申请/专利权人:滨州学院
申请日:2020-04-21
公开(公告)日:2022-06-24
公开(公告)号:CN111647662B
主分类号:C12Q1/6888
分类号:C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12N15/53
优先权:
专利状态码:有效-授权
法律状态:2022.06.24#授权;2020.10.13#实质审查的生效;2020.09.11#公开
摘要:本发明提供的是一种利用mtDNACOI基因鉴定云斑白条天牛危害寄主的方法。所述方法分别提取危害白蜡树和杨树云斑白条天牛雌雄成虫的mtDNACOI基因,PCR扩增测序,分析比对,确定危害白蜡树和杨树雌雄成虫的4个COI基因标准序列。提取待检天牛的DNA,获得其COI基因序列,将其与以上4个标准序列比对。通过观察系统发育树和遗传距离表,根据待检基因序列与标准序列的亲缘关系,确定待检天牛的危害寄主和性别。所述PCR扩增方法,适合的退火温度是47℃、52℃、49℃、47℃。所述鉴定方法中,确定了适于比对的4个COI标准序列。该方法适于检疫部门鉴定云斑白条天牛的危害寄主,对控制其传播具有重要意义。
主权项:1.一种利用mtDNACOI基因鉴定云斑白条天牛危害寄主的方法,其特征在于,所述方法分别提取危害白蜡树和杨树云斑白条天牛雌雄成虫的mtDNACOI基因,PCR扩增,测序,多次重复,分析比对确定危害白蜡树云斑白条天牛雌性成虫COI标准基因、危害白蜡树云斑白条天牛雄性成虫COI标准基因、危害杨树云斑白条天牛雌性成虫COI标准基因、危害杨树云斑白条天牛雄性成虫COI标准基因四个标准序列,其中,危害白蜡树云斑天牛雌成虫mtDNACOI基因标准序列为:AAACATAAAGATATTGGAACTTTATATTTTCTTTTTGGAGCTTGAGCAGGAATATTAGGAACTTCATTAAGATTACTAATTCGAACAGAATTGGGTACCCCAGGATCTTTAATTGGAGATGACCAAATTTATAATGTAATTGTAACAGCCCATGCTTTTGTTATAATTTTCTTCATAGTTATACCTATTATAATTGGTGGATTCGGAAATTGACTAGTACCCCTTATGCTAGGAGCCCCAGATATAGCCTTTCCTCGAATAAATAATATAAGATTTTGATTATTACCCCCATCATTATCTTTATTAATTATAAGAAGAATTGTAGAAAATGGAGCAGGAACAGGATGAACAGTTTACCCCCCTTTAGCTGCTAATATTGCTCACAGAGGTTCTTCTGTTGATTTAGCCATTTTTAGTTTACACCTAGCTGGAATTTCCTCTATTCTAGGCGCAGCTAACTTTATTACAACTGTTATAAACATACGACCCTCAGGAATAACTATAGATCGTCTTCCCCTATTTGTATGAGCCGTTCAAATTACTGCAATTCTCCTTTTATTATCATTACCAGTATTAGCCGGAGGAATTACTATACTATTAACTGACCGAAATCTAAATACTTCCTTTTTTGACCCCGCAGGAGGAGGAGATCCAATTCTATATCAACATTTATTTTGATTTTTTGGTCACCTGTGA,该基因序列长696bp,碱基含量情况A为30.32%,G为15.80%,T为35.34%,C为18.53%,A+T为65.66%,C+G为34.34%;危害白蜡树云斑天牛雄成虫mtDNACOI基因标准序列为:AAACATAAAGATATTGGAACTTTATATTTTCTTTTTGGAGCTTGAGCAGGAATATTAGGAACTTCATTAAGATTACTAATTCGAACAGAATTAGGTACCCCAGGATCTTTAATTGGAGATGACCAAATTTATAATGTAATTGTAACAGCCCATGCTTTTGTTATAATTTTCTTCATAGTTATACCTATTATAATTGGTGGATTCGGAAATTGACTAGTACCCCTTATGCTAGGAGCCCCAGATATAGCCTTTCCTCGAATAAATAATATAAGATTTTGATTATTACCCCCATCATTATCTTTATTAATTATAAGAAGAATTGTAGAAAATGGAGCAGGAACAGGATGAACAGTTTACCCCCCTTTAGCTGCTAATATTGCTCACAGAGGTTCTTCTGTTGATTTAGCAATTTTTAGTTTACACCTAGCTGGAATTTCCTCTATTCTAGGCGCAGCTAACTTTATTACAACTGTTATAAACATACGACCCTCAGGAATAACTATAGATCGTCTTCCCCTATTTGTATGAGCCGTTCAAATTACTGCAATTCTCCTTTTATTATCATTACCAGTATTAGCCGGAGGAATTACTATACTATTAACTGACCGAAATCTAAATACTTCCTTTTTTGACCCCGCAGGAGGAGGAGACCCAATTCTATATCAACATTTATTTTGATTTTTTGGTCACCTGTGA,该基因序列长696bp,碱基含量情况A为30.60%,G为15.66%,T为35.20%,C为18.53%,A+T为65.80%,C+G为34.20%;危害杨树云斑天牛雌成虫mtDNACOI基因标准序列为:GGTCAACAAAACATAAAGATATTGGGACTTTATATTTTCTTTTCGGAGTATGAGCAGGAATATTAGGAACTTCATTAAGATTACTAATTCGAACAGAATTAGGTACCCCAGGATCTTTAATTGGAGATGACCAAATTTATAATGTAATTGTAACAGCCCATGCTTTTGTCATAATTTTCTTTATAGTTATACCTATTATAATTGGTGGATTTGGAAATTGACTAGTACCCCTAATACTAGGAGCCCCCGATATAGCCTTTCCACGAATAAATAATATAAGATTTTGATTATTACCCCCATCATTATCTTTGTTGATTATAAGAAGAATTGTAGAAAATGGAGCAGGAACAGGATGAACAGTTTACCCCCCCTTAGCTGCTAATATTGCTCACAGTGGTTCTTCTGTTGACTTAGCCATTTTTAGCTTACACTTAGCCGGAATTTCCTCTATTCTAGGCGCAGCTAACTTTATTACTACTGTTATAAATATACGACCCTCAGGAATAACTATAGATCGTCTTCCCCTATTTGTATGAGCCGTTCAAATTACTGCAATTCTTCTTTTATTATCATTACCAGTATTAGCTGGAGGAATTACTATACTATTAACTGACCGAAATCTAAATACCTCCTTTTTTGACCCCGCAGGAGGAGGAGATCCAATTCTCTATCAACATTTATTTTGATTTTTTGGTC,该基因序列长696bp,碱基含量情况A为30.17%,G为15.95%,T为35.06%,C为18.82%,A+T为65.23%,C+G为34.77%;危害杨树云斑天牛雄成虫mtDNACOI基因标准序列为:GGTCAACAAAATCATAAAGATATTGGGACTTTATATTTTCTTTTCGGAGCATGAGCAGGAATATTAGGAACTTCATTAAGATTACTAATTCGAACAGAATTAGGTACCCCAGGATCTTTAATTGGAGATGACCAAATTTATAATGTAATTGTAACAGCCCATGCTTTTGTCATAATTTTCTTTATAGTTATACCTATTATAATTGGTGGATTTGGAAATTGACTAGTACCCCTAATACTAGGAGCCCCCGATATAGCCTTTCCACGAATAAATAATATAAGATTTTGATTATTACCCCCATCATTATCTTTGTTGATTATAAGAAGAATTGTAGAAAATGGAGCAGGAACAGGATGAACAGTTTACCCCCCCTTAGCTGCTAATATTGCTCACAGTGGTTCTTCTGTTGACTTAGCCATTTTTAGCTTACACTTAGCCGGAATTTCCTCTATTCTAGGCGCAGCTAACTTTATTACTACTGTTATAAATATACGACCCTCAGGAATAACTATAGATCGTCTTCCCCTATTTGTATGAGCCGTTCAAATTACTGCAATTCTTCTTTTATTATCATTACCAGTATTAGCTGGAGGAATTACTATACTATTAACTGACCGAAATCTAAATACCTCCTTTTTTGACCCCGCAGGAGGAGGAGATCCAATTCTCTATCAACATTTATTTTGATTTTTTGGT,该基因序列长696bp,碱基含量情况A为30.17%,G为15.95%,T为35.06%,C为18.82%,A+T为65.23%,C+G为34.77%。
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