申请/专利权人：原子高科股份有限公司

申请日：2017-01-03

公开（公告）日：2018-05-11

公开（公告）号：CN108017691A

主分类号：C07K9/00(2006.01)I

分类号：C07K9/00(2006.01)I;C07K1/13(2006.01)I;C07K1/107(2006.01)I;C07K1/06(2006.01)I;C07K1/04(2006.01)I

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2019.08.23#授权;2018.06.05#实质审查的生效;2018.05.11#公开

摘要：本发明属于医药领域，具体涉及一种123131I标记的新型糖基化生长抑素类似物123131I‑Gluc‑KE108及制备方法。所述123131I标记的新型糖基化生长抑素类似物123131I‑Gluc‑KE108通过如下步骤制备得到：S1新型糖基化生长抑素类似物Gluc‑KE108的合成；S2Gluc‑KE108的123131I标记。其中，步骤S1又包括S1‑1氨基酸的缩合；S1‑2多肽的脱Dde；S1‑3多肽从树脂上切除；S1‑4多肽的环化；S1‑5多肽的酸解和中间体的纯化；S1‑6多肽的糖基化及其纯化。而在步骤S2中，采用Iodogen法或者氯胺‑T法对Gluc‑KE108进行123131I标记。

主权项：一种123131I标记的新型糖基化生长抑素类似物123131I‑Gluc‑KE108，其特征在于，具备如通式Ⅰ所示的结构：

全文数据：糖基化生长抑素类似物123131I-Gluc-KE108及制备方法技术领域本发明属于医药领域，具体涉及一种123131I标记的新型糖基化生长抑素类似物123131I-Gluc-KE108及制备方法。背景技术神经内分泌肿瘤NeuroendocrineTumor，NETs是起源于不同神经内分泌器官的一组异质性肿瘤，包括从具有良好预后的经典类癌到高度恶性的未分化神经内分泌癌的广泛谱系，其中85％来自于消化道，10％源于肺，尚可见于喉、胸腺、肾上腺、卵巢、皮肤、前列腺等部位。近年来NETs的发病率不断升高，对其进行早诊断早治疗是能否治愈这一疾病的关键。研究表明高达94％的NETs细胞表面有生长抑素受体Somatostatinreceptor，SSTR的高表达，甚至一些低分化的肿瘤细胞表面也有SSTR的表达。SSTR有5种受体亚型SSTR1～SSTR5，SSTR2分为SSTR2A和SSTR2B，均为G蛋白偶联受体。不同肿瘤细胞表面有不同的SSTR亚型的表达，同一种类的肿瘤也有不同的SSTR亚型的表达。前列腺癌和肉瘤细胞表面SSTR1高表达，神经胶质瘤、淋巴瘤、嗜铬细胞瘤和小细胞肺癌细胞SSTR2高表达，大多数非活性垂体瘤中SSTR3高表达，胃肠胰腺神经内分泌瘤、胃癌、室管膜瘤SSTR1和SSTR2的一种或两种同时高表达。生长抑素Somatostatin，SMS或SST是一种具有广泛生理学功能的内源性调节肽。天然生长抑素对生长抑素受体的五种亚型都有很好的亲和力，但在体内不稳定，用于分子显像时生物半衰期仅为2～3min，限制了其临床应用和发展。为了改善天然生长抑素的体内药代动力学特性，延长体内生物半衰期，对天然生长抑素结构进行修饰得到一系列的生长抑素类似物，如Octreotide、Lanreotide、Vapreotide、Pasireotide、KE108等。生长抑素及其类似物与SSTR不同亚型的亲和力各不相同。放射性核素标记的生长抑素类似物可与NETs细胞表面的SSTR特异性结合，因此可用此类标记物作为分子探针或治疗药物对NETs进行早期诊断和靶向治疗。目前临床常用的NETs分子探针有一定的局限性，如对前列腺癌、肉瘤和非活性垂体瘤等无SSTR2和SSTR5表达的NETs不具有靶向性，对一些胃肠胰腺神经内分泌瘤的诊断也有很高的假阴性。因此，开发对SSTR不同亚型具有广谱性的诊断药物具有非常重要的意义。研究表明糖基化作用可改善标记物的体内药代动力学特性，增加水溶性，降低肝胆摄取，提高标记物对肿瘤的靶向性。KE108Tyr0-cyclo-[D-Dab-Arg-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe]是一种对SSTR五种亚型都有高亲和力的生长抑素类似物，对SSTR阳性肿瘤具有广谱性，并且在体内稳定。而不同种类的NETs细胞中SSTR表达类型不同，有些NETs细胞上有不止一种的SSTR亚型表达。以KE108作为靶向分子用于NETs的诊断具有广谱性，有望降低诊断的假阴性率，提高准确度。当用于一有种以上SSTR亚型表达肿瘤的诊断时有望增加靶向分子在肿瘤中的摄取，提高诊断的灵敏度。KE108作为靶向分子尤其适用于SSTR2和SSTR5没有表达的肿瘤：如前列腺癌、肉瘤、非活性垂体瘤等的诊断。123I是一种用加速器生产的放射性核素，半衰期为13.2h,发射主光子为159keV的γ射线，用于显像时辐射剂量小，显像效果好，可允许多次重复显像，被认为是核素性质最为理想的单光子计算机断层显像Single-PhotonEmissionComputedTomography，SPECT显像核素。131I是一种通过反应堆生产的β衰变核素，半衰期为8.02d，β分支比为100％，主β射线能量为0.606Mev，目前在核医学领域主要用作甲状腺疾病的治疗。发明内容本发明的目的在于以新型糖基化生长抑素类似物KE108为靶向分子，对其进行糖基化修饰后用123131I标记，获得NETs分子探针123I-Gluc-KE108和靶向治疗分子131I-Gluc-KE108，以解决临床常用的NETs分子探针有一定的局限性的问题。本发明的另一目的在于提供上述化合物的制备方法。为了达到上述目的，本发明的技术方案是：一种123131I标记的新型糖基化生长抑素类似物123131I-Gluc-KE108，具备如通式Ⅰ所示的结构：123131I标记的新型糖基化生长抑素类似物123131I-Gluc-KE108的标记前体是一种新型糖基化生长抑素类似物Gluc-KE108，具备如通式Ⅱ所示的结构：制备上述123131I标记的新型糖基化生长抑素类似物123131I-Gluc-KE108的步骤如下：S1Gluc-KE108的合成；S2Gluc-KE108的123131I标记。进一步地，所述步骤S1又包括如下步骤：S1-1氨基酸的缩合：用DMF将Fmoc-Phe-CTCResin溶胀1-2h，然后加入20％哌啶常温下反应30-60min脱除Fmoc，然后加入Fmoc-ThrtBu-OH,HBTU,NMM,反应40-60分钟后检测茚三酮为阴性过滤洗涤得到Fmoc-ThrtBu-Phe-CTCResin,重复上述操作依次加入相应氨基酸：Fmoc-LysBoc-OH，Fmoc-D-TrpBoc-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Phe-OH，Fmoc-ArgPbf-OH，Fmoc-D-DabDde0-OH，Boc-TyrtBu-OH，制得Boc-TyrtBu-DDabDde-ArgPbf-Phe-Phe-DTrpBoc-LysBoc-ThrtBu-Phe-CTCResin；S1-2多肽的脱Dde：用含2％水合肼的DMF浸泡3-5min多肽树脂Boc-TyrtBu-DDabDde-ArgPbf-Phe-Phe-DTrpBoc-LysBoc-ThrtBu-Phe-CTCResin，滤掉脱保护液,用适量的DMF清洗部分保护的多肽树脂，以脱去Dde；S1-3多肽从树脂上切除：将上述脱去Dde后的多肽树脂全保护切割得到Boc-TyrtBu-DDab-ArgPbf-Phe-Phe-DTrpBoc-LysBoc-ThrtBu-Phe-OH；S1-4多肽的环化：经过液相环化后得到全保护的环肽Boc-TyrtBu-Cyclone[DDab-ArgPbf-Phe-Phe-DTrpBoc-LysBoc-ThrtBu-Phe]；S1-5多肽的酸解和中间体的纯化：将全保护环肽Boc-TyrtBu-Cyclone[DDab-ArgPbf-Phe-Phe-DTrpBoc-LysBoc-ThrtBu-Phe]用三氟乙酸酸解2.5h，经过后处理纯化得到中间体Tyr-CycloDDab-Arg-Phe-Phe-DTrp-Lys-Thr-Phe；S1-6多肽的糖基化及其纯化：中间体Tyr-CycloDDab-Arg-Phe-Phe-DTrp-Lys-Thr-Phe与Gluc反应2-3天后得到粗品Gluc-Tyr-CycloDDab-Arg-Phe-Phe-DTrp-Lys-Thr-Phe，粗品纯化后得到最终的产品Gluc-Tyr-CycloDDab-Arg-Phe-Phe-DTrp-Lys-Thr-Phe，即Gluc-KE108。进一步地，在所述步骤S2中，采用Iodogen法对Gluc-KE108进行123131I标记，具体步骤如下：在标记管中预先涂Iodogen，向标记管中依次加入Gluc-KE108的二甲基亚砜溶液，Na123131I，振荡反应10min，以生理盐水溶解；然后用HPLC法或薄层色谱法分析其标记率，并对产品进行分离纯化后用HPLC分析其放化纯。进一步地，在所述步骤S2中，采用氯胺-T法对Gluc-KE108进行123131I标记，具体步骤如下：将Gluc-KE108溶于磷酸盐缓冲液中，然后加入Na123131I，最后加入氯胺-T溶液中；20℃下轻轻摇动混合液1-2min，然后加入焦亚硫酸钠溶液中停止反应；然后用HPLC法或薄层色谱法分析其标记率，并对产品进行纯化后用HPLC分析其放化纯。本发明的有益效果在于：用放射性核素123131I标记的新型糖基化生长抑素类似物123131I-Gluc-KE108，可对神经内分泌肿瘤NETs进行显像诊断和治疗。放射性核素123131I标记的糖基化生长抑素类似物123131I-Gluc-KE108可与NETs细胞表面的SSTR特异性结合，因此可用此标记物作为分子探针或治疗药物对NETs进行早期诊断和靶向治疗。同时，KE108Tyr0-cyclo-[D-Dab-Arg-Phe-Phe-D-Trp-Lys-Thr-Phe]是一种对SSTR五种亚型都有高亲和力的生长抑素类似物，对SSTR阳性肿瘤具有广谱性，并且在体内稳定。以KE108作为靶向分子用于NETs的诊断具有广谱性，降低了诊断的假阴性率，提高了诊断的灵敏度。KE108作为靶向分子尤其适用于SSTR2和SSTR5没有表达的肿瘤：如前列腺癌、肉瘤、非活性垂体瘤等的诊断。附图说明图1是Gluc-KE108的合成路线；图2是Gluc-KE108的HPLC分析图谱；图3是Gluc-KE108的MS分析图谱。具体实施方式为了便于对本发明的进一步了解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。这些实施例仅供叙述而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的保护范围仍以权利要求为准。实施例1：Gluc-KE108的合成Gluc-KE108的具体合成路线如附图1所示，具体步骤如下：S1-1氨基酸的缩合称取Fmoc-Phe-CTCResin0.71克0.3mmol，加入到多肽反应器中，用DMF溶胀1h，然后加入20％哌啶常温下反应30min脱除Fmoc，树脂用DMF洗涤3次，然后加入358mgFmoc-ThrtBu-OH,324mgHBTU,200μLNMM,反应50分钟后检测茚三酮为阴性过滤洗涤得到Fmoc-ThrtBu-Phe-CTCResin,重复上述操作依次加入相应氨基酸：Fmoc-LysBoc-OH422mg，Fmoc-D-TrpBoc-OH474mg,Fmoc-Phe-OH349mg,Fmoc-Phe-OH349mg，Fmoc-ArgPbf-OH584mg，Fmoc-D-DabDde0-OH0.454mg，Boc-TyrtBu-OH304mg，制得Boc-TyrtBu-DDabDde-ArgPbf-Phe-Phe-DTrpBoc-LysBoc-ThrtBu-Phe-CTCResin。S1-2多肽的脱Dde用含2％水合肼的DMF浸泡3-5min多肽树脂Boc-TyrtBu-DDabDde-ArgPbf-Phe-Phe-DTrpBoc-LysBoc-ThrtBu-Phe-CTCResin，滤掉脱保护液,重复上步操作2遍，用适量的DMF清洗部分保护的多肽树脂三次，以脱去Dde。S1-3多肽从树脂上切除将上述脱去Dde后的多肽树脂全保护切割得到Boc-TyrtBu-DDab-ArgPbf-Phe-Phe-DTrpBoc-LysBoc-ThrtBu-Phe-OH。S1-4多肽的环化经过液相环化后得到全保护的环肽Boc-TyrtBu-Cyclone[DDab-ArgPbf-Phe-Phe-DTrpBoc-LysBoc-ThrtBu-Phe]。S1-5多肽的酸解和中间体的纯化将全保护环肽Boc-TyrtBu-Cyclone[DDab-ArgPbf-Phe-Phe-DTrpBoc-LysBoc-ThrtBu-Phe]用三氟乙酸酸解2.5h，用乙醚沉淀后离心，抽干得到中间体。经过HPLC纯化得到中间体Tyr-CycloDDab-Arg-Phe-Phe-DTrp-Lys-Thr-Phe，再用HPLC分析其纯度。S1-6多肽的糖基化及纯化中间体Tyr-CycloDDab-Arg-Phe-Phe-DTrp-Lys-Thr-Phe与Gluc反应3天后得到粗品Gluc-Tyr-CycloDDab-Arg-Phe-Phe-DTrp-Lys-Thr-Phe。粗品经过HPLC纯化后得到最终产品Gluc-KE108，即：Gluc-Tyr-CycloDDab-Arg-Phe-Phe-DTrp-Lys-Thr-Phe，然后用质谱定性分析，用HPLC分析其纯度。实施例2：采用Iodogen法对Gluc-KE108进行123131I标记：标记管中预先涂以50μgIodogen，向标记管中依次加入50μL1mgmL的Gluc-KE108的二甲基亚砜溶液，10μL18.5-37MBqNa123131I，振荡反应10min，以生理盐水溶解。然后用HPLC法或薄层色谱法分析其标记率，并对产品进行分离纯化后用HPLC分析其放化纯。实施例3：采用氯胺-T法CH-T法对Gluc-KE108进行123131I标记：将50μgGluc-KE108溶于80μL0.5molLpH7.4磷酸盐缓冲液中，然后加入10μL18.5-37MBqNa123131I，最后加入10mgmL的氯胺-T溶液10μL中。20℃下轻轻摇动混合液1-2min，然后加入50μLpH7.44.0mgmL的焦亚硫酸钠溶液中停止反应。然后用HPLC法或薄层色谱法分析其标记率，并对产品进行纯化后用HPLC分析其放化纯。综上所述，通过Fmoc固相合成法合成了16.3mgGluc-KE108，即Gluc-Tyr-CycloDDab-Arg-Phe-Phe-DTrp-Lys-Thr-Phe，经HPLC分析可知纯度为95.2％，通过质谱分析可知mz为720.1M+2H2和1438.5M,与计算值相符M计算值＝1438.6，如附图2和附图3所示。使用Iodogen法制备的123131I-Gluc-KE108标记率为92.8％±3.6％n＝5，使用氯胺-T制备的123131I-Gluc-KE108标记率为65.5％±4.1％n＝5。标记物分离纯化后经HPLC分析可知放化纯均大于95％。

权利要求：1.一种123131I标记的新型糖基化生长抑素类似物123131I-Gluc-KE108，其特征在于，具备如通式Ⅰ所示的结构：。2.一种新型糖基化生长抑素类似物Gluc-KE108，其特征在于，具备如通式Ⅱ所示的结构：。3.一种123131I标记的新型糖基化生长抑素类似物123131I-Gluc-KE108的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1Gluc-KE108的合成；S2Gluc-KE108的123131I标记；所述步骤S1又包括如下步骤：S1-1氨基酸的缩合：用DMF将Fmoc-Phe-CTCResin溶胀1-2h，然后加入20％哌啶常温下反应30-60min脱除Fmoc，然后加入Fmoc-ThrtBu-OH,HBTU,NMM,反应40-60分钟后检测茚三酮为阴性过滤洗涤得到Fmoc-ThrtBu-Phe-CTCResin,重复上述操作依次加入相应氨基酸：Fmoc-LysBoc-OH，Fmoc-D-TrpBoc-OH,Fmoc-Phe-OH,Fmoc-Phe-OH，Fmoc-ArgPbf-OH，Fmoc-D-DabDde0-OH，Boc-TyrtBu-OH，制得Boc-TyrtBu-DDabDde-ArgPbf-Phe-Phe-DTrpBoc-LysBoc-ThrtBu-Phe-CTCResin；S1-2多肽的脱Dde：用含2％水合肼的DMF浸泡3-5min多肽树脂Boc-TyrtBu-DDabDde-ArgPbf-Phe-Phe-DTrpBoc-LysBoc-ThrtBu-Phe-CTCResin，滤掉脱保护液,用适量的DMF清洗部分保护的多肽树脂，以脱去Dde；S1-3多肽从树脂上切除：将上述脱去Dde后的多肽树脂全保护切割得到Boc-TyrtBu-DDab-ArgPbf-Phe-Phe-DTrpBoc-LysBoc-ThrtBu-Phe-OH；S1-4多肽的环化：经过液相环化后得到全保护的环肽Boc-TyrtBu-Cyclone[DDab-ArgPbf-Phe-Phe-DTrpBoc-LysBoc-ThrtBu-Phe]；S1-5多肽的酸解和中间体的纯化：将全保护环肽Boc-TyrtBu-Cyclone[DDab-ArgPbf-Phe-Phe-DTrpBoc-LysBoc-ThrtBu-Phe]用三氟乙酸酸解2.5h，经过后处理纯化得到中间体Tyr-CycloDDab-Arg-Phe-Phe-DTrp-Lys-Thr-Phe；S1-6多肽的糖基化及其纯化：中间体Tyr-CycloDDab-Arg-Phe-Phe-DTrp-Lys-Thr-Phe与Gluc反应2-3天后得到粗品Gluc-Tyr-CycloDDab-Arg-Phe-Phe-DTrp-Lys-Thr-Phe，粗品纯化后得到最终的产品Gluc-Tyr-CycloDDab-Arg-Phe-Phe-DTrp-Lys-Thr-Phe，即Gluc-KE108。4.根据权利要求3所述的一种123131I标记的新型糖基化生长抑素类似物123131I-Gluc-KE108的制备方法，其特征在于，在所述步骤S2中，采用Iodogen法对Gluc-KE108进行123131I标记，具体步骤如下：在标记管中预先涂Iodogen，向标记管中依次加入Gluc-KE108的二甲基亚砜溶液，Na123131I，振荡反应10min，以生理盐水溶解；然后用HPLC法或薄层色谱法分析其标记率，并对产品进行分离纯化后用HPLC分析其放化纯。5.根据权利要求3所述的一种123131I标记的新型糖基化生长抑素类似物123131I-Gluc-KE108的制备方法，其特征在于，在所述步骤S2中，采用氯胺-T法对Gluc-KE108进行123131I标记，具体步骤如下：将Gluc-KE108溶于磷酸盐缓冲液中，然后加入Na123131I，最后加入氯胺-T溶液；20℃下轻轻摇动混合液1-2min，然后加入焦亚硫酸钠溶液中停止反应；然后用HPLC法或薄层色谱法分析其标记率，并对产品进行纯化后用HPLC分析其放化纯。

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