申请/专利权人：西安交通大学

申请日：2022-10-12

公开（公告）日：2022-12-02

公开（公告）号：CN115418387A

主分类号：C12Q1/04

分类号：C12Q1/04;C12Q1/24;C12R1/385

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2022.12.20#实质审查的生效;2022.12.02#公开

摘要：一种基于扩散室系统的含油污泥功能微生物原位培养筛选方法，包括扩散室系统构建、富集和菌株分离；扩散室由带中央通孔的金属环和紧贴在环两侧的PC顶膜和PC底膜构成；无菌琼脂、土著菌悬液及石油混合制成固体培养物，底膜密封后将其注入，上部留空隙，顶膜封闭；取含油污泥制备土壤基质；将扩散室置于土壤基质中，底部嵌入，顶部露出，封闭完成后得到扩散室系统，扩散室系统构建多个，分别恒温培养观察；培养后取出，于生理盐水中震荡形成菌悬液，然后与无菌琼脂及石油混合后制成新的固体培养物，注入新的扩散室并置于土壤基质中，继续恒温培养，循环数次，从最后一次洗脱出菌悬液中分离菌株，本发明可分离出传统方法难以培养的功能微生物。

主权项：1.一种基于扩散室系统的含油污泥功能微生物原位培养筛选方法，其特征在于，包括：步骤1，扩散室系统构建扩散室由一个带中央通孔的金属环1和紧贴在环两侧的PC顶膜2和PC底膜3构成；取无菌琼脂、土著菌悬液及石油混合后制成固体培养物4，将PC底膜3密封后向扩散室注入固体培养物4，上部留2±0.5mm空隙，然后将PC顶膜2封闭；取含油污泥，滴入灭菌纯水，制备土壤基质5；将扩散室置于土壤基质5中，底部嵌入，顶部露出，封闭完成后得到扩散室系统，所述扩散室系统构建多个，分别于20±3℃恒温培养观察；步骤2，富集培养21d后取出各扩散室，揭下PC底膜3，于生理盐水中震荡形成菌悬液，然后与无菌琼脂及石油混合后制成新的固体培养物，按步骤1方法注入新的扩散室并置于土壤基质5中，继续20±3℃恒温培养21d；如此循环数次；步骤3，菌株分离富集培养后对最后一次洗脱出的菌悬液进行梯度稀释，将连续稀释的上清液涂布到含有石油的LB琼脂平板上，能够以石油烃为碳源生长的微生物聚集生长出肉眼可见菌斑，采用无菌棒挑取分离出石油烃降解菌。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 西安交通大学 一种基于扩散室系统的含油污泥功能微生物原位培养筛选方法

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