申请/专利权人：绿色地球研究所株式会社

申请日：2019-09-06

公开（公告）日：2023-05-26

公开（公告）号：CN112888776B

主分类号：C12N1/21

分类号：C12N1/21;C12N1/15;C12N1/19;C12N5/10;C12N9/88;C12N15/60;C12P7/42;C12P7/46;C12P13/06;C12P13/20

优先权：["20190412 JP 2019-076629"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.05.26#授权;2021.11.16#实质审查的生效;2021.06.01#公开

摘要：本公开涉及一种使用满足规定条件中的若干条件的转基因微生物的菌体或其菌体处理物生成目标物质的方法。所述规定条件包括：I与野生型微生物相比，琥珀酸脱氢酶活性或富马酸还原酶活性经降低或失活；II与野生型微生物相比，乳酸脱氢酶活性经降低或失活；III具有修饰型磷酸烯醇丙酮酸羧化酶活性或外源性磷酸烯醇丙酮酸羧化酶活性，所述修饰型磷酸烯醇丙酮酸羧化酶活性相对于野生型磷酸烯醇丙酮酸羧化酶活性中的由天冬氨酸引起的反馈抑制而显示出抵抗性，所述外源性磷酸烯醇丙酮酸羧化酶活性与野生型微生物显示出的野生型磷酸烯醇丙酮酸羧化酶活性相比，相对于由天冬氨酸引起的反馈抑制的抵抗性更高。

主权项：1.一种生产目标物质的方法，包括：p使用转基因微生物的菌体或其菌体处理物生成目标物质；以及q回收所述目标物质，所述转基因微生物为棒状杆菌属菌，所述转基因微生物满足所有下述条件I～条件III：条件I与所述转基因微生物的对应野生型微生物相比，琥珀酸脱氢酶基因的活性失活；条件II与所述野生型微生物相比，乳酸脱氢酶活性失活；条件III具有变异型磷酸烯醇丙酮酸羧化酶活性，所述变异型磷酸烯醇丙酮酸羧化酶活性相对于野生型磷酸烯醇丙酮酸羧化酶活性中的由天冬氨酸引起的反馈抑制而显示出抵抗性，其中，所述目标物质是在三羧酸循环中衍生自草酰乙酸、L-苹果酸或富马酸的代谢产物，且为天冬氨酸、β丙氨酸或天冬酰胺；其中，所述转基因微生物对属于棒状细菌的细菌来源的变异型磷酸烯醇丙酮酸羧化酶进行编码的核酸以能够表达所述变异型磷酸烯醇丙酮酸羧化酶的形态导入，所述变异型磷酸烯醇丙酮酸羧化酶具有使所述转基因微生物满足条件III的至少二个氨基酸变异，所述至少二个氨基酸变异以序列号2所示的氨基酸序列为基准，且包括下述a所示的氨基酸置换，以及选自由下述c及f所示的氨基酸置换所组成的群组中的至少一个：a相当于第299位的天冬氨酸的氨基酸向天冬酰胺的氨基酸的氨基酸置换；c相当于第813位的赖氨酸的氨基酸向丝氨酸的氨基酸的氨基酸置换；f相当于第917位的天冬酰胺的氨基酸向甘氨酸的氨基酸的氨基酸置换。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 绿色地球研究所株式会社 生产目标物质的方法

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