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龙图腾网恭喜江苏大学申请的专利一种嗜盐古菌亚硝酸盐还原酶的制备方法及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN114134125B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2023-09-26发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202110593384.2，技术领域涉及：C12N9/06；该发明授权一种嗜盐古菌亚硝酸盐还原酶的制备方法及其应用是由崔恒林;殷雪矇;侯靖设计研发完成，并于2021-05-28向国家知识产权局提交的专利申请。

本一种嗜盐古菌亚硝酸盐还原酶的制备方法及其应用在说明书摘要公布了：本发明属于基因工程领域，涉及一种嗜盐古菌亚硝酸盐还原酶的制备方法及其应用；步骤为：首先基于嗜盐古菌Haloterrigenasp.KZCA68‑1的基因组获得编码基因nirKHtg；通过分子克隆技术将nirKHtg连接到载体上构建重组质粒；将重组质粒转化嗜盐古菌宿主，得到转化后的重组宿主细胞在Hv‑YPC液体培养基中培养至稳定期后低温离心收集菌体，于细胞裂解液中进行重悬，经超声破碎、离心收集上清液，用于重组蛋白纯化；采用镍亲和层析纯化以及凝胶过滤层析纯化后，获得高纯度还原酶，记为NirKHtg。本发明得到的NirKHtg具有良好的酶学特性，高盐腌制食品、废水处理等过程中降解亚硝酸盐。

本发明授权一种嗜盐古菌亚硝酸盐还原酶的制备方法及其应用在权利要求书中公布了：1.一种嗜盐古菌亚硝酸盐还原酶的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：1构建pTA04-nirkHtg重组表达质粒：首先基于嗜盐古菌Haloterrigenasp.KZCA68-1的基因组获得一条嗜盐古菌亚硝酸盐还原酶的基因nirKHtg，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；进一步设计含有酶切位点EcoRI和BamHI的目的片段引物，利用常规PCR技术扩增目的片段nirKHtg；通过分子克隆技术将nirKHtg连接到pTA04载体上构建重组质粒；所述嗜盐古菌Haloterrigenasp.KZCA68-1保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，菌种保藏号为CGMCC22195；2转化嗜盐古菌Haloferaxvolcanii：将步骤1成功构建的重组质粒转化嗜盐古菌宿主，得到转化后的重组宿主细胞；所述宿主为菌株Haloferaxvolcanii；将转化后的重组宿主细胞接种于Hv-YPC液体培养基中进行活化培养，培养后得到培养液；再取培养液接种至Hv-YPC液体培养基中摇瓶培养至稳定期，进一步离心收集菌体，低温保存备用；3重组亚硝酸盐还原酶的纯化收集步骤2保存的菌体于细胞裂解液中进行重悬，重悬后超声破碎细胞，离心后收集上清液，即粗酶液，将粗酶液用于重组蛋白纯化；首先采用镍柱亲和层析纯化获得含有咪唑的目的蛋白；最后利用凝胶过滤层析去除咪唑，获得高纯度的嗜盐古菌亚硝酸盐还原酶，记为NirKHtg。

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