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【发明公布】原矛头蝮蛇毒C型蛋白的制备方法及其作为诊断试剂的应用_贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室(贵州医科大学天然产物化学重点实验室)_202110780744.X 

申请/专利权人:贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室(贵州医科大学天然产物化学重点实验室)

申请日:2021-07-09

公开(公告)日:2023-01-13

公开(公告)号:CN115594745A

主分类号:C07K14/435

分类号:C07K14/435;C07K1/22;C07K1/18;C07K1/16;G01N33/68

优先权:

专利状态码:在审-实质审查的生效

法律状态:2023.02.07#实质审查的生效;2023.01.13#公开

摘要:本发明原矛头蝮蛇毒C型蛋白的制备方法及其作为诊断试剂的应用,通过三步层析从国产原矛头蝮蛇毒中分离纯化得到新颖的目标蛋白Protocetin,其具有诱导血小板发生聚集的功能。基于Protocetin能通过作用vWF进而通过GPIb激活血小板导致血小板聚集,使其可以用于检测vWF的功能及血小板的聚集功能,从而能在临床上用于检测血友病以及与GPIb结构与功能异常的血小板相关疾病。

主权项:1.原矛头蝮蛇毒C型蛋白的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一、分子筛凝胶过滤层析;SephadexG-75凝胶层析柱2.6×100cm,用PBS磷酸盐缓冲生理盐水,含0.147molLNaCl的0.01mol·L-1Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液,pH7.4平衡,流速24ml·h-1;称取原矛头蝮蛇毒冻干粉0.5g,溶于3mlPBS,将溶解后的蛇毒溶液以2000rpm离心10min,取上清液上样于前述已用PBS平衡好的SephadexG-75凝胶柱。上样完毕后,以PBS进行洗脱,流速24ml·h-1,自动收集器收集洗脱液,4ml管,测定280nm吸光值,取标记的洗脱部分合并用于下一步分离纯化。步骤二、肝素亲和层析;取原矛头蝮蛇毒SephadexG-75层析活性峰,脱盐或稀释后,上样于肝素亲和层析柱,采用PB缓冲液0.01mol·L-1Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液,pH7.0平衡肝素亲和层析,用含NaCl的PB缓冲液进行梯度洗脱,流速为1ml·min-1,2ml管收集样品,测定280nm吸光值,收集活性峰;步骤三、阳离子交换层析;HiTrapSP阳离子交换预装柱采用PB0.01mol·L-1Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液,pH7.0为平衡,取肝素亲和层析获得的活性峰上样后,充分洗脱后,用含1molNaCl的PB缓冲液进行梯度洗脱,流速为1ml·min-1,收集活性峰,SDS-PAGE检测纯度,用BCA蛋白定量试剂盒进行蛋白质定量后,放入-80℃超低温冰箱备用。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室(贵州医科大学天然产物化学重点实验室) 原矛头蝮蛇毒C型蛋白的制备方法及其作为诊断试剂的应用

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