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龙图腾网获悉中国医学科学院基础医学研究所申请的专利新型单细胞CRISPR筛选文库获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN119506359B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-13发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202510081784.3，技术领域涉及：C12N15/867；该发明授权新型单细胞CRISPR筛选文库是由余佳;荣誉;马艳妮设计研发完成，并于2025-01-20向国家知识产权局提交的专利申请。

本新型单细胞CRISPR筛选文库在说明书摘要公布了：本发明公开了新型单细胞CRISPR筛选文库。本发明提供了一种双gRNA表达盒、用于单细胞CRISPR筛选的双gRNA表达盒载体以及一种单细胞CRISPR筛选文库的构建方法。利用该方法构建的CRISPR筛选文库能够将单细胞CRISPR筛选范围从蛋白质编码基因扩充到ncRNA，并能够实现对ncRNA的敲除。

本发明授权新型单细胞CRISPR筛选文库在权利要求书中公布了：1.一种单细胞CRISPR筛选文库的构建方法，其特征在于，所述方法包括：先将设计合成的n对gRNA分别拼接到第一gRNA表达盒和第二gRNA表达盒中，n为大于等于1的整数；所述第一gRNA表达盒在5’至3’方向依次包含macU6启动子、gRNA1占位符序列、newscaffold和Terminator；所述第二gRNA表达盒在5’至3’方向依次包括U6启动子、gRNA2占位符序列、第二scaffold和Terminator；所述将n对gRNA分别拼接到第一gRNA表达盒和第二gRNA表达盒中的方法为Gatway方法； 再将拼接好的第一gRNA表达盒组装到慢病毒CROP-seq载体骨架LentiCROP-PuroR-P2A-GFP-U6质粒EF1A序列的前端，将拼接好的第二gRNA表达盒组装到慢病毒CROP-seq载体骨架LentiCROP-PuroR-P2A-GFP-U6质粒WPRE序列后端的155bp处；所述将第一gRNA表达盒和第二gRNA表达盒插入CROP-seq载体骨架LentiCROP-PuroR-P2A-GFP-U6质粒上的方法为Gibson组装技术； 将组装好的表达载体感染目标细胞； 所述macU6启动子的序列如SEQIDNo:1所示；所述newscaffold的序列如SEQIDNo:2所示；所述Terminator的序列为tttttt； 所述U6启动子的序列如SEQIDNo:3所示；所述第二scaffold的序列如SEQIDNo:4所示； 所述第一gRNA表达盒和第二gRNA表达盒的启动子序列与gRNA占位符序列处于可操作连接中。

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