申请/专利权人：青岛龙鼎生物技术有限公司

申请日：2020-12-29

公开（公告）日：2022-11-25

公开（公告）号：CN112522343B

主分类号：C12P19/02

分类号：C12P19/02;C12N9/04;C12N15/70;C12R1/19

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.11.25#授权;2021.04.06#实质审查的生效;2021.03.19#公开

摘要：本发明公开了一种利用NADP‑依赖型醇脱氢酶催化生产D‑阿洛酮糖的方法，包括以下步骤：对NADP‑依赖型醇脱氢酶基因adh进行优化合成，构建重组质粒pET22b‑adh，构建重组菌株，重组菌株在低温下诱导培养，得到粗酶液，分离纯化粗酶液并经超滤浓缩后得到纯酶液，利用粗酶液或纯酶液构建反应体系催化阿洛醇溶液生产D‑阿洛酮糖。本发明方法简单、条件温和、转化效率高，且是本发明首次证实NADP‑依赖型醇脱氢酶能够用于催化阿洛醇生产D‑阿洛酮糖，因此本发明方法有利于D‑阿洛酮糖的工业化生产。

主权项：1.一种利用NADP-依赖型醇脱氢酶催化生产D-阿洛酮糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将NADP-依赖型醇脱氢酶基因扩增后，通过双酶切连接到载体质粒上，得到重组质粒；所述NADP-依赖型醇脱氢酶基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述扩增的引物对为： adh-pET22b-NdeI-U：5’-GGGAATTCCATATGGCCCAGGCCCTGGTGCTGGAAAAG-3’； adh-pET22b-XhoI-D：5’-CCGCTCGAGCAGAACAATCTGCAGTTTAACATC-3’；（2）将重组质粒转化到大肠杆菌中，得到重组菌株；（3）将重组菌株接种到培养基中，在低温条件下诱导培养，然后收集菌体并重悬，重悬的菌体使用超声波破碎后，离心收集上清液，上清液即为粗酶液；（4）使用分离纯化柱纯化粗酶液，再超滤浓缩，得到纯酶液；（5）利用粗酶液或纯酶液构建反应体系，催化阿洛醇溶液生产D-阿洛酮糖。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 青岛龙鼎生物技术有限公司 一种利用NAD(P)-依赖型醇脱氢酶催化生产D-阿洛酮糖的方法

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