申请/专利权人：江苏省农业科学院

申请日：2021-11-23

公开（公告）日：2023-05-23

公开（公告）号：CN116143863A

主分类号：C07K1/14

分类号：C07K1/14;C07K1/30

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.06.09#实质审查的生效;2023.05.23#公开

摘要：本发明提供了一种提取果酒沉淀中蛋白的新方法，用于果酒沉淀中蛋白组分分析，属于生物技术领域。取果酒自然沉淀，分别用无水乙醇和水清洗后获得去除表面杂质的沉淀，冷冻干燥后研磨，取0.10g沉淀依次用30mL的0.3∽0.4、0.4∽0.5、0.5∽0.6M的NaOH溶液涡旋10∽20min溶解，溶解液用4∽5倍体积的无水乙醇沉淀蛋白，得蛋白成分1。上清液在35∽40℃条件下旋转蒸发至体积为50∽80mL。加入1∽2倍体积丙酮，进行蛋白沉淀处理，得蛋白成分2。用pH7.0浓度为0.02M的Tris‑HCl溶液溶解成分1和2，获得总蛋白。本发明提取沉淀中蛋白得率93％以上，本发明对于分析沉淀中蛋白组分及针对性解决果酒蛋白沉淀提供靶标具有重要作用，具有广泛应用前景。

主权项：1.一种提取果酒沉淀中蛋白的新方法，其特征在于该方法的提取步骤如下：1果酒发酵结束后，3000rpm∽5000rpm离心5∽8min后去除酒糟，上清酒液放置6∽12个月，瓶底出现沉淀。8000rpm∽10000rpm离心处理的果酒沉淀，分别用无水乙醇和水清洗后，离心10000rmin，10min，取沉淀，冷冻干燥，干燥后进行研磨，用100目分样筛进行筛分。2取0.100g沉淀，用30mL的0.3∽0.4M的NaOH溶液涡旋10∽20min溶解，离心5000rmin，5分钟；取上清置于干净的容器中，沉淀继续用30mL的0.4∽0.5MNaOH溶液涡旋10∽20min溶解，离心5000rmin，5分钟，然后用40mL的0.5∽0.6M的NaOH溶液涡旋10∽20min溶解，合并3次溶解液。3溶解样品的溶液加入4∽5倍的无水乙醇进行第一次沉淀蛋白处理。并放置在4℃下过夜沉淀。沉淀后进行10000rmin，10min离心；氮吹干，沉淀为蛋白成分1。4步骤3所得上清液用真空旋转蒸发仪35∽40℃，转速60rmin旋转蒸发至近50∽80mL。加入1∽2倍丙酮，放置在4℃下3∽4h进行蛋白沉淀，丙酮沉淀液经10000rmin，10min离心；氮吹干，沉淀为蛋白成分2。5合并蛋白成分1和蛋白成分2，用pH7.0的0.02MTris-HCl溶液溶解。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江苏省农业科学院 一种提取果酒沉淀中蛋白的新方法

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