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【发明授权】一种非标记型适配体探针体系及其检测方法和应用_山东师范大学_202010541943.0 

申请/专利权人:山东师范大学

申请日:2020-06-15

公开(公告)日:2023-03-14

公开(公告)号:CN111879738B

主分类号:G01N21/64

分类号:G01N21/64;G01N27/447

优先权:

专利状态码:有效-授权

法律状态:2023.03.14#授权;2020.11.20#实质审查的生效;2020.11.03#公开

摘要:本发明提供一种非标记型适配体探针体系及其检测方法和应用,属于生物检测分析技术领域。本发明采用SYBRGreenI荧光染料对互补碱基进行染色,进行非标记型适配体探针体系的设计,不仅实现信号放大,且成本更加低廉;通过引发链的设计能够引发四种发夹形成大量的四臂连接体,以产生更多的互补配对碱基,可与更多SYBRGreenI结合,在减少信号泄露的同时,实现信号的循环放大;同时基于T7核酸外切酶特性,从而对实验中未引发的发夹酶解,降低了背景信号干扰,提高了CAP检测的灵敏度,具有良好的实际应用之价值。

主权项:1.一种非标记型适配体探针体系,其特征在于,所述非标记型适配体探针体系至少包括引发链、适配体、发夹结构和T7核酸外切酶;其中,所述引发链和适配体能够发生互补形成双链结构;所述适配体为待测物对应的适配体;所述发夹结构至少存在4种,4种发夹结构在引发链作用下,基于发夹自组装原理依次互补结合形成特定的四臂连接体结构;所述待测物为氯霉素时,所述引发链核苷酸序列为如下a、b或c:a5’-TTTTTGCCTAACTACCACCGATT-3’SEQIDNO.1;b5’-TTTTTTCTAACTACCACCGATT-3’SEQIDNO.2;c5’-TTTTTCTGCCTAACTACCACCGATT-3’SEQIDNO.3;所述适配体核苷酸序列为如下d:d5’-ACTTCAGTGAGTTGTCCCACGGTCGGCGAGTCGGTGGTAGTTAGGCAG-3’SEQIDNO.4;所述4种发夹结构分别命名为H1、H2、H3和H4,核苷酸序列如下:H1:5’-CTACCACCGATTTGAAACAATCGGTGGTAGTTAGGC-3’SEQIDNO.5;H2:5’-CCGATTTGAAACGCCTAAGTTTCAAATCGGTGGTAG-3’SEQIDNO.6;H3:5’-TGAAACGCCTAACTACCATTAGGCGTTTCAAATCGG-3’SEQIDNO.7;H4:5’-GCCTAACTACCACCGATTTGGTAGTTAGGCGTTTCA-3’SEQIDNO.8。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 山东师范大学 一种非标记型适配体探针体系及其检测方法和应用

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