申请/专利权人：南京立顶医疗科技有限公司

申请日：2023-02-24

公开（公告）日：2023-05-23

公开（公告）号：CN116143905A

主分类号：C07K14/775

分类号：C07K14/775;C07K1/16;G01N1/28;G01N27/447;G01N33/545;G01N33/92

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.06.09#实质审查的生效;2023.05.23#公开

摘要：本发明涉及生物蛋白技术领域，尤其是一种采用高密度脂蛋白互作获取天然血清样淀粉蛋白A的方法，包括以下步骤：A配基的偶联；B天然淀粉样蛋白分离纯化；CWestern‑blot验证：1准备样品，2SDS‑PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳，3膜转移，4膜封闭和抗体孵育，5显影，定影。采用本发明方法可以获得性能更为优异的淀粉样蛋白A，稳定高效、批间差小，有利于蛋白形成双键，可控制成熟蛋白的N端，适于作为诊断试剂的抗原原料，降低了生产成本，可以获取更大量的蛋白。

主权项：1.一种采用高密度脂蛋白互作获取天然血清样淀粉蛋白A的方法，其特征在于，包括以下步骤：A.配基的偶联1将所需要偶联的高密度脂蛋白，溶解到含有NaCl的NaHCO3缓冲溶液中，加入处理好的CNBrActivatedSeplife4FF；2在室温中搅拌反应2～4小时或者在4℃下反应过夜；3反应完全后，先用偶联缓冲液洗涤掉多余的配体，然后用水洗涤；4将洗涤后的凝胶悬浮到水中，加入20mMTris-HClpH8.0缓冲液，在常温下搅拌反应，消除残余活性基团；5用含有NaCl的醋酸盐缓冲液和含有NaCl的Tris-HCl缓冲液交替洗涤，最后用PBS洗涤；B.天然淀粉样蛋白分离纯化将步骤A提取的样品上样至处理后的CNBrActivatedSeplife4FF；平衡缓冲液为20mMTris，300mMNaCl，pH8.0；洗脱缓冲液为20mM甘氨酸pH3.0；然后用20mMTris中和至pH8.0；C.Western-blot1准备样品2SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳3膜转移4膜封闭和抗体孵育5显影，定影。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南京立顶医疗科技有限公司 采用高密度脂蛋白互作获取天然血清样淀粉蛋白A的方法

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