申请/专利权人：山东舜丰生物科技有限公司

申请日：2020-09-18

公开（公告）日：2022-12-02

公开（公告）号：CN113293198B

主分类号：C12Q1/6844

分类号：C12Q1/6844;C12N9/22;C12N15/113

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.12.02#授权;2021.09.10#实质审查的生效;2021.08.24#公开

摘要：本发明基于不同Cas蛋白的温度耐受性，提供了一种基于CRISPR技术进行靶核酸多重检测的方法，具体地，提供了一种检测靶核酸的方法、系统和试剂盒，所述的检测方法包括向含有靶核酸的反应体系中加入第一核酸检测组合物、第二核酸检测组合物、第三核酸检测组合物和第四核酸检测组合物中的任意一种、任意两种、任意三种或四种，基于不同Cas蛋白的温度耐受性，可以实现对于靶核酸的多重检测。

主权项：1.一种检测样品中靶核酸的方法，所述方法为非疾病诊断目的的方法，所述方法包括将样品与核酸检测组合物和单链核酸检测器接触，所述核酸检测组合物包括Cas蛋白和gRNA；所述gRNA包括与所述Cas蛋白结合的区域和与靶核酸上的靶序列杂交的导向序列；其特征在于，所述方法包括将样品进行以下反应：i、将样品与第一核酸检测组合物、第三核酸检测组合物和单链核酸检测器接触，在第一温度下反应第一时间段，然后在第三温度下再反应第三时间段；或者，ii、将样品与第一核酸检测组合物、第三核酸检测组合物、第四核酸检测组合物和单链核酸检测器接触，在第一温度下反应第一时间段，之后在第三温度下再反应第三时间段，然后在第四温度下再反应第四时间段；所述第一核酸检测组合物包括Cas12i、可以结合Cas12i以及与靶核酸上的第一靶序列杂交的第一gRNA；所述第三核酸检测组合物包括Cas12j、可以结合Cas12j以及与靶核酸上的第三靶序列杂交的第三gRNA；所述第四核酸检测组合物包括Cas12b、可以结合Cas12b以及与靶核酸上的第四靶序列杂交的第四gRNA；所述第一温度为48℃；所述第三温度为52℃；所述第四温度为60℃；检测由Cas蛋白切割单链核酸检测器产生的可检测信号，从而检测靶核酸。

全文数据：

权利要求：

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