申请/专利权人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所

申请日：2022-08-30

公开（公告）日：2022-12-02

公开（公告）号：CN115418392A

主分类号：C12Q1/6806

分类号：C12Q1/6806;C12Q1/6844;C12N15/11

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2022.12.20#实质审查的生效;2022.12.02#公开

摘要：本发明公开了一种基于点击化学末端转移酶及CRISPRCas12a对miRNA的检测方法。首先，靶标miRNA‑21作为模板，将两个核酸探针进行点击化学连接，其生成物可与磁珠MBs结合。然后用TdT对其连接的核酸探针和互补链miRNA‑21进行延伸。延伸出的poly‑T尾巴激活了CRISPRCas12a的反式切割能力，从而切割报告基因来产生荧光信号。microRNAsmiRNAs检测的特异性和灵敏性在癌症的早期诊断和各种疾病的治疗中起着至关重要的作用。

主权项：1.一种基于点击化学末端转移酶及CRISPRCas12a对miRNA的检测方法，其特征在于：将含有miRNA互补片段被连接的DNA链通过链霉亲和素-生物素相互作用附着在磁珠MBs表面，MBs通过磁分离被保留；在dTTP和TdT存在的情况下，连接的DNA链和互补链miRNA暴露的游离3'-OH端可以产生连续的poly-T；crRNA的识别区域包含一个21bp的poly-A尾巴；扩展的poly-T尾巴可以作为激活剂，补充crRNA，激活CRISPRCas12a的反式切割，切割报告基因，产生荧光信号。

全文数据：

权利要求：

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