申请/专利权人：海南师范大学

申请日：2021-06-10

公开（公告）日：2023-03-21

公开（公告）号：CN113136384B

主分类号：C12N15/10

分类号：C12N15/10

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.03.21#授权;2021.08.06#实质审查的生效;2021.07.20#公开

摘要：本发明属于分子生物学方面，具体涉及一种针对濒危半红树植物莲叶桐核酸的提取方法。采用改进的裂解液对细胞进行裂解，并通过一定比例的Tris平衡酚‑氯仿‑异戊醇混合液进行抽提，同时为了更彻底的清除糖蛋白，又用等体积的Tris平衡酚进行抽提。再用改进体积的醋酸钠‑异丙醇进行沉淀DNA、纯化DNA，从而获得高质量的基因组DNA。采用本发明提供的濒危半红树植物莲叶桐核酸提取方法提取的DNA浓度高、纯度高，还不易降解，同时可以防止超氧阴离子自由基或者活性氧对DNA的损害，为后续的PCR扩增、分子标记技术开发、基因组文库构建等分子生物学实验奠定基础。

主权项：1.莲叶桐核酸提取的方法，其特征在于，包括如下步骤：1取适量新鲜莲叶桐叶片，置于预冷的研钵中，加入液氮充分研磨，将粉末转至离心管中，加入预热温度为65℃的裂解液，混匀，加入RNA酶，涡旋振荡1min；裂解液组成为：100mmolLTris-HClpH8.0，50mmolLEDTA，500mmolLNaCl，2％vvβ疏基乙醇，5％mvSDS，2％mvPVP；2混匀后65℃水浴10min，加入等体积的抽提液振荡混匀，抽提液组成为Tris平衡酚︰氯仿︰异戊醇＝25︰24︰1，在转速为11000～135000rpm室温下离心10～15min；3取上清液转入一新离心管加入等体积的Tris平衡酚振荡混匀，在转速为11000～135000rpm4℃离心15～20min；4取上清液，加入110倍体积的3molLNaAc和两倍体积的异丙醇，混匀后，至于－20℃中过夜，在转速为11000～135000rpm4℃离心15～20min；5弃上清，沉淀用体积浓度70％乙醇洗涤2～4次，加入50～250μLTE，充分混匀后，加入110倍体积的3molLNaAc和两倍体积的异丙醇，混匀后，至于－20℃中2h，在转速为11000～135000rpm室温下离心10～15min；6弃上清，沉淀用体积浓度70％乙醇洗涤2～4次，室温静置20～30min晾干，加入50～250μL的TE，充分混匀后，置于-20℃保存。

全文数据：

权利要求：

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