑶33配体的表达在黑素瘤细胞、肺肿瘤细胞和结肠癌细胞中比背景增加至少20倍。不希望受到理论的束缚，在这些肿瘤细胞上鉴定到抑制性唾液酸配体表达指示癌细胞凭借其躲避免疫识别和清除的促成机制。肿瘤细胞上的唾液酸配体可通过在骨髓和淋巴样免疫细胞上表达的⑶33介导免疫抑制性相互作用（图14B-图14D。这些结果指示从细胞表面去除CD33或阻断增加的配体相互作用的抗体可缓解肿瘤对于免疫系统的抑制性作用并且增强癌症疗法。[0717]体内研究[0718]为了研究在CD33不存在或存在的情况下的体内MC38结肠癌生长，在侧腹中用在O.lmLPBS中的IxlO6个MC38结肠癌细胞皮下攻击8-10周龄的C57BL6NJ野生型小鼠（WT;n=7或CD33敲除的小鼠（K0;n=10。使用卡尺每3-4天监测肿瘤生长，直至肿瘤达到2000mm3的尺寸为止。[0719]为了确定体内⑶33的表达，对四周龄的雌性TaconicNOG小鼠进行清髓大约24小时，之后通过静脉内注射移植人胎儿肝脏CD34+细胞（100，000个细胞小鼠）。通过外周血的流式细胞术监测免疫细胞的重建。移植之后十二周，皮下植入ChampionsTumorGraft™黑素瘤模型。大约8-10周之后，当肿瘤达到150-200mm3的大小时，收获血液、脾和肿瘤细胞并且进行处理以用于在BDFACSCanto™上通过流式细胞术进行分析。执行流式细胞计数分析以确定人h⑶45+免疫系统的不同隔室中的⑶33表达。具体地，分析在⑶3+T细胞、⑶14+单核细胞巨噬细胞和其他⑶3-⑶14-人免疫细胞细胞中的表达。使用TreeStar的Flowjo软件版本10.0.6分析数据。[0720]图14B-图14D示出肿瘤细胞中体内CD33的表达。图14B示出来自外周血和脾以及来自患者来源的黑素瘤的细胞浸润物的人免疫细胞中的CD33表达，所述患者来源的黑素瘤来自缺少成熟小鼠T细胞、B细胞和NK细胞的移植有人CD45+免疫细胞和移植有患者来源的黑素瘤的免疫缺陷小鼠模型。图14C示出来自脾和细胞浸润物的CD3+T细胞、CDlIb+免疫细胞以及Grl+CDllb+免疫细胞中的CD33表达，所述细胞浸润物来自小鼠肿瘤模型的乳腺癌肿瘤EMT-6。图14D示出来自脾和细胞浸润物的⑶45-T细胞、Grl+细胞以及Grl-⑶Ilb-免疫细胞中的CD33表达，所述细胞浸润物来自小鼠肿瘤模型的乳腺癌肿瘤EMT-6。[0721]图15A-图15C示出与野生型小鼠相比，⑶33K0小鼠具有减小的皮下MC38肿瘤体积。图15D示出证明CD33K0小鼠比野生型小鼠更好地从MC38肿瘤攻击存活的Kaplan-Meier存活数据。[0722]图15E证明⑶33在来自野生型小鼠（WT的从脾和肿瘤分离的免疫细胞上表达，但是不在来自CD33K0小鼠的免疫细胞上表达，与天然小鼠相比，CD33在肿瘤攻击的WT小鼠中的脾巨噬细胞单核细胞^45沱01113+6^^%田胞工045+^1113+6^*骨髓来源的抑制细胞、以及⑶Ilc+树突细胞上上调。当与WT肿瘤攻击或天然WT小鼠相比，CD33表达还在肿瘤浸润CD45+CD1Ib+Gr细胞上增加，与脾CD45+CD1Ib+Grls细胞保持相同的水平，在肿瘤浸润⑶IIc+细胞上高度上调，并且在NK细胞上稍微上调。[0723]这些结果证明⑶33的抑制实现皮下肿瘤的限制生长或限制。所述结果还指示⑶33功能抑制了限制肿瘤生长并且使免疫系统经历肿瘤清除的有益免疫应答。这些结果还指示CD33阻断抗体可部分地通过降低肿瘤浸润免疫抑制细胞的数量、改变其功能、和或增加浸润细胞毒性T细胞、天然杀伤细胞的数量、或增加其他免疫肿瘤清除机制来减少实体瘤生长。CD33抗体可通过减少⑶33表达或阻断抑制性唾液酸配体相互作用来做到这一点。如本文所证明的，在肿瘤攻击之后，⑶33K0小鼠比WT小鼠更好地存活，从而指示⑶33阻断抗体在治疗癌症方面可具有益作用。本文中还证明，在肿瘤攻击的小鼠中，与脾CD33+细胞相比，月中瘤浸润骨髓细胞使⑶33上调，并且与天然小鼠相比，上调甚至更多。[0724]抗⑶33抗体治疗的体内作用[0725]为了测试⑶33阻断抗体的有益作用，对野生型WT雌性BALBc小鼠注射同种基因肿瘤，诸如MC38结肠癌、B16黑素瘤、或EMT-6鼠乳腺癌。以0.ImL小鼠的体积在侧腹中对δη周龄的小鼠皮下注射在0%基质胶中的5xl06个EMT-6肿瘤细胞。基于第1天体重将小鼠随机分到治疗组中。每隔一周测量体重，直至实验终止为止。在第1、4、8、15和22天对接受肿瘤的小鼠单独注射20-100mgkg的⑶33或对照抗体或与抗CTLA49H10抗体或抗PDl抗体组合。然后使用卡尺测量每隔一周测量肿瘤大小，直至终止为止。监测不利反应或死亡。对具有〉30%体重损失或连续三次测量肿瘤大小25%体重损失的任何个体动物进行安乐死。实验的终点是2000mm3的肿瘤体积或45天，以先到者为准。可对应答者跟踪更久。当达到终点时，对动物进行安乐死。监测抗体对于肿瘤体积和存活的作用。[0726]抗⑶33和抗Η-1抗体组合治疗的体内作用[0727]将CTG-0202患者来源的黑素瘤肿瘤首先在预研究小鼠中进行传代，之后植入到人源化小鼠。当肿瘤在繁殖小鼠（Stockmice中达到1-1.5cm3的体积时，收获肿瘤以用于再植入到预研究小鼠中。对预研究小鼠在左侧腹上单侧地植入肿瘤片段。在第6代时使用CTG-0202黑素瘤肿瘤。[0728]使用胎儿肝脏来源的CD34+造血细胞（ChampionTumorGraft™黑素瘤模型CTG-0202使免疫受损的雌性小鼠（TaconicN0G人源化。在68-74°F20-23°C和30-70%湿度下，将小鼠关在单个HEPA通风笼（Imiocage®IVC，InnoviveUSA中的富集辐照的纸捻的18”的玉米棒衬底（Sheperd上，采用12小时白天-夜晚循环。对小鼠随意饲喂水反渗透，2ppmCl2，并且饲喂由19%蛋白质、9%脂肪和4%纤维组成的辐照的测试啮齿动物饮食Teklad2919。对四十八只人源化小鼠进行植入，并且针对每个实验在植入之后七至十天开始记录预研究肿瘤体积。当肿瘤达到大约80-200mm3的体积时，根据肿瘤体积将小鼠匹配到待用于在第〇天开始给药的治疗组或对照组中。对治疗组单独施用抗PD-I抗体ICeytmd.a®派姆单抗pembrolizumab或与抗⑶33抗体2F5组合施用。对对照组施用抗ro-Ι抗体和同种型对照抗体或低亲和力非配体阻断抗CD33抗体的组合。然后在第0天开始给药。表11和图15F描绘给药时程、给药量和施用途径。[0729]表11:抗体给药时程[0732]在表11中，“N”是指在每个治疗组中重复的数量；“CTRmAb”是指同种型对照抗体或低亲和力非配体阻断抗CD33抗体；“2F5mAb”是指抗CD33抗体2F5;“R0A”是指施用途径；“IP”是指腹膜内；“q5dx6”是指每五天总计六次施用的给药时程。[0733]在第0天开始，每天观察小鼠并且使用电子秤每周两次进行称重。通过数字卡尺每周两次测量肿瘤尺寸，并且针对每个组记录数据，包括个体和平均估计的肿瘤体积平均TV土SEM。使用公式⑴计算肿瘤体积:TV=宽度2X长度xO.52。在研究完成时，通过公式⑵使用初始⑴和最终⑴肿瘤测量值计算肿瘤生长抑制百分比（％TGI值并且针对每个治疗组⑺相对于对照⑹进行报告：％TGI=I-Tf-TiACf-Ci。[0734]对于连续两次测量报告肿瘤体积1500mm3的终点要求，在第25、32和39天取下小鼠以用于最终研究终止，无论治疗组如何。[0M3]在研究终止时，将收获的肿瘤在冰包装上的培养基中过夜运输并且在第二天进行处理。通过心脏刺穿收集全血样品并且在肝素钠中运输，并且在递送后在第二天进行处理。使用胶原酶在37°C下对肿瘤样品进行处理30min。通过细胞滤器对样品进行解离并且重悬浮在I3BS中的2%FBS中。使用ACK裂解缓冲液对全血样品中的红血细胞进行裂解，并且然后将细胞在I3BS中的2%FBS中洗涤两次。使用血细胞计数器对细胞进行计数，并且在冰上使用荧光染料偶联的抗体对一百万个细胞进行染色30min，然后使用PBS中的2%FBS洗涤。使用PBS中的4%多聚甲醛固定细胞。在FACSCantoBDBiosciences上分析所有的染色细胞，并且使用Flowjo软件TreeStar分析数据。为了评估受体下调，使用小鼠（mCD45、人hCD45、人⑹CD3、以及人⑹CD14抗体对CD14+群体进行设门。为了鉴定肿瘤浸润免疫细胞，根据标准程序使用h⑶45、h⑶3、h⑶4、h⑶8、以及h⑶14抗体对群体进行设门。[0754]如图15S和图15T所示，单独使用CD33抗体2F5的治疗抑制移植有人免疫干细胞的小鼠中的患者来源的黑素瘤肿瘤模型中的体内肿瘤生长。通过使用RImO函数的多元线性回归针对供体、在时间0处的肿瘤大小和小鼠重量校正在每个时间点处的肿瘤体积。在每个时间点处，通过使用Rlm函数评估统计学显著性。[0M5]如图15U所示，单独使用CD33抗体2F5的治疗减慢移植有人免疫干细胞的小鼠中的患者来源的黑素瘤肿瘤模型中的体内肿瘤生长速率。使用Rtumgr包装从第0天至第11天评估肿瘤指数生长，从而校正小鼠重量。通过使用RImO函数的多元线性回归评估统计学显著性，从而校正供体、动物重量和肿瘤初始体积。[0756]如图15V、图15W和图15X所示，单独使用CD33抗体2F5的治疗降低肿瘤生长速率，与存在于移植有人免疫干细胞和患者来源的异种移植物CTG-0202黑素瘤肿瘤的小鼠肿瘤模型中CD33单核苷酸多态性SNPCD33等位基因rs3865444AA、AC或CC无关。rs3865444CC等位基因是阿尔茨海默氏病的风险等位基因，而rs3865444AA等位基因是阿尔茨海默氏病的保护性等位基因。[0757]如图15Y所示，单独使用CD33抗体2F5的治疗降低来自小鼠肿瘤模型的外周血hCD45+CD14+骨髓细胞中的CD33的细胞表面水平，所述小鼠肿瘤模型移植有人免疫干细胞和患者来源的异种移植物CTG-0202黑素瘤肿瘤。通过使用RImO函数的多元线性回归评估统计学显著性。[0758]如图15Z、图15AA和图15BB所示，单独使用CD33抗体2F5的治疗降低来自小鼠肿瘤模型的外周血hCD45+CD14+骨髓细胞中的CD33的细胞表面水平，所述小鼠肿瘤模型移植有人免疫干细胞和患者来源的异种移植物CTG-0202黑素瘤肿瘤，其中单核苷酸多态性（SNPCD33等位基因rs3865444AA、AC或CC存在于小鼠中。CD33细胞表面水平的降低在是阿尔茨海默氏病风险等位基因rs3865444CC的携带者的小鼠中是统计学上显著的（图15Z和图15AA，但是在是阿尔茨海默氏病保护性等位基因rs3865444AA的携带者的小鼠中不是统计学上显著的（图15BB。[0M9]如图15CCC所示，单独使用CD33抗体2F5的治疗降低来自移植有人免疫干细胞和患者来源的异种移植物CTG-0202黑素瘤肿瘤的小鼠肿瘤模型的肿瘤浸润hCD45+⑶14+骨髓细胞中的CD33的细胞表面水平。通过使用Rlm函数的多元线性回归评估统计学显著性。[0760]如图15DD、图15EE和图15FF所示，单独使用⑶33抗体2F5的治疗降低来自移植有人免疫干细胞和患者来源的异种移植物CTG-0202黑素瘤肿瘤的小鼠肿瘤模型的肿瘤浸润h⑶45+CD14+骨髓细胞中的⑶33的细胞表面水平，其中单核苷酸多态性SNP⑶33等位基因rs3865444AA、AC或CC存在于小鼠中。CD33细胞表面水平的降低在是阿尔茨海默氏病风险等位基因rs3865444CC的携带者的小鼠中是统计学上显著的（图15DD和图15EE，但是在是阿尔茨海默氏病保护性等位基因rs3865444AA的携带者的小鼠中不是统计学上显著的图15FF〇[0761]如图15GG所示，单独使用CD33抗体2F5的治疗减少移植有人免疫干细胞和患者来源的异种移植物CTG-0202黑素瘤肿瘤的小鼠肿瘤模型中的肿瘤浸润h⑶45+CD14+骨髓细胞的数量。通过使用RIm函数的多元线性回归评估统计学显著性。[0762]如图15HH、图1511和图15JJ所示，单独使用⑶33抗体2F5的治疗减少移植有人免疫干细胞和患者来源的异种移植物CTG-0202黑素瘤肿瘤的小鼠肿瘤模型中的肿瘤浸润hCD45+CD14+骨髓细胞的数量，其中单核苷酸多态性SNPCD33等位基因rs3865444AA、AC或CC存在于小鼠中。肿瘤浸润hCD45+CD14+骨髓细胞的降低在是阿尔茨海默氏病风险等位基因rs3865444CC和阿尔茨海默氏病保护性等位基因rs3865444AA的携带者的小鼠中是统计学上显著的（图15HH、图1511和图15JJ。[0763]如图15KK所示，单独使用CD33抗体2F5的治疗增加移植有人免疫干细胞和患者来源的异种移植物CTG-0202黑素瘤肿瘤的小鼠肿瘤模型中的肿瘤浸润hCD45+⑶3+T骨髓细胞的数量。通过使用RIm函数的多元线性回归评估统计学显著性。[0764]如图15LL、图15MM和图15NN所示，单独使用CD33抗体2F5的治疗增加肿瘤浸润hCD45+CD3+T细胞的数量，与存在于移植有人免疫干细胞和患者来源的异种移植物CTG-0202黑素瘤肿瘤的小鼠肿瘤模型中的CD33单核苷酸多态性（SNPCD33等位基因rs3865444AA、AC或CC无关。rs3865444CC等位基因是阿尔茨海默氏病的风险等位基因，而rs3865444AA等位基因是阿尔茨海默氏病的保护性等位基因。[0765]如图1500所示，单独使用CD33抗体2F5的治疗减少移植有人免疫干细胞和患者来源的异种移植物CTG-0202黑素瘤肿瘤的小鼠肿瘤模型中的外周血hCD45+⑶14+骨髓细胞的数量。通过使用RIm函数的多元线性回归评估统计学显著性。[0766]如图15PP、图15QQ和图15RR所示，单独使用⑶33抗体2F5的治疗减少外周血hCD45+CD14+骨髓细胞的数量，与存在于移植有人免疫干细胞和患者来源的异种移植物CTG-0202黑素瘤肿瘤的小鼠肿瘤模型中的⑶33单核苷酸多态性SNP⑶33等位基因rs3865444AA、AC或CC无关。rs3865444CC等位基因是阿尔茨海默氏病的风险等位基因，而rs3865444AA等位基因是阿尔茨海默氏病的保护性等位基因。[0767]抗体治疗的体内作用的结论[0768]图15F-图15RR中所描绘的结果证明抗⑶33抗体2F5作为用于治疗人癌症例如，黑素瘤）的治疗剂的临床前效力。2F5抗体是强效的受体下调剂和配体阻断抗体。当作为单一疗法疗法（图15R-图15RR或与抗Η-1抗体组合（图15F-图15Q施用的2F抗体显著降低黑素瘤肿瘤中的肿瘤体积和肿瘤生长速率。值得注意的是，单独的同种型对照或较低亲和力非配体阻断CD33抗体或与抗ro-i抗体组合的施用不抑制肿瘤生长。[0769]使用CD33抗体单一疗法或与抗PD-I抗体组合治疗的肿瘤浸润免疫细胞群体的分析证明肿瘤浸润⑶3+T细胞的数量的显著增加（图15P和图15kk-图15NN。骨髓细胞群体通过⑶33抗体单一疗法或与抗PD-I抗体组合来减少（图150、图15Q、图15GG-图15JJ、以及图1500-图15RR。观察到肿瘤浸润CD14+骨髓细胞和外周血iCD14+骨髓细胞两者的显著降低。[0770]值得注意的是，肿瘤和对肿瘤做出应答的免疫系统两者在此小鼠研究中均是人。小鼠的免疫系统使用一种方法来人源化，通过所述方法，小鼠免疫系统在遗传上被切除并且使用使骨髓和淋巴样免疫细胞再生并发展的人供体CD34+造血干细胞和祖细胞替换。所述肿瘤是患者来源的黑素瘤。所述结果证明人特异性抗CD33抗体2F5展示出靶标特异性接合并且降低人CD33的细胞表面水平。CD33的细胞表面水平的下调在外周和肿瘤CD14+骨髓细胞上是显著的。因此，对于肿瘤体积、肿瘤生长速率、CD3+T细胞的肿瘤浸润的增加数量、以及CD14+细胞的减少数量的任何作用是人骨髓免疫细胞上的CD33的2F5抗体介导的下调的结果。[0771]另外，所述结果将用于使肿瘤植入小鼠的免疫系统再生的人供体的CD33基因型考虑在内。在评估已证明是阿尔茨海默氏病风险等位基因的⑶33SNPrs3865444时，具有保护性rs3865444AA等位基因的供体显示与是rs3865444C风险等位基因的携带者的供体相比更低的CD33细胞表面水平和降低的肿瘤生长速率。此外，使用CD33抗体2F5的治疗模拟CD33基因型的表型，因为2F5抗体在两个研究中均降低CD14+骨髓细胞上的细胞表面CD33水平并且降低肿瘤生长速率。[0772]实施例11:由拮抗性和或双特异性CD33抗体引起的骨髓细胞中的抗炎细胞因子IL-10的减少[0773]此实施例的目的在于测试骨髓衍生的骨髓细胞在使用拮抗性抗CD33和或CD33双特异性抗体处理并且通过与凋亡细胞共培养或通过相似的刺激使用l〇〇ngmlLPSSigma进行刺激之后是否显示抗炎细胞因子IL-IO和其他抗炎介质的降低。[0774]如前所述执行人骨髓前体细胞的分离。5天之后改变培养基并且对细胞培养另外的10-11天。24h之后收集上清液并且根据制造商的说明书RDSystems通过IL-10ELISA确定从细胞释放的IL-IO和其他抗炎细胞因子的水平JEM2005，201;647-657;以及PLoSMedicine2004，4|lssue4|el24〇[0775]实施例12:通过拮抗性和或双特异性CD33抗体进行的来自骨髓谱系的细胞中的吞噬作用的诱导[0776]此实施例的目的在于测试拮抗性抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体是否诱导对来自骨髓谱系的细胞诸如单核细胞、树突细胞、巨噬细胞以及小神经胶质细胞）中的以下各项的吞噬作用：凋亡神经元、神经组织碎片、非神经组织碎片、细菌、其他异物、以及致病性蛋白（诸如Αβ妝、α关触核蛋白、Tau蛋白、TDP-43蛋白、H兀病毒蛋白、予廷顿蛋白）RNA、翻译产物抗原包括由甘氨酸-丙氨酸GA、甘氨酸-脯氨酸GP、甘氨酸-精氨酸GR、脯氨酸-丙氨酸PA、或脯氨酸-精氨酸PR构成的二肽重复序列DPR肽）。双特异性抗体可以是识别CD33抗原和第二抗原的抗体，所述第二抗原包括但不限于Αβ肽、抗原或α突触核蛋白抗原、或Tau蛋白抗原、或TDP-43蛋白抗原、或朊病毒蛋白抗原、或亨廷顿蛋白抗原、或RNA、翻译产物抗原（包括由甘氨酸-丙氨酸®Α、甘氨酸-脯氨酸GP、甘氨酸-精氨酸GR、脯氨酸-丙氨酸PA、或脯氨酸-精氨酸PR构成的二肽重复序列DPR肽）。[0777]使用RosetteSep单核细胞分离抗体混合物StemCellTechnologies分离来自外周人血液样品的单核细胞，并且使用50ygmlM-CSFPeproTech分化为树突细胞，持续5天。将细胞铺板在培养皿上含有10%胎牛血清Hyclone的RPMI培养基（Invitrogen中，并且在37°C下在5%C02中进行培养。通过轻轻刮擦收集贴壁细胞，并且用于吞噬作用实验。[0778]根据在Etemad等人，JI2012，和Ohgidani等人，ScientificReports2014中所描述的方案，通过在具有1%青霉素链霉素、1〇即111161-〇3?、1〇1^11111-〇3?、1〇1^1111|3-NGF、100ngmlCCL-2、100ngmlIL-34的不含血清的RPMI中进行培养来从外周血单核细胞制备人小神经胶质细胞。当分支形态出现时，在第7-10天收获细胞。[0779]为了实施吞噬作用测定，将小神经胶质细胞、巨噬细胞或树突细胞与凋亡神经元、神经组织碎片、非神经组织碎片、细菌、其他异物、以及致病性蛋白一起培养。将神经元培养5-10天，然后以30nM的最终浓度添加冈田酸3h以诱导细胞凋亡。使用CelITrackerCM-DiI膜染料分子探针标记神经元细胞膜。在孵育之后，洗涤凋亡神经元或吞噬作用的其他靶标两次并且以1:20的效应物靶标比率下添加到转导的小神经胶质细胞培养物。在添加凋亡神经元之后Ih和24h处，在共焦荧光显微镜Leica下计数具有吞噬神经元细胞膜的小神经胶质细胞的数量。在60放大率下在不同区域中对凋亡细胞进行计数。通过流式细胞术确认吞噬量。此外，在添加凋亡神经元之后24h、48h、或72h，收集细胞并且用于细胞因子的RT-PCR0[0780]为了实施微球珠粒或细菌吞噬作用测定，使用抗CD33激动性抗体处理小神经胶质细胞、巨噬细胞或树突细胞。收获细胞并且铺板在没有细胞因子的96孔平底板中2小时。根据制造商的方案重悬浮pHrodo标记的大肠杆菌生物颗粒并且使用0.2Uml或0.4Uml来自霍乱弧菌的唾液酸酶或单独使用PBS在37C下处理2.5小时。洗涤生物颗粒，重悬浮在RPMI中并且以20yg孔添加。将细胞和大肠杆菌混合、铺板并且在37C下孵育30分钟。以ΙΟμΜ将细胞松弛素D添加到对照孔。在即将进行FACS分析之前，将细胞转移到冰并且在4C下在FACS缓冲液中洗涤2次。在BDFACSCanto上通过流式细胞术在PE通道中检测pHrodo标记的大肠杆菌吞噬作用。[0781]24h之后，添加1.ΟΟμπι的红色荧光微球珠粒（Fluoresbrite多色红色微球；Polysciences公司）持续Ih。通过焚光显微镜分析通过小神经胶质细胞进行的对微球珠粒的吞噬作用。此外，从培养板收集小神经胶质细胞并且通过流式细胞术分析。确定具有吞噬珠粒的小神经胶质细胞的百分比。因为吞噬作用在实验之间不同，也确定吞噬作用的相对变化。将数据示为与激动性抗体和对照抗体一起培养的小神经胶质细胞之间的吞噬作用的相对变化。[0782]为了实施用于炎性基因转录物的分析的RT-PCR，使用⑶33载体或GFPl对照载体转导小神经胶质细胞。然后在皿上培养细胞并且使用抗⑶33激动性抗体处理。在24h、48h和72h之后，使用RNeasy微试剂盒QIAGEN从小神经胶质细胞分离RNA。还从用sh-CD33RNA、sh-对照1?嫩、¥〇33、6??2、11^04?12-6??、以及6??1载体转导的小神经胶质细胞收集8嫩并且将RNA与凋亡神经元共培养48h。[0783]然后执行RNA的逆转录。在ABIPrism5700序列检测系统PerkinElmer上执行通过SYBRGreen进行的定量RT-PCR。使用GAPDH的扩增用于样品归一化。扩增方案遵循GeneAmp5700序列检测系统软件版本1.3。对于GAPDH、TNF-a、IL-I、N0S2、以及TGF-β转录物的检测，以200nM的最终浓度使用以下正向和反向引物：[0784]GAPDH正向引物：5，-CTCCACTCACGGCAAATTCAA-3,（SEQIDN0:218，和GAPDH反向引物：5’-GATGACAAGCTTCCCATTCTCG-3’（SEQIDN0:219;[0785]TNF-a正向引物：5’-CCGTCAGCCGATTTGCTATCT-3’（SEQIDN0:220，和TNF-a反向引物：5’-ACGGCAGAGAGGAGGTTGACTT-3’（SEQIDN0:221;[0786]IL-la正向引物：5’-ACAA-CAAAAAAGCCTCGTGCTG-3’（SEQIDN0:222，和IL-la反向引物：5’-CCATTGAGGTGGAGAGCTTTCA-3’（SEQIDN0:223;[0787]N0S2正向引物：5，-GGCAAACCCAAGGTCTACGTTC-3，（SEQIDN0224，N0S2反向引*:5’-TACCTCATTGGCCAGCTGCTT-3’（SEQIDN0:225;W[0788]TGF-m正向引物：5’-AGGACCTGGGTTGGAAGTGG-3’（SEQIDN0:226，和TGF-m反向引物：5’-AGTTGGCATGGTAGCCCTTG-3’（SEQIDN0:227。[0789]为了实施骨髓吞噬作用测定，在20mM下将HiLyteFluor™647Anaspec-Αβ-I-40重悬浮在TrisEDTApH8.2中，并且然后在37°C下在黑暗中孵育3天以促进聚集。在低血清补充有胰岛素的〇.5%FBS、LPS50ngml、IFNc100个单位ml、以及抗CD33拮抗性抗体中预处理小神经胶质细胞、巨噬细胞或树突细胞24h，之后添加聚集的荧光标记的ειβ肽。添加IOOnM聚集的HiLyteFluor™647-Ab-1-40ASNNEURO201023:157-170后5h通过流式细胞计数分析确定骨髓吞噬作用和CD33的表面表达。以相似的方式实施对其他致病性蛋白的吞噬作用。[0790]实施例13:通过拮抗性CD33抗体和或双特异性抗体进行的SYK和或ERK活化的诱导[0791]此实施例的目的在于测试激动性抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体是否诱导Syk和ERK活化。[0792]将小神经胶质细胞、巨噬细胞或树突细胞暴露于拮抗性抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体lh。在刺激之后，在还原样品缓冲液中使细胞裂解以用于蛋白质印迹分析。通过蛋白质印迹分析JEM2005，201，647-657通过分别使用抗磷酸化Syk或ERK抗体和抗Syk或ERK抗体的免疫检测（均根据细胞信号传导技术确定ERK的磷酸化和Syk和或ERK的总量。[0793]实施例14:CD33抗体和或双特异性抗体诱导Syk磷酸化[0794]脾酪氨酸激酶Syk是通过使若干底物磷酸化、从而有助于形成引起细胞活化和炎性过程的信号传导复合物来在CD33下游起作用的细胞内信号传导分子。通过培养人巨噬细胞和人原代树突细胞并且测量细胞提取物中的Syk蛋白的磷酸化状态确定激动剂CD33抗体诱导Syk活化的能力。[0795]使人原代树突细胞在1%血清RPMI中饥饿4小时，并且然后使用I3BS-EDTA从组织培养皿去除，使用PBS洗涤，并且计数。在冰上使用全长激动剂CD33抗体或对照抗体涂覆细胞15分钟。在使用冷PBS洗涤之后，在山羊抗人IgG的存在下在37°C下孵育细胞，持续指示的时间段。在刺激之后，使用裂解缓冲液（l%vvNP-40%、50MmTriS-HCUpH8.0、150mMNaCl、ImMEDTA、1.5mMMgCl2、10%甘油，加上蛋白酶和磷酸酶抑制剂使细胞裂解，接着在4°C下以16，OOOg离心IOmin以去除不可溶物质。然后使用抗SykAb针对人DC的4D10，SantaCruzBiotechnology使裂解物免疫沉淀。通过SDS-PAGE分级沉淀的蛋白质，转移到PVDF膜并且使用抗磷酸酪氨酸Ab4G10，Millip〇re进行探测。为了确认所有基质被充分免疫沉淀，使用抗SykNovusBiological，针对人DC对免疫印迹进行再探测。使用增强的化学发光（ECL系统（GEhealthcare执行可视化，如所描述的（例如，Peng等人，（2010SciSignal.,3122：ra38〇[0796]实施例15:通过拮抗性CD33抗体和或双特异性抗体进行的小神经胶质细胞、巨噬细胞、T细胞、以及树突细胞中的CCR7的诱导和向CCL19和CCL21的迀移[0797]此实施例的目的在于测试抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体是否诱导小神经胶质细胞、巨噬细胞和树突细胞中的CCR7和向CCL19和CCL21的迀移。[0798]将小神经胶质细胞、巨噬细胞或树突细胞与激动性抗⑶33抗体和或⑶33DAP12双特异性抗体或与对照抗体一起培养。在72h之后收集细胞，使用CCR7特异性抗体进行免疫标记，并且通过流式细胞术进行分析。[0799]为了确定增加的CCR7表达的任何功能性结果，执行趋化性测定。使用拮抗性抗⑶33抗体和或⑶33DAP12双特异性抗体通过⑶33刺激小神经胶质细胞、巨噬细胞或树突细胞，并且放置在两腔室系统中。对向趋化因子配体CCL19和CCL21迀移的小神经胶质细胞的数量进行定量JEM2005，201，647-657。[0800]对于趋化性测定，将小神经胶质细胞、巨噬细胞或树突细胞暴露于拮抗性抗CD33抗体或⑶33双特异性抗体并且使用lygmlLPS处理。将小神经胶质细胞、巨噬细胞或树突细胞转移到在下部腔室中含有具有l〇〇ngmlCCL19或CCL21均来自PeproTech的450μ1培养基的跨孔系统3μπι孔径过滤器;Millipore的上部腔室中。在Ih孵育时间段之后，通过显微镜JEM2005，201，647-657在三个独立的区域中计数迀移到下部腔室的小神经胶质细胞、巨噬细胞或树突细胞的数量。[0801]实施例16:通过拮抗性CD33抗体和或双特异性抗体进行的小神经胶质细胞、巨噬细胞、T细胞、以及树突细胞中的F-肌动蛋白的诱导[0802]此实施例的目的在于测试拮抗性抗CD33抗体或CD33双特异性抗体是否诱导小神经胶质细胞、巨噬细胞和树突细胞中的F-肌动蛋白。[0803]将用CD33转导或表达CD33的感兴趣的小神经胶质细胞、巨噬细胞或树突细胞和其他细胞添加到培养板并且然后暴露于拮抗性抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体或对照抗体。在Ih之后，固定细胞，阻断细胞并且然后使用AlexaFluor546偶联的鬼笔环肽分子探针染色，并且使用荧光染料标记F-肌动蛋白。通过具有40倍物镜的共焦激光扫描显微镜Leica采集图像。（JEM2005，201，647-657。[0804]实施例17:通过拮抗性CD33抗体和或双特异性抗体进行的破骨细胞产生的诱导和破骨细胞生成速率的增加[0805]此实施例的目的在于测试拮抗性抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体是否诱导破骨细胞产生并且增加破骨细胞生成的速率。[0806]将人单核细胞衍生的单核细胞巨噬细胞维持在补充有10%FBSAtlanticBiologics，Atlanta，GA，USA和青霉素-链霉素-谷氨酰胺Mediatech的RPMI-1640培养基Mediatech或另一种适当的培养基中。将细胞以3000个细胞孔接种在96孔板中的补充有10%FBS、青霉素-链霉素-谷氨酰胺、50ngmlRANKL、以及20ngmlM-CSF的α-ΜΕΜ培养基中。将培养基每3天改变一次，暴露于抗CD33拮抗性抗体，并且通过光学显微镜计数多核至少三核TRACP+破骨细胞的数量并且进行评分。为了确定复杂性和大小，通过核的数量10个或3-10个核对破骨细胞进行计数。还通过使用ImageJ软件NIH测量破骨细胞的表面积。此外，确定破骨细胞基因的表达水平。使用TRIzol试剂（Invitrogen在不同时间点处从破骨细胞生成培养物提取总RNA。在使用SuperscriptIII试剂盒Invitrogen合成第一链cDNA之后，针对Nfatcl、Acp5、Ctsk、Calcr、以及Ccndl执行实时定量PCR反应。计算革EfemRNA表达的相对定量并且归一化到亲环蛋白的表达，并且表示为革巴标基因的mRNA亲环蛋白的mRNA3X106〇J.OFBONEANDMINERALRESEARCH2006,21,237-245；JImmunol2012；188:2612-2621。[0807]可替代地，将巨噬细胞以一式三份孔接种到板上，并且使用RANKL、M_CSF处理并且使用抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体或同种型匹配的对照单克隆抗体处理。将培养基每3天改变一次，直至可见大的多核细胞。在培养物中3天至5天之后，使用在PBS中的3.7%甲醛固定细胞lOmin。然后将板在PBS中洗涤两次，在50%丙酮和50%乙醇的溶液中孵育30s并且使用I3BS洗涤。使用来自Sigma的试剂盒产品435针对抗酒石酸酸性磷酸酶TRAP对细胞进行染色。然后通过光学显微镜对多核（多于两个核TRAP阳性细胞进行计数，如所描述的（例如，Peng等人，（2010SciSignal.，3122:ra38〇[0808]实施例18:完整动物中针对EAE和双环己酮草酰二腙的体内保护[0809]在尾基部中两侧对成年7-9周龄的雌性C57BL6小鼠（从CharlesRiverLaboratories获得）注射含有IOOyg的髓鞘少突胶质细胞糖蛋白肽35-55氨基酸MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGKSEQIDN0:215;Seqlab和Img的在不完全弗氏佐剂（Difco中的结核分枝杆菌H37RaDifco的200μ1的接种物。在免疫之后在第0天和在第2天注射百日咳毒素200ng;ListBio-logicalLaboratories。如下对临床体征进行评分:0,没有临床体征；1，完全无力的尾巴；2,完全无力的尾巴和异常步态;3,一个后肢轻度瘫痪;4,完全后肢轻度瘫痪；以及5,前肢和后肢麻痹或垂死。仅使用在第14天具有疾病发作的小鼠（1或更大的临床评分用于实验。在第一临床症状的当天或在任何其他所需的时间处对患有EAE疾病的小鼠腹膜内或静脉内注射激动性抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体（PLoSMed20074⑷：el24。[0810]对年轻或老年的野生型WT小鼠饲喂含有0.2%双环己酮草酰二腙CPZ粉末状草酸双亚环己基酰肼）（Sigma-Aldrich的标准饮食Harlan持续4周、6周或12周。对于组织学和免疫组织化学分析，在对小鼠灌注4%多聚甲醛PFA之后去除大脑，固定在4%PFA中24h，接着浸没在30%蔗糖中24-28h。为了评价髓鞘完整性和损害以及细胞增殖，使用抗MBP1:100;Abcam，ab7349、抗dMBP1:2000;Millipore，ab5864、抗MPP1:100;Invitrogen，51-2700、抗SMI-31l:1000;Covance，smi-31R、抗Iball:600;Wako,019-19741、抗BrdU1:250;Abcam，abl893、抗GFAP1:200;Invitrogen，13-0300、抗iN0Sl:100;80?11^1^即611，610329、抗^^1:400，来自0『.6.01^6^〇仙）以及抗腿：111:100;BDPharmingen，553549对炎症切片或小鼠大脑进行染色。对于抗体的行为作用，使用透明聚苯乙烯外壳和计算机化光束器械针对运动活性分析小鼠。分析一般活性变量总走动、垂直直立活动），连同情绪指数，包括花费的时间、行走的距离和进入。执行一套感觉运动测试以评估平衡（突出部和平台）、强度倒置的挡板）、协调杆和倾斜的挡板）以及动作的启动行走启动）。使用旋转杆方案研究运动协调和平衡（Cantoni等人，ActaNeuropathol20151293:429-47。_1]实施例19:建立的创伤性脑损伤的动物模型中拮抗性CD33抗体和或CD33双特异性抗体的治疗性用途的表征[0812]在建立的创伤性脑损伤的动物模型中测试拮抗性抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体的治疗性用途Tanaka，Y等人（2013Neuroscience23149-60。可使用常规小鼠或在细菌人工染色体下或在骨髓启动子下表达人CD33基因的小鼠。例如，使用诱导小神经胶质细胞和星形胶质细胞的活化的创伤性脑损伤的模型。使用八周或九周龄的雄性C57BL6JWT小鼠（购自CharlesRiverLaboratories或JacksonLaboratories。通过腹膜内施用溶解在无菌盐水中的盐酸甲苯噻嗪8mgkg和水合氯醛300mgkg使小鼠麻醉，并且随后放置在立体定位装置Narishige，Tokyo，Japan中。在头皮中制作切口并且使脑烦暴露。从卢员骨清理骨膜，使用牙钻在右大脑半球上钻孔，并且使用针尖去除硬脑膜。使用具有〇.5mm外径的不锈钢插管在右半球中制作纵向刺伤。将插管定位在中线侧面1.3mm和前囟后部Imm处，并且引入到大脑中直至尖端达到2mm的深度为止。然后将插管在尾部移动2mm前囟3mm，并且然后旋转地移动2mm回到其初始位置。最后将插管从大脑去除并且缝合头皮伤口。然后根据标准程序使用拮抗性抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体处理小鼠，并且然后通过组织学和免疫荧光染色和行为测试进行分析。此实验还可在表达来自细菌人工染色体或来自由骨髓启动子驱动的cDNA的人⑶33基因的小鼠中或在用包含h⑶33cDNA的慢病毒或AAV病毒转导的小鼠中实施。[0813]实施例20:毒素诱导的损伤之后的神经炎症和神经元丧失的模型中拮抗性⑶33抗体和或CD33双特异性抗体的治疗性用途的表征[0814]在毒素诱导的损伤之后的神经炎症和神经元丧失的模型中测试激动性抗⑶33抗体和或CD33双特异性抗体的治疗性用途Martens，LH等人，（2012TheJournalofClinicalInvestigation，122，3955。使用每天4次腹膜内注射MPTP1-甲基-4-苯基-I，2，3，6_四氢吡啶）持续2天4ygg体重）（Sigma-Aldrich或PBS处理三月龄的常规小鼠。根据标准方案使用激动性抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体处理小鼠，并且然后使用立体学计数进行分析以定量黑质致密部（SNpc中的多巴胺神经元和小神经胶质细胞，如所描述的。此实验还可在表达来自细菌人工染色体或来自由骨髓启动子驱动的cDNA的人⑶33基因的小鼠中或在用包含hCD33cDNA的慢病毒或AAV病毒转导的小鼠中实施。[0815]实施例21:老化、癫痫发作、脊髓损伤、视网膜营养不良、额颞叶痴呆、以及阿尔茨海默氏病的动物模型中拮抗性CD33抗体和或CD33双特异性抗体的治疗性用途的表征[0816]在老化、癫痫发作、脊髓损伤、视网膜营养不良、额颞叶痴呆、亨廷顿病、帕金森氏病、肌萎缩性侧索硬化症以及阿尔茨海默氏病的动物模型中测试拮抗性抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体的治疗性用途，如先前所述的（例如，Beattie，MS等人，（2002Neuron36，375-386;Volosin，M等人，（2006J.Neurosci.26,7756-7766;Nykjaer，A等人，（2005Curr·Opin·Neurobiol·15,49-57;Jansen，P等人，（2007Nat.Neurosci·10,1449-1457;Volosin，M等人，（2008J·Neurosci·28，9870-9879;Fahnestock，M等人，（2001Mol·CelINeurosci·18,210_220;Nakamura，K等人，（2007CellDeath.Differ.14,1552_1554;Yune，T等人，（2007BrainRes.ll83,32-42;Wei，Y等人，（2007Neurosci.Lett.429，169-174;Provenzano，MJ等人，（2〇〇8Laryngoscopell8,87_93;Nykjae;r，A等人，（2OO4Nature427，843-848;Harrington，AW等人，（2004Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.101，6226-6230;Teng，HK等人，（2005J·Neurosci·25，5455-5463;Jansen，P等人，（2007恥1恥1^〇8^.10，1449-1457;VoIosin，M等人，（2008J.Neurosci·28,9870-9879;Fan，YJ等人，（2008Eur·J.Neurosci·27，2380-2390;Al-Shawi，R等人，（2008Eur·J.Neurosci·27，2103-2114;以及Yano，H等人，（2009J.Neurosci.29，14790-14802。此实验还可在表达来自细菌人工染色体或来自由骨髓启动子驱动的cDNA的人⑶33基因的小鼠中或在用包含hCD33cDNA的慢病毒或AAV病毒转导的小鼠中实施。[0817]实施例22:感染模型中拮抗性CD33抗体和或CD33双特异性抗体的治疗性用途的表征[0818]在感染模型中测试拮抗性抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体的治疗性用途。例如，可使用正常小鼠中的单核细胞增多性李斯特菌（Listeriamonocytogenes或其他感染，如先前所述的（例如，Yin，F等人，（2009J.Exp.MecU207,117-128。可使用常规小鼠或在细菌人工染色体下或在骨髓启动子下表达人CD33基因的小鼠。_9]实施例23:炎性疾病的模型中拮抗性CD33抗体和或CD33双特异性抗体的治疗性用途的表征[0820]在炎性疾病的模型中测试拮抗性抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体的治疗性用途。例如，类风湿关节炎或在建立的另一种炎性疾病的模型中（Mizoguchi2012ProgMolBiolTranslSci.，105:263-320;以及Asquith等人，（2009EurJImmunol.39:2040-4〇此实验还可在表达来自细菌人工染色体或来自由骨髓启动子驱动的cDNA的人⑶33基因的小鼠中或在用包含hCD33cDNA的慢病毒或AAV病毒转导的小鼠中实施。[0821]实施例24:筛选诱导或抑制CD33和下游信号传导分子的磷酸化的抗CD33抗体和或⑶33双特异性抗体。[0822]使用I3BS-EDTA从组织培养皿去除细胞J774、RAW264.7、BMM细胞、人原代单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、T细胞小神经胶质细胞或破骨细胞），使用PBS洗涤并且进行计数。在冰上或在其他条件下将细胞与抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体或与同种型匹配的对照抗体以lygΙΟ6个细胞孵育20min。在冰冷的放射免疫沉淀测定RIPA缓冲液中使细胞裂解20min，接着在4°C以16,000g离心IOmin以去除不可溶物质。使所得的上清液经受与所指示的抗体DAP12、ERK、或AKT和蛋白A-或蛋白G-琼脂糖Sigma的免疫沉淀反应。使用RIPA缓冲液充分洗涤珠粒，并且通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳SDS-PAGE使蛋白质分离。然后通过蛋白质印迹将蛋白质转移到硝化纤维膜，与适当的抗体特异性地识别磷酸化酪氨酸或磷酸化形式的04?12^狀、371^、1^〇¥1：-〇31、¥4¥、或41〇'的抗体一起孵育并且使用增强的化学发光（ECL系统（Pierce可视化，如所描述的（例如，Peng等人，（2010SciSignal.,3122：ra38〇[0823]实施例25:筛选诱导或抑制钙流量的抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体[0824]使用含有HEPES的缓冲液[20mMHEPESpH7.3、120mMNaCKlmMCaCKlmMMgCl、5mMKC1、葡萄糖（lmgml、牛血清白蛋白（lmgml]洗涤BMM细胞两次，接着在37°C下在0.05%PluronicF-127Invitrogen和ΙμΜIndo-IAMInvitrogen中孵育20min。使用HEPES缓冲液洗涤细胞两次并且然后使用抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体（16ygml或使用对照抗体（16ygml刺激并且通过分光光度计（PTLPhotonTechnologyInternational进行监测。根据制造商的说明书将Indo-I焚光发射转化为f丐Ca2+例如，Peng等人，（2010SciSignal.，3122:ra38。[0825]实施例26:CD33增加巨噬细胞、T细胞和树突细胞的存活[0826]为了评价CD33在细胞存活中的作用，在炎性介质的存在下培养人或小鼠巨噬细胞、小神经胶质细胞、T细胞和树突细胞，并且测量细胞存活。[0827]通过使用冷PBS冲洗胫骨和股骨骨髓细胞来获得来自⑶33WT、Het和KO小鼠的鼠骨髓前体细胞。在使用PBS—次洗涤之后，使用ACK裂解缓冲液Lonza使红细胞裂解，使用PBS洗涤两次并且以〇.5xl06个细胞ml重悬浮在具有指示量的产生巨噬细胞的50ngmlM-CSF或产生树突细胞的l〇ngmlGM-CSF的完全RPMI培养基（10%FCS，青霉素链霉素，Gln，neAA中。对于M2型巨噬细胞，向培养细胞添加10ngmlIL-4。对于Ml型巨噬细胞，添加50ngmlIFN。在一些实施方案中，以lygml-0.01ngml的浓度范围在第5天向细胞培养物添加LPS或酵母聚糖。重组细胞因子购自Peprotech。[0828]为了分析骨髓衍生的巨噬细胞的成活力，如上制备细胞并且在MCSF中进行培养。在非组织培养物处理板中，将细胞以IO5个200ul铺板在96孔板中（用于使用基于萤光素酶的测定的成活力分析或以0.5xl06个Iml铺板在6孔板中（用于台盼蓝排除细胞计数）。在第3天添加含有新鲜M-CSF的培养基。在指示的时间点处，使用3mMEDTA使细胞从板轻轻脱离，并且使用Burker腔室Burkerchamber进行计数。对于活细胞的FACS分析，在50ngmlMCSF中培养巨噬细胞6天+MCSF或在50ngmlMCSF中培养巨噬细胞4天，之后去除MCSF，培养额外的36h-MCSF。使用CDlIb抗体和DAPI对细胞进行染色。对于荧光素酶成活力测定，在梯度浓度的生长因子GMCSF树突细胞）、MCSFMl巨噬细胞）、或MCSF+IL-4M2巨噬细胞）中培养的第5天测量细胞成活力。将细胞与ToxGlo试剂Promega—起直接孵育，并且确定荧光素酶活性发光）。对于在炎性介质IFN、LPS、或酵母聚糖的存在下培养的成活的巨噬细胞的FACS分析，在第5天收集细胞并且使用CDlIb抗体和DAPI进行染色。[0829]实施例27:CD33增加巨噬细胞上的炎性细胞表面标记物的表达[0830]为了确定⑶33在炎性标记物表达中的作用，使用各种炎性介质培养巨噬细胞，并且在⑶33抗体存在或不存在下测量表面标记物⑶86和⑶206的表达。[0831]将巨噬细胞铺板并且使其在37°C下粘附4h，并且以0.01-100ngmlLPS或0.01-lOygml酵母聚糖范围内的浓度添加TLR激动剂LPS马流产沙门氏菌和酵母聚糖酿酒酵母）。可替代地，在细胞因子IL-410ngml或IFN0.5-50ngml的存在下培养巨噬细胞。48小时之后在BDFACSCanto上执行CD86和CD206的FACS分析。使用FlowJoTreeStar软件版本10.0.7执行数据分析。[0832]实施例28:CD33缺陷小鼠中肿瘤生长的分析[0833]使用悬浮在IOOulPBS中的肿瘤细胞例如，IxIO5-IxIO6个MC38结肠癌细胞、Lewis肺癌细胞、或B16黑素瘤细胞皮下攻击同龄组的10只⑶33野生型WT小鼠、CD33杂合HET小鼠和⑶33敲除KO小鼠（性别和年龄匹配的同窝出生小鼠，8周龄+-2周）。在植入之前使用异氟烷使动物麻醉。在第4天开始使用卡尺每两周一次监测肿瘤生长以测量肿瘤生长。实验的终点是2000mm3的肿瘤体积或60天。肿瘤生长和存活％是结果测量值。肿瘤摄取和生长速率降低和肿瘤浸润免疫抑制巨噬细胞的数量减少指示CD33KO小鼠中流入肿瘤中的效应T细胞增加。[0834]为了确定浸润肿瘤相关免疫抑制巨噬细胞和T细胞的数量，使用6-8只性别和年龄匹配的同窝出生小鼠的组。使用悬浮在200ul基质胶基质胶基质生长因子减少;BD中的肿瘤细胞例如，IxIO5-IxIO6个MC38细胞、Lewis肺细胞、或B16细胞皮下攻击8周龄+-2周）的WT-HET-KO同窝出生小鼠。在植入之前使用异氟烷使动物麻醉。肿瘤注射之后7天和10天，切除基质胶塞，在37°C下与lmgml胶原酶DSigma—起孵育1小时，解离以获得单细胞悬浮液，并且通过细胞滤器进行过滤。为了确定募集在肿瘤中的T细胞的量和效应T细胞与调节性T细胞之间的比率，使用抗CD45.2PercpCy5.5、抗CD3-FITC、抗CD8-PE-Cy7、抗CD4-APC、抗FoxP3-PEBD、以及DAPI对5xl06个细胞进行染色。为了确定募集到肿瘤中的单核细胞巨噬细胞谱系细胞的量，使用抗CD45.2PercpCy5.5、抗CDllb-PECY7、抗F480-FITC、抗Ly6CG-APC、抗CD86-PE、以及DAPI对5xl06个细胞进行染色。在BDFACSCanto上获取细胞。使用FlowJoTreeStar软件版本10·0·7执行数据分析。[0835]实施例29:CD33抗体和或双特异性抗体的抗癌作用的分析[0836]使用悬浮在IOOulPBS中的肿瘤细胞例如，IxlO5至IxlO6个MC38细胞、Lewis肺细胞、或B16细胞皮下攻击10只8周+-2周龄的C57B16NTac小鼠（常规小鼠或表达来自细菌人工染色体或来自骨髓启动子的人CD33基因的小鼠）的组。在植入之前使用异氟烷使动物麻醉。在第2天开始，对小鼠的组每3天腹膜内注射4个剂量200ug的每种拮抗性抗CD33抗体，诸如实施例38和实施例40所描述的那些。在第4天开始使用卡尺每两周一次监测肿瘤生长以测量肿瘤生长。实验的终点是2000mm3的肿瘤体积或60天。肿瘤生长和存活％是结果测量值。肿瘤摄取和生长速率降低、肿瘤浸润免疫抑制巨噬细胞的数量减少、以及效应T细胞流入肿瘤中增加指示阻断抗CD33抗体的抗癌作用。[0837]使表达人IL-3、人GM-CSF、人IL-6、人IL-2的免疫缺陷小鼠或免疫缺陷转基因小鼠接种有来自人胎盘、胎儿肝脏、外周血的人免疫细胞，或者还可使用另一种来源用于此类研究（ItoM等人，（2008CurrTopMicrobiolImmunol·;324:53_76;ItoR.等人，（2012CellularMolecularImmunology9,208_214;Brehm等人，（2010CurrOpinEndocrinolDiabetesObes.172:120_125;Zhou等人，（2013CancerLetters.344,13-19。此类小鼠可与细胞系肿瘤或患者衍生的人肿瘤异种移植物结合使用（Siolas等人，（2013CancerRes.；7317:5315-5319〇[0838]此实验还可在表达来自细菌人工染色体或来自由骨髓启动子驱动的cDNA的人⑶33基因的小鼠中或在用包含h⑶33cDNA的慢病毒或AAV病毒转导的小鼠中实施。[0839]实施例30:将CD33抗体和或双特异性抗体与针对抑制性检查点蛋白或抑制性细胞因子趋化因子及其受体的抗体组合的组合疗法的附加抗癌作用的分析[0840]用肿瘤细胞皮下攻击15只8周+-2周龄的C57B16NTac小鼠的组，如在实施例35中所描述的。在植入之前使用异氟烷使动物麻醉。在第2天开始，在第3天、第6天和第9天对小鼠每3天腹膜内注射4个剂量单独的200ug抗CD33抗体或与针对检查点蛋白的抗体例如，抗I3DLlmAb克隆10F.9G2和或抗CTLA4mAb克隆UC10-4F10-11组合。治疗组包括抗CD33;抗CTLA4;抗PDLl;抗⑶33+抗CTLA4;抗⑶33+抗PDLl;以及同种型对照。在第4天开始使用卡尺每两周一次监测肿瘤生长以测量肿瘤生长。实验的终点是2000mm3的肿瘤体积或60天。肿瘤生长和存活％是结果测量值。使用组合疗法肿瘤生长降低和存活％增加指示抗CD33抗体与抗检查点抗体具有相加或协同治疗性作用。针对检查点分子的诘抗性抗体包括针对PDLl、PDL2、PDl、CTLA4、B7-H3、B7-H4、HVEM、BTLA、KIR、GAL9、HM3、A2AR、LAG-3、以及磷脂酰丝氨酸的抗体。针对抑制性细胞因子的拮抗剂抗体包括针对CCL2、CSF-1和IL-2的抗体。使表达人IL-3、人GMCSF、人IL-6、人112的免疫缺陷小鼠或免疫缺陷转基因小鼠接种有来自人胎盘、胎儿肝脏、外周血的人免疫细胞，或者还可使用另一种来源用于此类研究（ItoM等人，2008CurrTopMicrobiolImmunol.;324:53_76;ItoR.等人，（2012CellularMolecularImmunology9,208-214;Brehm等人，（2010CurrOpinEndocrinolDiabetesObes.172:120-125;Zhou等人，（2013CancerLetters.344,13-19。此类小鼠可与细胞系肿瘤或患者来源的人肿瘤异种移植物结合使用（Siolas等人，（2013CancerRes.;7317:5315-5319〇[0841]此实验还可在表达来自细菌人工染色体或来自由骨髓启动子驱动的cDNA的人⑶33基因的小鼠中或在用包含h⑶33cDNA的慢病毒或AAV病毒转导的小鼠中实施。[0842]实施例31:将CD33抗体和或双特异性抗体与活化刺激性检查点蛋白的抗体组合的组合疗法的附加抗肿瘤作用的分析[0843]用肿瘤细胞皮下攻击15只8周+-2周龄的C57B16NTac小鼠的组，如在实施例35中所描述的。在植入之前使用异氟烷使动物麻醉。在第2天开始，在第3天、第6天和第9天对小鼠每3天腹膜内注射4个剂量单独的200ug抗CD33抗体或与活化刺激性检查点蛋白的激动性抗体例如，0X40或ICOSmAb组合。在第4天开始使用卡尺每两周一次监测肿瘤生长以测量肿瘤生长。实验的终点是2000mm3的肿瘤体积或60天。肿瘤生长和存活％是结果测量值。使用组合疗法肿瘤生长降低和存活％增加指示抗CD33抗体与刺激性检查点抗体具有相加或协同治疗性作用。刺激性检查点抗体包括针对⑶28、IC0S、⑶137、⑶27、CD40、以及GITR的激动性刺激性抗体。[0844]使表达人IL-3、人GMCSF、人IL-6、人112的免疫缺陷小鼠或免疫缺陷转基因小鼠接种有来自人胎盘、胎儿肝脏、外周血的人免疫细胞，或者还可使用另一种来源用于此类研究（ItoM等人，（2008CurrTopMicrobiolImmunol·;324:53_76;ItoR.等人，（2012CellularMolecularImmunology9,208_214;Brehm等人，（2010CurrOpinEndocrinolDiabetesObes.172:120_125;Zhou等人，（2013CancerLetters.344,13-19。此类小鼠可与细胞系肿瘤或患者来源的人肿瘤异种移植物结合使用（Siolas等人，（2013CancerRes.；7317:5315-5319〇[0845]此实验还可在表达来自细菌人工染色体或来自由骨髓启动子驱动的cDNA的人⑶33基因的小鼠中或在用包含人⑶33cDNA的慢病毒或AAV病毒转导的小鼠中实施。[0846]实施例32:将CD33抗体和或双特异性抗体与刺激性细胞因子组合的组合疗法的相加抗肿瘤作用的分析[0847]用肿瘤细胞皮下攻击15只8周+-2周龄的C57B16NTac小鼠的组，如在实施例35中所描述的。在植入之前使用异氟烷使动物麻醉。在第2天开始，对小鼠每3天腹膜内注射4个剂量单独的200ug抗⑶33抗体或与刺激性细胞因子例如，IL-12、IFN-a组合。在第4天开始使用卡尺每两周一次监测肿瘤生长以测量肿瘤生长。实验的终点是2000mm3的肿瘤体积或60天。肿瘤生长和存活％是结果测量值。使用组合疗法肿瘤生长降低和存活％增加指示抗CD33抗体与免疫刺激性细胞因子具有相加或协同治疗性作用。刺激性细胞因子包括正^ab、IL-2、IL-12、IL-18、GM-CSF、以及G-CSF。[0848]使表达人IL-3、人GMCSF、人IL-6、人112的免疫缺陷小鼠或免疫缺陷转基因小鼠接种有来自人胎盘、胎儿肝脏、外周血的人免疫细胞，或者还可使用另一种来源用于此类研究（ItoM等人，（2008CurrTopMicrobiolImmunol·;324:53_76;ItoR.等人，（2012CellularMolecularImmunology9,208_214;Brehm等人，（2010CurrOpinEndocrinolDiabetesObes.172:120_125;Zhou等人，（2013CancerLetters.344,13-19。此类小鼠可与细胞系肿瘤或患者来源的人肿瘤异种移植物结合使用（Siolas等人，（2013CancerRes.；7317:5315-5319〇[0849]此实验还可在表达来自细菌人工染色体或来自由骨髓启动子驱动的cDNA的人⑶33基因的小鼠中或在用包含h⑶33cDNA的慢病毒或AAV病毒转导的小鼠中实施。[0850]实施例33:CD33抗体和或双特异性抗体Fab刺激先天和适应性免疫细胞的成活力的能力的分析[0851]在先天免疫细胞例如，巨噬细胞或适应性免疫细胞例如，T细胞）中评价板结合的交联抗CD33抗体Fab片段的激动性功能性。[0852]在M-CSF和板结合的CD33抗体Fab的存在下培养巨噬细胞并且测量细胞成活力。[0853]将衍生自人单核细胞的巨噬细胞和DC以及衍生自人单核细胞的T细胞和人小神经胶质细胞铺板在使用12.5nM或IOOnM的交联⑶33Fab预涂覆的非组织培养物处理的96孔板上。在10ngmlM-CSF的存在下培养细胞48小时。使用CellTiter-Glo'®试剂盒Promega执行成活力分析。使用GEN52.04软件使用BioTekSynergy酶标仪读取板。[0854]实施例34:CD33抗体和或双特异性抗体调节NFAT依赖性基因的能力的分析[0855]在NFAT活化T细胞的核因子启动子的控制下使用荧光素酶报告基因评价拮抗性抗⑶33抗体活化NFAT依赖性基因的能力。[0856]使衍生自表达含有ITAM基序的共受体DAP12及其配体结合配偶体TREM2的小鼠T淋巴细胞BW5147.G.1ATCC⑧TIB48™的细胞系感染有人CD33，并且感染有Cignal慢病毒NFAT-荧光素酶病毒Qiagen。通过结合板的抗TREM2抗体活化荧光素酶信号传导。将全长和Fab片段抗CD33抗体与TREM2抗体共铺板或施加在溶液中。对于板结合，将抗体在4°C下以lOygml下施加在组织培养物处理的清洁底部白色96孔板（ΙΟΟμίν孔上的DPBS中过夜。使用DPBS淋洗孔三次并且随后以100,000个细胞孔铺板在具有1%血清的培养基中。作为信号传导的阳性对照，将PMA0.05ygml和离子霉素0.25uM—起添加。将细胞孵育6小时，并且通过将ΟΝΕ-Glo™试剂Promega添加到每个孔并且在RT下在板振动器上孵育3min来测量荧光素酶活性。使用BioTek酶标仪测量荧光素酶信号。[0857]实施例35:CD33抗体和或双特异性抗体的抗中风作用的分析[0858]使用瞬时大脑中动脉闭塞MCAO与人中风非常相似的模型）来诱导小鼠中的大脑梗塞。通过右侧颈总动脉的切口将单丝（70SPRe，D〇CC〇lCorp，USA引入到颈内动脉中。在一系列的再灌注时间（第6小时、第12小时、第24小时、第2天、第7天以及第28天）的情况下使大脑中动脉闭塞30分钟。在第12小时和在第7天使用假手术动物核实手术作用。假手术动物经历相同的手术程序而没有大脑中动脉闭塞。针对梗塞容积、急性炎性应答第12小时再灌注）、促炎细胞因子TNFa、IL-la和IL-Ιβ的转录、小神经胶质细胞活性CD68、Ibal、趋化因子CCL2MCPl、CCL3MIPla和趋化因子受体CX3CR1的转录以及⑶3阳性T细胞的侵入测试使用拮抗性抗⑶33抗体或对照抗体处理的MCAO动物（Sieber等人2013PLoSONE81:e52982.doi:10.1371journal.pone.0052982.。此实验还可在常规小鼠中或可替代地在表达来自细菌人工染色体或来自由骨髓启动子驱动的cDNA的人CD33基因的小鼠中或在用包含h⑶33cDNA的慢病毒或AAV病毒转导的小鼠中实施。[0859]实施例36:抗CD33抗体和或双特异性抗体的抗阿尔茨海默氏病作用的分析[0860]为了评价拮抗性抗CD33抗体延迟、预防、或逆转阿尔茨海默氏病AD的发展，使用5XFAD小鼠。5XFAD小鼠过表达具有瑞典K670N、M671L、佛罗里达（I716V和伦敦V717I家族性阿尔茨海默氏病（FAD突变的突变体人APP695以及含有两个FAD突变M146L和L286V的人PS1。两种转基因均通过小鼠Thyl启动子来调节以驱动在大脑上的过表达并且概述AD的主要特征。使用免疫组织化学并且通过组织提取物的ELISA测试使用激动性抗⑶33抗体或使用对照抗体处理的小鼠的Αβ斑负载。还使用Morris水迷宫（空间学习和记忆任务）、辐射臂水迷宫空间学习和记忆任务）、Y迷宫将自发交替定量为空间认知的量度）、开放领域中的新颖偏好、评估学习和记忆的操作性学习、以及恐惧条件反射测试它们大脑中小神经胶质细胞的数量和认知缺陷的减少mousebiology.orgwebsite;Wang等人，（2015Cell.pii:S0092-86741500127-0。此实验还可在表达来自细菌人工染色体或来自由骨髓启动子驱动的cDNA的人⑶33基因的小鼠中或在用包含h⑶33cDNA的慢病毒或AAV病毒转导的小鼠中实施。[0861]实施例37:CD33抗体和或双特异性抗体在呼吸道感染中的保护性作用的分析[0862]为了评价拮抗剂CD33抗体延迟、预防、或治疗细菌呼吸道感染的能力，使用涉及使用肺炎链球菌Streptococcuspneumoniae攻击C57B16小鼠的临床前小鼠模型。此模型涉及105CFU肺炎链球菌S.pneumoniae血清型3ATCC6303的鼻内（i.η.施用，如所描述的参见，例如，Sharif0等人，2014PL〇SPathog.2014年6月；106:el004167;以及SchabbauerG等人，2010JImmunol185:468-476。在此模型中，约90%WTC57B16小鼠在感染后6天内死于感染。[0863]使用肺炎链球菌攻击十至十五只小鼠组，并且与此同时从第0天开始每隔一天使用拮抗剂抗CD33抗体进行治疗。在使用肺炎链球菌攻击之前3小时施用第一剂量的抗CD33抗体。每天监测小鼠持续15天以检查死亡事件。确定从细菌攻击存活的小鼠的％。[0864]在单独的实验中，还确定血液中和肺中细菌负载和细胞因子表达的计数。感染之后24小时或48小时在含有EDTA的管中收集感染血液并且铺板在琼脂板上以计算血浆中的细菌CFU。将血浆储存在-20°C下以用于通过ELISA进行的细胞因子分析。收获肺、均匀化并且铺板在琼脂板上以计算细菌CFU，或在裂解缓冲液中孵育30min并且分析上清夜以用于细胞因子测量。[0865]在单独的实验中，在细菌感染后40小时收集肺，固定在10%福尔马林中，并且包埋在石蜡中以用于HE病理学分析。[0866]此实验还可在表达来自细菌人工染色体或来自由骨髓启动子驱动的cDNA的人⑶33基因的小鼠中或在用包含h⑶33cDNA的慢病毒或AAV病毒转导的小鼠中实施。[0867]实施例38:CD33抗体和或双特异性抗体在败血症中的保护性作用的分析[0868]为了评价拮抗剂⑶33抗体延迟、预防、或治疗败血症的能力，使用涉及用LPS全身性攻击C57B16小鼠的临床前小鼠模型。此模型涉及37mgmlLPS的腹膜内（i.p.施用，如上所述的（参见，例如，GawishR等人，2014FASEBJ。在此模型中，95%WTC57B16小鼠在LPS注射后40小时内死于感染。[0869]使用LPS攻击同龄组小鼠，并且与此同时从第0天开始每天使用拮抗剂抗CD33抗体进行治疗。在使用LPS攻击之前3小时施用第一剂量的抗CD33抗体。在白天期间每约4小时监测小鼠以检查死亡事件。确定从LPS攻击存活的小鼠的百分比。[0870]在单独的实验中，收集腹膜灌洗液PLF。将上清液储存在-20°C下以用于通过ELISA进行的细胞因子分析;对沉淀细胞进行计数以定量募集在腹膜腔中的炎性细胞。可实施相似的研究以测试CD33抗体在感染的其他模型中的效力（参见，例如，Sun等人，（2013InvestOphthalmolVisSci.17;545:3451-62〇[0871]此实验还可在表达来自细菌人工染色体或来自由骨髓启动子驱动的cDNA的人⑶33基因的小鼠中或在用包含h⑶33cDNA的慢病毒或AAV病毒转导的小鼠中实施。[0872]实施例39:CD33抗体和或双特异性抗体在急性和慢性结肠炎中的保护性作用的分析[0873]为了评价拮抗剂抗CD33抗体延迟、预防、或治疗结肠炎的能力，使用急性或慢性结肠炎的临床前小鼠模型。对于DSS诱导的结肠炎，小鼠随意接受在饮用水中的3%DSS，持续8天。对于TNBS诱导的结肠炎，使小鼠麻痹并且使用在20%乙醇中的3mgTNBS体积体积或作为对照的单独的媒介物的直肠内注射进行处理。对于慢性结肠炎模型，使用3个循环的2%DSS处理所有小鼠，持续5天，接着10天的恢复期。对于所有模型，每天监测体重损失、大便稠度和粪便隐血的存在，并且用于计算疾病活性指数，如所描述的参见，例如，CorrealeC，2013,Gastroenterology，2013年2月，第346-356页·e3。[0874]从第0天开始每天使用拮抗剂抗⑶33抗体治疗同龄组的小鼠，并且经受DSS或TNBS施用。每天监测小鼠以检查体重损失、大便稠度和粪便隐血的存在，每天监测并且用于计算疾病活性指数，如所描述的（参见，例如，3.'\^1:抑11〇,6381：1'〇611丨61'〇1^7，1352008，第173-184页）。[0875]在单独的实验中，收集粘膜损害的内窥镜和组织学图像以评价炎性细胞浸润和粘膜损害。可实施相似的研究以测试CD33抗体在自身免疫包括克罗恩氏病、炎症性肠病和溃疡性结肠炎）的其他模型中的益处参见，例如，Low等人，（2013DrugDesDevelTher.;7:1341-1357;以及Sollid等人，（2008PLoSMed59:el98。[0876]此实验还可在表达来自细菌人工染色体或来自由骨髓启动子驱动的cDNA的人⑶33基因的小鼠中或在用包含h⑶33cDNA的慢病毒或AAV病毒转导的小鼠中实施。[0877]实施例40:CD33抗体和或双特异性抗体在伤口愈合中的保护性作用的分析[0878]为了评价激动性抗CD33抗体增加损伤之后结肠伤口修复的能力，使用在结肠中活组织检查损伤的小鼠模型。在此模型中，将具有外操作鞘的内窥镜插入中降结肠，并且向肛门直肠连接处检查粘膜。然后，使用具有3French直径的柔性活组织检查钳去除整个粘膜和粘膜下层的单一全厚区域。使每只小鼠沿着结肠背侧在3-5个位点处具有活组织检查损伤参见，例如，SenoH，2008，ProcNatlAcadSciUSA.2009年1月6日；1061:256-261〇[0879]在活组织检查损伤之后，使用激动剂抗⑶33抗体治疗同龄组的小鼠2或3天。每天监测小鼠，持续15天，以通过测量病灶的表面积检查体重损失和伤口愈合。[0880]此实验还可在表达来自细菌人工染色体或来自由骨髓启动子驱动的cDNA的人⑶33基因的小鼠中或在用包含h⑶33cDNA的慢病毒或AAV病毒转导的小鼠中实施。[0881]实施例41:CD33抗体和或双特异性抗体在视网膜变性中的保护性作用的分析[0882]AMD是外视网膜的变性疾病。认为炎症具体地是炎性细胞因子和巨噬细胞促成AMD疾病进展。[0883]在脉络膜小疣、布鲁赫氏膜Bruch’smembrane、脉络膜以及视网膜中记录巨噬细胞在AMD病灶附近的存在。巨噬细胞释放组织因子TF和血管内皮生长因子VEGF，其触发显示脉络膜新血管形成的患者中新血管形成的扩张。[0884]存在于黄斑脉络膜中的巨噬细胞的类型随着年龄变化，从而与较年轻眼睛相比，在较年长眼睛中展示出升高水平的M2巨噬细胞。然而，与相似年龄的正常解剖眼睛相比，晚期AMD黄斑具有较高的Ml与M2比例。（参见，例如，CaoX等人，（2011，PatholInt619:第528-35页）。这显示在AMD进展的晚期发作中眼睛中经典Ml巨噬细胞活化之间的联系。[0885]视网膜小神经胶质细胞是也通常存在于内视网膜中的组织驻留型巨噬细胞。在损害事件中，小神经胶质细胞被可活化并且充当炎症介质。活化的小神经胶质细胞已在AMD组织样品中检测到并且被提出作为导致AMD发病机制的炎性过程的一个潜在贡献者Gupta等人，（2003ExpEyeRes.，76⑷：463-71.。在一个或多个AMD模型中测试⑶33抗体预防、延迟、或逆转AMD的能力（参见，例如，Pennesi等人，（2012MolAspectsMed.;334:487-509。[0886]记录总体炎性巨噬细胞Ml和或活化的小神经胶质细胞与AMD疾病进展相关并且因此代表拮抗剂CD33抗体的治疗性靶标。可在青光眼和遗传形式的视网膜变性诸如色素性视网膜炎）中实现相似的治疗性益处。[0887]在青光眼模型中测试⑶33抗体预防、延迟、或逆转青光眼中的视网膜神经节细胞变性的能力（参见，例如，El-Danaf等人，（2015.JNeurosci.ll;356:2329-43。同样，如在Chang等人，（2002VisionRes.;42⑷：517-25和在“RetinalDegenerationRatModelResourceAvailabilityofP23HandS334terMutantRhodopsinTransgenicRatsandRCSInbredandRCSCongenicStrainsofRats，”MMLaVail，2011年6月30日中所描述的测试REM2在遗传上诱导的视网膜变性和色素性视网膜炎中的治疗性益处。[0888]此实验还可在表达来自细菌人工染色体或来自由骨髓启动子驱动的cDNA的人⑶33基因的小鼠中或在用包含h⑶33cDNA的慢病毒或AAV病毒转导的小鼠中实施。[0889]实施例42:CD33抗体和或双特异性抗体在脂肪生成和饮食诱导的肥胖症中的保护性作用的分析[0890]为了测试CD33抗体在脂肪生成和肥胖症中的作用，使用高脂肪饮食HFD的小鼠模型参见，例如，Park等人，（2015Diabetes.64l:117-27。[0891]此实验还可在表达来自细菌人工染色体或来自由骨髓启动子驱动的cDNA的人⑶33基因的小鼠中或在用包含h⑶33cDNA的慢病毒或AAV病毒转导的小鼠中实施。[0892]实施例43:拮抗剂CD33抗体和或双特异性抗体在骨质疏松症中的保护性作用的分析[0893]骨是不断地被改造以支持钙体内稳态和结构需要的动态器官。破骨细胞是负责去除骨的有机和无机组分两者的细胞。破骨细胞衍生自巨噬细胞谱系中的造血祖细胞，并且响应于NFkB配体的肿瘤坏死因子家族细胞因子受体活化剂而进行分化。破骨细胞唯一的骨再吸收细胞）对于骨质疏松症和骨硬化病的发病机制是重要的（Novack等人，（2008AnnualRevPathol.，3:457_84。[0894]骨质疏松症是特征在于骨质量和密度降低（其可导致增加的骨折风险）的进行性骨病。它在停经之后的最初几年表现最多，此时骨转换加速，破骨细胞和成骨细胞两者的活性均增加。然而，由于再吸收和合成的过程中的失衡，净效应是骨损失，其主要是小梁的骨损失。因此，骨质疏松症中骨折的最普遍位点是腕部、股骨颈和脊椎体，其中小梁结构是总体骨强度的关键。[0895]破骨细胞功能降低导致骨硬化病，其中骨质量增加并且骨髓空间消除，如在缺少DAP12ITAM信号传导接头并且导致破骨细胞样细胞分化的显著缺陷的动物模型中所观察到的（Koga等人，（2004Nature428:758-763。[0896]因此，施用本公开的拮抗剂抗CD33抗体可预防、降低风险和或治疗骨质疏松症。在一些实施方案中，施用激动剂抗CD33抗体可诱导患有骨硬化病的个体中的一种或多种CD33活性例如，DAP12磷酸化、Syk活化和向破骨细胞的加速分化）（Peng等人2010.SciSignal.201018;3122;以及Humphrey等人，（2006JBoneMinerRes.，212:237-45。[0897]此实验还可在表达来自细菌人工染色体或来自由骨髓启动子驱动的cDNA的人⑶33基因的小鼠中或在用包含h⑶33cDNA的慢病毒或AAV病毒转导的小鼠中实施。[0898]实施例44:⑶33抗体和或双特异性抗体调节⑶33与SHPl、SHP2和其他信号传导分子的结合的能力的分析[0899]使用PBS-EDTA从组织培养皿去除人原代单核细胞、巨噬细胞、树突细胞、T细胞、小神经胶质细胞或破骨细胞，使用PBS洗涤并且进行计数。在冰上或在其他条件下将细胞与抗CD33抗体和或CD33双特异性抗体或与同种型匹配的对照抗体以lyglO6个细胞孵育20min。在冰冷的放射免疫沉淀测定（RIPA缓冲液中使细胞裂解20min，接着在4°C以16，OOOg离心IOmin以去除不可溶物质。使所得的上清液经受与所指示的抗体（5冊1、5冊2、：-Cbl、Vav、Syk、LcK、Fyn、GRb2、PLC-γ、Toll样受体、DAMP受体、模式识别受体和蛋白A-或蛋白G-琼脂糖Sigma的免疫沉淀反应。使用RIPA缓冲液充分洗涤珠粒，并且通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE使蛋白质分离。然后通过蛋白质印迹将蛋白质转移到硝化纤维膜，与适当的CD33抗体一起孵育并且使用增强的化学发光ECL系统Pierce可视化，如所描述的（例如，Peng等人，（2010SciSignal.，3122:ra38。可替代地，在冰上或在其他条件下将细胞与抗⑶33抗体和或⑶33双特异性抗体或与同种型匹配的对照抗体以lyg106个细胞孵育20min。在冰冷的放射免疫沉淀测定RIPA缓冲液中使细胞裂解20min，接着在4°：以16,OOOg离心IOmin以去除不可溶物质。使所得的上清液经受与第二⑶33抗体的免疫沉淀反应。然后通过蛋白质印迹将蛋白质转移到硝化纤维膜并且与所指示的抗体（SHPl、SHP2、c-CbI、Vav、Syk、LcK、Fyn、GRb2、PLC-γ、To11样受体、DAMP受体、模式识别受体一起孵育。[0900]实施例45:CD33抗体结合CD33并且降低体外CD33的细胞表面水平的能力的比较[0901]⑶33抗体结合的比较[0902]确定不同的抗⑶33抗体结合在人原代单核细胞上表达的⑶33的能力。将抗⑶33抗体2F5、2E12、6A3、以及6C7的结合能力与商业抗CD33抗体吉妥珠单抗和林妥珠单抗的结合能力进行比较。使用小鼠IgGlmlgGl同种型对照和人同种型对照作为对照。收获细胞，在96孔板中以IO6个ml铺板，并且在冰上在含有2%FBS、2mMEDTA和lygml、0.1ygml、或0.0lygml抗⑶33抗体和Fc阻断试剂的ΙΟΟμΙPBS中孵育1小时。洗涤细胞两次，并且在冰上在含有2%FBS、2mMEDTA和5ygmlPE偶联的二抗的ΙΟΟμΙPBS中孵育30分钟。在冷I3BS中洗涤细胞两次，并且在BDFACSCanto上通过流式细胞术进行分析。使用FlowJoTreeStar软件版本10.0.7执行数据分析和平均荧光强度MFI值的计算。[0903]如图17A所示，抗⑶33抗体2F5、2E12、6A3、以及6C7在0.lygml抗体的浓度下以比商业抗体吉妥珠单抗和林妥珠单抗高的MFI结合到人原代单核细胞。所述结果证明与商业抗体相比，本公开的抗CD33抗体在人原代骨髓细胞中表现出提高的靶标接合。[0904]⑶33的体外表达的比较[0905]将抗⑶33抗体2F5、2E12、6A3、以及6C7降低人原代单核细胞上⑶33的细胞表面水平的能力与商业抗CD33抗体吉妥珠单抗和林妥珠单抗降低人原代单核细胞上CD33的细胞表面水平的能力进行比较。使用小鼠IgGlmlgGl同种型对照和人同种型对照作为对照。[0906]使用RosetteSep™单核细胞分离抗体混合物（StemCellTechnologies分离来自外周人血液样品的单核细胞。在补充有10%HyCl〇neFBS、2mM谷氨酰胺、青霉素链霉素、以及非必需氨基酸的2ml的RPMI中，将细胞样品以200，000个细胞ml铺板在24孔板中或以500，000个细胞ml铺板在6孔皿中。以1·0ygml、0·lygml、0·0lygml、0·00lygml、0·0001ygml、以及0.00001ygml添加CD33抗体或对照同种型，并且在37°C下使用5%⑶2孵育24小时。[0907]为了评估受体动力学，使抗体结合细胞一小时，进行洗涤并且在24小时和48小时后确定CD33的表面水平。[0908]通过FACS分析检测细胞表面受体表达。在冰上在黑暗中将细胞与抗⑶33-FITC克隆HM3-4图17B以及对照表面标记物⑶14图17C—起孵育30分钟。在FACS缓冲液PBS+2%FBS，2mMEDTA中洗涤细胞两次，并且在BDFACSCanto上执行流式细胞术。使用TreeStarFlowjo软件分析数据。使用相应荧光团的MFI值将数据计算为在抗体不存在的情况下受体表达的百分比。[0909]图17B描绘来自人细胞的CD33细胞表面水平的结果，其中抗CD33抗体针对6点曲线滴定1〇倍。所述结果证明在小于I.Oygml的抗体浓度下CD33的表面水平降低，但是在对照受体⑶14的情况下没有降低（图17B和图17C。在0.01ygml的浓度下的抗体2F5、2E12、6A3、以及6C7使CD33的细胞表面水平降低至约20%，而商业抗体林妥珠单抗降低CD33的细胞表面水平的能力在〇.Olygml的浓度下完全消失（图17B。此外，商业抗体吉妥珠单抗降低⑶33的细胞表面水平的能力在0.01ygml的浓度下也显著降低下调功能，并且在0.OOlygml的浓度下完全丧失（图17B。相比之下，抗体2F5、2E12、6A3、以及6C7在0.001μgml的浓度下能够使⑶33的表面水平降低至约50-30%图17B。如图17C所示，抗⑶33抗体中任一种不调节⑶14对照受体的细胞表面水平。[0910]所述结果证明抗⑶33抗体2F5、2E12、6A3、以及6C7以与商业抗体相比提高的能力稳健地降低⑶33的细胞表面水平。具体地，抗体2F5、2E12、6A3、以及6C7在降低⑶33的细胞表面水平方面好于商业抗体吉妥珠单抗大约10倍，并且在降低CD33的细胞表面水平方面好于商业抗体林妥珠单抗大约100倍图17B。[0911]实施例46:丧失CD33表达对于细胞因子产生和细胞活化的影响[0912]以50,000个细胞孔在24孔皿中在37°C、5%⑶2下使单核细胞系THP-I经从CRISPRCas9单体慢病毒载体（All-in-OneLentivectorpLenti-U6-sgRNA-SFFV_Cas9-2A-Puro，ABM表达的杂乱小指导RNA祀标序列：GCACTCACATCGCTACATCASEQIDNO:216或CD33小指导RNA祀标序列:CTAGAGTGCCAGGGATGSEQIDNO:217慢病毒转导过夜。在第二天添加培养基。添加慢病毒后三天，使用〇.5ygml嘌呤霉素选择转导的细胞，持续两周，每2-3天添加新鲜培养基和抗生素。通过FACS检测⑶33受体表达和对照⑶14表达（图18A和图18B。[0913]为了评估细胞因子产生和细胞活化状态，以100，〇〇〇个细胞孔将杂乱SgRNA表达细胞或CD33sgRNA表达THP-I细胞铺板在24孔皿中，并且用没有LPS、1·OygmlLPS、IOOngmlLPS、或10ngmlLPS进行处理。在细胞因子刺激的孔中，添加10ngmlGM_CSF、10ngmlIL-6和10ngmlIL-8。刺激后三天，使用人炎性细胞计数珠粒阵列试剂盒（BDBiosciences分析细胞上清液的细胞因子产生（图18C。将数据呈现为PE检测物的平均荧光强度MFI。刺激后三天，在FACSCantoBDBiosciences上针对CD14PacificBlue，BDBiosciences、CD16v500，BDBiosciences、HLA_DRAPC_Cy7，BDBiosciences、以及CCR2PE，Biolegend表达对细胞进行FACS分析，并且使用FlowJo10.Ir5TreeStar处理数据图18D。将数据呈现为与未处理相比的MFI的变化。[0914]为了评估CD33表达丧失对于细胞因子产生和细胞活化的影响，生成CRISPR⑶33K0THP-I细胞系并且与对照杂乱SgRNA转导细胞进行比较。在基础状态下，⑶33CRISPRKO细胞不展示出较大差异细胞因子或活化标记物表达（图18C和图18D。然而，在使用滴定量的LPS刺激之后，CD33K0细胞产生增加水平的IL-6、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-a、IL-lO和上调的⑶14工016、!11^-01?、以及〇^2图18：和图180。这些结果指示缺少^33的细胞更具有免疫反应性。[0915]实施例47:CD33抗体对于免疫检查点的影响[0916]通过ficoll离心将人外周血单核细胞PBMC与全血分开。在红细胞的ACK裂解之后，在补充10%FBSHyclone、L-谷氨酰胺、青霉素链霉素、非必需氨基酸、丙酮酸钠、以及抑制性细胞因子混合物的RPMI培养基中培养人PBMC，所述抑制性细胞因子混合物含有10ngml重组IL-6Sigma-Aldrich、IL-8RDSystems和GM-CSFRDSystems。在一些实施方案中，使用补充有l〇ngmlGM-CSF的肿瘤条件培养基培养人TOMC。肿瘤条件培养基是具有以上指出的补充剂IL-6和IL-8除外）的从肿瘤细胞系培养物宫颈癌细胞或胶质母细胞瘤细胞收获并且使用〇.2μΜ膜无菌过滤的RPMI培养基。每2-3天向人PBMC添加细胞因子、抗体CD33抗体2F5或同种型对照）、或rhGM-CSF加标的肿瘤上清液，进行一周。[0917]对于FACS分析，收获悬浮细胞和贴壁细胞并且通过标准FACS程序针对所指示的受体的表达进行测试。[091S]对于T细胞增殖测定，在培养7天之后，通过使用CD2、CD3、CD8、CD19、以及CD56的抗体的混合物（STEMCELLTechnologies的基于磁的阴性选择来分离骨髓来源的抑制细胞MDSC。以50,000个细胞孔将分离的MDSC铺板在平底96孔非TC板中，并且使用⑶33抗体2F5、小鼠同种型对照抗体mlgGl、或抗ro-Ll抗体进行处理，之后添加T细胞。[0919]使用RosetteSep选择技术STEMCELLTechnologies从全血分离非自体同源供体CD3T细胞或CD8T细胞，使用CFSELifeTechnologies标记并且使用lOUmlIL-2和1:1比率CD3CD28T活化剂DynabeadsLifeTechnologies进行活化。MDSC和T细胞以1:2的比率或50,000:100,000个细胞孔共培养。在共培养后3天在FACSCantoBDBiosciences上检测CFSE。使用Flowjo版本10.1TreeStar软件分析数据。[0920]如图19A所示，抗⑶33抗体2F5降低MDSC上的免疫抑制性配体PD-Ll的表达，从而导致针对肿瘤的T细胞功能抑制的降低。与抗CD33抗体2F5—起培养的MDSC也展示出表型变化，从而表明免疫抑制性能力减弱。与所述培养基相比，仅对照未处理MDSC或同种型对照抗体处理的细胞MDSC+同种型）、与2F5抗体一起培养的MDSCMDSC+C-2F5表达较低水平的PD-I配体（PD-L1和PD-L2、降低水平的B7-H3强效T细胞检查点抑制剂）、降低水平的⑶200R抑制性信号传导受体）、以及降低水平的M2型标志物⑶163和⑶206图19B。所述结果指示抗体介导的靶标接合和随后的CD33细胞表面水平的下调以减少抑制性配体和受体的方式导致表型改变。[0921]如图19C和图19D所示，抗⑶33抗体2F5在MDSC的存在下增加T细胞增殖，从而允许生成更多肿瘤对抗T细胞。与活化的T细胞共培养的MDSC抑制T细胞增殖。在这些研究中，使用抗体2F5处理的MDSC诱导对总CD3T细胞或细胞毒性CD8T细胞的T细胞增殖的较少抑制图19C和图19D。同种型对照抗体mlgGl不改变T细胞增殖的MDSC依赖性抑制（图19C和图19D。此外，与抗H-L1抗体相比，2F5抗体在减轻MDSC介导的T细胞抑制方面是更有效的（图19C和图19D。所述结果指示能够通过减少抑制性配体和受体的表达来在表型上改变MDSC的抗CD33抗体也能够实现下游功能，诸如T细胞增殖。[0922]实施例48:CD33抗体对于骨髓来源的抑制细胞MDSC的影响[0923]Ficol1分离人外周血细胞，使用ACK裂解缓冲液使红细胞裂解，并且洗涤细胞3次，之后铺板在具有10%FBS、青霉素链霉素、ImM谷氨酰胺、非必需氨基酸、以及丙酮酸钠的RPMI中。在37°C下在5%C02中将人外周血单核细胞PBMC与以下细胞因子一起培养一周：10ngmlrhGM_CSFRD、10ngmlrhIL_8RD、以及10ngmlrhIL_6Sigma。然后向烧瓶添加mlgGlBioXcelI同种型或⑶33抗体2F5或6C7。每2-3天补充培养基、细胞因子和抗体在适用的情况下）。在培养7天之后，通过刮擦和研磨收获细胞，并且重悬浮在具有2%FBS和ImMEDTA的I3BS中以用于FACS分析。对于活细胞和死细胞群体的评估，将LiveDeadFixableAqua死细胞染色剂ThermoFisher在具有2%FBS和ImMEDTA的PBS中以1:500稀释并且在冰上孵育30分钟。在缓冲液中洗涤细胞3次并且在BDFACSCantoBDBiosciences上针对前向散射和侧向散射和AmCyan焚光进行分析。使用FlowJoTreeStar软件分析数据。[0924]如图20所示，CD33抗体6C7能够在分化骨髓来源的抑制细胞MDSC中诱导细胞死亡。

权利要求：1.一种分离的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体降低CD33的细胞水平、或抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用、或两者，并且其中所述抗CD33抗体表现出以下特性中的一种或多种：a.对于人CD33的解离常数Kd低于抗CD33抗体吉妥珠单抗的解离常数；b.以低于抗CD33抗体吉妥珠单抗或林妥珠单抗的EC5Q的EC5Q结合到人树突细胞；c.以低于抗CD33抗体吉妥珠单抗或林妥珠单抗的EC5q的EC5q降低CD33的细胞水平；d.对于人⑶33具有300pM至IOpM范围内的解离常数Kd，其中所述Kd在大约25°C的温度下确定；e.以200pM至IOpM范围内的EC5q结合到人树突细胞，其中所述EC5q在大约4°C的温度下确定；f.以65pM至20pM范围内的EC5q降低⑶33的细胞水平;或者g.以8.Omgkg至2.Omgkg范围内的EC5Q降低体内⑶33的细胞水平。2.如权利要求1所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体降低CD33的细胞表面水平、降低⑶33的细胞内水平、降低⑶33的总水平、或其任何组合。3.如权利要求1或权利要求2所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体诱导CD33降解、⑶33裂解、⑶33内化、⑶33脱落、⑶33表达的下调、或其任何组合。4.如权利要求1-3中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体降低CD33的细胞水平而不抑制⑶33与一种或多种⑶33配体之间的相互作用。5.如权利要求1-3中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体降低CD33的细胞水平并且抑制⑶33与一种或多种⑶33配体之间的相互作用。6.如权利要求1-5中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗体以小于2.Omgkg的EC50降低体内CD33的细胞水平。7.如权利要求1所述的抗⑶33抗体，其中所述抗⑶33抗体抑制⑶33与一种或多种⑶33配体之间的相互作用而不降低CD33的细胞水平。8.如权利要求1-7中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体抑制CD33的细胞表面簇集。9.如权利要求1-8中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体抑制一种或多种CD33活性。10.如权利要求9所述的抗CD33抗体，其中所述一种或多种CD33活性选自由以下组成的组：aCD33结合到含有唾液酸的糖蛋白、或含有唾液酸的糖脂、或两者；b调节一种或多种抗炎细胞因子的表达，任选地其中所述一种或多种抗炎细胞因子选自由以下组成的组：IL-4、IL-lO、IL-13、IL-35、IL-16、TGF-0、IL-lRa、G-CSF、WTNF、IFN-ma、IFN-mb、或IL-6的可溶性受体；c调节选自由以下组成的组的一种或多种细胞中一种或多种抗炎细胞因子的表达：巨噬细胞、树突细胞、骨髓衍生的树突细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、嗜中性粒细胞、以及小神经胶质细胞；d调节一种或多种促炎细胞因子的表达，任选地其中所述一种或多种促炎细胞因子选自由以下组成的组：正1^14、正113、11^-10、了陬-€[、几-6、11^-8、〇^、11^-2〇家族成员、1^正、IFN-γ、0SM、CNTF、GM-CSF、IL-ll、IL-12、IL-17、IL-18、IL-23、CXCL10、IL-33、CRP、IL-33、MCP-I、以及MIP-1-β;e调节选自由以下组成的组的一种或多种细胞中一种或多种促炎细胞因子的表达：巨噬细胞、树突细胞、骨髓衍生的树突细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、嗜中性粒细胞、以及小神经胶质细胞；f调节选自由以下组成的组的一种或多种蛋白质的表达:Clqa、ClqB、ClqC、Cls、ClR、C4、C2、C3、ITGB2、HMOXI、LAT2、CASPI、CSTA、VSIG4、MS4A4A、C3AR1、GPXI、TyroBP、AL0X5AP、ITGAM、SLC7A7、CD4、ITGAX、PYCARD、CD14、CD16、HLA-DR、以及CCR2;g减少由选自由以下组成的组的一种或多种细胞诱导的T细胞增殖:树突细胞、骨髓衍生的树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、Ml小神经胶质细胞、活化的Ml小神经胶质细胞、M2小神经胶质细胞、巨噬细胞、Ml巨噬细胞、活化的Ml巨噬细胞、以及M2巨噬细胞；⑹减少选自由以下组成的组的一种或多种细胞的增殖:树突细胞、骨髓衍生的树突细胞、巨噬细胞、Ml巨噬细胞、活化的Ml巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、嗜中性粒细胞、小神经胶质细胞、Ml小神经胶质细胞、活化的Ml小神经胶质细胞、以及M2小神经胶质细胞；i降低选自由以下组成的组的一种或多种细胞的一种或多种功能:树突细胞、骨髓衍生的树突细胞、巨噬细胞、M1巨噬细胞、活化的Ml巨噬细胞、M2巨噬细胞、单核细胞、破骨细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、粒细胞、嗜中性粒细胞、小神经胶质细胞、Ml小神经胶质细胞、活化的Ml小神经胶质细胞、以及M2小神经胶质细胞；j抑制对以下中的一种或多种的吞噬作用：凋亡神经元、神经组织碎片、功能失调的突触、非神经组织碎片、细菌、其他异物、致病性蛋白、致病性肽、致病性核酸、或肿瘤细胞；任选地其中所述致病性核酸是反义GGCCCCG2C4重复序列扩增RNA，所述致病性蛋白选自由以下组成的组:淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、a-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72染色体9开放阅读框72、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降血钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易小体、心房利钠因子、胰岛淀粉样蛋白多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、泌乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白、免疫球蛋白轻链AL、S-IBM蛋白、重复序列相关非ATGRAN翻译产物、二肽重复序列DPR肽、甘氨酸-丙氨酸GA重复序列肽、甘氨酸-脯氨酸GP重复序列肽、甘氨酸-精氨酸®R重复序列肽、脯氨酸-丙氨酸PA重复序列肽、泛素、以及脯氨酸-精氨酸PR重复序列肽，并且所述肿瘤细胞来自选自由以下组成的组的癌症:膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、或甲状腺癌；⑹结合到肿瘤细胞上的CD33配体；l结合到选自由以下组成的组的细胞上的CD33配体：嗜中性粒细胞、树突细胞、骨髓衍生的树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、以及巨噬细胞；m抑制由以下中的一种或多种进行的肿瘤细胞杀伤：小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓衍生的树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞、或细胞毒性T细胞；⑹抑制以下中的一种或多种的抗肿瘤细胞增殖活性:小神经胶质细胞、巨噬细胞、树突细胞、骨髓衍生的树突细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞、或细胞毒性T细胞；〇促进以下中的一种或多种的功能性:免疫抑制树突细胞、免疫抑制巨噬细胞、非致瘤性骨髓来源的抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞、免疫抑制嗜中性粒细胞、以及调节性T细胞；P增强以下中的一种或多种到肿瘤中的浸润：免疫抑制树突细胞、免疫抑制巨噬细胞、非致瘤性骨髓来源的抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞、免疫抑制嗜中性粒细胞、非致瘤性⑶45+CD14+骨髓细胞、以及调节性T细胞；q增加肿瘤中、外周血中或其他淋巴样器官中的促进肿瘤的骨髓粒细胞性免疫抑制性细胞和或非致瘤性CD45+CD14+骨髓细胞的数量；r增强非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC和或非致瘤性CD45+CD14+骨髓细胞的促进肿瘤的活性；s增强非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC和或非致瘤性CD45+CD14+骨髓细胞的存活；⑴减少具有肿瘤杀伤潜力的肿瘤特异性T淋巴细胞的活化；u减少具有肿瘤杀伤潜力的CD45+CD3+T淋巴细胞的活化；V减少具有肿瘤杀伤潜力的肿瘤特异性NK细胞的浸润；w减少具有增强免疫应答的潜力的肿瘤特异性B淋巴细胞的浸润；X减少具有肿瘤杀伤潜力的肿瘤特异性T淋巴细胞的浸润；y减少⑶45+CD3+T淋巴细胞的浸润；z增加肿瘤体积；aa增加肿瘤生长速率；以及bb降低调节抗肿瘤T细胞应答的一种或多种免疫疗法或一种或多种化疗剂和或癌症疫苗的效力，任选地其中所述一种或多种免疫疗法是靶向选自由以下组成的组的一种或多种蛋白质的免疫疗法：CD40、0X40、I⑶S、CD28、CD1374-lBB、CD27、GITR、PD-Ll、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、BTLA、KIR、GAL9、ΊΊΜ3、A2AR、LAG、DR-5、TREMl、TREM2、CSF-I受体、以及其任何组合。11.如权利要求1-8中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体表现出选自由以下组成由以下组成的组的一种或多种活性：a增加肿瘤浸润CD3+T细胞的数量；⑹降低非致瘤性CD14+骨髓细胞中的CD33的细胞水平，任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞是肿瘤浸润细胞或者任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞存在于血液中；c减少非致瘤性CD14+骨髓细胞的数量，任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞是肿瘤浸润细胞或者任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞存在于血液中；⑹降低一种或多种细胞中的PD-Ll水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;e降低一种或多种细胞中的PD-L2水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;f降低一种或多种细胞中的B7-H2水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;g降低一种或多种细胞中的B7-H3水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;h降低一种或多种细胞中的CD200R水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;i降低一种或多种细胞中的CD163水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;j降低一种或多种细胞中的CD206水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;⑹降低实体瘤的肿瘤生长速率；⑴减小肿瘤体积；m增加一种或多种ro-i抑制剂的效力；⑹增加一种或多种检查点抑制剂疗法和或免疫调节疗法的效力，任选地其中所述一种或多种检查点抑制剂疗法和或免疫调节疗法靶向以下中的一种或多种:CTL4、腺苷途径、PD-Ll、PD-L2、0X40、ΊΊΜ3、LAG3、或其任何组合〇增加一种或多种化疗剂的效力，任选地其中所述化疗剂中的一种或多种是吉西他滨、卡培他滨、蒽环类药物、多柔比星Adriamydn"、表柔比星EHence'、紫杉烷类、紫杉醇Taxol®、多西他赛Taxotereig、5-氟尿嘧啶（5-FU、环磷酰胺Cytoxan®、卡铂Paraplatinκ',以及其任何组合；P在非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC存在下增加T细胞的增殖；q抑制非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC的分化、存活、和或一种或多种功能；以及r当偶联到化学毒素或放射性毒素时杀灭实体瘤和相关联的血管中的CD33表达免疫抑制非致瘤性骨髓细胞和或非致瘤性CD14表达细胞。12.如权利要求1-11中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体结合不连续的CD33表位。13.如权利要求12所述的抗CD33抗体，其中所述不连续的CD33表位包含两个或更多个肽、三个或更多个肽、四个或更多个肽、五个或更多个肽、六个或更多个肽、七个或更多个肽、八个或更多个肽、九个或更多个肽、或10个或更多个肽。14.如权利要求13所述的抗CD33抗体，其中所述肽中的每一个包含五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个、八个或更多个、九个或更多个、10个或更多个、11个或更多个、12个或更多个、13个或更多个、14个或更多个、15个或更多个、16个或更多个、17个或更多个、18个或更多个、19个或更多个、或20个或更多个SEQIDNO:1的氨基酸序列的氨基酸残基；或五个或更多个、六个或更多个、七个或更多个、八个或更多个、九个或更多个、10个或更多个、11个或更多个、12个或更多个、13个或更多个、14个或更多个、15个或更多个、16个或更多个、17个或更多个、18个或更多个、19个或更多个、或20个或更多个在哺乳动物CD33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的氨基酸序列的氨基酸残基。15.如权利要求I-11中任一项所述的抗⑶33抗体，其中所述抗⑶33抗体结合到⑶33的构象表位。16.如权利要求1-11中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体结合到一种或多种氨基酸，所述一种或多种氨基酸在SEQIDN0:1的氨基酸残基19-259、19-135、145_228、或229-259内；或在哺乳动物⑶33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基19-259、19-135、145-228、或229-259的氨基酸残基内。17.如权利要求I-11中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体结合到选自由以下组成的组的氨基酸残基内的一种或多种氨基酸：i.SEQIDNO:1的氨基酸残基39-51，或在哺乳动物⑶33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基39-51的氨基酸残基；ii.SEQIDNO:1的氨基酸残基48-54,或在哺乳动物⑶33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基48-54的氨基酸残基；iii.SEQIDNO:1的氨基酸残基88-98,或在哺乳动物⑶33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基88-98的氨基酸残基；iv.SEQIDNO:1的氨基酸残基110-120,或在哺乳动物⑶33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基110-120的氨基酸残基；V.SEQIDNO:1的氨基酸残基112-122,或在哺乳动物⑶33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基112-122的氨基酸残基；vi.SEQIDNO:1的氨基酸残基39-51、88-98和110-120，或在哺乳动物CD33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基39-51、88-98和110-120的氨基酸残基；vii.SEQIDN0:1的氨基酸残基39-51、88-98和112-122,或在哺乳动物CD33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基39-51、88-98和112-122的氨基酸残基;并且viii.SEQIDNO:1的氨基酸残基39-51、88-98、110-120和112-122，或在哺乳动物CD33蛋白上的对应于SEQIDN0:1的氨基酸残基39-51、88-98、110-120和112-122的氨基酸残基。18.如权利要求1-11中任一项所述的抗⑶33抗体，其中所述抗⑶33抗体结合到SEQID冊：1的选自由以下组成的组的一种或多种氨基酸残基：018、？19、似02144、？46、¥49、Y50、K52、以及N53,或结合到哺乳动物⑶33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的选自由以下组成的组的氨基酸残基的一种或多种氨基酸残基:D18、P19、N20、F21、F44、P46、Y49、Y50、K52、及N53〇19.如权利要求1-18中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体与选自由以下组成的组的一种或多种抗体竞争结合到CD33:lA8、2B4、2E12、2F5、3A12a、3A12b、6A3a、6A3b、6C7a、6C7b、以及其任何组合。20.如权利要求1-19中任一项所述的抗CD33抗体，其中CD33的所述细胞水平在选自由以下组成的组的原代细胞上测量:树突细胞、骨髓衍生的树突细胞、单核细胞、小神经胶质细胞、T细胞、以及巨噬细胞，或在细胞系上测量，并且其中CD33的所述细胞水平利用体外细胞测定来测量。21.如权利要求1-20中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述一种或多种CD33配体选自由以下组成的组:在红细胞上表达的⑶33配体、在细菌细胞上表达的⑶33配体、在凋亡细胞上表达的⑶33配体、在肿瘤细胞上表达的⑶33配体、在病毒上表达的⑶33配体、在树突细胞上表达的⑶33配体、在神经细胞上表达的⑶33配体、在神经胶质细胞上表达的⑶33配体、在小神经胶质细胞上表达的⑶33配体、在星形胶质细胞上表达的⑶33配体、β淀粉样蛋白斑上的⑶33配体、Tau缠结上的⑶33配体、致病性蛋白上的⑶33配体、致病性肽上的⑶33配体、在巨噬细胞上表达的⑶33配体、在自然杀伤细胞上表达的⑶33配体、在T细胞上表达的⑶33配体、在T辅助细胞上表达的⑶33配体、在细胞毒性T细胞上表达的⑶33配体、在B细胞上表达的CD33配体、在肿瘤包埋的免疫抑制树突细胞上表达的CD33配体、在肿瘤包埋的免疫抑制巨噬细胞上表达的⑶33配体、在非致瘤性骨髓来源的抑制细胞上表达的⑶33配体、在调节性T细胞上表达的CD33配体、分泌粘蛋白、唾液酸、含有唾液酸的糖脂、含有唾液酸的糖蛋白、含有α-2,6连接的唾液酸的糖脂、含有α-2,6连接的唾液酸的糖蛋白、含有α-2,3连接的唾液酸的糖脂、含有α_2,3连接的唾液酸的糖蛋白、α-l酸性糖蛋白（AGP、CD24蛋白、以及神经节苷脂。22.如权利要求1-21中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述轻链可变结构域、或所述重链可变结构域、或两者包含选自抗体的HVR-LI、HVR-L2、HVR-L3、HVR-Hl、HVR-H2、以及HVR-H3的至少一个、两个、三个、四个、五个、或六个HVR，所述抗体选自由以下组成的组：IA8、2B4、2E12、2E12.1、2F5、2F5.1、3A12a、3A12b、6A3a、6A3b、6C7a、6C7b、以及6C7·2。23.如权利要求22所述的抗⑶33抗体，其中：a所述HVR-Ll包含SEQIDNO:9的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDNO:12的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:15的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:18的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDNO:22的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:26的氨基酸序列；⑹所述HVR-Ll包含SEQIDNO:10的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDNO:13的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:16的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:19的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:23的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:27的氨基酸序列；c所述HVR-Ll包含SEQIDNO:10的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDNO:69的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:72的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:19的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:23的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:27的氨基酸序列；⑹所述HVR-Ll包含SEQIDNO:11的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDNO:14的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:17的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:20的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:24的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:28的氨基酸序列；e所述HVR-Ll包含SEQIDN0:68的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDN0:71的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:74的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:75的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:77的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:28的氨基酸序列；f所述HVR-Ll包含SEQIDNO:67的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDNO:70的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:73的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:21的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:25的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:29的氨基酸序列；g所述HVR-Ll包含SEQIDNO:67的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDNO:70的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:73的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:21的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:76的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:29的氨基酸序列；⑹所述HVR-Hl包含SEQIDN0:21的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:25的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:29的氨基酸序列；⑴所述HVR-Hl包含SEQIDN0:21的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:76的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:29的氨基酸序列；j所述HVR-Ll包含SEQIDNO:184的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDNO:185的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:17的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:75的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDNO:186的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:187的氨基酸序列；⑹所述HVR-Ll包含SEQIDNO:10的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDNO:13的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:72的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:231的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:23的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:27的氨基酸序列;或者⑴所述HVR-Ll包含SEQIDN0:228的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDN0:229的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:230的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:232的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDNO:233的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:29的氨基酸序列。24.如权利要求1-21中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包含：aHVR-Ll，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDN0:9-ll、SEQIDN0:67、SEQIDN0:68、SEQIDN0:184、以及SEQIDN0:228，或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDN0:9-11、SEQIDN0:67、SEQIDN0:68、SEQIDN0:184、WSEQIDN0:228;⑹HVR-L2,其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDN0:12-14、SEQIDNO:69-71、SEQIDN0:185、以及SEQIDN0:229,或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDN0:12-14、SEQIDN0:69-71、SEQIDNO:185、以及SEQIDN0:229;以及cHVR-L3,其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDN0:15-17、SEQIDNO:72-74和SEQIDNO:230,或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDNO:15-17、SEQIDNO:72-74和SEQIDNO:230;并且其中所述重链可变结构域包含：aHVR-Hl，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:18-21、SEQIDNO:75、SEQIDN0:231、以及SEQIDN0:232,或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDN0:18-21、SEQIDN0:75、SEQIDN0:231、以及SEQIDNO:232；⑹HVR-H2,其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:22-25、SEQIDNO:76、SEQIDN0:77、SEQIDN0:186、以及SEQIDN0:233，或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDNO:22-25、SEQIDNO:76、SEQIDNO:77、SEQIDNO:186、以及SEQIDNO:233;以及cHVR-H3,其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:26-29和SEQIDNO:187,或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDNO:26-29和SEQIDNO:187。25.如权利要求1-21中任一项所述的抗⑶33抗体，其中所述抗⑶33抗体包含:轻链可变结构域，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDN0:30-48、SEQIDN0:112-153、SEQIDN0:192-202、以及SEQIDN0:241-243;和或重链可变结构域，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDN0:49-66、SEQIDN0:154-183、SEQIDN0:203-213、以及SEQIDNO:244-246。26.如权利要求1-21中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体包含:选自由以下组成的组的抗体的轻链可变结构域：IA8、2B4、2E12、2E12.1、2F5、2F5.1、3A12a、3A12b、6八3、6六313、607、60713、以及607.2;和或选自由以下组成的组的抗体的重链可变结构域：lA8、2B4、2E12、2E12.1、2F5、2F5.1、3A12a、3A12b、6A3a、6A3b、6C7a、6C7b、#6C7.2。27.—种分离的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体结合到一种或多种氨基酸，所述一种或多种氨基酸在SEQIDNO:1的氨基酸残基19-259、19-135、145-228、或229-259内；或在哺乳动物CD33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基19-259、19-135、145-228、或229-259的氨基酸残基内。28.如权利要求27的权利要求所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体结合到选自由以下组成的组的氨基酸残基内的一种或多种氨基酸：i.SEQIDNO:1的氨基酸残基39-51，或在哺乳动物⑶33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基39-51的氨基酸残基；ii.SEQIDNO:1的氨基酸残基48-54,或在哺乳动物⑶33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基48-54的氨基酸残基；iii.SEQIDNO:1的氨基酸残基88-98,或在哺乳动物⑶33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基88-98的氨基酸残基；iv.SEQIDNO:1的氨基酸残基110-120,或在哺乳动物⑶33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基110-120的氨基酸残基；V.SEQIDNO:1的氨基酸残基112-122,或在哺乳动物⑶33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基112-122的氨基酸残基；vi.SEQIDNO:1的氨基酸残基39-51、88-98和110-120，或在哺乳动物CD33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基39-51、88-98和110-120的氨基酸残基；vii.SEQIDN0:1的氨基酸残基39-51、88-98和112-122,或在哺乳动物CD33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的氨基酸残基39-51、88-98和112-122的氨基酸残基；以及viii.SEQIDNO:1的氨基酸残基39-51、88-98、110-120和112-122，或在哺乳动物CD33蛋白上的对应于SEQIDN0:1的氨基酸残基39-51、88-98、110-120和112-122的氨基酸残基。29.—种分离的抗⑶33抗体，其中所述抗⑶33抗体结合到SEQIDNO:1的选自由以下组成的组的一种或多种氨基酸残基:D18、P19、N20、F21、F44、P46、Y49、Y50、K52、WN53，Sg合到哺乳动物⑶33蛋白上的对应于SEQIDNO:1的选自由以下组成的组的氨基酸残基的一种或多种氨基酸残基:D18、P19、N20、F21、F44、P46、Y49、Y50、K52、WN53。30.—种分离的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述重链可变结构域、或所述轻链可变结构域、或两者包含选自抗体的HVR-L1、HVR-L2、HVR-L3、HVR-Hl、HVR-H2、以及HVR-H3的至少一个、两个、三个、四个、五个、或六个HVR，所述抗体选自由以下组成的组：lA8、2B4、2E12、2E12·l、2F5、2F5·l、3A12a、3A12b、6A3a、6A3b、6C7a、6C7b、6C7·2、以及其任何组合。31.如权利要求30所述的抗⑶33抗体，其中：a所述HVR-Ll包含SEQIDNO:9的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDNO:12的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:15的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:18的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDNO:22的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:26的氨基酸序列；⑹所述HVR-Ll包含SEQIDNO:10的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDNO:13的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:16的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:19的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:23的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:27的氨基酸序列；c所述HVR-Ll包含SEQIDNO:10的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDNO:69的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:72的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:19的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:23的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:27的氨基酸序列；⑹所述HVR-Ll包含SEQIDNO:11的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDNO:14的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:17的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:20的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:24的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:28的氨基酸序列；e所述HVR-Ll包含SEQIDN0:68的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDN0:71的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:74的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:75的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:77的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:28的氨基酸序列；f所述HVR-Ll包含SEQIDNO:67的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDNO:70的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:73的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:21的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:25的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:29的氨基酸序列；g所述HVR-Ll包含SEQIDNO:67的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDNO:70的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:73的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:21的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:76的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:29的氨基酸序列；⑹所述HVR-Hl包含SEQIDN0:21的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:25的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:29的氨基酸序列；⑴所述HVR-Hl包含SEQIDN0:21的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:76的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:29的氨基酸序列；j所述HVR-Ll包含SEQIDNO:184的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDNO:185的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:17的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:75的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDNO:186的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:187的氨基酸序列；⑹所述HVR-Ll包含SEQIDNO:10的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDNO:13的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:72的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:231的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDN0:23的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:27的氨基酸序列;或者⑴所述HVR-Ll包含SEQIDN0:228的氨基酸序列，所述HVR-L2包含SEQIDN0:229的氨基酸序列，所述HVR-L3包含SEQIDNO:230的氨基酸序列，所述HVR-Hl包含SEQIDNO:232的氨基酸序列，所述HVR-H2包含SEQIDNO:233的氨基酸序列，并且所述HVR-H3包含SEQIDNO:29的氨基酸序列。32.如权利要求30所述的抗CD33抗体，其中所述轻链可变结构域包含：aHVR-Ll，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDN0:9-ll、SEQIDN0:67、SEQIDN0:68、SEQIDN0:184、以及SEQIDN0:228，或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDN0:9-11、SEQIDN0:67、SEQIDN0:68、SEQIDN0:184、WSEQIDN0:228;⑹HVR-L2,其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDN0:12-14、SEQIDNO:69-71、SEQIDN0:185、以及SEQIDN0:229,或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDN0:12-14、SEQIDN0:69-71、SEQIDNO:185、以及SEQIDN0:229;以及cHVR-L3,其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDN0:15-17、SEQIDNO:72-74和SEQIDNO:230,或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDNO:15-17、SEQIDNO:72-74和SEQIDNO:230;并且其中所述重链可变结构域包含：aHVR-Hl，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:18-21、SEQIDNO:75、SEQIDN0:231、以及SEQIDN0:232,或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDN0:18-21、SEQIDN0:75、SEQIDN0:231、以及SEQIDNO:232；⑹HVR-H2,其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:22-25、SEQIDNO:76、SEQIDN0:77、SEQIDN0:186、以及SEQIDN0:233，或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDNO:22-25、SEQIDNO:76、SEQIDNO:77、SEQIDNO:186、以及SEQIDNO:233;以及cHVR-H3,其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:26-29和SEQIDNO:187,或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDNO:26-29和SEQIDNO:187。33.—种分离的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体包含：轻链可变结构域，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDN0:30-48、SEQIDN0:112-153、SEQIDN0:192-202、以及SEQIDN0:241-243;和或重链可变结构域，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDN0:49-66、SEQIDNO:154-183、SEQIDN0:203-213、以及SEQIDNO:244-246〇34.—种分离的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体包含:选自由以下组成的组的抗体的轻链可变结构域：IA8、2B4、2E12、2E12·I、2F5、2F5·I、3A12a、3A12b、6A3a、6A3b、6C7a、6C7b、以及6C7.2;和或选自由以下组成的组的抗体的重链可变结构域：IA8、2B4、2E12、2E12.1、2F5、2F5·I、3A12a、3A12b、6A3a、6A3b、6C7a、6C7b、以及6C7·2。35.—种分离的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体与选自由以下组成的组的一种或多种抗体竞争结合到CD33:1A8、2B4、2E12、2E12.1、2F5、2F5.l、3A12a、3A12b、6A3a、6A3b、6C7a、6C7b、6C7.2、以及其任何组合。36.—种分离的抗CD33抗体，其与选自由以下组成的组的抗体结合基本上相同的CD33表位：lA8、2B4、2E12、2E12.1、2F5、2F5.1、3A12a、3A12b、6A3a、6A3b、6C7a、6C7b、#6C7.2。37.—种分离的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包含：aHVR-Ll，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDN0:9-ll、SEQIDN0:67、SEQIDN0:68、SEQIDN0:184、以及SEQIDN0:228，或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDN0:9-11、SEQIDN0:67、SEQIDN0:68、SEQIDN0:184、WSEQIDN0:228;⑹HVR-L2,其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDN0:12-14、SEQIDNO:69-71、SEQIDN0:185、以及SEQIDN0:229,或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDN0:12-14、SEQIDN0:69-71、SEQIDNO:185、以及SEQIDN0:229;以及cHVR-L3,其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDN0:15-17、SEQIDNO:72-74和SEQIDNO:230,或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDNO:15-17、SEQIDNO:72-74和SEQIDNO:230;或者其中所述重链可变结构域包含：aHVR-Hl，其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:18-21、SEQIDNO:75、SEQIDN0:231、以及SEQIDN0:232,或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDN0:18-21、SEQIDN0:75、SEQIDN0:231、以及SEQIDNO:232；⑹HVR-H2,其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:22-25、SEQIDNO:76、SEQIDN0:77、SEQIDN0:186、以及SEQIDN0:233，或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDNO:22-25、SEQIDNO:76、SEQIDNO:77、SEQIDNO:186、以及SEQIDNO:233;以及cHVR-H3,其包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQIDNO:26-29和SEQIDNO:187,或包含与选自由以下组成的组的氨基酸序列具有至少约90%同源性的氨基酸序列：SEQIDNO:26-29和SEQIDNO:187。38.如权利要求1-37中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗体属于IgG类别、IgM类另IJ、或IgA类别。39.如权利要求38所述的抗⑶33抗体，其中所述抗⑶33抗体具有IgGl、IgG2、IgG3、或IgG4同种型。40.如权利要求39所述的抗CD33抗体，其中所述抗体结合抑制性Fc受体。41.如权利要求40所述的抗⑶33抗体，其中所述抑制性Fc受体是抑制性Fc-γ受体IIBFeyIIB。42.如权利要求41所述的抗⑶33抗体，其中：a所述抗⑶33抗体具有人IgGl同种型，并且包含在Fc区中的在选自由以下组成的组的残基位置处的一个或多个氨基酸取代:N297A、D265A、D270A、L234A、L235A、G237A、P238D、L328E、E233D、G237D、H268D、P271G、A330R、C226S、C229S、E233P、L234V、L234F、L235E、P331S、S267E、L328F、A330L、M252Y、S254T、T256E、N297Q、P238S、P238A、A327Q、A327G、P329A、K322A、T394D、以及其任何组合，其中所述残基的编号根据EU编号；或者包含在所述Fe区中的在对应于甘氨酸236的位置处的氨基酸缺失；⑹所述抗⑶33抗体具有人IgGl同种型并且包含IgG2同种型重链恒定结构域IChl和铰链区，任选地其中所述IgG2同种型CHl和铰链区包含氨基酸序列ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPSEQIDNO:214，并且任选地其中所述抗体Fe区包含S267E氨基酸取代、或L328F氨基酸取代、或两者、和或N297A或N297Q氨基酸取代，其中所述残基的编号根据EU编号；c所述抗CD33抗体具有人IgG2同种型，并且包含在所述Fe区中的在选自由以下组成的组的残基位置处的一个或多个氨基酸取代：P238S、V234A、G237A、H268A、H268Q、V309L、A330S、P331S、C214S、C232S、C233S、S267E、L328F、M252Y、S254T、T256E、H268E、N297A、N297Q、A330L、以及其任何组合，其中所述残基的编号根据EU编号；d所述抗CD33抗体具有人IgG4同种型，并且包含在所述Fe区中的在选自由以下组成的组的残基位置处的一个或多个氨基酸取代：L235A、G237A、S228P、L236E、S267E、E318A、L328F、M252Y、S254T、T256E、E233P、F234V、L234AF234A、S228P、S241P、L248E、T394D、N297A、N297Q、L235E、以及其任何组合，其中所述残基的编号根据EU编号;或者e所述抗CD33抗体具有杂合IgG24同种型，并且任选地其中所述抗体包含含有人IgG2的氨基酸118至260和人IgG4的氨基酸261至447的氨基酸序列，其中所述残基的编号根据EU或Kabat编号。43.如权利要求39所述的抗⑶33抗体，其中：a所述抗⑶33抗体具有人IgGl同种型，并且包含在Fe区中的在选自由以下组成的组的残基位置处的一个或多个氨基酸取代:N297A、N297Q、D270A、D265A、L234A、L235A、C226S、C229S、P238S、E233P、L234V、P238A、A327Q、A327G、P329A、K322A、L234F、L235E、P331S、T394D、A330L、M252Y、S254T、T256E、以及其任何组合，其中所述残基的编号根据EU编号；b所述抗CD33抗体具有人IgG2同种型，并且包含在所述Fe区中的在选自由以下组成的组的残基位置处的一个或多个氨基酸取代：P238S、V234A、G237A、H268A、H268Q、H268E、V309L、N297A、N297Q、A330S、P331S、C232S、C233S、M252Y、S254T、T256E、以及其任何组合，其中所述残基的编号根据EU编号;或者c所述抗CD33抗体具有人IgG4同种型，并且包含在所述Fc区中的在选自由以下组成的组的残基位置处的一个或多个氨基酸取代：E233P、F234V、L234AF234A、L235A、G237A、E318A、S228P、L236E、S241P、L248E、T394D、M252Y、S254T、T256E、N297A、N297Q、以及其任何组合，其中所述残基的编号根据EU编号。44.如权利要求43所述的抗⑶33抗体，其中：a所述Fc区还包含在选自由以下组成的组的位置处的一个或多个额外的氨基酸取代:A330L、L234F;L235E、P331S、以及其任何组合，其中所述残基的编号根据EU编号；b所述Fe区还包含在选自由以下组成的组的位置处的一个或多个额外的氨基酸取代:M252Y、S254T、T256E、以及其任何组合，其中所述残基的编号根据EU编号;或者c所述Fe区还包含根据EU编号的S228P氨基酸取代。45.如权利要求1-44中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述CD33蛋白是哺乳动物蛋白或人蛋白。46.如权利要求1-45中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述CD33蛋白是野生型蛋白。47.如权利要求1-45中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述CD33蛋白是天然存在的变体。48.如权利要求1-47中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述CD33蛋白在选自由以下组成的组的一种或多种细胞上表达:人树突细胞、人巨噬细胞、人单核细胞、人破骨细胞、人嗜中性粒细胞、人T细胞、人T辅助细胞、人细胞毒性T细胞、人粒细胞、以及人小神经胶质细胞。49.如权利要求1-48中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体特异性地结合到哺乳动物CD33蛋白、或人CD33蛋白、或两者。50.如权利要求1-48中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体特异性地结合到人⑶33、或小鼠⑶33、或两者。51.如权利要求1-50中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体以pH依赖性方式结合CD33。52.如权利要求51所述的抗⑶33抗体，其中所述抗⑶33抗体在范围是5.5至8.0的pH下结合CD33。53.如权利要求51所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体在小于5.0的pH下与CD33解离。54.如权利要求1-53中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体是结合到包含在人CD33蛋白或哺乳动物CD33蛋白上的氨基酸残基的表位的抗体片段。55.如权利要求1-53中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体是结合到选自由以下组成的组的一种或多种人蛋白的抗体片段:人CD33、人CD33的天然存在的变体、以及人CD33的疾病变体。56.如权利要求54或权利要求55所述的抗CD33抗体，其中所述抗体片段交联到第二抗体片段，所述第二抗体片段结合到选自由以下组成的组的一种或多种人蛋白：人CD33、人CD33的天然存在的变体、以及人CD33的疾病变体。57.如权利要求54-56中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述片段是?13113’、？13’-SH、Fab’）2、Fv、或scFv片段。58.如权利要求1-57中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体是鼠抗体。59.如权利要求1-57中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体是人源化抗体、双特异性抗体、单克隆抗体、多价抗体、偶联抗体、或嵌合抗体。60.如权利要求1-57中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体是识别第一抗原和第二抗原的双特异性抗体。61.如权利要求60所述的抗⑶33抗体，其中所述第一抗原是⑶33并且所述第二抗原是：a有助于跨血脑屏障转运的抗原；b有助于跨血脑屏障转运的抗原，其选自由以下组成的组:转铁蛋白受体TR、胰岛素受体HIR、胰岛素样生长因子受体（IGFR、低密度脂蛋白受体相关蛋白1和低密度脂蛋白受体相关蛋白2LPR-1和LPR-2、白喉毒素受体、CRM197、美洲驼单结构域抗体、TMEM30㈧、蛋白转导结构域、TAT、Syn-B、穿膜肽、聚精氨酸肽、血管肽、以及ANG1005;c致病物质，其选自由致病性肽或蛋白质和致病性核酸组成的组，其中所述致病性肽或蛋白质选自由以下组成的组:淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72染色体9开放阅读框72、c9RAN蛋白、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降血钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易小体、心房利纳因子、膜岛淀粉样蛋白多妝、膜岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、泌乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白、免疫球蛋白轻链AUS-IBM蛋白、重复序列相关非ATGRAN翻译产物、二肽重复序列DPR肽、甘氨酸-丙氨酸®A重复序列肽、甘氨酸-脯氨酸®P重复序列肽、甘氨酸-精氨酸®R重复序列肽、脯氨酸-丙氨酸PA重复序列肽、泛素、以及脯氨酸-精氨酸（PR重复序列肽，并且所述致病性核酸是反义GGCCCCG2C4重复序列扩增RNA；d在免疫细胞上表达的配体和或蛋白质，其中所述配体和或蛋白质选自由以下组成的组040、0父40、1：05、〇28、〇01374-188、〇027、61丁1?、？0-1^、：1'1^4、？0-1^、？0-1、87-H3、B7-H4、HVEM、BTLA、KIR、GAL9、ΊΊM3、A2AR、LAG、以及磷脂酰丝氨酸；以及e在一种或多种肿瘤细胞上表达的蛋白质、脂质、多糖、或糖脂。62.如权利要求1-61中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体是偶联抗体。63.如权利要求62所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体偶联到可检测的标记物、毒素、或治疗剂。64.如权利要求63所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体偶联到选自由以下组成的组的毒素:蓖麻毒素、蓖麻毒素A-链、多柔比星、柔红霉素、美登木素生物碱、紫杉酸、溴化乙锭、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春花碱、秋水仙碱、二羟基炭疽菌素二酮、放线菌素、白喉毒素、假单胞杆菌外毒素PEA、PE40、相思豆毒素、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、α-帚曲菌素、白树毒素、丝林霉素、局限曲霉素、酚霉素、依诺霉素、麻疯树毒蛋白、巴豆毒蛋白、加利车霉素、肥皂草抑制剂、糖皮质激素、奥瑞斯他汀、金霉素、钇、铋、考布他汀、多卡霉素、多拉司它汀、cc1065、以及顺铂。65.如权利要求1-64中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体用于与特异性地结合致病物质的一种或多种抗体组合，所述致病物质选自由以下组成的组:致病性肽、致病性蛋白、淀粉样蛋白β、寡聚淀粉样蛋白β、淀粉样蛋白β斑、淀粉样蛋白前体蛋白或其片段、Tau、IAPP、α-突触核蛋白、TDP-43、FUS蛋白、C9orf72染色体9开放阅读框72、朊病毒蛋白、PrPSc、亨廷顿蛋白、降血钙素、超氧化物歧化酶、共济失调蛋白、共济失调蛋白1、共济失调蛋白2、共济失调蛋白3、共济失调蛋白7、共济失调蛋白8、共济失调蛋白10、路易小体、心房利钠因子、胰岛淀粉样蛋白多肽、胰岛素、载脂蛋白AI、血清淀粉样蛋白A、medin、泌乳素、转甲状腺素蛋白、溶菌酶、β2微球蛋白、凝溶胶蛋白、角膜上皮蛋白、抑半胱氨酸蛋白酶蛋白、免疫球蛋白轻链AUS-IBM蛋白、重复序列相关非ATGRAN翻译产物、二肽重复序列DPR肽、甘氨酸-丙氨酸GA重复序列肽、甘氨酸-脯氨酸®P重复序列肽、甘氨酸-精氨酸GR重复序列肽、脯氨酸-丙氨酸PA重复序列肽、泛素、和脯氨酸-精氨酸PR重复序列肽、以及其任何组合;或与结合免疫调节蛋白的一种或多种抗体组合，所述免疫调节蛋白选自由以下组成的组:CD40、0X40、IC0S、CD28、CD1374-lBB、CD27、GITR、PD-Ll、CTLA4、PD-L2、PD-1、B7-H3、B7-H4、HVEM、BTLA、KIR、GAL9、TIM3、A2AR、LAG、TREM1、TREM2、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-5、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-7、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-9、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-11、磷脂酰丝氨酸、致病性核酸、反义GGCCCCG2C4重复序列扩增RNA、以及其任何组合。66.如前述权利要求中任一项所述的抗CD33抗体，其中所述抗CD33抗体对于小鼠CD33具有约IOOnM至约IOOpM范围内、或小于IOOpM的解离常数Kd，并且其中所述Kd在25°C的温度下确定。67.—种的分离的核酸，其包含编码如前述权利要求中任一项所述的抗CD33抗体的核酸序列。68.—种载体，其包含如权利要求67所述的核酸。69.—种分离的宿主细胞，其包含如权利要求68所述的载体。70.—种产生抗⑶33抗体的方法，其包括培养如权利要求69所述的宿主细胞以产生所述抗⑶33抗体。71.如权利要求70所述的方法，其还包括回收由所述宿主细胞产生的所述抗⑶33抗体。72.—种分离的抗CD33抗体，其由如权利要求70或权利要求71所述的方法产生。73.—种药物组合物，其包含如权利要求1-66中任一项所述的抗⑶33抗体和药学上可接受的载体。74.—种预防、降低风险、或治疗选自由以下组成的组的疾病、病症或损伤的方法：痴呆、额颞叶痴呆、阿尔茨海默氏病、血管性痴呆、混合型痴呆、tau蛋白病、感染、以及癌症，所述方法包括向有需要的个体施用治疗有效量的降低CD33的细胞水平、或抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用、或两者的药剂。75.如权利要求74所述的方法，其中所述疾病、病症或损伤是癌症。76.如权利要求74或或权利要求书75所述的方法，其中所述癌症表达CD33或一种或多种CD33配体。77.如权利要求74-76中任一项所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组:膀胱癌、脑癌、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、子宫内膜癌、肾癌、肾细胞癌、肾盂癌、白血病、肺癌、黑素瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、纤维肉瘤、急性成淋巴细胞白血病ALL、急性骨髓性白血病AML、慢性淋巴细胞白血病CLL、慢性骨髓性白血病CML、以及多发性骨髓瘤。78.如权利要求74-77中任一项所述的方法，其中所述药剂抑制一种或多种CD33活性，所述一种或多种CD33活性选自由以下组成的组：a促进以下中的一种或多种的增殖、成熟、迀移、分化、和或功能性:免疫抑制树突细胞、免疫抑制巨噬细胞、免疫抑制嗜中性粒细胞、非致瘤性骨髓来源的抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞、非致瘤性CD14+骨髓细胞、以及调节性T细胞；b增强以下中的一种或多种到肿瘤中的浸润：免疫抑制树突细胞、免疫抑制巨噬细胞、免疫抑制嗜中性粒细胞、非致瘤性骨髓来源的抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞、以及调节性T细胞；c增加肿瘤中、外周血中或其他淋巴样器官中的促进肿瘤的骨髓粒细胞性免疫抑制性细胞和或非致瘤性CD14+骨髓细胞的数量；d增强非致瘤性骨髓来源的抑制细胞和或非致瘤性CD14+骨髓细胞的促进肿瘤的活性；e增加肿瘤中或外周血中的促进肿瘤的细胞因子的表达，任选地其中所述促进肿瘤的细胞因子是TGF-β或IL-10;f增加促进肿瘤的FoxP3+调节性T淋巴细胞的肿瘤浸润；g减少具有肿瘤杀伤潜力的肿瘤特异性T淋巴细胞的活化；⑹减少具有肿瘤杀伤潜力的肿瘤特异性T淋巴细胞的浸润；⑴减少具有肿瘤杀伤潜力的肿瘤特异性NK细胞的浸润；j降低NK细胞的肿瘤杀伤潜力；⑹减少具有增强免疫应答的潜力的肿瘤特异性B淋巴细胞的浸润；l增加肿瘤体积；m增加肿瘤生长速率；η增加转移；⑹增加肿瘤复发率；P增加一种或多种ro-i配体的表达；q降低调节抗肿瘤T细胞应答的一种或多种免疫疗法或一种或多种癌症疫苗的效力，任选地其中所述一种或多种免疫疗法是靶向选自由以下组成的组的一种或多种蛋白质的免疫疗法：CD40、0X40、IC0S、CD28、CD1374-lBB、CD27、GITR、PD-Ll、CTLA4、PD-L2、PD-l、B7-!13、87-!14、见^]\〇1'1^、111?、6厶1^9、1'頂3、厶2厶1?、1^6、01?-5、了1«]\11、了1«]\12、〇5卩-1受体、以及其任何组合；r抑制PLCγPKC钙动员；s抑制PI3KAkt、RasMAPK信号传导；以及t降低一种或多种化疗剂的效力，任选地其中所述化疗剂中的一种或多种是吉西他滨、卡培他滨、蒽环类药物、多柔比星Adriamyci#、表柔比星Ellenee®、紫杉烷类、紫杉醇Taxol®、多西他赛Taxotere®、:5-氟尿嘧啶（5-FU、环磷酰胺Cytoxaniw、卡铂Paraplatinκ、以及其任何组合。79.如权利要求74-77中任一项所述的方法，其中所述药剂表现出选自由以下组成由以下组成的组的一种或多种活性：a增加肿瘤浸润CD3+T细胞的数量；⑹降低非致瘤性CD14+骨髓细胞中的CD33的细胞水平，任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞是肿瘤浸润细胞或者任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞存在于血液中；c减少非致瘤性CD14+骨髓细胞的数量，任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞是肿瘤浸润细胞或者任选地其中所述非致瘤性CD14+骨髓细胞存在于血液中；⑹降低一种或多种细胞中的PD-Ll水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;e降低一种或多种细胞中的PD-L2水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;f降低一种或多种细胞中的B7-H2水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;g降低一种或多种细胞中的B7-H3水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;h降低一种或多种细胞中的CD200R水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;i降低一种或多种细胞中的CD163水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;j降低一种或多种细胞中的CD206水平，任选地其中所述一种或多种细胞是非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC;⑹降低实体瘤的肿瘤生长速率；⑴减小肿瘤体积；m增加一种或多种ro-i抑制剂的效力；⑹增加一种或多种检查点抑制剂疗法和或免疫调节疗法的效力，任选地其中所述一种或多种检查点抑制剂疗法和或免疫调节疗法靶向以下中的一种或多种:CTL4、腺苷途径、PD-Ll、PD-L2、0X40、ΊΊΜ3、LAG3、或其任何组合；〇增加一种或多种化疗剂的效力，任选地其中所述化疗剂中的一种或多种是吉西他滨、卡培他滨、蒽环类药物、多柔比星Adriamyein®、表柔比星EHence"、紫杉烷类、紫杉醇Taxolif、多西他赛Taxotere®V5-氟尿嘧啶（5-FU、环磷酰胺Cytoxan®、卡铂Paraplatin'"、以及其任何组合；P在非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC存在下增加T细胞的增殖；以及q抑制非致瘤性骨髓来源的抑制细胞MDSC的分化、存活、和或一种或多种功能；以及r当偶联到化学毒素或放射性毒素时杀灭实体瘤和相关联的血管中的CD33表达免疫抑制骨髓细胞和或CD14表达细胞。80.—种诱导或促进有需要的个体中的一种或多种免疫细胞的存活、成熟、功能性、迀移、或增殖的方法，其包括向所述个体施用治疗有效量的降低CD33的细胞水平、或抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用、或两者的药剂。81.如权利要求81所述的方法，其中所述一种或多种免疫细胞选自由以下组成的组:树突细胞、巨噬细胞、小神经胶质细胞、嗜中性粒细胞、T细胞、T辅助细胞、细胞毒性T细胞、以及其任何组合。82.如权利要求74-81中任一项所述的方法，其中所述药剂选自由以下组成的组:抗体、可溶性CD33受体、CD33-Fc融合蛋白、CD33免疫粘附素、可溶性唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素受体、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-Fc融合蛋白、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素免疫粘附素、反义分子、siRNA、小分子抑制剂、蛋白质、以及肽。83.如权利要求74-81中任一项所述的方法，其中所述药剂是分离的抗CD33抗体。84.如权利要求83所述的方法，其中所述抗CD33抗体是如权利要求1-66中任一项所述的抗⑶33抗体。85.—种降低有需要的个体中的以下各项的活性、功能性、或存活的方法：调节性T细胞、肿瘤包埋的免疫抑制树突细胞、肿瘤包埋的免疫抑制巨噬细胞、非致瘤性骨髓来源的抑制细胞、肿瘤相关巨噬细胞、急性骨髓性白血病AML细胞、慢性淋巴细胞白血病（CLL细胞、或慢性骨髓性白血病CML细胞，所述方法包括向所述个体施用治疗有效量的结合CD33或与CD33相互作用的药剂。86.如权利要求85所述的方法，其中所述药剂是分离的抗CD33抗体或抗CD33抗体偶联物。87.如权利要求86所述的方法，其中所述抗CD33抗体是如权利要求1-66中任一项所述的抗⑶33抗体。88.—种在有需要的个体中的一种或多种细胞上降低CD33的细胞水平、或抑制CD33与一种或多种CD33配体之间的相互作用、或两者的方法，其包括向所述个体施用治疗有效量的分离的抗CD33抗体。89.如权利要求88所述的方法，其中所述抗CD33抗体降低体内CD33的细胞水平。90.如权利要求88或权利要求89所述的方法，其中所述抗⑶33抗体以65pM至20pM范围内的EC5q降低CD33的细胞水平。91.如权利要求88-90中任一项所述的方法，其中所述抗⑶33抗体以约8.Omgkg至约2.0mgkg范围内的EC5Q降低体内CD33的细胞水平。92.如权利要求88-91中任一项所述的方法，其中所述抗CD33抗体对于人CD33具有300pM至IOpM范围内的解离常数Kd，其中所述Kd在大约25°C的温度下确定。93.如权利要求88-92中任一项所述的方法，其中所述抗⑶33抗体以200pM至IOpM范围内的EC5q结合到人树突细胞，其中所述EC5q在大约4°C的温度下确定。94.如权利要求88或权利要求89所述的方法，其中所述抗CD33抗体是如权利要求1-66中任一项所述的抗⑶33抗体。95.如权利要求74-94中任一项所述的方法，其中所述个体包含⑶33的变体。96.如权利要求95所述的方法，其中所述变体包含选自由以下组成的组的一种或多种多态性：dSNPrsl2459419cc、cl5KrT;以及其任何组合。97.如权利要求74-96中任一项所述的方法，其还包括向所述个体施用特异性地结合到抑制性检查点分子的至少一种抗体和或一种或多种标准或研究性抗癌疗法。98.如权利要求97所述的方法，其中特异性地结合到抑制性检查点分子的所述至少一种抗体与所述抗CD33抗体组合施用。99.如权利要求97或权利要求98所述的方法，其中特异性地结合到抑制性检查点分子的所述至少一种抗体选自由以下组成的组:抗I3D-Ll抗体、抗CTLA4抗体、抗PD-L2抗体、抗PD-1抗体、抗B7-H3抗体、抗B7-H4抗体、以及抗HVEM抗体、抗B淋巴细胞和T淋巴细胞衰减因子BTLA抗体、抗杀伤细胞抑制性受体KIR抗体、抗GAL9抗体、抗TIM3抗体、抗A2AR抗体、抗LAG-3抗体、抗磷脂酰丝氨酸抗体、抗CD27抗体、抗TNFa抗体、抗唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-5抗体、抗唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-7抗体、抗唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-9抗体、抗唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-11抗体、拮抗性抗TREMl抗体、拮抗性抗TREM2抗体、以及其任何组合。100.如权利要求97所述的方法，其中所述一种或多种标准或研究性抗癌疗法选自由以下组成的组:放射疗法、细胞毒性化学疗法、靶向疗法、伊马替尼疗法、曲妥珠单抗疗法、依那西普疗法、过继细胞移植ACT疗法、嵌合抗原受体T细胞移植CAR-T疗法、疫苗疗法、以及细胞因子疗法。101.如权利要求74-100中任一项所述的方法，其还包括向所述个体施用特异性地结合到抑制性细胞因子的至少一种抗体。102.如权利要求101所述的方法，其中特异性地结合到抑制性细胞因子的所述至少一种抗体与所述抗CD33抗体组合施用。103.如权利要求101或权利要求102所述的方法，其中特异性地结合到抑制性细胞因子的所述至少一种抗体选自由以下组成的组:抗CCL2抗体、抗CSF-I抗体、抗IL-2抗体、以及其任何组合。104.如权利要求74-103中任一项所述的方法，其还包括向所述个体施用特异性地结合到刺激性检查点蛋白的至少一种激动性抗体。105.如权利要求104所述的方法，其中特异性地结合到刺激性检查点蛋白的所述至少一种激动性抗体与所述抗CD33抗体组合施用。106.如权利要求104或权利要求105所述的方法，其中特异性地结合到刺激性检查点蛋白的至少一种激动性抗体选自由以下组成的组:激动剂抗CD40抗体、激动剂抗0X40抗体、激动剂抗ICOS抗体、激动剂抗CD28抗体、激动性抗TREMl抗体、激动性抗TREM2抗体、激动剂抗CDl374-1BB抗体、激动剂抗⑶27抗体、激动剂抗糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白GITR抗体、以及其任何组合。107.如权利要求74-106中任一项所述的方法，其还包括向所述个体施用至少一种刺激性细胞因子。108.如权利要求107所述的方法，其中所述至少一种刺激性细胞因子与所述抗CD33抗体组合施用。109.如权利要求107或权利要求108所述的方法，其中所述至少一种刺激性细胞因子选自由以下组成的组：1卩1^14、1卩113、11^-10、了呖-€[、11-6、11^-8、〇^、11^-2〇家族成员、1^1卩、IFN-γ、0SM、CNTF、GM-CSF、IL-ll、IL-12、IL-17、IL-18、IL-23、CXCL10、IL-33、CRP、IL-33、MCP-I、ΜΙΡ-1-β、以及其任何组合。110.—种选择有需要的受试者以供用结合CD33或与CD33相互作用的药剂治疗的方法，所述方法包括：a.从所述受试者获得样品；b.检测存在于所述受试者中的CD33等位基因；以及c.选择所述受试者以供用结合CD33或与CD33相互作用的所述药剂治疗，所述受试者具有一种或多种CD33等位基因，其中所述一种或多种⑶33等位基因选自由rs3865444Ae*rs3865444GG组成的组。111.一种评估有需要的受试者对于结合CD33或与CD33相互作用的药剂的应答性的方法，所述方法包括：a.在向所述受试者施用抗CD33抗体之前测量从所述受试者获得的血液样品中的非致瘤性骨髓细胞上的⑶45+和⑶14+的表达水平；b.向所述受试者施用治疗有效量的所述药剂；以及c.在施用所述抗CD33抗体之后测量从所述受试者获得的血液样品中的非致瘤性骨髓细胞上的⑶45+和⑶14+的表达水平，a其中在施用所述抗CD33抗体之后非致瘤性骨髓细胞上的CD45+CD14+水平降低指示所述受试者对于所述药剂具有应答性。112.如权利要求111所述的方法，其还包括施用一份或多份额外的治疗有效量的所述药剂。113.如权利要求110-112中任一项权利要求所述的方法，其中所述药剂选自由以下组成的组:抗体、可溶性⑶33受体、CD33-Fc融合蛋白、CD33免疫粘附素、可溶性唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素受体、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素-Fc融合蛋白、唾液酸结合性免疫球蛋白样凝集素免疫粘附素、反义分子、siRNA、小分子抑制剂、蛋白质、以及肽。114.如权利要求110-112中任一项所述的方法，其中所述药剂是分离的抗CD33抗体或抗CD33抗体偶联物。115.如权利要求113或114所述的方法，其中所述抗CD33抗体是如权利要求1-66中任一项所述的抗⑶33抗体。

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