申请/专利权人：济宁医学院

申请日：2022-10-12

公开（公告）日：2023-01-03

公开（公告）号：CN115558668A

主分类号：C12N15/40

分类号：C12N15/40;C12N15/85

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2023.01.03#公开

摘要：本发明公开了SFTSV膜蛋白真核双表达载体构建方法，具体包括以下步骤：步骤一、基因分析：发现SFTSV的膜蛋白上含有决定病毒与宿主细胞间相互作用的抗原决定簇；步骤二、密码子优化；步骤三、表达构建；步骤四、表达纯化：将真核表达载体转染到哺乳动物细胞中来表达目的蛋白，进行表达纯化测试，本发明涉及分子病毒学技术领域。该SFTSV膜蛋白真核双表达载体构建方法，通过将含有抗原决定簇的膜蛋白优化后亚克隆到真核表达载体PBudce4.1中，利用PBudce4.1的双表达载体特性，实现Gn蛋白和Gc蛋白的同时表达，构建出同时表达Gn蛋白和Gc蛋白的真核表达载体PBudCE‑GnGc，大大提高了工作效率的同时，获得针对病毒膜蛋白的重组基因工程疫苗，为病毒防控提供思路。

主权项：1.SFTSV膜蛋白真核双表达载体构建方法，其特征在于：具体包括以下步骤：步骤一、基因分析：对发热伴血小板减少综合征病毒SFTSV的基因序列进行检查分析，发现发热伴血小板减少综合征病毒SFTSV的膜蛋白上含有决定病毒与宿主细胞间相互作用的抗原决定簇；步骤二、密码子优化：对发热伴血小板减少综合征病毒SFTSV的基因序列进行密码子优化后进行基因合成，并截取发热伴血小板减少综合征病毒SFTSV基因序列膜蛋白中的Gn蛋白和Gc蛋白；步骤三、表达构建：将步骤二中截取发热伴血小板减少综合征病毒SFTSV基因序列膜蛋白中的Gn蛋白和Gc蛋白作为目的片段亚克隆到真核表达载体PBudce4.1载体，其中Gn蛋白插入到HindIIIBamHI位点，Gc蛋白插入到KpnIXhoI位点，转至步骤四；步骤四、表达纯化：将步骤三中完成Gn蛋白和Gc蛋白插入后的真核表达载体PBudce4.1载体转染到哺乳动物细胞中来表达目的蛋白，进行表达纯化测试。

全文数据：

权利要求：

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