申请/专利权人：李锋

申请日：2019-03-31

公开（公告）日：2019-08-16

公开（公告）号：CN110123895A

主分类号：A61K36/752(20060101)

分类号：A61K36/752(20060101);A61P9/10(20060101);A61P39/00(20060101);A61K131/00(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2022.03.25#发明专利申请公布后的驳回;2019.09.10#实质审查的生效;2019.08.16#公开

摘要：本发明涉及化州橘红在制备防治脑缺血引起氧化应激的药物的应用，化州橘红的功能用于风寒咳嗽，喉痒痰多，食积伤酒，呕恶痞闷，而缺血性脑卒中是一种涉及多基因多靶点多种信号通路的复杂性疾病，氧化应激和炎症反应是缺血性脑卒中发病的重要机制，故传统认识化州橘红没有对脑缺血的防治作用，但是本发明经研究发现化州橘红可干预缺血性脑卒中的多个病理环节，可显著抑制缺血性脑卒中（简称脑缺血）所致血清氧化应激，可应用于防治脑缺血引起的氧化应激反应的药物。

主权项：1.化州橘红在制备防治脑缺血引起氧化应激的药物中的应用。

全文数据：化州橘红在制备防治脑缺血引起氧化应激反应药物的应用技术领域本发明涉及生物医药技术领域，特别是涉及一种防治脑缺血引起氧化应激反应药物。背景技术缺血性脑血管病又称脑缺血性疾病，是最常见的脑血管疾病，也是严重影响患者身体健康和生活质量的疾病，它包括短暂性脑缺血发作、可逆性神经功能障碍和脑梗死。而发生脑缺血症状时，往往会带来氧化应激反应，氧化应激是指机体在遭受各种有害刺激时,体内高活性分子如活性氧自由基reactiveoxygenspecies,ROS和活性氮自由基reactivenitrogenspecies,RNS产生过多,氧化程度超出氧化物的清除,氧化系统和抗氧化系统失衡,一旦这种协调与动态平衡产生紊乱与失调，就会引起一系列的新陈代谢失常和免疫功能降低，形成氧自由基连锁反应，损害生物膜及其功能，以致形成细胞透明性病变、纤维化，大面积细胞损伤造成进神经、组织、器官等损伤，对人体健康危害极大。化州橘红因其具有独特的健胃行气、化痰止咳的药用效果而闻名四方，是一种著名的治疗咳嗽的药物，也可用于脾胃气滞所致脘腹胀满，疼痛、恶心呕吐、不思饮食之证。国内外均未曾报道过化州橘红可应用于防治脑缺血引起的相关反应。发明内容本发明的目的在于避免现有技术中的不足之处而提供一种化州橘红在制备防治脑缺血引起氧化应激反应药物的应用。本发明的目的通过以下技术方案实现：化州橘红在制备防治脑缺血引起氧化应激的药物中的应用。优选的，所述化州橘红为经过炮制的橘红，炮制方法如下：橘红夏季果实未成熟时采收，除去果瓤及部分中果皮，压制成形再干燥。优选的，所述化州橘红为生长在茂名市化州市的橘红果。本发明的有益效果：现有认识中，化州橘红（又称“化橘红”）的功能用于风寒咳嗽，喉痒痰多，食积伤酒，呕恶痞闷，缺血性脑卒中是一种涉及多基因多靶点多种信号通路的复杂性疾病，氧化应激和炎症反应是缺血性脑卒中发病的重要机制，传统认识化州橘红没有对脑缺血的防治作用，但是本发明经研究发现化州橘红可干预缺血性脑卒中的多个病理环节，可显著抑制缺血性脑卒中（简称脑缺血）所致血清氧化应激，因而可应用于防治脑缺血引起的氧化应激反应的药物。附图说明利用附图对本发明做进一步说明，但附图中的内容不构成对本发明的任何限制。图1是不同组别大鼠血清NADPH氧化酶（NOX）、脂质过氧化产物（4-HNE）、蛋白羰基化（proteincarbonyl）、DNA氧化产物（8-OHdG）、抗氧化酶HO-1和NQO-1的含量图。具体实施方式结合以下实施例对本发明作进一步说明。实验：化州橘红在防治脑缺血引起氧化应激中的作用1.1.供试品及对照品1.1供试品名称：化州橘红提供者：化州李锋化橘红投资有限公司性状：本品为黄色粉末用法用量：每日3～9g。贮藏：密封，避光保存场所：中国医学科学院药用植物研究所药理毒理中心剩余供试品处理方法：留样后，其余供试品返回委托单位1.2阴性对照名称：0.9%氯化钠注射液来源：山东华鲁制药有限公司批号：G16092904保存条件：常温1.3供试品配制1.3.1配制方法用生理盐水配制成所需浓度。配制频率试验现用现配。2.试验材料2.1试验药物及剂量设计化州橘红原药、化州橘红水提物、化州橘红醇提物试验各设1个剂量组，均为0.9gkg。肠溶阿司匹林（由拜耳医药保健有限公司生产），试验设1个剂量组为10mgkg（临床等效剂量）.其中，化州橘红原药为化州李锋化橘红投资有限公司炮制好的市面上销售的成品打磨成粉。化州橘红水提取是化州橘红原药用纱布包住，用开水95度以上的泡浸获得。化州橘红醇提物是化州橘红原药用乙醇或者其他醇类溶剂浸泡后过滤获得。试剂与仪器甲聚硅氧烷涂布的4-0单丝尼龙线购自北京西浓科技有限公司；四氮唑红（TTC）购自Sigma；ELISA试剂盒购自北京易科拜德有限公司；电子天平购自梅特勒托利多仪器（上海）有限公司；酶标仪购自帝肯（上海）公司。动物与饲养条件3.3.1试验动物健康雄性SD大鼠（体重280-300g）由北京维通利华实验动物公司提供，许可证编号为SCXK（京）2016-0006。饲养条件实验动物在中国医学科学院药用植物研究所动物中心进行动物饲养。动物实验设施持续保持屏障环境标准。主要环境指标的控制范围：室温20～26℃，日温差≤4℃。相对湿度40～70%。最小换气次数15次小时，光照明：暗=12h，明=12h。饲养于标准盒内，每盒5只，其饲养空间符合中华人民共和国国家标准GB14925-2010中关于实验动物所需最小空间的规定。所有动物均由培训合格的人员进行饲养管理，整个饲养过程中保持动物饮食活动自由。检疫及驯化过程实验动物进入动物房后，动物检疫期为3～5天。在检疫期间观察动物饮水、摄食和健康状况，以及是否存在疾病和死亡征兆。健康动物皮毛光滑、反应灵敏、无异常分泌物等。发现任何异常现象都需向专题负责人和临床兽医报告，在兽医指导下、经专题负责人确认，剔除有病的动物、用健康动物进行代替。确认动物健康无病，方能使用。动物适应性饲养1周后方可进行试验。4.试验方法4.1动物分组和药物处理4.1.1动物分组72只雄性SD大鼠随机分为6组，每组12只，分别为：1.假手术组（Sham）2.大脑中动脉栓塞再灌注MCAOR模型组3.阿司匹林ASA，10mgkg，临床等效剂量组4.化州橘红原药ECG，0.9gkg，生药量9gd组5.化州橘红水提物AE-ECG，0.9gkg，生药量16.5gd组6.化州橘红醇提物EE-ECG，0.9gkg，生药量24.5gd组4.1.2药物处理化州橘红原药、化州橘红水提物、化州橘红醇提物、阿司匹林于MCAO手术前一周灌胃给药，假手术组和MCAOR模型组大鼠则灌胃等体积的生理盐水。脑缺血再灌注损伤（MCAOR）模型采用线栓法制作脑缺血再灌注损伤（MCAOR）模型。手术过程严格无菌操作，主要手术过程如下：4%水合氯醛（10mLkg）腹腔注射麻醉大鼠，分离出颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）和颈内动脉（ICA），用微动脉夹夹闭颈总动脉，用双极电凝笔电凝颈外动脉的分支。游离颈外动脉主干，在距颈总动脉分叉3～4mm处结扎。微动脉夹暂时夹闭颈内动脉，眼科剪将颈外动脉剪一小口，插入甲聚硅氧烷涂布的4-0单丝尼龙线，在颈外动脉剪口处打一松节以阻断颈内动脉的血液返流，去除颈内动脉的微动脉夹，轻推尼龙线进入颈内动脉，到达颅内的大脑前动脉，阻断大脑中动脉（MCA）的开口，插入深度约18-22mm。去除颈总动脉的微动脉夹，消毒后逐层缝合皮下组织和皮肤，于术后2h缓慢抽出尼龙线进行再灌注24h。假手术组除不插入尼龙线外，其余操作与模型组相同。所有大鼠在整个实验过程中的直肠温度维持在37℃。氧化应激指标检测取所有大鼠，腹主动脉取血5mL，3000rpm离心10min后取血清，分离大脑皮层和海马组织，10%匀浆后3000rpm离心10min后取上清。采用ELISA试剂盒检测氧化应激指标NADPH氧化酶、4-羟基壬烯醛（4-HNE）、8-羟化脱氧鸟苷（8-OHdG）、蛋白羰基化（Proteincarbonyl）、血红素加氧酶1（HO-1）和醌氧化还原酶1（NQO-1）水平。数据处理所有数据经过SPSS22.0forWindows统计软件处理，数据以均数±标准差（mean±SD）表示。采用t检验和One-wayANOVA对计量数据进行统计分析，用最小显著差法（LSD）作两两比较，以P0.05表示差异有统计学意义。5.实验结果化州橘红显著抑制脑缺血再灌注损伤模型大鼠血清氧化应激如图1和表1所示，与假手术组比较，MCAOR模型组大鼠血清NADPH氧化酶（NOX）、脂质过氧化产物（4-HNE）、蛋白羰基化（proteincarbonyl）、DNA氧化产物（8-OHdG）、抗氧化酶HO-1和NQO-1水平均显著增加（P0.01）；与MCAOR模型组比较，阿司匹林、化州橘红水提物、醇提物组大鼠血清NOX、4-HNE、proteincarbonyl、8-OHdG水平均显著减少（P0.01），化州橘红原药组大鼠血清NOX、proteincarbonyl水平均显著减少（P0.01），而各给药组大鼠血清HO-1和NQO-1水平无显著变化（P＞0.05）。表1化州橘红可显著抑制MCAOR模型大鼠的血清氧化应激注：##，P0.01vs假手术组；*，P0.05vsMCAOR模型组；**，P0.01vsMCAOR模型组。经实验验证可知：与MCAOR模型组比较，阿司匹林、化州橘红水提物、醇提物组大鼠血清NOX、4-HNE、proteincarbonyl、8-OHdG水平均显著减少（P0.01），化州橘红原药组大鼠血清NOX、proteincarbonyl水平均显著减少（P0.01），化州橘红在预防及抑制脑缺血引起的氧化应激反应具有明显的效果。最后应当说明的是，以上实施例仅用于说明本发明的技术方案说明而非对权利要求保护范围的限制。本领域的普通技术人员参照较佳实施例应当理解，并可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，但属于本发明技术方案的实质相同和保护范围。

权利要求：1.化州橘红在制备防治脑缺血引起氧化应激的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的化州橘红在制备防治脑缺血引起氧化应激的药物中的应用，其特征在于，所述化州橘红为经过炮制的化州橘红，炮制方法如下：化州橘红夏季果实未成熟时采收，除去果瓤及部分中果皮，压制成形再干燥。3.根据权利要求1所述的化州橘红在制备防治脑缺血引起氧化应激的药物中的应用，其特征在于，所述化州橘红为生长在茂名市化州市的橘红果。

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