申请/专利权人：扬州大学

申请日：2022-11-29

公开（公告）日：2023-05-16

公开（公告）号：CN116121304A

主分类号：C12N15/866

分类号：C12N15/866;C12N7/01;C07K19/00;C12R1/93

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.06.02#实质审查的生效;2023.05.16#公开

摘要：本发明公开了一种表达乌鳢病毒糖蛋白的可视化重组杆状病毒构建方法，包括：引物设计与合成；重组表达质粒pVL1393‑G的构建；可视化绿色荧光重组杆状病毒的制备。本发明可以通过一步转染法即获得大量抗原性、免疫原性较好的可视化绿色荧光重组杆状病毒表达的糖蛋白，适用于乌鳢水泡病毒糖蛋白的高效表达及DNA疫苗制备。

主权项：1.一种表达乌鳢病毒糖蛋白的可视化重组杆状病毒构建方法，其特征是，包括：设计并合成引物F、R，所述引物F、R的核苷酸序列如SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示；以乌鳢水泡病毒基因组为模板，以F、R为引物扩增糖蛋白基因；采用双酶切法酶切pVL1393载体和糖蛋白基因，回收纯化后用T4DNA连接酶连接再转化至感受态细胞，涂布筛选阳性克隆，挑取阳性克隆扩大培养后提取质粒再进行鉴定，得到重组质粒pVL1393-G；将测序正确的重组质粒转化至感受态细胞，涂布进行抗生素筛选，纯化后经PCR及测序鉴定，得到重组质粒；将转染试剂TransITinsectreagent、杆状病毒DNAProGreenbaculovirusDNA、Grace’s培养基混合物转染Sf9昆虫细胞；将该混合物加入铺有Sf9细胞的6孔板中，在27℃培养5天，离心后收获感染细胞，洗涤后反复冻融收获上清，得到一种表达乌鳢水泡病毒糖蛋白的可视化绿色荧光重组杆状病毒。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 扬州大学 一种表达乌鳢病毒糖蛋白的可视化重组杆状病毒构建方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD