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【发明授权】胞外囊泡纯化方法_中国科学院城市环境研究所_202110676767.6 

申请/专利权人:中国科学院城市环境研究所

申请日:2021-06-17

公开(公告)日:2023-03-14

公开(公告)号:CN113388520B

主分类号:C12N1/02

分类号:C12N1/02;C12N5/04

优先权:

专利状态码:有效-授权

法律状态:2023.03.14#授权;2021.10.01#实质审查的生效;2021.09.14#公开

摘要:本公开提供一种大体积样液的胞外囊泡纯化方法。所述方法包括提供待制备胞外囊泡的样液,提取胞外囊泡;所述样液的体积以升计;将所述胞外囊泡加入排阻色谱柱中,等体积收集流下组分;选择并混合具有目标粒径或游离蛋白目标浓度的流下组分;将混合所得物转移至超滤管中离心,留取截留液,得到纯化胞外囊泡。所得胞外囊泡纯度高、可溶性杂蛋白污染小,实用性更加广泛,可满足后续NTA、电镜和蛋白组等分析。且操作简便,耗时短。

主权项:1.一种胞外囊泡纯化方法,其特征在于,包括:提供待制备胞外囊泡的样液,提取胞外囊泡;所述样液的体积以升计;所述样液选自细菌培养液、藻细胞培养液和植物裂解液中的至少一种;将所述胞外囊泡加入排阻色谱柱中,等体积收集流下组分;选择并混合具有目标粒径或游离蛋白目标浓度的流下组分;将混合所得物转移至超滤管中离心,留取截留液,得到纯化胞外囊泡;其中,所述提取胞外囊泡具体包括:将样液进行离心,得到上清液;离心条件为,离心力9800~10200g,离心时间为10~20min;将上清液进行第一过滤处理和第二过滤处理,得到过滤液;其中,第二过滤处理的滤膜粒径小于第一过滤处理;将过滤液进行超速离心处理或者进行试剂盒提取,得到胞外囊泡;在所述将上清液进行第一过滤处理和第二过滤处理,得到过滤液之后,将过滤液进行超速离心处理之前还包括:将过滤液用小型切向流超滤设备进行浓缩,得到浓缩液;其中,浓缩条件为截留分子量100kDa;将浓缩液进行第三过滤处理,得到滤液;其中,所述第三过滤处理的滤膜粒径与所述第二过滤处理的滤膜粒径相同;所述将过滤液进行超速离心处理包括将所述滤液进行超速离心,并用PBS缓冲液重悬沉淀;超速离心的条件为,离心力99950~100050g,离心时间为1.8~2.2h;所述选择并混合具有目标粒径或游离蛋白目标浓度的流下组分具体包括:分别检测每份流下组分的平均粒径或者游离蛋白浓度;筛选平均粒径符合目标粒径或游离蛋白浓度符合目标浓度的流下组分;每份流下组分的体积为1~1.25ml;所述目标粒径为30~200nm;所述游离蛋白目标浓度为小于2.0ugmL;所述第一过滤处理的滤膜粒径为0.4~0.5um;所述第二过滤处理的滤膜粒径为0.20~0.22um。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 中国科学院城市环境研究所 胞外囊泡纯化方法

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