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【发明授权】一种双抗体介导的PCR检测微量生物标志物的方法_北京天浚元生生物科技有限公司_202211592778.7 

申请/专利权人:北京天浚元生生物科技有限公司

申请日:2022-12-13

公开(公告)日:2023-03-21

公开(公告)号:CN115651966B

主分类号:C12Q1/6804

分类号:C12Q1/6804

优先权:

专利状态码:有效-授权

法律状态:2023.03.21#授权;2023.02.17#实质审查的生效;2023.01.31#公开

摘要:本发明涉及微量蛋白质分子检测技术领域,尤其是涉及一种双抗体介导的PCR检测微量生物标志物的方法,包括以下步骤:以单克隆捕获抗体包被微量孔板,得到包被微量孔板;向微量孔板中加入待测样本,得到捕获抗体‑抗原免疫复合物;继续向微量孔板中加入生物素化单克隆检测抗体,得到捕获抗体‑抗原‑生物素化检测抗体免疫复合物;向微量孔板中加入DNA标准工作液,得到捕获抗体‑抗原‑生物素化检测抗体‑DNA免疫复合物;将步骤S4所得微量孔板进行PCR扩增,并对PCR扩增后产物进行荧光信号检测。本发明将抗原抗体结合的高特异性与PCR反应的高灵敏度相结合,可以检测到几百个拷贝的蛋白质分子,其检测范围宽、灵敏度高、精密度好。

主权项:1.一种双抗体介导的PCR检测微量生物标志物的方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、以单克隆捕获抗体包被微量孔板,得到包被微量孔板;S2、向微量孔板中加入待测样本,得到捕获抗体-抗原免疫复合物;S3、继续向微量孔板中加入生物素化单克隆检测抗体,得到捕获抗体-抗原-生物素化检测抗体免疫复合物;S4、继续向微量孔板中加入DNA标准工作液,得到捕获抗体-抗原-生物素化检测抗体-DNA免疫复合物;S5、将步骤S4所得微量孔板进行PCR扩增,并对PCR扩增后产物进行荧光信号检测,以确定待测样本中抗原的含量;步骤S4具体包括:继续向微量孔板中加入DNA标准工作液,并于37℃下孵育30min,吸去微孔中液体,并使用PBS缓冲液洗涤多次,得到捕获抗体-抗原-生物素化检测抗体免疫复合物;所述DNA标准工作液为亲和素偶联生物素化DNA的溶液;其中,所述亲和素偶联生物素化DNA的制备方法包括:以生物素标记的引物对对质粒DNA进行扩增,得到生物素化DNA;将相对过量的亲和素溶液快速搅拌,向其中缓慢滴加入生物素化DNA溶液,反应得到复合物;采用分子筛层析法对复合物进行层析分离,得到一个亲和素分子与一个生物素化DNA分子相结合的亲和素偶联生物素化DNA。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 北京天浚元生生物科技有限公司 一种双抗体介导的PCR检测微量生物标志物的方法

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