申请/专利权人：西南林业大学;云南植虫药生物科技有限公司

申请日：2023-03-09

公开（公告）日：2023-05-16

公开（公告）号：CN115968790B

主分类号：A01H4/00

分类号：A01H4/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.05.16#授权;2023.05.05#实质审查的生效;2023.04.18#公开

摘要：本发明涉及药用植物组织培养及中药材领域，具体涉及滇西乌头组培快繁方法及应用，步骤包括：外植体选择与清洁；外植体消毒；初代诱导培养；继代增殖培养；生根培养。本发明是利用组培快繁技术进行的种苗繁育，属于无性繁殖范畴，能最大程度的保持母本的优良性状，同时，无性繁殖虽存在一定周期的退化可能性，但在组培繁育过程中，可不断进行原母本的初代培养，从而减少无性繁殖代数，最终获得品质极其稳定的滇西乌头苗。

主权项：1.滇西乌头组培快繁方法，其特征在于，步骤包括：（1）外植体选择与清洁：选择滇西乌头顶端15～25cm茎段作为外植体，去叶后剪成3～4cm具芽小段，用饱和肥皂水溶液涮洗10～15min，后用自来水洗净表面肥皂水，再滴加2～3滴吐温-80，震摇10～15min，最后用自来水冲淋60～70min；（2）外植体消毒：清洁完的外植体转移至超净工作台，依次用75%酒精、饱和漂白粉溶液、25%双氧水溶液和5%双氧水溶液消毒；具体为：用75%酒精消毒15～20s、无菌水涮洗2～3次，饱和漂白粉溶液消毒15～20min、无菌水涮洗3～4次，25%双氧水溶液消毒2～3min、无菌水涮洗2～3次，5%双氧水溶液消毒20～25min、无菌水涮洗4～5次；（3）初代诱导培养：消毒的外植体用无菌纸吸去表面水分，剪掉两端伤口，并将其剪成1～2cm具芽小段，接种于MS+NAA0.1～0.2mgL+ZT0.5～0.8mgL+KT2.0～3.0mgL+硝酸银0.2～0.3μgL+活性炭1.0gL的初代诱导培养基中，在5±2℃温度下全黑暗培养7天，后转移至温度为25±2℃，光照强度2000～3000LX，日照光12h的光暗交替环境下培养40～50天；（4）继代增殖培养：诱导出的丛生芽剪成单芽，接种在MS+CPPU0.05～0.08mgL+TDZ0.5～0.6mgL+BR0.08~0.1mgL+椰汁60～80mlL+硝酸银0.1～0.15μgL的继代增殖培养基中，在温度为25±2℃，光照强度2000～3000LX，日照光12h的光暗交替环境下培养30～40天；（5）生根培养：增殖培养获得的丛生芽剪成单芽，接种于12改良MS+NAA0.4～0.6mgL+IBA0.2～0.3mgL+椰汁100～120mLL+硝酸银0.05～0.1μgL的生根培养基中，在温度为25±2℃，光照强度2000～3000LX，日照光12h的光暗交替环境下培养30～40天；所述改良MS培养基为其余元素不变，蔗糖浓度调整为12～15gL。

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