申请/专利权人：豪夫迈·罗氏有限公司

申请日：2015-09-15

公开（公告）日：2022-12-02

公开（公告）号：CN106794247B

主分类号：A61K39/395

分类号：A61K39/395;A61P35/00;A61P9/10;A61P27/02;A61P17/06;A61P19/02;A61P13/12;A61P29/00;A61P11/06;A61P15/00

优先权：["20140915 US 62/050,739"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.12.02#授权;2017.10.13#实质审查的生效;2017.05.31#公开

摘要：本发明提供稳定的含水药物配制剂，其包含治疗性抗体、海藻糖、缓冲剂、和任选的表面活性剂，且具有在约5.5至约7.0的范围中的pH。本发明还提供用于制备此类配制剂的方法和使用此类配制剂的方法。

主权项：1.一种稳定的含水药物配制剂，该配制剂包含a量为25mgmL至100mgmL的单克隆抗体；b量为45mM至634mM的海藻糖；和c量为大于35mM至100mM的磷酸钠，其中所述配制剂具有5.5至7.0的pH，其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为大于或等于0.49且小于或等于0.74或者大于或等于0.97且小于或等于1.47，其中该配制剂于-20℃贮藏时稳定至少6个月，且其中该单克隆抗体是贝伐珠单抗，其中用于计算抗体对海藻糖的重量比的，配制剂中海藻糖的重量基于海藻糖二水合物MW378.33的量。

全文数据：抗体配制剂[0001]对相关申请的交叉引用[0002]本申请要求2014年9月15日提交的流水号62050,739的美国临时申请的优先权，通过援引将其完整收入本文。[0003]ASCII文本文件上的序列表的提交[0004]通过援引将ASCII文本文件上的下述提交的内容完整收入本文:计算机可读形式CRF的序列表（文件名称：146392028240SEQLIST.txt，记录日期：2015年9月3日，大小：29KB〇发明领域[0005]本发明涉及包含抗体的稳定的含水药物配制剂（aqueouspharmaceuticalformulation〇[0006]发明背景[0007]在过去几年里，生物技术的进步使之可能使用重组DNA技术来生产多种蛋白质，供药物应用。因为蛋白质比传统的有机和无机药物更大且更复杂例如在复杂的三维结构之外还拥有多种官能团），所以此类蛋白质的配制剂提出了特殊问题。为了使蛋白质维持生物学活性，配制剂必须至少使蛋白质氨基酸的核心序列的构象完整性保持完整，同时保护蛋白质的多种官能团免于降解。蛋白质的降解途径可涉及化学不稳定性例如任何涉及通过键形成或切割来修饰蛋白质，产生新化学实体的过程或物理不稳定性例如蛋白质的高级结构的变化）。化学不稳定性可源自脱酰胺、外消旋、水解、氧化、β消除或二硫化物交换。物理不稳定性可源自例如变性、聚集、沉淀或吸附。三种最常见的蛋白质降解途径为蛋白质聚集、脱酉先胺和氧化。Clelandetal.,CriticalReviewsinTherapeuticDrugCarrierSystems10⑷：307-3771993〇[0008]用于药物应用的蛋白质包括抗体。已经为药用抗体开发了稳定的含水配制剂。参见例如WO2011084750。本领域仍然需要包含抗体诸如抗VEGF抗体和抗⑶20抗体）的稳定的含水药物配制剂，其减少二聚体、可溶性聚集体、和颗粒形成。[0009]发明概述[0010]—方面，本发明提供一种稳定的含水药物配制剂，该配制剂包含单克隆抗体、海藻糖trehalose和缓冲剂buffer，其中该配制剂中单克隆抗体对海藻糖的重量比为大于或等于0.41且小于1.65，且其中该配制剂具有约5.5至约7.0的pH。在一些实施方案中，单克隆抗体对海藻糖的重量比为0.49至1.47。在一些实施方案中，单克隆抗体对海藻糖的重量比为约0.41至0.73。在一些实施方案中，单克隆抗体对海藻糖的重量比为约0.73至1.47。在一些实施方案中，单克隆抗体对海藻糖的重量比为0.41，0.45,0.50,0.55,0.60,0.65，0·70，0·75，0·80，0·85，0·90，0·95，1·00，1·05，1·10，1·15，1·20，1·25，1·30，1·35，1·40，1.45，1.50，1.55，1.60，和1.64任一，包括这些数值之间的每一个数值。在一些实施方案中，该配制剂中的单克隆抗体为约25mgmL至约100mgmL。在一些实施方案中，该配制剂中的单克隆抗体为约45mgmL至约55mgmL。在一些实施方案中，该配制剂中的单克隆抗体为约35mgmL至约75mgmL。在一些实施方案中，该配制剂中的海藻糖为约45mM至约634mM。在一些实施方案中，该配制剂中的海藻糖为约50mM至约600mM。在一些实施方案中，该配制剂中的海藻糖为约150mM至约400mM。在一些实施方案中，该配制剂中的海藻糖为约45mM至约135mM。在一些实施方案中，该配制剂中的海藻糖为约180mM至约634mM。在一些实施方案中，缓冲剂的量为约15mM至约lOOmM。在一些实施方案中，缓冲剂的量为大于35mM至约lOOmM。在一些实施方案中，缓冲剂包含组氨酸例如组氨酸乙酸酯，组氨酸氢氯化物或磷酸盐例如磷酸钠）。[0011]另一方面，本发明提供稳定的含水药物配制剂，其包含（a量为约25mgmL至约100mgmL的单克隆抗体；（b量为约45mM至约634mM的海藻糖；和（c量为大于35mM至约IOOmM的磷酸钠，其中所述配制剂具有约5.5至约7.0的pH，其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为大于或等于0.41且小于1.65,和任选的表面活性剂surfactant。在一些实施方案中，该配制剂中单克隆抗体对海藻糖的重量比为0.41至0.73。在一些实施方案中，单克隆抗体对海藻糖的重量比为0.73至1.47。在一些实施方案中，单克隆抗体对海藻糖的重量比为0.49至1.47。在一些实施方案中，单克隆抗体对海藻糖的重量比为0.41，0·45,0·50,0·55,0·60,0·65,0·70,0·75,0·80,0·85,0·90,0·95,1.00，1·05，1·10，1·15，1·20，1·25，1·30，1·35，1·40，1·45，1·50，1·55，1·60，和1·64任一，包括这些数值之间的每一个数值。[0012]另一方面，本发明提供稳定的含水药物配制剂，该配制剂包含a量为小于或等于约100mgmL的抗体例如单克隆抗体）；和b量为约150mM至约400mM的海藻糖，其中所述配制剂具有约5.5至约7.0的pH，且其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为大于或等于0.41且小于1.65。在一些实施方案中，该配制剂用于皮下施用。在一些实施方案中，该配制剂用于眼内施用。在一些实施方案中，该配制剂是等张的。在一些实施方案中，该配制剂具有大于约240m0smkg的摩尔渗透压浓度osmolality。[0013]另一方面，本发明提供稳定的含水药物配制剂，该配制剂包含a量为小于或等于约100mgmL的抗体例如单克隆抗体）；和b量为约50mM至约600mM的海藻糖，其中所述配制剂具有约5.5至约7.0的pH，且其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为大于或等于0.41且小于1.65。在一些实施方案中，该配制剂用于静脉内施用。[0014]在一些实施方案中，本文所述配制剂中单克隆抗体的量为约30mgmL至约90mgmL，约35mgmL至约85mgmL，约35mgmL至约75mgmL，约40mgmL至约80mgmL，约45mgmL至约70mgmL，或约45mgmL至约55mgmL。在一些实施方案中，该配制剂中的单克隆抗体为约25mgmL，约30mgmL，约35mgmL，约40mgmL，约45mgmL，约50mgmL，约55mgmL，约60mgmL，约65mgmL，约70mgmL，约75mgmL，约80mgmL，约85mgmL，约90mgmL，约95mgmL，或约lOOmgmL，包括这些数值之间的每一个数值。在一些实施方案中，该配制剂中的单克隆抗体为约45mgmL，约50mgmL，或约55mgmL。[0015]在一些实施方案中，本文所述配制剂包含约45mM至约600mM，约45mM至约550mM，约45mM至约500mM，约45mM至约450mM，约45mM至约400mM，约45mM至约350mM，约45mM至约300mM，约45mM至约250mM，约45mM至约200mM，约45mM至约180mM，约45mM至约150mM，约45mM至约140mM，约45mM至约135mM，约45mM至约130mM，约45mM至约120mM，约45mM至约11OmM，约45mM至约lOOmM，约180mM至约634mM，约50mM至约600mM，或约150mM至约400mM的海藻糖。在一些实施方案中，该配制剂中的海藻糖为约45mM，约50mM，约60mM，约70mM，约80mM，约90mM，约IOOmM，约11OmM，约120mM，约130mM，约135mM，约140mM，约150mM，约180mM，约200mM，约250mM，约300mM，约350mM，约400mM，约450mM，约500mM，约550mM，约600mM，约610mM，约620mM，约630mM，或约634mM，包括这些数值之间的每一个数值。在一些实施方案中，该配制剂包含磷酸盐例如磷酸钠作为缓冲剂。在一些实施方案中，该配制剂中的磷酸盐缓冲剂例如磷酸钠）为约15mM至约30mM，约20mM至约30mM，约22mM至约28mM，大于35mM至约100mM，约40mM至约100mM，约45mM至约90mM，约50mM至约75mM，或约15mM至约100mM。在一些实施方案中，该配制剂中的磷酸盐（例如磷酸钠）为约15mM，约2OmM，约22mM，约25mM，约28mM，约30mM，约35mM，约36mM，约40mM，约45mM，约50mM，约51mM，约55mM，约60mM，约65mM，约70mM，约75mM，约80mM，约85mM，约90mM，约95mM，或约lOOmM，包括这些数值之间的每一个数值。在一些实施方案中，该配制剂包含组氨酸诸如L-组氨酸作为缓冲剂。在一些实施方案中，该配制剂的组氨酸为约15mM至约30mM，约20mM至约30mM，约22mM至约28mM，大于35mM至约lOOmM，约40mM至约100mM，约45mM至约90mM，约50mM至约75mM，或约15mM至约100mM。在一些实施方案中，该配制剂的组氨酸为约15mM，约2OmM，约22mM，约25mM，约28mM，约3OmM，约35mM，约36mM，约40mM，约45mM，约50mM，约51mM，约55mM，约60mM，约65mM，约70mM，约75mM，约80mM，约85mM，约90mM，约95mM，或约lOOmM，包括这些数值之间的每一个数值。[0016]在一些实施方案中，本文所述配制剂进一步包含表面活性剂。在一些实施方案中，表面活性剂为聚山梨酯polysorbate诸如聚山梨酯20或泊洛沙姆poloxamer诸如泊洛沙姆188。在一些实施方案中，表面活性剂的浓度为约0.01%至约0.1%，约0.01%至约0.05%，或约0.02%至约0.04%。在一些实施方案中，表面活性剂的浓度为约0.01%，约0.02%，约0.03%，约0.04%，约0.05%，或约0.1%，包括这些数值之间的每一个数值。[0017]在一些实施方案中，本文所述配制剂具有约5.5至约6.5，约5.8至约6.8，约5.9至约6.5，约6.0至约6.5，约6.0至约6.4，或约6.0至约6.2的pH。在一些实施方案中，该配制剂具有约5.6,约5.8,约5.9,约6.0,约6.2,约6.4,约6.5,约6.8,或约7.0的pH，包括这些数值之间的每一个数值。[0018]在一些实施方案中，本文所述配制剂中的单克隆抗体未进行在先冻干。在一些实施方案中，该单克隆抗体为全长抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为IgGl，IgG2,或IgG4抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为人源化抗体，嵌合抗体或人抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为包含抗原结合区的抗体片段。在一些实施方案中，该抗体片段为Fab或Fab’）2片段。在一些实施方案中，该单克隆抗体结合VEGF。在一些实施方案中，该抗体为贝伐珠单抗bevacizumab。在一些实施方案中，该单克隆抗体容易聚集。[0019]在一些实施方案中，本文所述配制剂中的单克隆抗体未进行在先冻干。在一些实施方案中，该单克隆抗体为全长抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为IgGl，IgG2,或IgG4抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为人源化抗体，嵌合抗体或人抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为包含抗原结合区的抗体片段。在一些实施方案中，该抗体片段为Fab或Fab’）2片段。在一些实施方案中，该单克隆抗体结合CD20。在一些实施方案中，该结合CD20的抗体为本文所述人源化B-Lyl抗体。在一些实施方案中，该结合CD20的抗体为包含选自SEQIDNO:3至SEQIDNO:19的重链可变区氨基酸序列和SEQIDNO:20的轻链可变区氨基酸序列的抗体。在一些实施方案中，该抗体为奥奴珠单抗obinutuzumab。在一些实施方案中，该单克隆抗体容易聚集。[0020]在一些实施方案中，本文所述配制剂于-20°C稳定至少约6个月，至少约12个月，至少约15个月，至少约18个月，至少约19个月，至少约20个月，或至少约2年。在一些实施方案中，该配制剂是无菌的。在一些实施方案中，该配制剂用于对受试者施用。在一些实施方案中，该配制剂用于静脉内（IV，皮下SQ，眼内（IQ，或肌肉内（IM施用。[0021]另一方面，本发明提供制品，其包含装有本文所述稳定的含水药物配制剂的容器。在一些实施方案中，该配制剂包含单克隆抗体、海藻糖、和缓冲剂，其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为大于或等于0.41且小于1.65,且其中该配制剂具有约5.5至约7.0的pH。在一些实施方案中，该配制剂包含a量为约25至约lOOmgmL的单克隆抗体；（b量为约45mM至约634mM的海藻糖;和c量为大于35mM至约IOOmM的磷酸钠，其中所述配制剂具有约5.5至约7.0的pH，其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为大于或等于0.41且小于1.65,和任选的表面活性剂。在一些实施方案中，，该配制剂中单克隆抗体对海藻糖的重量比为0.41至0.73。在一些实施方案中，单克隆抗体对海藻糖的重量比为0.73至1.47。在一些实施方案中，单克隆抗体对海藻糖的重量比为0.49至1.47。在一些实施方案中，该配制剂中单克隆抗体对海藻糖的重量比为〇.41，0.45，0.50，0.55，0.60，0·65,0·70,0·75,0·80,0·85,0·90,0·95，1.00,1.05,1.10,1.15,1.20,1.25,1.30,1.35，1.40，1.45，1.50，1.55，1.60，和1.64任一，包括这些数值之间的每一个数值。[0022]在一些实施方案中，该配制剂中单克隆抗体的量为约3OmgmL至约90mgmL，约35mgmL至约85mgmL，约35mgmL至约75mgmL，约40mgmL至约80mgmL，约45mgmL至约7OmgmL，或约45mgmL至约55mgmL。在一些实施方案中，该配制剂中的单克隆抗体为约25mgmL，约30mgmL，约35mgmL，约40mgmL，约45mgmL，约50mgmL，约55mgmL，约60mgmL，约65mgmL，约70mgmL，约75mgmL，约80mgmL，约85mgmL，约90mgmL，约95mgmL，或约lOOmgmL，包括这些数值之间的每一个数值。在一些实施方案中，该配制剂中的单克隆抗体为约45mgmL，约50mgmL，或约55mgmL。[0023]在一些实施方案中，该配制剂包含约45mM至约600mM，约45mM至约550mM，约45mM至约500mM，约45mM至约450mM，约45mM至约400mM，约45mM至约350mM，约45mM至约300mM，约45mM至约250mM，约45mM至约200mM，约45mM至约180mM，约45mM至约150mM，约45mM至约140mM，约45mM至约135mM，约45mM至约130mM，约45mM至约120mM，约45mM至约110mM，约45mM至约100mM，约180mM至约634mM，约50mM至约600mM，或约150mM至约400mM的海藻糖。在一些实施方案中，该配制剂中的海藻糖为约45mM，约50mM，约60mM，约70mM，约80mM，约90mM，约IOOmM，约11OmM，约120mM，约130mM，约135mM，约140mM，约150mM，约180mM，约200mM，约250mM，约300mM，约350mM，约400mM，约450mM，约500mM，约550mM，约600mM，约610mM，约620mM，约630mM，或约634mM，包括这些数值之间的每一个数值。在一些实施方案中，该配制剂包含磷酸钠作为缓冲剂。在一些实施方案中，该配制剂中的磷酸钠为约15mM至约30mM，约2OmM至约3OmM，约22mM至约28mM，大于35mM至约lOOmM，约40mM至约100mM，约45mM至约90mM，约50mM至约75mM，或约15mM至约100mM。在一些实施方案中，该配制剂中的磷酸钠为约15mM，约20mM，约22mM，约25mM，约28mM，约30mM，约35mM，约36mM，约40mM，约45mM，约50mM，约5ImM，约55mM，约60mM，约65mM，约70mM，约75mM，约80mM，约85mM，约90mM，约95mM，或约100mM，包括这些数值之间的每一个数值。在一些实施方案中，该配制剂包含组氨酸诸如L-组氨酸作为缓冲剂。在一些实施方案中，该配制剂的组氨酸为约15mM至约30mM，约20mM至约30mM，约22禮至约28111]\1，大于35111]\1至约10〇1111，约4〇111]\1至约10〇111]\1，约451111至约9〇1111，约5〇1111至约75111]\1，或约15mM至约lOOmM。在一些实施方案中，该配制剂的组氨酸为约15mM，约20mM，约22mM，约25mM，约28mM，约30mM，约35mM，约36mM，约40mM，约45mM，约50mM，约51mM，约55mM，约60mM，约65mM，约70mM，约75mM，约80mM，约85mM，约90mM，约95mM，或约lOOmM，包括这些数值之间的每一个数值。[0024]在一些实施方案中，该配制剂进一步包含表面活性剂。在一些实施方案中，表面活性剂为聚山梨酯诸如聚山梨酯20或泊洛沙姆诸如泊洛沙姆188。在一些实施方案中，表面活性剂的浓度为约0.01%至约0.1%，约0.01%至约0.05%，或约0.02%至约0.04%。在一些实施方案中，表面活性剂的浓度为约0.01%，约0.02%，约0.03%，约0.04%，约0.05%，或约0.1%，包括这些数值之间的每一个数值。[0025]在一些实施方案中，该配制剂具有约5.5至约6.5，约5.8至约6.8，约5.9至约6.5，约6.0至约6.5,约6.0至约6.4,或约6.0至约6.2的pH。在一些实施方案中，该配制剂具有约5.6,约5.8,约5.9,约6.0,约6.2,约6.4,约6.5,约6.8,或约7.0的pH，包括这些数值之间的每一个数值。[0026]在一些实施方案中，该单克隆抗体未进行在先冻干。在一些实施方案中，该单克隆抗体为全长抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为IgGl，IgG2,或IgG4抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为人源化抗体，嵌合抗体或人抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为包含抗原结合区的抗体片段。在一些实施方案中，该抗体片段为Fab或Fab’）2片段。在一些实施方案中，该单克隆抗体结合VEGF。在一些实施方案中，该抗体为贝伐珠单抗。在一些实施方案中，该单克隆抗体容易聚集。[0027]在一些实施方案中，该单克隆抗体未进行在先冻干。在一些实施方案中，该单克隆抗体为全长抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为IgGl，IgG2,或IgG4抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为人源化抗体，嵌合抗体或人抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为包含抗原结合区的抗体片段。在一些实施方案中，该抗体片段为Fab或Fab’）2片段。在一些实施方案中，该单克隆抗体结合CD20。在一些实施方案中，该结合CD20的抗体为本文所述人源化B-Lyl抗体。在一些实施方案中，该结合⑶20的抗体为包含选自SEQIDN0:3至SEQIDNO:19的重链可变区氨基酸序列和SEQIDNO:20的轻链可变区氨基酸序列的抗体。在一些实施方案中，该抗体为奥奴珠单抗。在一些实施方案中，该单克隆抗体容易聚集。[0028]在一些实施方案中，该配制剂于-20°C稳定至少约6个月，至少约12个月，至少约15个月，至少约18个月，至少约19个月，至少约20个月，或至少约2年。在一些实施方案中，该配制剂是无菌的。在一些实施方案中，该配制剂用于对受试者施用。在一些实施方案中，该配制剂为用于静脉内（IV，皮下SQ，眼内（10，或肌肉内（IM施用。[0029]在一些实施方案中，该容器为带注射器可刺穿的塞子的管形瓶，其中该管形瓶装有本文所述任一配制剂。在一些实施方案中，该管形瓶贮藏于约2_8°C。在一些实施方案中，该管形瓶贮藏于约_20°C。在一些实施方案中，该管形瓶为3cc，2〇CC或50cc管形瓶。[0030]另一方面，本发明提供不锈钢罐，其在罐内部装有本文所述任一配制剂。在一些实施方案中，该配制剂是冷冻的。[0031]另一方面，本发明提供降低治疗性单克隆抗体聚集的方法。在一些实施方案中，该方法包括在包含海藻糖和缓冲剂的配制剂中配制单克隆抗体，其中该配制剂中单克隆抗体对海藻糖的重量比为大于或等于0.41且小于1.65,且其中该配制剂具有约5.5至约7.0的pH。在一些实施方案中，该方法包括在包含量为约45mM至约634mM，约50mM至约600mM，或约150mM至约40OmM的海藻糖和量为大于35mM至约10OmM的磷酸钠的配制剂中配制抗体，且所述配制剂具有约5.5至约7.0的？!1，其中在该配制剂中以约2511^1^至约10〇11^1^的量配制所述单克隆抗体，且其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为大于或等于0.41且小于1.65。[0032]在本文所述方法的一些实施方案中，该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为大于或等于0.41且小于1.65。在本文所述方法的一些实施方案中，单克隆抗体对海藻糖的重量比为0.73至1.47。在一些实施方案中，单克隆抗体对海藻糖的重量比为0.49至1.47。在一些实施方案中，单克隆抗体对海藻糖的重量比为0.41，0.45，0.50，0.55，0.60，0·65,0·70,0·75,0·80,0·85,0·90,0·95，1.00,1.05,1.10,1.15,1.20,1.25,1.30,1.35，1.40，1.45，1.50，1.55，1.60，和1.64任一，包括这些数值之间的每一个数值。[0033]在一些实施方案中，该配制剂中单克隆抗体的量为约3OmgmL至约90mgmL，约35mgmL至约85mgmL，约35mgmL至约75mgmL，约40mgmL至约80mgmL，约45mgmL至约7OmgmL，或约45mgmL至约55mgmL。在一些实施方案中，该配制剂中的单克隆抗体为约25mgmL，约30mgmL，约40mgmL，约45mgmL，约50mgmL，约55mgmL，约60mgmL，约65mgmL，约70mgmL，约75mgmL，约80mgmL，约85mgmL，约90mgmL，约95mgmL，或约100mgmL，包括这些数值之间的每一个数值。在一些实施方案中，该配制剂中的单克隆抗体为约45mgmL，约50mgmL，或约55mgmL〇[0034]在一些实施方案中，该配制剂包含约45mM至约600mM，约45mM至约550mM，约45mM至约500mM，约45mM至约450mM，约45mM至约400mM，约45mM至约350mM，约45mM至约300mM，约45mM至约250mM，约45mM至约200mM，约45mM至约180mM，约45mM至约150mM，约45mM至约140mM，约45mM至约135mM，约45mM至约130mM，约45mM至约120mM，约45mM至约110mM，约45mM至约100mM，约180mM至约634mM，约50mM至约600mM，或约150mM至约400mM的海藻糖。在一些实施方案中，该配制剂中的海藻糖为约45mM，约50mM，约60mM，约70mM，约80mM，约90mM，约IOOmM，约11OmM，约120mM，约130mM，约135mM，约140mM，约150mM，约180mM，约200mM，约250mM，约300mM，约350mM，约400mM，约450mM，约500mM，约550mM，约600mM，约610mM，约620mM，约630mM，或约634mM。在一些实施方案中，该配制剂包含磷酸钠作为缓冲剂。在一些实施方案中，该配制剂中的磷酸钠为约15mM至约30mM，约20mM至30mM，约22mM至约28mM，大于35111]\1至约10〇111]\1，约4〇111]\1至约10〇111]\1，约45111]\1至约9〇111]\1，约5〇111]\1至约75111]\1，或约15111]\1至约100mM。在一些实施方案中，该配制剂中的磷酸钠为约15mM，约20mM，约22mM，约25mM，约28mM，约30mM，约35mM，约36mM，约40mM，约45mM，约50mM，约51mM，约55mM，约60mM，约65mM，约70mM，约75mM，约80mM，约85mM，约90mM，约95mM，或约lOOmM，包括这些数值之间的每一个数值。在一些实施方案中，该配制剂包含组氨酸诸如L-组氨酸作为缓冲剂。在一些实施方案中，该配制剂的组氨酸为约15mM至约30mM，约20mM至约30mM，约22mM至约28mM，大于35mM至约10OmM，约40mM至约10OmM，约45mM至约90mM，约5OmM至约75mM，或约15mM至约10OmM。在一些实施方案中，该配制剂的组氨酸为约15mM，约20mM，约22mM，约25mM，约28mM，约30mM，约35mM，约36mM，约40mM，约45mM，约50mM，约51mM，约55mM，约60mM，约65mM，约70mM，约75mM，约80mM，约85mM，约90mM，约95mM，或约lOOmM，包括这些数值之间的每一个数值。[0035]在一些实施方案中，该配制剂进一步包含表面活性剂。在一些实施方案中，表面活性剂为聚山梨酯诸如聚山梨酯20或泊洛沙姆诸如泊洛沙姆188。在一些实施方案中，表面活性剂的浓度为约0.01%至约0.1%，约0.01%至约0.05%，或约0.02%至约0.04%。在一些实施方案中，表面活性剂的浓度为约0.01%，约0.02%，约0.03%，约0.04%，约0.05%，或约0.1%，包括这些数值之间的每一个数值。[0036]在一些实施方案中，该配制剂具有约5.5至约6.5，约5.8至约6.8，约5.9至约6.5，约6.0至约6.5,约6.0至约6.4,或约6.0至约6.2的pH。在一些实施方案中，该配制剂具有约5.6,约5.8,约5.9,约6.0,约6.2,约6.4,约6.5,约6.8,或约7.0的pH，包括这些数值之间的每一个数值。[0037]在一些实施方案中，该单克隆抗体未进行在先冻干。在一些实施方案中，该单克隆抗体为全长抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为IgGl，IgG2,或IgG4抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为人源化抗体，嵌合抗体或人抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为包含抗原结合区的抗体片段。在一些实施方案中，该抗体片段为Fab或Fab’）2片段。在一些实施方案中，该单克隆抗体结合VEGF。在一些实施方案中，该抗体为奥奴珠单抗。在一些实施方案中，该单克隆抗体容易聚集。[0038]在一些实施方案中，该单克隆抗体未进行在先冻干。在一些实施方案中，该单克隆抗体为全长抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为IgGl，IgG2,或IgG4抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为人源化抗体，嵌合抗体或人抗体。在一些实施方案中，该单克隆抗体为包含抗原结合区的抗体片段。在一些实施方案中，该抗体片段为Fab或Fab’）2片段。在一些实施方案中，该单克隆抗体结合CD20。在一些实施方案中，该结合CD20的抗体为本文所述人源化B-Lyl抗体。在一些实施方案中，该结合⑶20的抗体为包含选自SEQIDN0:3至SEQIDNO:19的重链可变区氨基酸序列和SEQIDNO:20的轻链可变区氨基酸序列的抗体。在一些实施方案中，该抗体为奥奴珠单抗。在一些实施方案中，该单克隆抗体容易聚集。[0039]在一些实施方案中，该配制剂于-20°C稳定至少约6个月，至少约12个月，至少约15个月，至少约18个月，至少约19个月，至少约20个月，或至少约2年。在一些实施方案中，该配制剂是无菌的。在一些实施方案中，该配制剂用于对受试者施用。在一些实施方案中，该配制剂用于静脉内（IV，皮下SQ，眼内（IO，或肌肉内（IM施用。[0040]另一方面，本发明提供生成药物配制剂的方法，其包括：（a制备本文所述任一配制剂;并b评估该配制剂中的抗体的物理稳定性、化学稳定性、或生物学活性。在一些实施方案中，在该配制剂贮藏例如于-20°C或-40°C后约6个月、约12个月、约18个月、或约24个月评估该配制剂中的抗体的物理稳定性、化学稳定性、或生物学活性。[0041]另一方面，本发明提供治疗受试者中的疾病或病症的方法，其包括以有效治疗该疾病或病症的量对受试者施用本文所述任一配制剂。在一些实施方案中，该配制剂包含结合VEGF的抗体。在一些实施方案中，该抗体为贝伐珠单抗。在一些实施方案中，该疾病为癌症。在一些实施方案中，该癌症选自结肠直肠癌，肺癌，乳腺癌，肾癌，和成胶质细胞瘤。[0042]另一方面，本发明提供治疗受试者中的疾病或病症的方法，其包括以有效治疗该疾病或病症的量对受试者施用本文所述任一配制剂。在一些实施方案中，该配制剂包含结合CD20的抗体。在一些实施方案中，该抗体为奥奴珠单抗。在一些实施方案中，该疾病为癌症。在一些实施方案中，该癌症为表达CD20的癌症，例如淋巴瘤，淋巴细胞性白血病，和多发性骨髓瘤。[0043]要理解，可以组合本文所述各个实施方案的一个、一些、或所有特性以形成本发明的其它实施方案。本发明的这些和其它方面对本领域技术人员会变得显而易见。通过下面的详述进一步描述本发明的这些和其它实施方案。[0044]附图简述[0045]图1A，1B，IC和ID显示诱导成核后含药学相关浓度的海藻糖的冷冻样品的表面上的直观海藻糖结晶，（图1A0.0%wtv海藻糖，（图1B2.0%wtv海藻糖，（图1C4.0%wtv海藻糖，和图ID8.0%wtv海藻糖。[0046]图2A显示蔗糖（1，海藻糖（2，和甘露醇（3的溶解度，作为温度的函数，如标注的。图2B描绘于-20°C冷冻和诱导成核28天之前和之后多种防冻配制剂中贝伐珠单抗的百分比高分子量种类，如通过HP-SEC测定的，如标注的。[0047]图3A，3B和3C显示于-20°CI，_14°C2，和_8°C3冷冻保存的单抗1图3A，贝伐珠单抗图3B，和单抗3图3C快速冷冻样品的聚集的时间依赖性升高，如标注的。[0048]图4A和4B显示单抗3单体，二聚体，和高分子量种类HMffS的代表性大小排阻层析SEC层析图。（图4A冷冻速率的影响。单抗3样品以慢速⑴，正常⑵，和快速⑶冷冻速率如标注的）冷冻并于-20°C储存12个月。显示了用于比较的研究对照（储存于-70°C。（图4B储存温度的影响。单抗3样品以快速冷冻速率冷冻并于-20°C3，_14°C2，和-8°C1储存12个月，如标注的。显示了用于比较的研究对照储存于_70°C。[0049]图5显示此项研究中讨论的三种海藻糖形式的标准化NIR谱:无定形海藻糖（1，海藻糖无水物晶体）（2，和海藻糖二水合物晶体）（3，如标注的。[0050]图6A1-图6C3显示使用（图6A1，6B1，和6C1慢速冷冻，（图6A2,6B2,和6C2正常冷冻，和⑶快速冷冻速率冷冻的（图6A1，6A2和6A3单抗1，（图6B1，6B2,和6B3贝伐珠单抗，和（图6C1，6C2,和6C3单抗3样品于-20°C，_14°C，和_8°C储存12个月后的标准化NIR谱。[0051]图7A，7B和7C显示于-20°C储存12个月后含（图7A0mgmL贝伐珠单抗，（图7B25mgmL贝伐珠单抗，和（图7C100mgmL贝伐珠单抗的配制剂中无定形⑴和结晶⑵海藻糖的浓度。图7D和7E显示框图，展示于-20°C储存12个月后含（图7D25mgmL贝伐珠单抗和图7E100mgmL贝伐珠单抗的海藻糖配制剂的百分比高分子量种类。[0052]图8A和8B显示结晶海藻糖二水合物（图8A和百分比高分子量种类（图8B的百分比，作为总海藻糖:单抗比wtwt的函数。高分子量种类是使用HP-SEC测量的，而海藻糖二水合物浓度是使用FT-NIR测定的。[0053]发明详述[0054]I.定义[0055]在详细描述本发明之前，应当理解本发明不限于特定组合物或生物学系统，它们当然可以有所变化。还应理解本文中所使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，并非意图对其进行限制。如本说明书和所附权利要求中使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数所指物，除非另有明确说明。如此，例如，提及“一个种分子”任选包括两个种或更多个种此类分子的组合，诸如此类。[0056]如本文中使用的，术语“约”指技术领域技术人员容易知道的相应数值的常规误差范围。本文中提到“约”数值或参数包括且描述涉及该数值或参数本身的实施方案。[0057]理解的是，本文所述发明的各个方面和实施方案包括“包含”、“由……组成”、和“基本上由……组成”方面和实施方案。[0058]术语“药物配制剂”指如下形式的制备物，使得容许活性组分的生物学活性有效，且不含别的对会施用配制剂的受试者有不可接受的毒性的成分。此类配制剂是无菌的。“药学可接受”赋形剂媒介、添加剂为那些可合理施用于受试哺乳动物以提供有效剂量的所采用的活性组分。[0059]“无菌”配制剂没有活菌或者没有或基本上没有所有活的微生物及其孢子。[0060]“冷冻”配制剂为一种处于TC以下的温度的。一般地，冷冻配制剂不是冷冻干燥的，也未进行在先或后续冻干。在某些实施方案中，冷冻配制剂包含供贮藏的冷冻药物物质在不锈钢罐中）或冷冻药物产品在最终管形瓶构造中）。[0061]“稳定”配制剂为一种其中的蛋白质在贮藏后基本上保留其物理稳定性和或化学稳定性和或生物学活性的。优选地，配制剂在贮藏后基本上保留其物理和化学稳定性，以及其生物学活性。贮藏期一般基于配制剂的预定架存期来选择。多种用于测量蛋白质稳定性的分析技术是本领域可得的且综述于例如？6口1：丨163111?1'^6；[1101'耶061；^6巧，247-301,VincentLeeEd.,MarcelDekker，Inc.，NewYork,N.Y.,Pubs.1991及Jones,A.Adv.DrugDeliveryRev.10:29-901993。可测量在预定温度藏预定时间段后的稳定性。在某些实施方案中，配制剂于约40°C稳定至少约1、2、3、4、5、6、7、14、21、28、或更多天。在某些实施方案中，配制剂于约40°C稳定至少约1、2、3、4、5、6、7、8、或更多周。在某些实施方案中，配制剂于约25°C稳定至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、或更多个月。在某些实施方案中，配制剂于约5°：稳定至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、或更多个月。在某些实施方案中，配制剂于约_20°C稳定至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、或更多个月。在某些实施方案中，配制剂于5°C或_20°C稳定至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、或更多个月。另外，配制剂优选在冷冻至例如-20°C、_40°C或_70°C和融化配制剂后（例如在1、2、3、4或5个循环的冷冻和融化后稳定。可以多种不同方式定性和或定量评估稳定性，包括评估聚集形式例如使用大小排阻层析、通过测量浊度、和或通过视觉检查）；使用阳离子交换层析、图像毛细管等电聚焦（icIEF或毛细管区带电泳评估电荷异质性;氨基末端或羧基末端序列分析;质谱分析；SDS-PAGE分析以比较还原型reduced和完整抗体;肽图（例如胰蛋白酶或LYS-C分析;评估抗体的生物学活性或抗原结合功能；等。不稳定性可涉及下述一项或多项：聚集，脱酰胺例如Asn脱酰胺），氧化例如Met氧化），异构化例如Asp异构化），修剪水解片段化例如铰链区片段化），琥珀酰亚胺形成，不配对的半胱氨酸，N端延伸，C端加工，糖基化差异，等。[0062]若在视觉检查颜色和或澄清度时，或根据UV光散射或大小排阻层析的测量，蛋白质显示很少的聚集、沉淀和或变性或没有上述迹象的话，则它在药物配制剂中“保留其物理稳定性”。[0063]若在给定时间的化学稳定性使得蛋白质被认定为仍然保留其生物学活性，如下文定义的，则蛋白质在药物配制剂中“保留其化学稳定性”。化学稳定性可通过检测和定量蛋白质的化学改变形式来评估。化学改变可涉及大小修饰例如修剪），这可使用例如大小排阻层析、SDS-PAGE和或基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱术MALDITOFMS来评估。其它类型的化学改变包括电荷改变例如因脱酰胺而发生的），其可通过例如离子交换层析或icIEF来评估。[0064]若抗体在给定时间的生物学活性在制备药物配制剂时展现的生物学活性的约10%之内（在测定法的误差之内），如在例如抗原结合测定法中测定的，则抗体在药物配制剂中“保留其生物学活性”。本文中下文详述了用于抗体的其它“生物学活性”测定法。[0065]如本文中使用的，单克隆抗体的“生物学活性”指抗体结合抗原的能力。它可进一步包括抗体结合抗原并导致可测量的生物学应答，其可在体外或在体内测量。此类活性可以是拮抗性的或激动性的。[0066]“脱酰胺”单克隆抗体在本文中为它的一个或多个天冬酰胺残基已被衍生成例如天冬氨酸或异天冬氨酸的单克隆抗体。[0067]“对脱酰胺易感的”抗体为包含一个或多个发现倾向于脱酰胺的残基的抗体。[0068]“对聚集易感的”抗体为发现与其它抗体分子聚集尤其在冷冻和或搅动时）的抗体。[0069]“对片段化易感的”抗体为发现被切割成两个或更多个片段例如在其铰链区处）的抗体。[0070]“降低脱酰胺、聚集、或片段化”意图相对于在不同配制剂中配制的单克隆抗体，阻止或降低脱酰胺、聚集、或片段化的量。[0071]配制的抗体优选基本上纯的且希望基本上同质的（例如没有污染性蛋白质等）。“基本上纯的”抗体表示基于组合物的总重量，组合物包含以重量计至少约90%、优选以重量计至少约95%的抗体。“基本上同质的”抗体表示基于组合物的总重量，组合物包含以重量计至少约99%的抗体。[0072]“等张”表示感兴趣的配制剂与人血液具有基本上相同的渗透压。等张配制剂一般会具有约250至350m0sm的渗透压。等张性可使用例如蒸气压或冰冻型渗透压计来测量。在一些实施方案中，配制剂具有大于约240m0smkg的摩尔渗透压浓度。[0073]如本文中使用的，“缓冲液”指通过其酸-碱配合成分的作用来抵抗pH变化的缓冲溶液。本发明的缓冲液优选具有在约4.5至约7.0，优选约5.6至约7.0，例如约5.6至6.9、5.7至6.8、5.8至6.7、5.9至6.6、5.9至6.5、6.0、6.0至6.4、或6.1至6.3的范围中的口!1。在一个实施方案中，缓冲液具有pH5·6、5·7、5·8、5·9、6·0、6·1、6·2、6·3、6·4、6·5、6·6、6·7、6·8、6.9、或7.0。例如，会控制pH在此范围中的缓冲液的一个例子是磷酸钠。[0074]如本文中使用的，“表面活性剂”指表面活性作用剂，优选非离子型表面活性剂。本文中的表面活性剂的例子包括聚山梨酯（例如聚山梨酯20和聚山梨酯80;泊洛沙姆（例如泊洛沙姆188;Triton;十二烷基硫酸钠（SDS;月桂基硫酸钠；辛基糖苷钠；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-、或硬脂酰基-磺基甜菜碱；月桂基-、肉豆蔻基-、亚油基-、或硬脂酰基-肌氨酸;亚油基_、肉豆蔻基、或鲸蜡基-甜菜碱；月桂酰氨基丙基_、椰油酰氨基丙基_、亚油酰氨基丙基-、肉豆蔻酰氨基丙基-、棕榈酰氨基丙基-、或异硬脂酰氨基丙基-甜菜碱例如月桂酰氨基丙基）；肉豆蔻酰氨基丙基_、棕榈酰氨基丙基_、或异硬脂酰氨基丙基-二甲胺；甲基椰油基牛磺酸钠或甲基油基牛磺酸二钠；和MONAQUAT™系列（MonaIndustries，Inc.，Paterson，N.J.;聚乙二醇、聚丙二醇、及乙二醇和丙二醇共聚物（例如Pluronics、PF68等）；等。在一个实施方案中，本文中的表面活性剂为聚山梨酯20。[0075]在药理学意义上，在本发明的语境中，抗体的“治疗有效量”指有效预防或治疗抗体可有效治疗的病症的量。“病症”为会受益于抗体处理的任何状况。这包括慢性和急性病症或疾病，包括那些使哺乳动物易患所讨论病症的病理状况。[0076]“防腐剂”为如下的化合物，其可任选地包括在配制剂中以本质上降低其中的细菌作用，如此便于生产例如多次使用配制剂。潜在防腐剂的例子包括十八烷基二甲基苯甲基氯化铵、氯己双胺、苯扎氯铵（烃基苯甲基二甲基氯化铵的混合物，其中烃基是长链化合物）、和苄索氯铵。其它类型的防腐剂包括芳香醇诸如酚、丁醇和苯甲醇，烃基对羟基苯甲酸酯诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯，邻苯二酚，间苯二酚，环己醇，3-戊醇，和间甲酚。在一个实施方案中，本文中的防腐剂为苯甲醇。[0077]如本文中使用的，术语“VEGF”或“VEGF-A”指165个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子及相关的121个、189个和206个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子，如Leungetal.1989Science246:1306;及Houcketal.1991Mol.Endocrin.5:1806所述，及其天然存在等位基因形式和加工形式。术语“VEGF”还指来自非人物种诸如小鼠、大鼠或灵长类动物的VEGF。有时，来自特定物种的VEGF表示如下，hVEGF表示人VEGF，mVEGF表示小鼠VEGF，等等。术语“VEGF”还用于指包含165个氨基酸的人血管内皮细胞生长因子的氨基酸第8-109位或第1-109位的截短形式多肽。本申请中可能通过例如“VEGF8-109”、“VEGF1-109”或“VEGF165”来鉴别任何此类形式VEGF。“截短的”天然VEGF的氨基酸位置如天然VEGF序列中所示编号。例如，截短的天然VEGF中的第17位氨基酸（甲硫氨酸也是天然VEGF中的第17位（甲硫氨酸）。截短的天然VEGF具有与天然VEGF相当的对KDR和Flt-I受体的结合亲和力。[0078]“VEGF生物学活性”包括对任何VEGF受体的结合或任何VEGF信号传导活性，诸如调节正常的和异常的血管发生angiogenesis和脉管发生vasculogenesis二者FerraraandDavis-Smyth1997EndocrineRev.18:4-25；Ferrara1999J.Mol.Med.77:527-543;促进胚胎脉管发生和血管发生（Carmelietet1·1996ΝβϊιιγΘ380:435-439;Ferraraetal.1996Nature380:439-442;及调控雌性生殖道中的和为了骨生长和软骨形成的周期性血管增殖（Ferraraetal.1998NatureMed.4:336_340;Gerberetal.1999NatureMed.5:623-628。在作为血管发生和脉管发生中的血管发生因子之外，VEGF，作为多效生长因子，在其它生理过程诸如内皮细胞存活、血管通透性和血管舒张、单核细胞趋化性和f丐内流中展现出多种生物学效应FerraraandDavis-Smyth1997，见上文；及Cebe-Suarezetal.Cell.Mol.LifeSci.63:601-6152006。此外，最近的研究报道了VEGF对少数非内皮细胞类型诸如视网膜色素上皮细胞、胰导管细胞、和许旺Schwann细胞的促有丝分裂效应（61^灯丨116七31.1995入〇611?1178丨〇1.164:385-394;^6作-ffelshetal.1997Mol.Cell.Endocrinol.126:125-132；Sondelletal.1999J.Neurosci.19:5731-5740。[0079]“VEGF拮抗剂”或“VEGF特异性拮抗剂”指能够结合VEGF，降低VEGF表达水平，或者中和、阻断、抑制、消除、降低或干扰VEGF生物学活性包括但不限于VEGF与一种或多种VEGF受体的结合及由VEGF介导的血管发生和内皮细胞存活或增殖）的分子。在本发明的方法中有用的VEGF特异性拮抗剂包括特异性结合VEGF的多肽、抗VEGF抗体及其抗原结合片段、特异性结合VEGF由此使其隔绝与一种或多种受体结合的受体分子和衍生物、融合蛋白（例如VEGF-TrapOtegeneron、和VEGFm-白树毒素（PeregrineJEGF特异性拮抗剂还包括VEGF多肽的拮抗性变体、针对VEGF的反义核碱基寡聚物、针对VEGF的小RNA分子、RNA适体、肽体、和针对VEGF的核酶。VEGF特异性拮抗剂还包括结合VEGF且能够阻断、抑制、消除、降低、或干扰VEGF生物学活性的非肽小分子。如此，术语“VEGF活性”明确包括VEGF介导的VEGF生物学活性。在某些实施方案中，VEGF拮抗剂将VEGF的表达水平或生物学活性降低或抑制了至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多。[0080]“抗VEGF抗体”指以足够亲和力和特异性结合VEGF的抗体。在某些实施方案中，所选择的抗体通常会具有足够的对VEGF的结合亲和力，例如，该抗体可以以介于IOOnM-1间的Kd值结合hVEGF。抗体亲和力可通过例如基于表面等离振子共振的测定法储如PCT申请公开文本No.W02005012359中所记载的BIAcore测定法）；酶联免疫吸附测定法ELISA;和竞争测定法例如RIA来测定。[0081]在某些实施方案中，抗VEGF抗体可用作治疗剂，用于靶向和干扰其中牵涉VEGF活性的疾病或疾患。还有，该抗体可进行其它生物学活性测定法，例如为了评估其作为治疗剂的效力。此类测定法是本领域已知的，而且取决于抗体的靶抗原和预定用途。例子包括HUVEC抑制测定法;肿瘤细胞生长抑制测定法如例如WO8906692中所记载的）；抗体依赖性细胞的细胞毒性ADCC和补体介导的细胞毒性CDC测定法美国专利No.5，500，362;及激动活性或造血测定法参见WO9527062。抗VEGF抗体通常不会结合其它VEGF同系物，诸如VEGF-B或VEGF-C，也不会结合其它生长因子，诸如P1GF、PDGF或bFGF。在一个实施方案中，抗VEGF抗体是与杂交瘤ATCCHB10709所生成的单克隆抗VEGF抗体A4.6.1结合相同表位的单克隆抗体。在另一个实施方案中，抗VEGF抗体是依照Prestaetal.1997CancerRes.57:4593-4599生成的重组人源化抗VEGF单克隆抗体，包括但不限于称作贝伐珠单抗Bevacizumab，BV;AVASTIN®的抗体。[0082]抗VEGF抗体“贝伐珠单抗BV”，也称作“rhuMAbVEGF”或“AVASTIN®”，是一种依照Prestaetal.1997CancerRes.57:4593-4599生成的重组人源化抗VEGF单克隆抗体。它涵盖突变的人IgG1框架区和来自鼠抗hVEGF单克隆抗体A.4.6.1其阻断人VEGF对其受体的结合的抗原结合互补决定区。贝伐珠单抗大约93%的氨基酸序列，包括大部分框架区，衍生自人IgGl，而大约7%的序列衍生自小鼠抗体A4.6.1。贝伐珠单抗具有约149，000道尔顿的分子量，而且是糖基化的。贝伐珠单抗和其它人源化抗VEGF抗体进一步记载于2005年2月26日公告的美国专利No.6,884,879,通过述及明确将其完整公开内容收入本文。[0083]如本文中使用的，术语“B20系列多肽”指包括结合VEGF的抗体的多肽。B20系列多肽包括但不限于自B20抗体的序列衍生的抗体或美国公开文本No.20060280747，美国公开文本No.20070141065和或美国公开文本No.20070020267中记载的B20衍生抗体，通过述及明确将这些专利申请的内容收入本文。在一个实施方案中，B20系列多肽是美国公开文本No.20060280747，美国公开文本No.20070141065和或美国公开文本No.20070020267中记载的820-4.1。在另一个实施方案中，820系列多肽是美国专利如.7,910,098中记载的820_4.1.1，通过述及将其完整公开内容收入本文。[0084]如本文中使用的，术语“G6系列多肽”指包括结合VEGF的抗体的多肽。G6系列多肽包括但不限于自G6抗体的序列衍生的抗体或美国公开文本No.20060280747，美国公开文本No.20070141065和或美国公开文本No.20070020267中记载的G6衍生抗体。美国公开文本No.20060280747，美国公开文本No.20070141065和或美国公开文本No.20070020267中记载的G6系列多肽包括但不限于G6-8，G6-23和G6-31。[0085]对于别的抗体，参见美国专利No.7，060，269，6，582，959，6，703，020;6，054，297;W09845332;WO9630046;W09410202;EP0666868B1;美国专利申请公开No·2006009360，20050186208,20030206899,20030190317,20030203409，和20050112126;及Popkovetal.,JournalofImmunologicalMethods288:149-1642004。在某些实施方案中，其它抗体包括那些结合人VEGF上包含残基F17，M18，D19，Y21，Y25，Q89，191，Κ101，E103，和C104或者包含残基F17，Y21，Q22，Y25，D63，183和Q89的功能性表位的。[0086]还知道其它抗VEGF抗体，而且记载于例如Liangetal·，JBiolChem281,951-9612006。[0087]如本文中使用的，“⑶20”指人B淋巴细胞抗原⑶20也称为⑶20、B淋巴细胞表面抗原BI、Leu-16、Bp35、BM5、和LF5;序列以SwissProt数据库条目Pl1836为特征）是一种位于前B和成熟B淋巴细胞上的具有约35kD分子量的疏水性跨膜蛋白（Valentine，M.A.etal.，J.Biol.Chem.26419198911282-11287；Tedder,T.F.etaI.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.851988208-12；Stamenkovic,I.etal.,J.Exp.Med.16719881975-80；Einfeld,D.A.etal.,EMB0J.71988711-7；Tedder,T.F.etal.,J.Immuno1.14219892560-8。相应的人基因是跨膜4域，A亚家族，成员I，又称为MS4A1。此基因编码跨膜4A基因家族的一个成员。此初生蛋白质家族的成员以共同的结构特征和相似的内含子外显子剪接边界为特征，并且在造血细胞和非淋巴样组织中展现出独特的表达样式。此基因编码B淋巴细胞表面分子，其在B细胞发育及分化成浆细胞中发挥作用。在一簇家族成员中，此家族成员定位于llql2。此基因的可变剪接产生编码相同蛋白质的两种转录物变体。[0088]术语“⑶20”和“CD20抗原”在本文中可互换使用，包括由细胞天然表达的或者在用CD20基因转染的细胞上表达的人CD20的任何变体、同等型和物种同系物。本发明的抗体对⑶20抗原的结合通过灭活⑶20而介导对表达⑶20的细胞例如肿瘤细胞）的杀伤。可以通过下列一项或多项机制而发生对表达⑶20的细胞的杀伤:细胞死亡凋亡诱导、ADCC和⑶C。[0089]如本领域中认可的，CD20的同义词包括B淋巴细胞抗原⑶20、B淋巴细胞表面抗原Bl、Leu-16、Bp35、BM5jPLF5。[0090]依照本发明的术语“抗CD20抗体”是特异性结合CD20抗原的抗体。根据抗CD20抗体对⑶20抗原的结合特性和生物学活性，两种类型的抗⑶20抗体（I型和II型抗⑶20抗体可以依照Cragg,M.S.etal.,Blood10320042738-2743;及Cragg,M.S.etal.,Blood10120031045-1052区别，参见表1。[0091]表1:1型和II型抗⑶20抗体的特性[0092][0094]II型抗⑶20抗体的例子包括例如人源化B-Ly1抗体IgGl—种嵌合的人源化IgGl抗体，如披露于WO2005044859中的）、llB8IgGl如披露于WO2004035607中的）、和AT801gG1。通常，IgG1同种型的II型抗⑶20抗体显示特征性的⑶C特征。与IgG1同种型的I型抗体相比，II型抗⑶20抗体具有降低的⑶C若为IgGl同种型的话）。[0095]I型抗CD20抗体的例子包括例如利妥昔单抗、HI47IgG3ECACC，杂交瘤）、2C6IgGl如披露于WO2005103081中的）、2F2IgGl如披露于WO2004035607和WO2005103081的）和2H7IgGl如披露于WO2004056312中的）。[0096]依照本发明的无岩藻糖基化抗CD20抗体优选是II型抗CD20抗体，更优选是WO2005044859和WO2007031875中描述的无岩藻糖基化人源化B-Lyl抗体。[0097]“利妥昔单抗”抗体参照抗体；I型抗⑶20抗体的例子是一种针对人⑶20抗原的含有人γ1鼠恒定域的遗传工程嵌合单克隆抗体。然而，这种抗体不是糖工程化的且不是无岩藻糖基化的，因此具有至少85%的岩藻糖量。此嵌合抗体含有人γΐ恒定域，并且在1998年4月17日公告的归于IDECPharmaceuticalsCorporation的US5,736,137Andersen等）中以名称“C2B8”鉴定。利妥昔单抗批准用于治疗复发性或顽固性低级或滤泡性、CD20阳性、B细胞非何杰金氏淋巴瘤患者。体外作用机制研究已经显示了利妥昔单抗展现出人补体依赖性细胞毒性CDCReff,M.E.etal.，Blood8321994435-445。另外，它在测量抗体依赖性细胞的细胞毒性ADCC的测定法中展现出活性。[0098]术语“人源化B-Lyl抗体”指如WO2005044859和WO2007031875中所披露的人源化B-Lyl抗体，其通过用来自IgGl的人恒定域嵌合化及接着的人源化自鼠单克隆抗CD20抗体B-Lyl鼠重链可变区（VH:SEQIDNO:1;鼠轻链可变区（VL:SEQIDNO:2参见Poppema，S.andVisser，L.,BiotestBulletin31987131-139获得（参见WO2005044859和WO2007031875。这些“人源化B-Lyl抗体”详细披露于WO2005044859和WO2007031875中。[0099]在一个实施方案中，“人源化B-Lyl抗体”具有选自下组的重链可变区（VH:SEQIDNO:3至SEQIDNO:19WO2005044859和WO2007031875的B-HH2至B-HH9和B-HL8至B-HL17。在一个具体的实施方案中，此类可变域选自下组：SEQIDNo.3、4、7、9、ll、13和15W02005044859和WO2007031875的B-HH2、B-HH3、B-HH6、B-HH8、B-HL8、B-HLlGPB-HL13。在一个具体的实施方案中，“人源化B-Lyl抗体”具有轻链可变区（VLSEQIDN〇:20TO2005044859和WO2007031875的B-KV1。在一个具体的实施方案中，“人源化B-Lyl抗体”具有重链可变区（VHSEQIDNo:7W02005044859和WO2007031875的B-HH6和轻链可变区（VLSEQIDNo:20W02005044859和WO2007031875的B-KV1。此外，在一个实施方案中，人源化B-Lyl抗体是IgGl抗体。依照本发明，依照记载于WO2005044859、W02004065540、W02007031875、Umana，P.etal.,NatureBiotechnol.171999176-180及WO99154342中的规程在Fe区中糖工程化改造GE此类无岩藻糖基化人源化B-Lyl抗体。在一个实施方案中，无岩藻糖基化糖工程人源化B-Lyl是B-HH6-B-KV1GE。在一个实施方案中，抗CD20抗体为奥奴珠单抗（recommendedINN，WH0DrugInformation，Vol.26，No.4,2012，p.453。如本文中使用的，奥奴珠单抗与GAlOl或R05072759同义。这替换所有先前的版本例如Vol·25，Νο·1，2011，ρ·75-76，而且以前称作afutuzumabrecommendedINN,WHODrugInformation，Vol·23，No·2，2009，p·176;Vol·22,No·2，2008，p·124。在一些实施方案中，人源化B-Lyl抗体为包含如下重链和轻链的抗体或其抗原结合片段，该重链包含SEQIDN0:21的氨基酸序列，该轻链包含SEQIDN0:22的氨基酸序列。在一些实施方案中，人源化B-Lyl抗体包含如下重链可变区和轻链可变区，该重链可变区包含SEQIDNO:21的三个重链⑶R，该轻链可变区包含SEQIDN0:22的三个轻链⑶R。[0100]重链（SEQIDN0:21[0103]轻链（SEQIDNO:22[0101][0102][0104][0105]在一些实施方案中，人源化B-Lyl抗体是无岩藻糖基化糖工程化人源化B-Lyl。此类糖工程人源化B-Lyl抗体在Fc区中具有改变的糖基化样式，优选具有降低的岩藻糖残基水平。优选地，岩藻糖量占Asn297处的寡糖总量的60%或更少在一个实施方案中，岩藻糖的量是40%至60%，在另一个实施方案中，岩藻糖的量是50%或更少，且在又一个实施方案中，岩藻糖的量是30%或更少）。而且，Fc区的寡糖优选是两分的。这些糖工程人源化B-Lyl抗体具有升高的ADCC。[0106]寡糖组分可以显著影响与治疗性糖蛋白的功效有关的特性，包括物理稳定性、对蛋白酶攻击的抗性、与免疫系统的相互作用、药动学、和特定生物学活性。此类特性可以不仅取决于寡糖的存在或缺乏，而且还取决于寡糖的特定结构。可以做出寡糖结构与糖蛋白功能间的一些概括。例如，某些寡糖结构经由与特定碳水化合物结合蛋白的相互作用来介导糖蛋白自血流的快速清除，而其它寡糖结构可以被抗体结合，并且触发不想要的免疫反应。（Jenkins，N.,NatureBiotechnol·141996975-81〇[0107]哺乳动物细胞由于其以对于人应用最相容的形式使蛋白质糖基化的性能而成为用于生产治疗性糖蛋白的优选宿主Cumming，D.A.etal.,Glycobiology11991115-30;Jenkins，Ν·etal·,NatureBiotechnol·141996975-81。细菌糖基化蛋白质非常罕见，并且与其它类型的常见宿主，诸如酵母、丝状真菌、昆虫和植物细胞一样，其产生与自血流快速清除、不想要的免疫相互作用、和在一些特定的情况中）降低的生物学活性有关的糖基化样式。在哺乳动物细胞中，在过去二十年期间最常使用中国仓鼠卵巢CHO细胞。在给出合适的糖基化样式外，这些细胞容许遗传稳定的、高生产性克隆细胞系的一致生成。它们可以使用无血清培养基在简单的生物反应器中培养至高密度，并且容许开发安全且可再现的生物工艺。其它常用的动物细胞包括幼仓鼠肾BHK细胞、NSO和SP20-小鼠骨髓瘤细胞。新近，还已经测试了来自转基因动物的生成（Jenkins,N·,NatureBiotechnol·141996975-981〇[0108]所有抗体在重链恒定区中的保守位置处都含有碳水化合物结构，其中每种同种型拥有独特的一批N连接的碳水化合物结构，其易变地影响蛋白质装配、分泌或功能性活性。Wright,A.andMorrison，S.L.,TrendsBiotech.15199726-32。根据加工程度，附着的N连接的碳水化合物的结构变化得相当大，并且可以包括高甘露糖的、多分支的及双触角biantennary复合寡糖。（Wright,A.andMorrison，S.L.,TrendsBiotech.15199726-32。通常，存在着对特定糖基化位点处附着的核心寡糖结构的异质加工，使得甚至单克隆抗体以多种糖化同种型glycoform存在。同样地，已经显示了细胞系间存在抗体糖基化的重大差异，并且甚至对在不同培养条件下培养的给定细胞系看到轻微差异。（Lifely，M.R.etal.,Glycobiology5⑶（1995813-22。[0109]—种在维持简单的生产工艺并潜在地避免显著的、不想要的副作用的情况中获得效力大幅升高的方式是通过工程化改造单克隆抗体的寡糖组分来增强其天然的、细胞介导的效应器功能，如记载于Umana,P.etal.,NatureBiotechnol.l71999176-180和US6，602,684的。1861型抗体（即癌症免疫疗法中最常使用的抗体是在每个〇12域中的4811297处具有保守的N连接的糖基化位点的糖蛋白。附着于Asn297的两个复合双触角寡糖掩埋于各CH2域间，与多肽主链形成广泛的接触，并且其存在对于抗体介导效应器功能诸如抗体依赖性细胞的细胞毒性ADCC是至关重要的0^€617，]\^.6七31.，6173〇1^〇1^751995813-822；Jefferis,R.etal.,ImmunolRev.163199859-76；ffright,A.andMorrison,S.L.,TrendsBiotechnol·15199726-32〇[0110]先前显示了βM-N-乙酰葡糖胺转移酶111“GnTII17y”）（一种催化两分型寡糖形成的糖基转移酶在中国仓鼠卵巢CHO细胞中的过表达显著提高由工程化改造的CHO细胞生成的抗成神经细胞瘤嵌合单克隆抗体（chCE7的体外ADCC活性。（参见Umana,P.etal.,NatureBiotechnol.171999176-180;及WO99154342,在此通过提及而收录其全部内容）。抗体chCE7属于具有高肿瘤亲和力和特异性，但是在缺乏GnTin酶的标准工业细胞系中生产时具有太少的效力以致在临床上无用的一大类未缀合的单克隆抗体Umana，P.etal·,NatureBiotechnol·171999176-180。该研究第一次显示了可以通过工程化改造抗体生成细胞以表达GnTIII来获得ADCC活性的大幅升高，其还导致恒定区Fe结合的两分型寡糖包括两分型非岩藻糖基化寡糖比例的增加，高于天然存在的抗体中找到的水平。[0111]“治疗”指治疗性处理和预防性或防范性措施二者。需要治疗的受试者包括早就患有病症的受试者以及要预防病症的受试者。[0112]“病症”指将会从处理中获益的任何疾患，包括但不限于慢性和急性病症，或者包括那些使哺乳动物趋向于所讨论病症的病理状况的疾病。病症包括血管发生性病症。如本文中使用的，“血管发生性病症”指涉及异常血管发生或异常血管通透性或渗漏的任何疾患。本文中要治疗的血管发生性病症的非限制性例子包括恶性和良性肿瘤;非白血病和淋巴样恶性肿瘤;和特别是肿瘤癌症转移。[0113]“异常血管发生”发生于病情中的或引起病情的新血管生长过度或其它方面不当例如从医学观点看不良的血管发生位置、时机、程度、或启动时。在一些情况中，过度的、失控的、或其它方面不当的血管发生发生于有促成病情恶化或引起病情的新血管生长时。新血管可供应患病组织，破坏正常组织，而且，在癌症的情况中，新血管可容许肿瘤细胞逃入循环并停留在其它器官中（肿瘤转移）。涉及异常血管发生的病症的例子包括但不限于癌症，尤其是血管化实体瘤和转移瘤包括结肠癌、肺癌尤其是小细胞肺癌、或前列腺癌），由眼部新血管形成引起的疾病尤其是糖尿病性失明、视网膜病变、原发性糖尿病性视网膜病变primarilydiabeticretinopathy或老年性黄斑变性，脉络膜新血管形成CNV，糖尿病黄斑水肿，病理性近视，vonHippel-Lindau病，眼部组织胞浆菌病，视网膜中央静脉阻塞CRVO，角膜新血管形成，视网膜新血管形成和发红;银肩病、银肩病关节炎、成血管细胞瘤诸如血管瘤;炎性肾病，诸如肾小球肾炎，尤其是膜增生性肾小球肾炎、溶血性尿毒综合征haemolyticuremicsyndrome、糖尿病肾病或高血压肾硬化;各种炎性疾病，诸如关节炎，尤其是类风湿性关节炎、炎性肠病、银肩病、结节病、动脉硬化和移植后发生的疾病、子宫内膜异位症或慢性哮喘，及其它疾患。[0114]“异常血管通透性”发生于疾病状态中的或引起疾病状态的血管与血管外区室之间的流体、分子例如离子和营养物）和细胞例如淋巴细胞）的流动过度或其它方面不当例如从医学观点看不良的血管通透性位置、时间、程度、或启动）时。异常血管通透性可导致过度的或其它方面不当的离子、水、营养物、或细胞经由血管系统“渗漏”。在有些情况中，过度的、失控的、或其它方面不当的血管通透性或血管渗漏加剧或诱发疾病状态，包括例如与肿瘤包括脑瘤有关的水肿；与恶性肿瘤有关的腹水;梅格斯氏Meigs综合征;肺部炎症；肾病综合症征；心包积液;胸腔积液;与心血管疾病储如心肌梗死和中风后的疾患有关的通透性等等。本发明涵盖治疗那些形成或有风险形成与异常血管通透性或渗漏有关的疾病和病症的患者。[0115]术语“细胞增殖性病症”和“增殖性病症”指与一定程度的异常细胞增殖有关的病症。在一个实施方案中，细胞增殖性病症指癌症。在一个实施方案中，细胞增殖性病症是肿瘤。[0116]“肿瘤”在用于本文时指所有赘生性neoplastic细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，及所有癌前pre-cancerous和癌性细胞和组织。术语“癌症”、“癌性”、“细胞增殖性病症”、“增殖性病症”和“肿瘤”在本文中提到时并不互相排斥。[0117]术语“癌症”和“癌性”指向或描述哺乳动物中特征通常为细胞生长不受调节的生理疾患。癌症的例子包括但不限于癌，淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴样恶性肿瘤。此类癌症的更具体例子包括但不限于鳞状细胞癌（例如上皮鳞状细胞癌）、肺癌包括小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺的腺癌、和肺的鳞癌）、腹膜癌、肝细胞癌、胃癌包括胃肠癌和胃肠基质癌）、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、尿道癌、肝瘤、乳腺癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、肛门癌、阴茎癌、黑素瘤、浅表扩散性黑素瘤、恶性雀斑样痣黑素瘤、肢端黑素瘤、结节性黑素瘤、多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤（包括低级滤泡性非何杰金氏淋巴瘤NHL、小淋巴细胞性SLNHL、中级滤泡性NHL、中级弥漫性NHL、高级成免疫细胞性NHL、高级成淋巴细胞性NHL、高级小无核裂细胞性NHL、贮积病bulkydiseaseNHL、套细胞淋巴瘤、AIDS相关淋巴瘤、和瓦尔登斯特伦氏Waldenstrom巨球蛋白血症）、慢性淋巴细胞性白血病CLL、急性成淋巴细胞性白血病ALL、毛细胞性白血病、慢性成髓细胞性白血病、和移植后淋巴增殖性病症PTLD、以及与瘢痣病phakomatoses、水肿诸如与脑瘤有关的）和梅格斯氏Meigs综合征有关的异常血管增殖、脑瘤和脑癌、以及头颈癌、及相关转移。在某些实施方案中，适合于通过本发明的抗体来治疗的癌症包括乳腺癌、结肠直肠癌、直肠癌、非小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、非何杰金氏淋巴瘤NHL、肾细胞癌、前列腺癌、肝癌、胰腺癌、软组织肉瘤、卡波西Kaposi氏肉瘤、类癌癌carcinoidcarcinoma、头颈癌、卵巢癌、间皮瘤、和多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，癌症选自：小细胞肺癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、黑素瘤、乳腺癌、胃癌、结肠直肠癌CRC、和肝细胞癌。还有，在一些实施方案中，癌症选自：非小细胞肺癌、结肠直肠癌、成胶质细胞瘤和乳腺癌，包括那些癌症的转移性形式。[0118]术语“抗癌疗法”指在治疗癌症中有用的疗法。抗癌治疗剂的例子包括但不限于例如化疗剂、生长抑制剂、细胞毒剂、放射疗法中所使用的药剂、抗血管发生剂、凋亡剂、抗微管蛋白剂、和其它治疗癌症的药剂，诸如抗HER-2抗体、抗CD20抗体、表皮生长因子受体EGFR拮抗剂例如酪氨酸激酶抑制剂）、HER1EGFR抑制剂例如erlotinibTarcevaTM、血小板衍生生长因子抑制剂（例如GleevecTMImatinibMesylate、C0X_2抑制剂（例如celecoxib、干扰素、细胞因子、结合一种或多种以下靶物的拮抗剂（例如中和性抗体）ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR-β、BlyS、APRIL、BCMA或VEGF受体、TRAILApo2、和其它生物活性和有机化学剂，等。本发明还包括它们的组合。[0119]“血管发生因子”或“血管发生剂”指涉及刺激血管发育，例如促进血管发生angiogenesis、内皮细胞生长、血管稳定性和或血管生成vasculogenesis等的生长因子或其受体。例如，血管发生因子包括但不限于例如VEGF和VEGF家族的成员及其受体VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D、VEGFR1、VEGFR2和VEGFR3、P1GF、PDGF家族、成纤维细胞生长因子家族FGF、TIE配体血管生成素、ANGPTl、ANGPT2、TIEl、TIE2、ephrin、Bv8、德尔塔样配体4DLL4、Del-l、酸性aFGF和碱性bFGF成纤维细胞生长因子、FGF4、FGF9、BMP9、BMP10、卵泡抑素Follistatin、粒细胞集落刺激因子G-CSF、GM-CSF、肝细胞生长因子HGF散射因子（SF、白介素-8IL-8、CXCL-12、瘦蛋白（Leptin、Midkine、神经毡蛋白、NRPl、NRP2、胎盘生长因子、血小板衍生内皮细胞生长因子PD-ECGF、血小板衍生生长因子尤其是]3DGF-BB、PDGFR-a、或]3DGFR-P、PleiotrophinPTN、Progranulin、Proliferin、转化生长因子-αTGF-α、转化生长因子-0TGF-0、肿瘤坏死因子-αTNF-α、Alkl、CXCR4、刻缺蛋白INotchl、刻缺蛋白4Notch4、561113厶、361]13〇、361]13卩、1?〇13〇4、等。它会进一步包括促进血管发生的因子，诸如ESMl和Perlecan。它还包括加速伤口愈合的因子，诸如生长激素、胰岛素样生长因子-IIGF-I、VIGF、表皮生长因子EGF、EGF样域，多重7EGFL7、CTGF及其家族的成员、及TGF-α和TGF-β。参见例如KlagsbrunandD’Amore1991Annu.Rev.Physiol.53:217-39；StreitandDetmar2003Oncogene22:3172-3179；FerraraAlitalo1999NatureMedicine512:1359-1364；Toninietal.2003Oncogene22:6549-6556例如列举已知血管发生因子的表I;Sato2003Int.J.Clin.Oncol·8:200-206。[0120]“抗血管发生剂”或“血管发生抑制剂”指或直接或间接抑制血管发生angiogenesis、血管生成vasculogenesis、或不想要的血管通透性的小分子量物质、多核苷酸包括例如抑制性RNARNAi或siRNA、多肽、分离的蛋白质、重组蛋白、抗体、或其缀合物或融合蛋白。应当理解，抗血管发生剂包括那些结合并阻断血管发生因子或其受体的血管发生活性的药剂。例如，抗血管发生剂是上文定义的血管发生剂的抗体或其它拮抗剂，例如VEGF-A的或VEGF-A受体例如KDR受体或Flt-I受体）的抗体、抗I3DGFR抑制剂、阻断VEGF受体信号传导的小分子（例如？11787212284、31]6668、:811丁:^：^丁@31]1124881111丨丨丨11讣malate、AMG706、或那些记载于例如国际专利公开文本WO2004113304的）。抗血管发生剂包括但不限于下述药剂：VEGF抑制剂诸如VEGF特异性拮抗剂、EGF抑制剂、EGFR抑制剂、ErbitUX®cetuximab,ImCloneSystems,Inc.,Branchburg,N.J.nVectibix®panitumumab,Amgen，Thousand0aks，Calif·、TIE2抑制剂、IGFlR抑制剂、COX-II环氧合酶II抑制剂、MMP-2基质金属蛋白酶2抑制剂、和MMP-9基质金属蛋白酶9抑制剂、CP-547,632PfizerInc.,NY,USA^AxitinibPfizerInc.；AG-〇13736^ZD-6474AstraZeneca、AEE788Novartis、AZD_2171、VEGFTrapRegeneronAventis、Vatalanib也称作PTK-787，ZK-222584:NovartisScheringAG、Macugenpegaptaniboctasodium,NX-1838,EYE-001,PfizerInc·GiIeadEyetech、IM862CytranInc·ofKirkland,Wash·，USA;和angiozyme—种来自RibozymeBoulder，Colo·和ChironEmeryville，Calif.的合成核酶及其组合。其它血管发生抑制剂包括血小板反应蛋白I、血小板反应蛋白2、胶原IV和胶原XVIIIJEGF抑制剂披露于美国专利No.6，534，524和No.6，235，764，完整收录二者用于所有目的。抗血管发生剂还包括天然血管发生抑制剂，例如血管他丁（angiostatin、内皮他丁（endostatin、等。参见例如KlagsbrunandD’Amore1991Annu.Rev.Physiol.53:217-39；StreitandDetmar2003Oncogene22:3172-3179例如列举恶性黑素瘤中抗血管发生疗法的表3;FerraraAlitalo1999NatureMedicine512:1359-1364;Toninietal.20030ncogene22:6549-6556例如列举已知抗血管发生因子的表2;及Sato2003Int.J.Clin.Oncol.8:200-206例如列举临床试验中所使用的抗血管发生剂的表1。[0121]术语“抗血管发生疗法”指对于抑制血管发生有用的疗法，其包括施用抗血管发生剂。[0122]如本文中所使用的，术语“表达⑶20的癌症”指癌细胞显示⑶20抗原表达的所有癌症。优选地，如本文中所使用的表达CD20的癌症指淋巴瘤（优选B细胞非何杰金氏淋巴瘤NHL和淋巴细胞性白血病。此类淋巴瘤和淋巴细胞性白血病包括例如a滤泡性淋巴瘤、b小无核裂细胞淋巴瘤SmallNon-CleavedCellLymphoma伯基特Burkitt氏淋巴瘤包括地方性伯基特氏淋巴瘤、散发性伯基特氏淋巴瘤和非伯基特氏淋巴瘤）、c边缘区淋巴瘤包括结外边缘区B细胞淋巴瘤粘膜相关淋巴组织淋巴瘤，MALT、结边缘区B细胞淋巴瘤和脾边缘区淋巴瘤）、d套细胞淋巴瘤MCL、e大细胞淋巴瘤包括B细胞弥漫性大细胞淋巴瘤DLCL、弥漫性混合细胞淋巴瘤、免疫母细胞性淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、血管中心性淋巴瘤-肺B细胞淋巴瘤）、f毛细胞白血病、g淋巴细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦Waldenstrom氏巨球蛋白血症、h急性淋巴细胞性白血病ALL、慢性淋巴细胞性白血病CLL小淋巴细胞性淋巴瘤SLL、B细胞幼淋巴细胞白血病、i浆细胞赘生物、浆细胞骨髓瘤、多发性骨髓瘤、浆细胞瘤、j何杰金氏病。[0123]更优选地，表达⑶20的癌症是B细胞非何杰金氏淋巴瘤NHL。尤其是，表达⑶20的癌症是套细胞淋巴瘤MCL、急性淋巴细胞性白血病ALL、慢性淋巴细胞性白血病CLL、B细胞弥漫性大细胞淋巴瘤DLCL、伯基特氏淋巴瘤、毛细胞白血病、滤泡性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、边缘区淋巴瘤、移植后淋巴增殖性病症PTLD、HIV相关淋巴瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球蛋白血症、或原发性CNS淋巴瘤。[0124]术语“细胞毒剂”在用于本文时指抑制或防止细胞的功能和或引起细胞死亡或破坏的物质。该术语意图包括:放射性同位素，例如At211、I131、I125、Y9、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素；化疗剂，例如甲氨蝶呤（methotrexate、阿霉素adriamicin、长春花生物碱类vincaalkaloids长春新碱vincristine、长春碱vinblastine、依托泊苷etoposide、多柔比星doxorubicin、美法仑melphalan、丝裂霉素mitomycinC、苯丁酸氮芥chlorambucil、柔红霉素daunorubicin或其它嵌入剂;酶及其片段，诸如溶核酶;抗生素;和毒素，诸如小分子毒素或者细菌、真菌、植物或动物起源的酶活毒素，包括其片段和或变体;及下文披露的各种抗肿瘤药或抗癌药。下文记载了其它细胞毒剂。杀肿瘤药引起肿瘤细胞的破坏。[0125]“毒素”指能够对细胞的生长或增殖产生有害效果的任何物质。[0126]“化疗剂”指可用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的实例包括烷化剂类alkylatingagents，诸如塞替派（thiotepa和环磷酰胺（cyclophosphamideCYTOXAN®;磺酸焼基酯类alkylsulfonates，诸如白消安busulfan、英丙舒凡improsuIfan和哌泊舒凡（piposuIfan;氮丙啶类（aziridines，诸如苯佐替派benzodopa、卡波醌（carboquone、美妥替派meturedopa和乌瑞替派uredopa;乙撑亚胺类（ethylenimines和甲基蜜胺类methylameIamines，包括六甲蜜胺（altretamine、三乙撑蜜胺（triethylenemelamine、三乙撑磷酰胺（triethylenephosphoramide、三乙撑硫代磷酰胺triethylenethiophosphoramide和三轻甲蜜胺trimethylomelamine;番蒸枝内酯类acetogenin尤其是布拉他辛bulIatacin和布拉他辛酮bulIatacinone;δ-9-四氢大麻酷（tetrahydrocannabinol屈大麻酷（dronabinol，MARINOL®;β-拉帕醌（Iapachone;拉帕醇（Iapachol;秋水仙素类colchicines;白桦脂酸betulinicacid;喜树碱（camptothecin包括合成类似物托泊替康（topotecanHYCAMTIN®、CPT-11伊立替康（irinotecan，CAMPTOSAR®、乙酰喜树碱、东莫菪亭（scopoletin和9_氨基喜树喊）；苔藓抑素bryostatin;callystatin;CC_1065包括其阿多来新adozelesin、卡折来新（carzelesin和比折来新bizelesin合成类似物）；鬼臼毒素（podophyllotoxin;鬼臼酸（podophyllinicacid;替尼泊苷teniposide;隐藻素类（cryptophycins特别是隐藻素1和隐藻素8;多拉司他汀dolastatin;duocarmycin包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1;艾植塞洛素eleutherobin;pancratistatin;sarcodictyin;海绵抑素（spongistatin;氮芥类nitrogenmustards，诸如苯丁酸氮芥（chlorambucil、萘氮芥（chlornaphazine、胆磷酰胺（chlorophosphamide、雌莫司汀（estramustine、异环磷酰胺（ifosfamide、双氯乙基甲胺（mechlorethamine、盐酉爱氧氮芥（mechlorethamineoxidehydrochloride、美法仑（meIphalan、新氮芥（novembichin、苯芥胆甾醇（phenesterine、泼尼莫司汀prednimustine、曲磷胺（trofosfamide、尿喃啶氮芥（uracilmustard;亚硝脈类nitrosoureas，诸如卡莫司汀（carmustine、氯脲菌素（chlorozotocin、福莫司汀fotemustine、洛莫司汀（Iomustine、尼莫司汀（nimustine和雷莫司汀ranimnustine;抗生素类，诸如稀二炔类抗生素（enediyne如加利车霉素calicheamicin，尤其是加利车霉素γΐΐ和加利车霉素ωΐΐ参见例如Nicolaouetal.，Angew.ChemIntl.Ed.Engl.,33:183-1861994;CDP323,一种口服α-4整联蛋白抑制剂；蒽环类抗生素（dynemicin，包括dynemicinΑ;埃斯波霉素（esperamicin;以及新制癌素neocarzinostatin发色团和相关色蛋白稀二炔类抗生素发色团）、阿克拉霉素aclacinomysin、方文线菌素（actinomycin、氨茴霉素（authramycin、偶氮丝氨酉爱azaserine、博来霉素bleomycin、放线菌素Ccactinomycin、carabicin、洋红霉素caminomycin、嗜癌霉素（carzinophilin、色霉素（chromomycin、放线菌素Ddactinomycin、柔红霉素（daunorubicin、地托比星（detorubicin、6_二氮_5_氧-L-正亮氨酸、多柔比星doxorubicin包括ADRIAMYCfN®、吗啉代多柔比星、氰基吗啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星、盐酸多柔比星脂质体注射剂（DOXIL®,脂质体多柔比星TLCD-99MYOCET®、PEG化脂质体多柔比星CAELYX®、和脱氧多柔比星）、表柔比星（epirubicin、依索比星（esorubicin、伊达比星（idarubicin、麻西罗霉素marcellomycin、丝裂霉素类mitomycins诸如丝裂霉素C、霉酷酸（mycophenolicacid、诺拉霉素nogalamycin、橄榄霉素（olivomycin、培洛霉素peplomycin、泊非霉素（porfiromycin、卩票呤霉素（puromycin、三铁阿霉素（quelamycin、罗多比星rodorubicin、链黑菌素（streptonigrin、链佐星（streptozocin、杀结核菌素tubercidin、乌苯美司（ubenimex、净司他丁zinostatin、佐柔比星zorubicin;抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤、吉西他滨（gemcitabineGEMZAR®、替加氟（tegafurUFTORAL®、卡培他滨（capecitabineXELODA®、埃坡霉素（epothilone和5-氟尿喃啶（5-FU;考布他汀combretastatin;叶酸类似物，诸如二甲叶酸denopterin、甲氨蝶呤、蝶酰三谷氨酸pteropterin、三甲曲沙（trimetrexate;卩票呤类似物，诸如氟达拉滨（fludarabine、6_疏基卩票呤mercaptopurine、硫咪卩票呤（thiamiprine、硫鸟卩票呤thioguanine;喃啶类似物，诸如安西他滨ancitabine、阿扎胞苷azacitidine、6_氮尿苷、卡莫氟carmofur、阿糖胞苷cytarabine、双脱氧尿苷dideoxyuridine、去氧氟尿苷doxifluridine、依诺他滨enocitabine、氟尿苷floxuridine;雄激素类，诸如卡鲁睾酮（calusterone、丙酸屈他雄酮（dromostanolonepropionate、表硫雄醇epitiostanol、美雄焼mepitiostane、睾内酯（testolactone;抗肾上腺类，诸如氨鲁米特aminoglutethimide、米托坦mitotane、曲洛司坦（trilostane;叶酸补充剂，诸如亚叶酸（frolinicacid;醋葡醛内酯（aceglatone;醛磷酰胺糖苷（aldophosphamideglycoside;氨基乙酰丙酸（aminolevulinicacid;恩尿喃啶（eniluracil;安B丫啶amsacrine;bestrabucil;比生群（bisantrene;依达曲沙（edatraxate;地磷酰胺defofamine;地美可辛（demecolcine;地B丫醌（diaziquone;elformithine;依利醋鞍elliptiniumacetate;epothilone;依托格鲁（etoglucid;硝酸镓；轻脲hydroxyurea;香燕多糖（Ientinan;氯尼达明（Ionidainine;美登木素生物碱类maytansinoids，诸如美登素（maytansine和安丝菌素（ansamitocin;米托胍腙mitoguazone;米托蒽醌（mitoxantrone;莫哌达醇（mopidanmol;二胺硝卩丫啶nitraerine;喷司他丁（pentostatin;蛋氨氮芥（phenamet;卩比柔比星（pirarubicin;洛索蒽醌（Iosoxantrone;2_乙基酰餅（ethylhydrazide;丙卡巴餅（procarbazine;PSK®多糖复合物（JHSNaturalProducts，Eugene，Oreg.;雷佐生（razoxane;根霉素rhizoxin;西索菲兰（sizofuran;螺旋锗（spirogermanium;细交链孢菌酮酸tenuazonicacid;三亚胺醌（triaziquone;2，2’，2”-三氯三乙胺；单端孢菌素类trichothecenes尤其是T-2毒素、癀孢菌素verracurinA、杆孢菌素roridinA和蛇行菌素（anguidine;乌拉坦（urethan;长春地辛（vindesineELDISINE®,FILDESIN®:;达卡巴嗪（dacarbazine;甘露醇氮芥mannomustine;二溴甘露醇（mitobronitol;二溴卫矛醇（mitolactol;哌泊溴焼pipobroman;gacytosine;阿糖胞苷（arabinoside“Ara_C”）；塞替派（thiotepa;类紫杉醇（taxoids，例如帕利他塞（paclitaxelTAXOL®，Bristol-MyersSquibbOncology,Princeton，N.J.、清蛋白改造的纳米颗粒剂型帕利他塞ABRAXANE™和多西他塞（doxetaxelTAX〇TERE®，Rhome_PouleneRorer,Antony,France;苯丁酸氮芥chloranbucil;6_硫鸟噪呤（thioguanine;疏基噪呤mercaptopurine;甲氨蝶呤methotrexate;钼剂，诸如顺钼（cisplatin、奥沙利钼（oxaliplatin例如ELGXATIN®和卡铂（carboplatin;长春药类vincas，其阻止微管蛋白聚合形成微管，包括长春喊（vinblastineVELBAN®、.长春新喊（vincristineONCOVIN®^、.长春地辛（vindesineELDISINE®,FILDESIN®、和长春瑞滨（vinorelbineNAVELBINE®;依托泊苷（etoposideVP-16;异环磷酰胺（ifosfamide;米托蒽醌mitoxantrone;亚叶酸（Ieucovorin;能灭瘤（novantrone;依达曲沙（edatrexate;道诺霉素daunomycin;氨基蝶呤aminopterin;伊本膦酸盐（ibandronate;拓扑异构酶抑制剂RFS2000;二氟甲基鸟氨酸（DMFO;类维A酸（retinoids，诸如维A酸（retinoicacid，包括贝沙罗汀（bexarotenuTARGRETIN®;二勝酸盐类（bisphosphonates，诸如氯膦酸盐（clodronate例如BONEFOS®或OSTAC®、依替膦酸钠（etidronateD1DROCAL'®x.NE-58095、卩坐来膦酸卩坐来膦酸盐（zoledronicacidzoledronateZOMETA®、阿伦膦酸盐（alendronateFOSAMAX®、帕米膦酸盐（pamidronateAREDIA®、替鲁膦酸盐（tiludronateSKELID®或利塞膦酸盐（risedronateACTONEL®;以及曲沙他滨troxacitabine1,3-二氧戊环核苷胞啼啶类似物）；反义寡核苷酸，特别是抑制牵涉异常细胞增殖的信号途经中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如例如PKC-a、Raf、H-Ras和表皮生长因子受体（EGF-R例如依洛替尼（erlotinibTarceva™;和降低细胞增殖的VEGF-A;疫苗，诸如THERATOPE®疫苗和基因疗法疫苗，例如ALLOVECTIN®疫苗、LEUVECTIN®疫苗和VAXID®疫苗;拓扑异构酶1抑制剂（例如LURTOTECAN®;rmRH例如ABARELIX®;BAY439006sorafenib;Bayer;SU-11248sunitinib，SUTEMT_,Pfizer;哌立福辛（perifosine，C0X_2抑制剂如塞来考昔（celecoxib或艾托考昔（etoricoxib，蛋白体抑制剂（例如PS341;bortezomib.VELCADEC®;XI-779;tipifarnibR11577;orafenib，ABT510;Bcl_2抑制剂，诸如oblimersensodiumGENASENSE®;pixantrone;EGFR抑制剂；酪氨酸激酶抑制剂；丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂，诸如雷帕霉素（rapamycinsirolimus，RAPAMUNE®;法尼基转移酶抑制剂，诸如IonafarniMSCH6636，SARASAR™;及任何上述各项的药学可接受盐、酸或衍生物；以及两种或更多种上述各项的组合，诸如CHOP环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙联合疗法的缩写和FOLFOX奥沙利铂EL0XATIN™联合5-FU和亚叶酸的治疗方案的缩写），及任何上述物质的药剂学可接受的盐、酸或衍生物；以及两种或多种上述物质的组合。[0127]本文中所定义的化疗剂包括“抗激素剂”或“内分泌治疗剂”，其作用于调节、降低、阻断、或抑制能促进癌症生长的激素的效果。它们自身可以是激素，包括但不限于:抗雌激素类和选择性雌激素受体调控物类（SERM，包括例如他莫昔芬（tamoxifen包括NOLVADEX®他莫昔芬）、雷洛昔芬raloxifene、屈洛昔芬droloxifene、4_轻基他莫昔芬、曲沃昔芬（trioxifene、那洛昔芬keoxifene、LY117018、奥那司酬onapristone和FARESTON⑯托瑞米芬toremifene;抑制在肾上腺中调节雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制剂，诸如例如45-咪卩坐、氨鲁米特aminoglutethimide、MEGASE®醋酸甲地孕酮（megestrolacetate、AROlVIASIN®依西美坦（exemestane、福美坦formestanie、法倔卩坐（fadrozole'RIVISOR®1伏罗卩坐（vorozole、FEMARA®来曲P坐（Ietrozole和ARIMIDEX®阿那曲卩坐（anastrozole;抗雄激素类，诸如氟他米特flutamide、尼鲁米特nilutamide、比卡米特bicalutamide、亮丙瑞林（Ieuprolide、和戈舍瑞林goserelin;以及曲沙他滨（troxacitabine1,3-二氧戊环核苷胞啼啶类似物）；反义寡核苷酸，特别是抑制牵涉异常abherant细胞增殖的信号途经中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如例如PKC-α、Raf和Η-Ras;核酶，诸如VEGF表达抑制剂（例如ANGIOZYME®核酶）和HER2表达抑制剂；疫苗，诸如基因疗法疫苗，例如ALLOVECTIN®疫苗、LEUVECTIN®疫苗和VAXID®疫苗；PR〇LEUKIN®rlL-2;LURTOTECAN®拓扑异构酶1抑制剂;ABARELIX®rmRH;长春瑞滨Vinorelbine和埃斯波霉素Bsperamicins见美国专利No.4,675,187;及任何上述物质的药剂学可接受的盐、酸或衍生物；以及两种或多种上述物质的组合。[0128]“生长抑制剂”在用于本文时指在体外或在体内抑制细胞生长的化合物或组合物。在一个实施方案中，生长抑制剂是阻止或降低表达抗体所结合的抗原的细胞增殖的生长抑制性抗体。在另一个实施方案中，生长抑制剂可以是显著降低处于S期的细胞百分比的药剂。生长抑制剂的例子包括阻断细胞周期行进处于S期以外的位置的药剂，诸如诱导Gl停滞和M期停滞的药剂。经典的M期阻断剂包括长春药类vincas长春新碱vincristine和长春碱（vinblastine、紫杉烧类（taxanes、和拓扑异构酶II抑制剂诸如多柔比星doxorubicin、表柔比星epirubicin、柔红霉素daunorubicin、依托泊苷etoposide和博来霉素bleomycin。那些阻滞Gl的药剂也溢出进入S期停滞，例如DNA烷化剂类诸如他莫昔芬（tamoxifen、泼尼松（prednisone、达卡巴嗪（dacarbazine、双氯乙基甲胺mechlorethamine、顺钼（cisplatin、甲氨蝶呤（methotrexate、5_氣尿啼啶（5-fluorouracil和ara_C。更多信息可参见Mendelsohn和Israel编，《TheMolecularBasisofCancer〉〉，第I章，题为“CelIcycleregulation,oncogenes,andantineoplasticdrugs”，Murakami等人，WBSaunders，Philadelphia，1995,例如第13页。紫杉烧类（紫杉醇paclitaxel和多西他赛docetaxel是衍生自紫杉树的抗癌药。衍生自欧洲紫杉的多西他赛（TAXOTERE®，Rhone_PoulencRorer是紫杉醇（TAXOL®，Bristol-MyersSquibb的半合成类似物。紫杉醇和多西他赛促进由微管蛋白二聚体装配成微管并通过防止解聚使微管稳定，导致对细胞中有丝分裂的抑制。[0129]“放射疗法”或“放疗”指使用定向伽马射线或贝塔射线来诱发对细胞的足够损伤，以限制细胞正常发挥功能的能力或全然破坏细胞。应当领会，本领域知道许多方式来确定治疗的剂量和持续时间。典型的治疗作为一次施用来给予，而典型的剂量范围为每天10-200个单位戈瑞Gray。[0130]用于治疗目的的“受试者”或“个体”指归入哺乳类的任何动物，包括人，家畜和牲畜，及动物园动物、体育运动用动物、或宠物动物，诸如犬、马、猫、牛等。优选地，哺乳动物为人。[0131]本文中术语“抗体”以最广义使用，明确覆盖单克隆抗体包括全长单克隆抗体）、多克隆抗体、多特异性抗体例如双特异性抗体）、及抗体片段，只要它们展现出期望的生物学活性。[0132]“分离的”抗体指已经鉴定且自其天然环境的成分分开和或回收的抗体。其天然环境的污染性成分指将会干扰该抗体的研究、诊断或治疗用途的物质，可包括酶、激素、和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在有些实施方案中，将抗体纯化至（1根据例如Lowry法的测定，抗体重量超过95%，而在有些实施方案中，重量超过99%，（2足以通过使用例如转杯式测序仪获得至少15个残基的N-末端或内部氨基酸序列的程度，或3根据还原性或非还原性条件下的SDS-PAGE及使用例如考马斯蓝或银染色，达到同质。既然抗体天然环境的至少一种成分不会存在，那么分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体。然而，分离的抗体通常将通过至少一个纯化步骤来制备。[0133]“天然抗体”指通常由两条相同的轻L链和两条相同的重H链构成的约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白。每条轻链通过一个共价二硫键与重链连接，而二硫键的数目在不同免疫球蛋白同种型的重链间有变化。每条重链和轻链还具有间隔规律的链内二硫桥。每条重链在一端具有一个可变域Vh，接着是多个恒定域。每条轻链在一端具有一个可变域νϋ，而另一端是一个恒定域。轻链的恒定域与重链的第一恒定域排列在一起，而轻链的可变域与重链的可变域排列在一起。认为特定的氨基酸残基在轻链与重链可变域之间形成界面。[0134]术语“恒定域”指免疫球蛋白分子中的如下部分，其相对于免疫球蛋白的其它部分，即含有抗原结合位点的可变域，具有更加保守的氨基酸序列。恒定域含有重链的Ch1、Ch2和Ch3域合成CH及轻链的CHL域CL域。[0135]抗体的“可变区”或“可变域”指抗体重链或轻链的氨基末端结构域。重链的可变域可以称为“VH”。轻链的可变域可以称为“VL”。这些结构域一般是抗体的最易变部分且包含抗原结合位点。[0136]术语“可变的”指可变域中的某些部分在抗体间序列差异广泛且用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性的实情。然而，变异性并非均匀分布于抗体的整个可变域。它集中于轻链和重链可变域中称作高变区HVR的三个区段。可变域中更加高度保守的部分称作框架区（FR。天然重链和轻链的可变域各自包含四个FR区，它们大多采取β-折叠片构象，通过形成环状连接且在有些情况中形成β-折叠片结构一部分的三个HVR连接。每条链中的HVR通过FR区非常接近的保持在一起，并与另一条链的HVR—起促成抗体的抗原结合位点的形成（参见Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版,NationalInstituteofHealth,Bethesda,Md.1991。恒定域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应器功能，诸如抗体在抗体依赖性细胞的细胞毒性中的参与。[0137]根据其恒定域的氨基酸序列，来自任何哺乳动物物种的抗体免疫球蛋白）的“轻链”可归入两种截然不同的型中的一种，称作卡帕（“κ”）和拉姆达（“λ”）。[0138]如本文中使用的，术语IgG“同种型”或“亚类”意指由其恒定区的化学和抗原特征定义的任何免疫球蛋白亚类。[0139]根据其重链恒定域的氨基酸序列，抗体免疫球蛋白）可归入不同的类。免疫球蛋白有五大类：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中有些可进一步分为亚类（同种型），例如IgGi、IgG2、IgG3、IgG4、IgAjPIgA2。将与不同类的免疫球蛋白对应的重链恒定域分别称作α、δ、ε、γ和μ。不同类别免疫球蛋白的亚基结构和三维构造是众所周知的，一般性描述于例如Abbasetal.,CellularandMol.Immunology，4thed.W.B.Saunders，Co.,2000。抗体可以是抗体与一种或多种其它蛋白质或肽共价或非共价连接而形成的更大融合分子的一部分。[0140]术语“全长抗体”和“完整抗体”在本文中可互换使用，指基本上完整形式的抗体，而非下文定义的抗体片段。该术语具体指重链包含Fc区的抗体。[0141]“裸抗体裸露的抗体”为本发明目的指未缀合细胞毒性模块或放射性标记物的抗体。[0142]“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选包含其抗原结合区。抗体片段的例子包括Fab、Fab’、Fab’）2和Fv片段;双抗体;线性抗体;单链抗体分子;及由抗体片段形成的多特异性抗体。[0143]用木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称为“Fab”片段，各自具有一个抗原结合位点，及一个剩余的“Fc”片段，其名称反映了它易于结晶的能力。胃蛋白酶处理产生一个Fab’）2片段，它具有两个抗原结合位点且仍能够交联抗原。[0144]“Fv”是包含完整抗原结合位点的最小抗体片段。在一个实施方案中，双链Fv种类由紧密、非共价结合的一个重链可变域和一个轻链可变域的二聚体组成。在单链FvscFv种类中，一个重链可变域和一个轻链可变域可以通过柔性肽接头共价相连接，使得轻链和重链可以在与双链Fv种类类似的“二聚体”结构中相结合。正是在这种构造中，每个可变域的三个HVR相互作用而在VH-VL二聚体表面上限定了一个抗原结合位点。六个HVR—起赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使是单个可变域或是只包含对抗原特异性的三个HVR的半个Fv也具有识别和结合抗原的能力，只是亲和力低于完整结合位点。[0145]Fab片段包含重链和轻链可变域，而且还包含轻链的恒定域和重链的第一恒定域CHljab’片段与Fab片段的不同之处在于重链CHl结构域的羧基末端增加了少数残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab’-SH是本文中对其中恒定域半胱氨酸残基携带游离硫醇基的Fab’的称谓。Fab’）2抗体片段最初是作为在Fab’片段之间有铰链半胱氨酸的成对Fab’片段生成的。还知道抗体片段的其它化学偶联。[0146]“单链Fv”或“scFv”抗体片段包含抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于一条多肽链上。一般而言，scFv多肽在VH与VL结构域之间进一步包含多肽接头，其使得scFv能够形成结合抗原的期望结构。关于scFv的综述参见例如Pliickthun，于《ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies》，第113卷，Rosenburg和Moore编，Springer-Verlag，NewYork，1994,第269-315页。[0147]术语“双抗体”指具有两个抗原结合位点的抗体片段，该片段在同一条多肽链VH-VL中包含相连的重链可变域VH和轻链可变域VL。通过使用过短的接头使得同一条链上的两个结构域之间不能配对，迫使这些结构域与另一条链的互补结构域配对，从而产生两个抗原结合位点。双抗体可以是二价的或双特异性的。双抗体更完整的记载于例如EP404,097;W0199301161;Hudsonetal.，Nat.Med.9:129-1342003;及Hollingeretal·，Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-64481993。三抗体（Triabody和四抗体tetrabody也记载于Hudsonetal·，Nat.Med.9:129-1342003〇[0148]术语“单克隆抗体”在用于本文时指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，例如构成群体的各个抗体相同，除了可能以极小量存在的可能的突变，例如天然存在的突变。如此，修饰语“单克隆”表明抗体不是分立的抗体的混合物的特征。在某些实施方案中，此类单克隆抗体典型的包括包含结合靶物的多肽序列的抗体，其中靶物结合多肽序列是通过包括从众多多肽序列中选择单一靶物结合多肽序列在内的过程得到的。例如，选择过程可以是从众多克隆诸如杂交瘤克隆、噬菌体克隆或重组DNA克隆的集合中选择独特克隆。应当理解，所选择的靶物结合序列可进一步改变，例如为了提高对靶物的亲和力、将靶物结合序列人源化、提高其在细胞培养物中的产量、降低其在体内的免疫原性、创建多特异性抗体等，而且包含改变后的靶物结合序列的抗体也是本发明的单克隆抗体。与典型的包含针对不同决定簇表位的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，单克隆抗体制备物的每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。在它们的特异性外，单克隆抗体制备物的优势在于它们通常未受到其它免疫球蛋白的污染。[0M9]修饰语“单克隆”表明抗体从基本上同质的抗体群获得的特征，不应解释为要求通过任何特定方法来生产抗体。例如，依照本发明使用的单克隆抗体可通过多种技术来生成，包括例如杂交瘤法（例如KohlerandMilstein，Nature，256:495_971975;Hongoetal.,Hybridoma,143:253-2601995,Harlowetal.,Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,第2版1988;Hammerlingetal.,In:MonoclonalAntibodiesandT-CellHybridomas563-681Elsevier，N.Y.,1981、重组DNA法参见例如美国专利No.4,816,567、噬菌体展示技术参见例如Clacksonetal.，Nature352:624-6281991；Marksetal.J.Mol.Biol.222:581-5971992；Sidhuetal.,J.Mol.Biol.3382:299-3102004；Leeetal.,J.Mol.Biol.3405:1073-10932004；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USAlOl34:12467-124722004；Leeetal.,J.Immunol.Methods2841-2:119-1322004、及用于在具有部分或整个人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列的基因的动物中生成人或人样抗体的技术（参见例如WO199824893；W0199634096；WO199633735；WO199110741；Jakobovitsetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:25511993；Jakobovitsetal.,Nature362:255-2581993;Bruggemannetal.,YearinImmuno.7:331993;美国专利Ν〇·5,545,807;5，545，806;5，569，825;5，625，126;5，633，425;和5，661，016;Marksetal·，BioTechnology10:779-7831992；Lonbergetal.,Nature368:856-8591994；Morrison,Nature368:812-8131994；Fishwildetal.,NatureBiotechnol.14:845-8511996；Neuberger,NatureBiotechnol.14:8261996；LonbergandHuszar,Intern.Rev.Tmmunol.13:65-931995〇[0150]单克隆抗体在本文中明确包括“嵌合”抗体，其中重链和或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们展现出期望的生物学活性（参见例如美国专利No.4,816,567;Morrisonetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA81:6851-68551984。嵌合抗体包括“灵长类化”抗体，其中抗体的抗原结合区衍生自通过例如用感兴趣抗原免疫猕猴而生成的抗体。[0151]非人例如鼠）抗体的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。在一个实施方案中，人源化抗体指人免疫球蛋白（受体抗体）中的HVR残基用具有期望特异性、亲和力和或能力的非人物种供体抗体诸如小鼠、大鼠、家兔、或非人灵长类动物的HVR残基替换的免疫球蛋白。在有些情况中，将人免疫球蛋白的FR残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体或供体抗体中没有找到的残基。可以进行这些修饰来进一步改进抗体的性能。一般而言，人源化抗体将包含至少一个、通常两个基本上整个如下可变域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体任选还将包含至少部分免疫球蛋白恒定区Fe，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节参见例如Jonesetal.,Nature321:522-5251986;Riechmannetal.,Nature332:323-3291988;和Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-5961992。还可参见例如VaswaniandHamiIton，Ann.Allergy,AsthmaImmunoI.I；105-1151998；Harris,Biochem.Soc.Transactions23:1035-10381995;HurleandGross,Curr.Op.Biotech.5:428-4331994;及美国专利Νο·6,982,321和7,087,409。[0152]“人抗体”指拥有与由人生成的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列和或使用本文所公开的用于生成人抗体的任何技术生成的抗体。人抗体的这种定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可使用本领域已知的多种技术来生成，包括噬菌体展不文库（HoogenboomandWinter，J.Mol.Biol.227:3811991;Marksetal·，J.Mol.Biol.222:5811991。还可用于制备人单克隆抗体的是以下文献中记载的方法：Coleetal.,MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy1AlanR.Liss,p.771985；Boerneretal.，J.Immunol.147I:86-951991。还可参见vanDijkandvandeWinkeI，Curr.Opin.Pharmacol.，5:368-742001。可通过给已经修饰以应答抗原性刺激而生成人抗体但其内源基因座已经失能的转基因动物例如经过免疫的异种小鼠（xenomice施用抗原来制备人抗体（参见例如美国专利6,075，181和6，150,584，关于XEN0M0USETM技术）。还可参见例如Lietal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，103:3557-35622006，关于经人B-细胞杂交瘤技术生成的人抗体。[0153]“物种依赖性抗体”指对来自第一哺乳动物物种的抗原的结合亲和力强于对来自第二哺乳动物物种的该抗原同系物的亲和力的抗体。通常，物种依赖性抗体“特异性结合”人抗原例如结合亲和力Kd数值不超过大约lxKT7M,优选不超过大约lx1Γ8Μ，且优选不超过大约lxIT9M，但是对来自第二非人哺乳动物物种的该抗原同系物的结合亲和力比对人抗原的结合亲和力弱至少大约50倍、或至少大约500倍、或至少大约1000倍。物种依赖性抗体可以是上文所定义的各种类型抗体中的任一种，但是优选人源化抗体或人抗体。[0154]术语“高变区”、“HVR”或“HV”在用于本文时指抗体可变域中序列上高度可变和或形成结构上定义的环的区域。通常，抗体包含六个HVR:三个在VH中（Η1、Η2、Η3，三个在VL中L1、L2、L3。在天然抗体中，Η3和L3展示这六个HVR的最大多样性，而且认为特别是Η3在赋予抗体以精密特异性中发挥独特作用。参见例如Xuetal.,Immunity13:37-452000;JohnsonandWu,In:MethodsinMolecularBiology248：1-25Lo,ed.,HumanPress,Totowa，NJ,2003。事实上，仅由重链组成的天然存在camelid抗体在缺乏轻链时是有功能的且稳定的。参见例如Hamers-Castermanetal.Nature363:446_448,1993!Sheriffetal.NatureStruct.Biol.3:733-736,1996〇[0155]本文中使用且涵盖许多HVR的叙述。Kabat互补决定区（CDR是以序列变异性为基石出的，而且是最常用的（Kabatetal.,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.1991100°Cmin冷冻后聚集，而且以更慢的冷冻速率〈rCmin不聚集。观察到在以更慢冷冻速率〈l°Cmin冷冻的三种药物物质（单抗1，贝伐珠单抗和单抗3任一中没有测量到显著聚集，不管长期储存温度表1。然而，所有以更快冷冻速率l〇〇°Cmin冷冻的贝伐珠单抗和单抗3样品显示聚集随时间显著升高表1。甚至作为阴性对照包括在内的快速冷冻单抗1也在研究过程期间显示聚集的微小升高（表1。对于所有快速冷冻样品，储存期间观察到的大部分聚集看来在头六个月内发生图3。随后，聚集的速率在6和12个月之间显著降低一这个时段期间的变化足够小，使得测量到的聚集可能潜在可归于样品和或测定法可变性。[0341]不希望受理论束缚，认为快速速率的冷冻代表抗体稳定性的一种应力条件stresscondition。例如，一旦以快速速率冷冻，在1个月后观察到抗体配制剂中聚集的变化，而在商业性冷冻和储存条件下，聚集可保持恒定达9个月或更多。认为快速冷冻代表一种应力条件，在该应力条件下抗体配制剂经历聚集比商业性冷冻和储存条件要快得多。结果是，可独立于配制剂储存时间的量使用此应力条件来评估抗体配制剂对聚集的易感性。[0342]以三种冷冻速率冷冻并于-20°C储存12个月的单抗3样品的SEC覆盖图证明快速冷冻单抗3样品中的聚集种类二聚体和高分子量有可观察的升高（图4A。反之，以慢速和正常冷冻速率冷冻的样品显示百分比聚集体没有显著升高，而且数据覆盖图与研究对照紧密相当（图4A。还有，快速冷冻贝伐珠单抗样品显示可溶性聚集体升高（表1和沉淀物的形成，如通过浊度分析和目测检查测定的。这些沉淀物先前已经表征为蛋白质相关的，而且伴随有通过使用0.2微米PVDF滤器过滤来去除后的UV吸光度降低。[0343]通过利用先前表征的4000-4500^-1之间的谱区中的明显差异（Connolly，B.等2010Anal.Biochem.399⑴：48-57，应用与线性回归模型组合使用的近红外漫反射系数光谱学方法证明能够在蛋白质存在下量化无定形和晶体海藻糖的相对量。三种已知海藻糖相的纯样品的FT-NIR谱图示了无定形，晶体无水物和晶体二水合物之间的关键谱差异（图5。通过FT-NIR光谱学对12个月样品的分析证明单抗1图6A3，贝伐珠单抗，（图6B3，和单抗3图6C3的快速冷冻样品中有可测量量的海藻糖结晶表1，单抗1图6A1-2，贝伐珠单抗（图6B1-2，或单抗3图6C1-2的慢速和正常冷冻样品中没有可测量量的海藻糖结晶。于多种储存温度冷冻储存12个月后获得的快速冷冻样品谱展示与海藻糖二水合物有关的关键谱区中的尖峰位移（图6B3和6C3，而且含有介于30和70%之间的（1.6%至5.7%wtv晶体海藻糖二水合物，保留冷冻溶液中的多2.5%wtv无定形海藻糖。[0344]有趣的是，观察到的蛋白质聚集的升尚与海澡糖结晶的升尚有关。例如，发现于_20°C储存12个月的快速冷冻单抗1样品具有0.2%wtv晶体海藻糖二水合物和聚集升高0.1%，而发现快速冷冻并于-20°C储存12个月的贝伐珠单抗和单抗3样品分别具有2.5%和5.1%wtv晶体海藻糖二水合物和聚集升高1.7%和3.1%表1。百分比海藻糖二水合物和单抗聚集的秩序关联提不结晶海澡糖的浓度影响蛋白质稳定性。[0345]作为对照，对样品快速冷冻并立即通过SEC和FT-NIR分析以评估快速冷却和冷冻-干燥对晶体形成和蛋白质聚集的即时影响。没有观察到蛋白质聚集的变化数据未显示）。另外，对快速冷冻To样品集合获得的FT-NIR谱揭示糖主要是无定形性质，含有〈5%的晶体海藻糖二水合物，这接近该方法的检测限度。这些结果证明对快速冷冻后的蛋白质聚集或海藻糖相分布没有即时影响。如此，此项研究期间测量到的海藻糖结晶和蛋白质聚集升高代表储存期间以时间依赖性方式发生的变化。[0346]来自冷冻速率研究的结果给出了关于冷冻速率对海藻糖结晶和单抗聚集二者的影响的见解。正如先前讨论的，快速冷冻提高冰晶的界面表面积并提供另外的成核位点。不希望受理论束缚，认为快速冷冻样品中形成的这些另外的成核位点提高成核事件可能发生的概率。反之，以慢速和正常冷冻速率冷冻的样品中形成的更大冰晶具有更低的表面积，认为它降低成核事件的概率。[0347]实施例4:储存温度对冷冻海藻糖配制剂中单抗稳定性的影响[0348]12个月聚集数据证明储存温度确实影响蛋白质稳定性（图3。一般而言，快速冷冻并于-20Γ储存12个月的单抗3样品聚集程度最大（图3C。有趣的是，贝伐珠单抗和单抗3的初始聚集速率在于-14°C储存的快速冷冻样品中更加快速，聚集速率降低比于-20°C储存的样品要早（图3，这可能是由于成核事件的混乱性质。快速冷冻并于-8°C最暖的储存温度）储存的样品一般贯穿研究过程显示最慢的聚集速率和程度二者（图3。图4B中的层析图覆盖显示在于三种相应储存温度储存12个月的快速冷冻单抗3样品的SEC谱中观察到的差异。对于贝伐珠单抗和单抗3,于更高的温度例如_8°C储存的快速冷冻样品聚集程度更小;反之，于更低的温度例如_20°C储存的样品聚集程度更大。[0349]此项研究中蛋白质聚集的储存温度依赖性对于冷冻溶液中蛋白质聚集的机制给出了另外的见解。有趣的是，储存温度决定蛋白质聚集和海藻糖结晶之间的依赖性表1。一般地，快速冷冻并于-8°C，-14°C和-20°C储存的样品显示海藻糖结晶程度没有显著差异，但是于更低温度-20Γ储存的样品聚集程度比于更高温度分别为-14°C和-8°C储存的样品要大（图3。例如，尽管储存12个月的快速冷冻单抗3样品对于所有储存温度有61%-69%的海藻糖结晶，然而聚集的量于更负的储存温度升高。例如，冷冻样品于-8°C，_14°C，和-20°C储存12个月后分别聚集0.3%，2.1%，和3.1%表1。这种趋势证明两种样品中相当量的海藻糖结晶可导致于更低温度_20°C比于更高温度分别为-14°C和_8°C储存时蛋白质聚集要多。[0350]这些温度依赖性趋势提示冷冻环境的分子迀移率和物理特性（即冰形态）可能在海藻糖结晶诱导的蛋白质聚集中发挥关键作用。所调查的储存温度-20°C，-14°C和-8°C的范围在这些溶液的玻璃转变温度Tg范围：-29.5至-32°c以上，因而预期有一些迀移率。所有快速冷冻样品是以相同方式冷冻的，因而具有相同组成的样品在冷冻后不久大概具有相似的冰形态和溶质分布。然而，在冷冻后，储存温度规定冷冻浓缩液中海藻糖和蛋白质分子的长期溶质浓度和扩散速率。由于海藻糖（342Da和IgGl彡145，OOODa之间的大小差异，可以假设海藻糖分子扩散穿过冷冻浓缩液比较大球形蛋白质要快得多。另外的研究证明海藻糖结晶在冷冻储存2周内达到平台（数据未显示）。既然海藻糖结晶较早发生且数据显示聚集于多个储存温度随时间的动力学，这可能提示分子迀移率规定冷冻介质的重排速率和程度，并由此规定IgGl单克隆抗体的聚集速率和程度。在快速冷冻后，于_14°C储存的单抗3样品较早开始聚集但在3和6个月之间达到平台，而于-20°C储存的样品在其后不久开始聚集但以时间依赖性方式继续聚集并在6至12个月之间达到平台（图3C。处于更高温度-14Γ和_8°C的样品大概具有更高的分子迀移率，所以蛋白质最初一起扩散并形成聚集体。然而，随着相分离溶液成分（即海藻糖重分布，蛋白质通过与共定位的无定形海藻糖分子的相互作用而稳定化。[0351]实施例5:配制剂组成对冷冻海藻糖配制剂中单抗稳定性的影响[0352]为了测定冷冻储存期间配制剂组成对海藻糖结晶和单抗聚集的影响，于一个海藻糖浓度范围（[海藻糖]范围：〇至34.2%wtv和一个贝伐珠单抗浓度范围（[贝伐珠单抗]范围：0，25，和100mgmL评估贝伐珠单抗。将样品于玻璃转变温度以上-20°C和以下-40°C的温度快速冷冻12个月，并分别使用FT-NIR和SEC分析海藻糖结晶和蛋白质聚集。[0353]来自此项研究的结果证明在快速冷冻后，海藻糖在于_20°C储存12个月的冷冻溶液中结晶（图7。然而，在于-40°C储存12个月的冷冻溶液中没有观察到海藻糖结晶或单抗聚集。在快速冷冻和刮擦（scratching后不久，有微量的结晶海藻糖（〈10%wtv。然而，于-20°C冷冻储存12个月后，海藻糖结晶显著增加图7A-C。[0354]—般而言，结果证明提高海藻糖浓度导致更高百分比的结晶海藻糖。例如，随着海藻糖浓度自1.7%升高至34.2%wtv，百分比结晶海藻糖自47%升高至86%[贝伐珠单抗]=〇11^1]1]^，自22%升高至61%[贝伐珠单抗]=2511^1]1]^，及自10%升高至47%[贝伐珠单抗]=l〇〇mgmL图7。类似地，贝伐珠单抗聚集也在于-20°C冷冻储存12个月后升高图7D-E。一般而言，结果显示长期冷冻储存期间稳定化贝伐珠单抗溶液的海藻糖有最佳范围。或者，在最佳范围以上的海藻糖:单抗比导致海藻糖结晶和蛋白质聚集（图7D-E。处于在最佳范围以下的海藻糖:单抗比时，蛋白质聚集升高但海藻糖结晶没有升高一大概是由于另一种机制例如防冻不足）。[0355]数据指示所形成的结晶海藻糖的百分比取决于蛋白质和海藻糖二者的浓度。有趣的是，更高的贝伐珠单抗浓度导致更低量的海藻糖结晶。例如，于固定的海藻糖浓度（1.7%wtv将贝伐珠单抗浓度自OmgmL提高至100mgmL则将结晶海藻糖的百分比自53%降低至9%〇[0356]图8展示海藻糖与单抗比wtwt对海藻糖结晶（图8A和贝伐珠单抗聚集（图8B的重要性。如图8A和B中显示的，贝伐珠单抗物理稳定性分析证明长期冷冻期间稳定化贝伐珠单抗溶液需要足够的海藻糖:单抗（彡0.2:lwtwt;然而，过度的海藻糖:单抗（彡2.4:lwtwt导致更高比例的结晶海藻糖二水合物和显著升高的贝伐珠单抗聚集。提高海藻糖：单抗大概导致冷冻溶液中海藻糖超饱和且导致海藻糖结晶和单抗聚集。这些结果鉴定长期冷冻储存期间海藻糖对贝伐珠单抗配制剂的物理稳定化所需的海藻糖:单抗的最佳范围（0.2:1和〈2.4:lwtwt。[0357]换言之，这些结果鉴定长期冷冻储存期间海藻糖对贝伐珠单抗配制剂的物理稳定化所需的单抗:海藻糖的最佳范围（0.417:1和〈5.0:lwtwt。例如，如图7D中显示的，使用25mgmL贝伐珠单抗，0.49和1.47之间的单抗:海藻糖范围显示较低的蛋白质聚集和较低的样品变异。又例如，如图7E中显示的，使用IOOmgmL贝伐珠单抗，0.41和1.47之间的单抗:海藻糖范围显示较低的蛋白质聚集和较低的样品变异。[0358]有趣的是，聚山梨酯在任何冷冻贝伐珠单抗配制剂中皆不影响蛋白质稳定性或海藻糖相分布。对于具有等同组成的样品，添加聚山梨酯〇.〇4%wtv不导致海藻糖结晶或蛋白质聚集的任何可测量变化。[0359]来自配制剂组成研究的结果指示提高蛋白质浓度则降低冷冻样品中海藻糖结晶的发生和程度。这些结果证明过高的海藻糖：单抗比（多2.4wtwt导致海藻糖结晶和蛋白质聚集，但是过低的海藻糖：单抗比（彡〇.2wtwt对于直至100mgmL的贝伐珠单抗浓度不提供足够的防冻。结果鉴定长期冷冻储存期间能够物理稳定化贝伐珠单抗配制剂的海藻糖：贝伐珠单抗wtwt比的最佳范围，0.2-2.4—即使是对于快速冷冻100°Cmin配制剂。换言之，这些结果鉴定长期冷冻储存期间海藻糖对贝伐珠单抗配制剂的物理稳定化所需的贝伐珠单抗:海藻糖的最佳范围（0.417:1和〈5.0:lwtwt。[0360]通过援引将本文中引用的所有专利、专利申请、文件、和论文完整收入本文。

权利要求：1.一种稳定的含水药物配制剂aqueouspharmaceuticalformulation，该配制剂包含单克隆抗体、海藻糖trehalose、和缓冲剂buffer，其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为大于或等于0.41且小于1.65,其中该配制剂具有约5.5至约7.0的pH，且其中该单克隆抗体结合VEGF。2.权利要求1的配制剂，其中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为0.49至约1.47。3.权利要求1的配制剂，其中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为0.41至0.73。4.权利要求1的配制剂，其中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为0.73至1.47。5.权利要求1-4任一项的配制剂，其中该配制剂中的所述单克隆抗体为约25mgmL至约100mgmL〇6.权利要求5的配制剂，其中该配制剂中的所述单克隆抗体为约45mgmL至约55mgmL。7.权利要求5的配制剂，其中该配制剂中的所述单克隆抗体为约35mgmL至约75mgmL。8.权利要求1-7任一项的配制剂，其中该配制剂中的所述海藻糖为约45mM至约634mM，约5OmM至约60OmM，或约15OmM至约40OmM。9.权利要求8的配制剂，其中该配制剂中的所述海藻糖为约45mM至约135mM。10.权利要求8的配制剂，其中该配制剂中的所述海藻糖为约180mM至约634mM。11.权利要求1-10任一项的配制剂，其中所述缓冲剂的量为大于35mM至约lOOmM。12.权利要求11的配制剂，其中所述缓冲剂包含组氨酸histidine。13.权利要求11的配制剂，其中所述缓冲剂包含磷酸钠sodiumphosphate。14.一种稳定的含水药物配制剂，该配制剂包含a量为约25mgmL至约10OmgmL的单克隆抗体；（b量为约45mM至约634mM的海藻糖;和c量为大于35mM至约IOOmM的磷酸钠，其中所述配制剂具有约5.5至约7.0的pH，其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为大于或等于0.41且小于1.65，且其中该单克隆抗体结合VEGF。15.权利要求14的配制剂，其中配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为0.41至0.73。16.权利要求14的配制剂，其中配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为0.73至1.47。17.权利要求14-16任一项的配制剂，其中所述单克隆抗体的量为约35mgmL至约85mgmL〇18.权利要求14-16任一项的配制剂，其中所述单克隆抗体的量为约45mgmL至约55mgmL〇19.权利要求14-16任一项的配制剂，其中所述单克隆抗体的量为约50mgmL。20.权利要求14-19任一项的配制剂，其中所述海藻糖的量为约45mM至约135mM。21.权利要求14-19任一项的配制剂，其中所述海藻糖的量为约180mM至约634mM。22.权利要求14-19任一项的配制剂，其中所述海藻糖的量为约60mM。23.权利要求14-22任一项的配制剂，其中所述磷酸钠的量为约45mM至约90mM。24.权利要求14-22任一项的配制剂，其中所述磷酸钠的量为约50mM至约75mM。25.权利要求14-22任一项的配制剂，其中所述磷酸钠的量为约51mM。26.权利要求1-25任一项的配制剂，其进一步包含表面活性剂surfactant。27.权利要求26的配制剂，其中所述表面活性剂为聚山梨酯polysorbate或泊洛沙姆poloxamerο28.权利要求27的配制剂，其中所述聚山梨酯为聚山梨酯20。29.权利要求27的配制剂，其中所述泊洛沙姆为泊洛沙姆188。30.权利要求26-29任一项的配制剂，其中所述表面活性剂的浓度为约0.01%至约0.1%〇31.权利要求26-29任一项的配制剂，其中所述表面活性剂的浓度为约0.01%至约0.05%〇32.权利要求26-29任一项的配制剂，其中所述表面活性剂的浓度为约0.04%。33.权利要求1-32任一项的配制剂，其中所述配制剂具有约5.9至约6.5的pH。34.权利要求1-32任一项的配制剂，其中所述配制剂具有约6.2或约6.0的pH。35.权利要求1-34任一项的配制剂，其中所述单克隆抗体未进行在先冻干。36.权利要求1-35任一项的配制剂，其中所述单克隆抗体为全长抗体。37.权利要求1-36任一项的配制剂，其中所述单克隆抗体为IgGl抗体。38.权利要求1-37任一项的配制剂，其中所述单克隆抗体为人源化抗体。39.权利要求1-35、37和38任一项的配制剂，其中所述单克隆抗体为包含抗原结合区的抗体片段。40.权利要求39的配制剂，其中该抗体片段为Fab或Fab’）2片段。41.权利要求1-40任一项的配制剂，其中所述抗体为贝伐珠单抗bevacizumab。42.权利要求1-41任一项的配制剂，其中所述单克隆抗体容易聚集。43.权利要求1-42任一项的配制剂，其中该配制剂于-20°C稳定至少12个月、至少18个月或至少24个月。44.权利要求1-43任一项的配制剂，其是无菌的。45.权利要求1-44任一项的配制剂，其中所述配制剂用于对受试者施用。46.权利要求1-45任一项的配制剂，其用于静脉内（IV、皮下（SQ、眼内（IO、或肌肉内IM施用。47.—种制品，其包含装有权利要求1-46任一项的稳定的含水药物配制剂的容器。48.—种降低治疗性单克隆抗体聚集的方法，其包括在包含量为约45mM至约634mM的海藻糖和量为大于35mM至约IOOmM的磷酸钠的配制剂中配制所述抗体，且所述配制剂具有约5.5至约7.0的卩!1，其中在该配制剂中以约2511^11^至约10〇11^1]1]^的量配制所述单克隆抗体，其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为大于或等于0.41且小于1.65,且其中该单克隆抗体结合VEGF。49.权利要求48的方法，其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为0.41至0.73。50.权利要求48的方法，其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为0.73至1.47。51.权利要求48-50任一项的方法，其中所述磷酸钠的量为约50mM至约75mM。52.权利要求48-50任一项的方法，其中所述磷酸钠的量为约51mM。53.—种降低治疗性单克隆抗体聚集的方法，其包括在包含海藻糖和缓冲剂的配制剂中配制所述抗体，其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为大于或等于0.41且小于1.65,其中该配制剂具有约5.5至约7.0的pH，且其中该单克隆抗体结合VEGF。54.权利要求53的方法，其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为0.41、0.49、0.58、0.65、0.73、0.74、0.83、0.97、1.16、和1.47任一。55.权利要求53的方法，其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为0.49至1.47。56.权利要求53的方法，其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为0.41至0.73。57.权利要求53的方法，其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为0.73至1.47。58.权利要求48-57任一项的方法，其中所述单克隆抗体的量为约45mgmL至约55mgmL〇59.权利要求48-57任一项的方法，其中所述单克隆抗体的量为约50mgmL。60.权利要求48-57任一项的方法，其中所述单克隆抗体的量为约35mgmL至约75mgmL〇61.权利要求48-60任一项的方法，其中所述海藻糖的量为约45mM至约135mM。62.权利要求48-60任一项的方法，其中所述海藻糖的量为约60mM。63.权利要求48-60任一项的方法，其中所述海藻糖的量为约180mM至约634mM。64.权利要求48-60任一项的方法，其中所述配制剂进一步包含表面活性剂。65.权利要求64的方法，其中所述表面活性剂为聚山梨酯或泊洛沙姆。66.权利要求65的方法，其中所述聚山梨酯为聚山梨酯20。67.权利要求65的方法，其中所述泊洛沙姆为泊洛沙姆188。68.权利要求64-67任一项的方法，其中所述表面活性剂的浓度为约0.01%至约0.1%。69.权利要求64-67任一项的方法，其中所述表面活性剂的浓度为约0.01%至约0.05%〇70.权利要求64-67任一项的方法，其中所述表面活性剂的浓度为约0.04%。71.权利要求48-70任一项的方法，其中所述配制剂具有约5.9至约6.5的pH。72.权利要求48-70任一项的方法，其中所述配制剂具有约6.2或6.0的pH。73.权利要求53-72任一项的方法，其中所述缓冲剂包含量为大于35mM至约IOOmM的磷酸钠。74.权利要求48-73任一项的方法，其中所述抗体为贝伐珠单抗。75.—种生成药物配制剂的方法，其包括：a制备权利要求1-46任一项的配制剂;并b评估该配制剂中的抗体的物理稳定性、化学稳定性、或生物学活性。76.—种治疗受试者中的疾病或病症的方法，其包括以有效治疗该疾病或病症的量对受试者施用权利要求1-46任一项的配制剂。77.—种用于静脉内施用的稳定的含水药物配制剂，该配制剂包含a量为小于或等于约10OmgmL的单克隆抗体;和b量为约5OmM至约60OmM的海藻糖，其中所述配制剂具有约5.5至约7.0的pH，且其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为大于或等于0.41且小于1.65。78.—种用于皮下或眼内施用的稳定的含水药物配制剂，该配制剂包含a量为小于或等于约100mgmL的单克隆抗体;和b量为约150mM至约400mM的海藻糖，其中所述配制剂具有约5.5至约7.0的pH，且其中该配制剂中所述单克隆抗体对所述海藻糖的重量比为大于或等于0.41且小于1.65。

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