申请/专利权人：厦门大学;集美大学

申请日：2021-02-09

公开（公告）日：2021-05-25

公开（公告）号：CN112831515A

主分类号：C12N15/70(20060101)

分类号：C12N15/70(20060101);C12N15/31(20060101);C07K16/12(20060101);C07K16/06(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2023.10.27#发明专利申请公布后的驳回;2021.06.11#实质审查的生效;2021.05.25#公开

摘要：本发明公开了一种变形假单胞菌HtpG抗原及其多克隆抗体的制备方法；包括以下步骤：首先，按照大肠杆菌的密码子偏好，人工合成HtpG基因插入pET‑32表达载体，挑选阳性克隆测序验证；然后，构建好的质粒转化BL21DE3感受态细胞，培养、诱导、裂解、离心，得到蛋白质，SDS‑PAGE检测蛋白表达情况；进一步，选择小样表达良好的菌株进行接种、培养、诱导、裂解、纯化，得到蛋白，SDS‑PAGE鉴定蛋白分子量、纯度及浓度；进一步，以所得HtpG蛋白质为抗原进行动物免疫，收集抗血清并进行纯化，即得HtpG抗体。获得了变形假单胞菌的HtpG抗原并制备得到相应的HtpG多克隆抗体。经间接ELISA法检测抗血清及亲和纯化抗体效价，结果显示亲和纯化抗体得率正常。本发明方法简单，制备的抗体免疫原性强。

主权项：1.一种变形假单胞菌HtpG抗原及其多克隆抗体的制备方法，其特征在于:包含以下步骤：步骤1从样品中获取HtpG蛋白质抗原；步骤2从HtpG蛋白质抗原中获取HtpG抗原的核酸，该核酸为蛋白氨基酸；步骤3构建重组质粒：将步骤2中的HtpG抗原人工合成HtpG基因，将HtpG基因插入pET-32表达载体，并挑选阳性克隆测序验证步；骤4小样表达：将步骤3所述构建好的质粒转化BL21DE3感受态细胞，培养、诱导、裂解、离心，得到蛋白质菌株，采用SDS-PAGE检测蛋白表达情况；步骤5大样表达：选择步骤4所得良好的菌株进行接种、培养、诱导、裂解、纯化，得到HtpG蛋白质，采用SDS-PAGE鉴定蛋白分子量、纯度及浓度；步骤6以步骤5制备所得HtpG蛋白质为抗原进行动物免疫；步骤7采用常规多克隆抗体制备方法制备抗血清并纯化，即得HtpG抗体。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 厦门大学;集美大学 一种变形假单胞菌HtpG抗原及其多克隆抗体的制备方法

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