申请/专利权人：香奈儿香水美妆品公司

申请日：2018-12-06

公开（公告）日：2023-01-20

公开（公告）号：CN109939043B

主分类号：A61K8/9789

分类号：A61K8/9789;A61Q19/02;A61Q19/08

优先权：["20171221 EP 17306870.1"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.01.20#授权;2020.10.16#实质审查的生效;2019.06.28#公开

摘要：本发明涉及疗伤绒毛花地上部分的提取物、获得它的方法、包含它的化妆品或皮肤病学组合物，以及其美容或皮肤病学用途，尤其是使皮肤脱色。

主权项：1.疗伤绒毛花地上部分的醇提取物，其能够通过包括以下步骤的方法获得：a用乙醇提取疗伤绒毛花的地上部分；b将a中获得的混合物在2℃-30℃的温度下倾析至少10小时；c过滤b中获得的经倾析混合物；和d从所得滤液中去除乙醇，然后最终稀释于1,3-丙二醇中。

全文数据：疗伤绒毛花地上部分的醇提取物、获得它的方法、以及包含它的化妆品或药物组合物技术领域本发明涉及疗伤绒毛花Anthyllisvulraria地上部分的提取物、获得它的方法、包含它的化妆品或药物组合物，以及各种美容用途。背景技术人皮肤的颜色取决于各种因素，尤其是一年中的季节、种族和性别。它主要由黑素细胞产生的黑色素的性质和浓度决定。黑素细胞是专门的树突细胞，其通过特定细胞器的介质黑素体合成黑色素。此外，在他们生命的不同时期，某些人在皮肤上尤其在手上看到较深和或更暗色的斑点，为皮肤提供异质性。这些斑点还归因于位于皮肤表面的角质形成细胞中大量浓度的黑色素。尤其需要使用有效的无害局部脱色素物质来治疗由于黑素细胞过度活跃引起的区域性色素沉着过度，例如在妊娠期间“妊娠面斑”或黄褐斑或雌激素加孕激素避孕期间发生的特发性黄褐斑，由于良性黑素细胞过度活跃和增殖引起的局部色素沉着过度，例如称为光化性雀斑的褐色老年斑，可能是由于光敏化或损伤后的瘢痕引起的偶然色素沉着过度，以及某些白斑病，如白癜风。对于后者可能导致皮肤具有更白外观的疤痕的瘢痕形成，由于不能使受损皮肤重新着色，因此完成其余正常皮肤区域的脱色，以使整个皮肤具有均匀的白色肤色。如果一种物质直接作用于发生黑素原生成的表皮黑素细胞的活力，和或如果一种物质通过抑制参与黑素原生成的酶之一或通过将其本身作为黑色素合成链然后可以被阻断并因此确保脱色的链的化学化合物之一的结构类似物插入来干扰黑色素生物合成的步骤之一，则该物质被认为是脱色的或抗脱色的。最近在色素沉着和Sestrines基因家族SESN–特别是SESN1和SESN2之间确立了联系。实际上，如申请人在申请EP2015072080中所确立的，调节了暴露于UV辐射的黑素细胞中其基因表达水平。此外，许多科学出版物证明了SESN还干扰对氧化应激诱导的损伤的限制。最常用于脱色的化妆品物质更特别是抗坏血酸及其衍生物，包括抗坏血酸葡糖苷，以及某些植物提取物特别是甘草。然而，仍然需要新型人皮肤增白剂，它有效并且是天然来源，并且耐受性良好。发明内容在这方面，申请人现在已经发现，通过特定方法获得的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物，通过其减少黑素细胞合成黑色素的作用，在色素沉着和皮肤肤色的一致性方面具有令人感兴趣的活性。实际上，如实施例中所证明的，根据本发明的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物具有令人感兴趣的化妆品性质：其允许皮肤的增白作用，尤其通过诱导黑素细胞和角质形成细胞中SESN2的表达。其诱导SESN2表达的作用还可以预防和或减少由于老化引起的皮肤变化。因此，根据第一方面，本发明涉及疗伤绒毛花地上部分的醇提取物，其能够通过包括以下步骤的方法获得：a用至少一种醇溶剂提取疗伤绒毛花的地上部分；b将a中获得的混合物倾析至少10小时；c过滤b中获得的经倾析混合物；和d从所得滤液中去除溶剂，然后最终稀释于另一种醇溶剂中。因此，在本申请中，这种提取物被称为根据本发明的提取物。本发明还涉及提取疗伤绒毛花的地上部分的方法，包括以下步骤：a用至少一种醇溶剂提取疗伤绒毛花的地上部分；b将a中获得的混合物倾析至少10小时；c过滤b中获得的经倾析混合物；和d从所得滤液中去除溶剂，然后最终稀释于另一种醇溶剂中。本发明还涉及化妆品或皮肤病学组合物，其在化妆品或药学上可接受的载体中包含根据本发明的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物。术语化妆品或药学上可接受的载体是指与皮肤、粘膜和附属物相容的介质。优选地，根据本发明的化妆品或皮肤病学组合物适合局部施用。因此用于获得根据本发明的提取物的方法包括以下步骤：a用至少一种醇溶剂提取疗伤绒毛花的地上部分；b将a中获得的混合物倾析至少10小时；c过滤b中获得的经倾析混合物；和d从所得滤液中去除溶剂，然后最终稀释于另一种醇溶剂中。采用的原料由疗伤绒毛花的地上部分组成。疗伤绒毛花Anthyllisvulneraria也称疗伤药、阿尔卑斯山茶、沙苜蓿，是一种一年生或多年生短生的草本植物，属于豆科。它是20-60cm高的低矮植物，作为地面覆盖物延伸。它具有深绿色叶子的浓密莲座，其上覆盖有丝状毛。它的花序是黄橙色，分为头部、整个花萼，在较高的海拔处从5月到8月出现，直到9月。它是适阳物种，生长在阳光充足的地方，通常在海岸、干草原、山脉草地和林地区域。它具有很大的海拔范围，高达3200m，对寒冷和干旱的耐受性很高。随着快速生长和深度固定的根系统，它确保了表层土的快速稳定。它是一种先锋植物，它可以使用有机物质较差的基质并在受损土地上定植。像所有豆科植物一样，它从空气中固氮的能力可以迅速使土壤肥沃，从而有利于其他植物的生长。存在许多亚种，例如：·疗伤绒毛花阿尔卑斯山亚种Kit.Asch.&Gr.AnthyllisvulnerariaL.subsp.alpestrisKit.Asch.&Gr.·疗伤绒毛花bocsii亚种AnthyllisvulnerariaL.subsp.bocsii·疗伤绒毛花玛丽蒂玛亚种AnthyllisvulnerariaL.subsp.maritima·疗伤绒毛花红花亚种AnthyllisvulnerariaL.subsp.rubrifolia·疗伤绒毛花疗伤亚种AnthyllisvulnerariaL.subsp.vulneraria根据本发明使用的疗伤绒毛花的地上部分通常选自花、叶、茎及其混合物。优选地，使用的地上部分是疗伤绒毛花的花、叶和茎的混合物。优选地，这些地上部分预先干燥，然后以常规方式研磨或化为碎片，以便优选地具有尺寸小于2cm的粉末形式。在步骤a中，用一种或几种醇溶剂提取地上部分，所述醇溶剂例如选自：-C1-C4一元醇，诸如例如甲醇、乙醇或异丙醇；和-二醇，诸如例如丙二醇、1,3-丙二醇或二丙二醇。优选地，醇溶剂是包含2-4个碳原子的一元醇，更优选乙醇。通常通过在例如环境温度至80℃的温度范围将地上部分浸入或缓和搅拌于上述一种或几种溶剂中约30分钟-8h的持续时间来进行提取。优选地，步骤a的提取在40℃-60℃的温度下进行2-6小时。特别地，疗伤绒毛花醇溶剂的重量比为11-120，优选110。根据具体的实施方案，提取步骤a进行两次。然后将步骤a中获得的混合物倾析至少10小时：这是步骤b。优选地，步骤b的孵育在2℃-30℃的温度下进行12h-30h。更优选地，倾析在4-20℃的温度下进行一夜，优选12h-15h。可以在倾析步骤b之前筛选步骤a获得的混合物，以去除植物残渣。有利地，筛选在筛目尺寸为50μm-100μm的筛上进行。然后过滤在步骤b结束时获得的倾析混合物以去除不溶物质：这是步骤c。优选地，在4μm膜上过滤b中获得的提取物。获得液体，优选透明的滤液。最后，去除液体滤液中存在的溶剂，然后将剩余的滤液稀释于另一种醇溶剂：这是步骤d。步骤d中使用的醇溶剂称为“其他的醇溶剂”，因为它不同于步骤a中使用的醇溶剂。考虑到这种限制，醇溶剂通常选自与步骤a溶剂相同的组，即选自C1-C4一元醇和二醇。优选地，通过蒸发去除步骤d的溶剂。优选地，最终稀释在二醇，优选1,3-丙二醇中进行。特别地，最终稀释可以作为水和1,3-丙二醇的混合物进行。例如，将由80％的1,3-丙二醇、10％的水组成的溶剂混合物添加到10％的粉末重量重量中。为了促进滤液的溶解，可以添加乙醇并通过蒸发去除。优选地，在步骤c和d之间，增加使c中获得的滤液褪色的步骤。可以通过用活性炭吸附滤液中存在的色素如叶绿素和叶黄素来进行褪色。该褪色步骤之后可以进行一个或几个过滤所获得的褪色滤液的步骤，特别是在过滤介质上的过滤，直至过滤阈值为1μm。根据具体的实施方案，根据本发明的方法还实施过滤步骤e，特别是直到过滤阈值为4μm。优选地，根据本发明的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物能够通过包括以下步骤的方法获得：a首先提取疗伤绒毛花的花、叶和茎的混合物，干燥并预先用乙醇在50℃-70℃的温度下研磨2h-5h，然后筛选50μm-100μm；a'将步骤a中获得的产物用乙醇在50℃-70℃的温度下第二次提取2h-5h，然后筛选100μm，b将a和a'中获得的滤液混合物在2℃-30℃的温度下倾析至少12h；c过滤b中获得的倾析混合物，以获得滤液；-通过在活性炭上吸附使c中获得的滤液褪色；然后-将褪色的滤液过滤至1μm的过滤阈值；和d通过蒸发从获得的滤液中去除乙醇，然后最终稀释于1,3-丙二醇中，优选水1,3-丙二醇混合物中，e过滤至4μm的过滤阈值。有利地，根据本发明实施的提取物具有澄清的颜色。此外，所述提取物具有足够浓缩的形式以能够在不引起制剂问题的情况下使用，所述制剂问题通常在乳剂形式的化妆品或皮肤病学组合物获得活性所需的浓度时遇到，并且所述提取物不具有深色，这与通过常规方法获得的植物提取物相反当它们是浓缩形式时。因此，根据本发明的提取物可以直接用于制备化妆品或皮肤病学组合物。根据后一方面，本发明涉及根据本发明的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物作为脱色剂和或增白剂和或淡化剂的美容用途，以使皮肤肤色统一，和或纠正色素缺陷。实际上，有利地，发现根据本发明的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物在可以减少黑色素合成的生理机制方面具有若干目标活性。因此，本发明更具体地涉及根据本发明的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物作为黑色素合成抑制剂的美容用途。有利地，还发现根据本发明的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物对于在黑素细胞和或角质形成细胞中表达SESN2具有有利的活性。本发明还涉及根据本发明的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物作为在黑素细胞和或角质形成细胞中表达SESN2的激活剂的用途。本发明还更具体地涉及根据本发明的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物尤其通过其抑制黑色素合成的作用用于皮肤脱色和或增白的美容用途。本发明进一步涉及根据本发明的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物作为抗氧化剂和或改进皮肤微循环的试剂和或用于预防和或减少由于老化引起的皮肤变化的美容用途。根据后一方面，本发明还涉及化妆品或皮肤病学组合物，其在化妆品或药学上可接受的载体中包含根据本发明的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物。优选地，所述提取物以组合物总重量的0.001-10％的比例，特别是以组合物总重量的0.01-10％，更优选0.1-10％的比例存在于化妆品或皮肤病学组合物中。所述化妆品或皮肤病学组合物尤其可适用于局部应用。有利地，所述化妆品或皮肤病学组合物可以具有粉末、乳剂、微乳剂、纳米乳剂、悬浮液、洗液、霜剂、水性或水醇凝胶的溶液、泡沫、浆液、气溶胶的溶液或分散体、或脂质囊泡的分散体的形式。在乳剂的情况下，它可以是油包水或水包油乳剂。根据本发明的化妆品或皮肤病学组合物还可包括根据各种成分和施用形式选择的溶剂。举例来说，可以提及水更优选去矿质水、醇如乙醇、或二甘醇的醚如乙氧基二甘醇或二甘醇单甲醚。所述化妆品组合物还可包括本领域的至少一种常用添加剂，例如至少一种选自润肤剂或保湿剂、胶凝剂和或增稠剂、表面活性剂、油、活性剂、着色剂、防腐剂、抗氧化剂、活性剂、有机或无机粉末、防晒剂和香料的化合物。尤其是，所述组合物可包含：-一种或几种润肤剂或保湿剂，其可以选自例如甘油、乙二醇、水溶性聚硅氧烷，例如以名称KF6011销售的那种ShinEtsu和水溶性荷荷巴油，例如以名称Resplantajojoba销售的那种Respharma。相对于组合物总重量，所述润肤剂或保湿剂可以以约0-30重量％，更优选2-10重量％的含量存在于组合物中。-水相的一种或几种胶凝剂和或增稠剂，选自例如纤维素衍生物、植物来源的胶瓜尔豆、角豆树、藻酸盐、角叉菜胶、果胶、微生物来源的胶黄原胶、粘土锂皂石，由INCI名称“丙烯酰基二甲基牛磺酸铵vp共聚物”和“丙烯酰基二甲基牛磺酸铵山嵛醇聚醚-25甲基丙烯酸酯共聚物”鉴定的材料例如由Clariant以名称AristoflexAVC和HMB销售的那些。相对于组合物总重量，所述胶凝剂和或增稠剂可以以约0-10重量％的含量存在于组合物中。-一种或几种表面活性剂，更优选非离子的，相对于组合物总重量，其以约0-8重量％，更优选0.5-3重量％的含量存在。-在环境温度下的一种或几种液体脂肪物质，通常称为挥发性或非挥发性的烃或聚硅氧烷；直链、环状或支链油，例如异十二烷、环戊二甲基硅氧烷、二甲基聚硅氧烷、异壬酸异壬酯或季戊四醇四异硬脂酸酯，更优选相对于组合物总重量比例为0-约10重量％，更优选0.5-5重量％。-具有生物活性的一种或几种天然或合成来源的活性剂，例如选自维生素、微量元素、尿囊素、植物蛋白、植物提取物、水合剂、抗老化剂、抗氧化剂、有利于光泽的试剂和后者的混合物。特别地，活性剂选自香草果实的水、烟酰胺、透明质酸及其衍生物、酵母提取物和后者的混合物。-一种或几种水溶性着色剂，诸如例如，胭脂红二钠盐、茜素绿二钠盐、喹啉黄、苋菜红三钠盐、酒石黄二钠盐、罗丹明单钠盐、品红二钠盐或叶黄素，更优选相对于组合物总重量比例为0-约2重量％。通常用于化妆品中的其他添加剂也可以存在于根据本发明的组合物中，特别是技术领域中公知的防腐剂、抗氧化剂或香料。本领域技术人员可以以使得后者保留其所有性质的方式，从所有这些可能的添加剂中选择将添加到组合物中的那些添加剂的性质和数量。通过以下实施例以非限制性方式显示本发明。附图说明图1表示疗伤绒毛花醇提取物对SESN2基因表达的影响；图2表示疗伤绒毛花醇提取物对黑色素合成的影响；图3显示用绒毛花处理的细胞的裂解物的视觉外观。具体实施方式实施例1：制备根据本发明的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物通过包括以下步骤的方法制备根据本发明的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物：a首先提取疗伤绒毛花的花、叶和茎的混合物，干燥并预先用乙醇在60℃的温度下研磨2h，然后筛选50μm-100μm以获得滤液1；a'将步骤a中获得的产物在步骤a的筛选期间保留的颗粒上用乙醇在60℃的温度下第二次提取2h，然后筛选50μm-100μm的混合物以去除植物残渣以获得滤液2，b将a和a'中获得的滤液1和2的混合物在2℃-25℃的温度下倾析一夜至少12h；c过滤b中获得的倾析混合物至1μm的阈值，以获得滤液；-通过在活性炭上吸附使c中获得的滤液褪色；然后-将褪色的滤液过滤直至1μm的阈值；和d通过蒸发从获得的滤液中去除乙醇，然后最终稀释于水1,3-丙二醇混合物12％88％中，e过滤至4μm的过滤阈值。实施例2：在正常人角质形成细胞中测试疗伤绒毛花醇提取物的细胞毒性方案将来自青少年供体的正常人表皮角质形成细胞PromoCell在96孔板中培养直至融合度接近75％。然后将细胞与各种浓度的疗伤绒毛花醇提取物一起孵育48h，每种浓度一式三份。基于活细胞将无色黄色四唑盐还原成强棕色着色的甲瓒衍生物的能力，使用CellTiter96AqueousOneSolutionCellProliferationAssayPromega评估细胞毒性。将细胞与四唑在37℃孵育30分钟，并读取形成的甲瓒在490nm处的吸光度。结果评估了在0.1-0.0125％的各种浓度下的疗伤绒毛花醇提取物的细胞毒性下表1。表1：在所有测试浓度下，疗伤绒毛花醇提取物对角质形成细胞无毒。因此，这些浓度将用于以下实验中的两种细胞类型角质形成细胞和黑素细胞。实施例3：评估疗伤绒毛花醇提取物对SESN2基因表达的影响方案将角质形成细胞和黑素细胞在6孔板中培养直至融合度接近75％，然后以以下浓度的疗伤绒毛花醇提取物处理24h：-0.1％-0.05％使用RNeasy试剂盒Qiagen，cat#74182根据制造商的方案提取总RNA，通过分光光度计ThermoFisherScientific，MultiskanGO定量，并使用iScriptReverseTranscriptionSupermix试剂盒Biorad，cat#1708840逆转录成cDNA。然后将cDNA用于实时定量PCRqRT-PCR，Biorad，CFX96，通过使用合适的Taqman探针ThermoFisherScientific和对应于用于标准化的管家基因的探针分析SESN2的基因表达。结果表示为相对于对照条件，处理条件的SESN2表达的“倍数变化”。结果：在2种细胞类型中，我们观察到SESN2表达的诱导供体和依赖剂量，如图1所示，角质形成细胞中最大约x3.04，黑素细胞中最大x1.28。因此可以得出结论，疗伤绒毛花醇提取物是调节应激反应、重塑胞外基质、光老化、色素沉着以及因此是皮肤的动态平衡中的有效成分。实施例4：测定疗伤绒毛花醇提取物对培养的人黑素细胞中黑色素合成的影响方案：将黑素细胞在6孔板中培养直至融合度最大为50％。将细胞与各种浓度的疗伤绒毛花醇提取物实施例1中测试的0.1-0.0125％的无毒浓度一式两份孵育5天，其中每2天更新活性物质处理。然后将细胞裂解并在60℃下将黑色素溶于NaOH1M中1h。为了提取细胞内黑色素，将细胞在NaOH1M中裂解，以12,000rpm离心5分钟，并测量澄清上清液在490nm处的吸光度。将黑色素的含量相对于595nm处每孔总蛋白质标准化BioradProteinAssay，Biorad。广泛记录其作用在于抑制黑色素合成的曲酸用作阳性对照。结果：如图2所示，结果表示为未处理对照设定为100％的％。黑色素是由表皮的黑素细胞合成的人皮肤的发色团，并且主要负责皮肤的颜色。通过化学定量处理和未处理细胞中的黑色素来评估疗伤绒毛花醇提取物对皮肤色素沉着的可能影响。相对于未处理细胞，浓度为0.1％的疗伤绒毛花醇提取物将黑素细胞中黑色素含量抑制了31±1.2％。该测试的结果是，疗伤绒毛花醇提取物调节培养的黑素细胞中黑色素的含量，因此可以降低皮肤的色素沉着水平因此作为脱色剂。在视觉上，用绒毛花处理的细胞的裂解物的外观明显比对照细胞淡如图3所示。实施例5：化妆品组合物5A-凝胶霜剂油水乳剂5b-霜剂油水乳剂这些组合物可以每天早晨和或晚上施用于皮肤上。

权利要求：1.疗伤绒毛花地上部分的醇提取物，其能够通过包括以下步骤的方法获得：a用至少一种醇溶剂提取疗伤绒毛花的地上部分；b将a中获得的混合物倾析至少10小时；c过滤b中获得的经倾析混合物；和d从所得滤液中去除溶剂，然后最终稀释于另一种醇溶剂中。2.根据权利要求1所述的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物，其特征在于步骤a的所述醇溶剂是包含1-4个碳原子的一元醇，优选乙醇。3.根据权利要求1或2所述的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物，其特征在于步骤a的所述提取在40℃-60℃的温度下进行2-6小时。4.根据权利要求1-3之一所述的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物，其特征在于所述地上部分选自花、叶、茎及其混合物。5.根据权利要求1-4之一所述的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物，其特征在于所述步骤a进行两次。6.根据权利要求1-5之一所述的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物，其特征在于步骤b的所述倾析在2℃-30℃的温度下进行12h-30h。7.根据权利要求1-6之一所述的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物，其特征在于在倾析步骤b之前筛选步骤a获得的混合物，优选在筛目尺寸为50μm-100μm的筛上。8.根据权利要求1-7之一所述的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物，其特征在于在步骤c和d之间，增加使c中获得的滤液褪色的步骤，优选通过在活性炭上吸附，然后进行一个或几个过滤所获得的褪色滤液的步骤。9.根据权利要求1-8之一所述的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物，其特征在于通过蒸发进行步骤d的去除，然后在1,3-丙二醇中进行最终稀释。10.根据权利要求1-8之一所述的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物，其特征在于所述方法采用过滤步骤e。11.根据权利要求1-10之一所述的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物，其特征在于其能够通过包括以下步骤的方法获得：a首先提取疗伤绒毛花的花、叶和茎的混合物，干燥并预先用乙醇在50℃-70℃的温度下研磨2h-5h；a'将步骤a中获得的产物用乙醇在50℃-70℃的温度下第二次提取2h-5h，然后筛选50μm-100μm，b将a和a'中获得的滤液混合物在2℃-30℃的温度下倾析至少12h；c过滤b中获得的倾析混合物，以获得滤液；-通过在活性炭上吸附使c中获得的滤液褪色；然后-将褪色的滤液过滤至1μm的阈值；和d通过蒸发从获得的滤液中去除乙醇，然后最终稀释于1,3-丙二醇中，优选水1,3-丙二醇混合物中，e过滤至4μm的过滤阈值。12.提取疗伤绒毛花的地上部分的方法，包括以下步骤：a用至少一种醇溶剂提取疗伤绒毛花的地上部分；b将a中获得的混合物倾析至少10小时；c过滤b中获得的经倾析混合物；和d从所得滤液中去除溶剂，然后最终稀释于另一种醇溶剂中。13.权利要求1-10任一项所述的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物在统一皮肤肤色、和或纠正色素缺陷中的美容用途。14.权利要求1-10任一项所述的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物作为脱色剂和或增白剂和或淡化剂和或黑色素合成抑制剂的美容用途。15.化妆品或皮肤病学组合物，其在化妆品或药学上可接受的载体中包含权利要求1-10任一项所述的疗伤绒毛花地上部分的醇提取物。16.根据权利要求14所述的化妆品或皮肤病学组合物，其特征在于其适于局部施用。

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