申请/专利权人:济宁医学院
申请日:2022-10-12
公开(公告)日:2023-01-20
公开(公告)号:CN115627274A
主分类号:C12N15/866
分类号:C12N15/866;C12N15/40;C12N15/62
优先权:
专利状态码:在审-公开
法律状态:2023.01.20#公开
摘要:本发明公开了SFTSV膜蛋白杆状病毒表达系统载体构建方法,具体包括以下步骤:步骤一、资料研究;步骤二、优化截取;步骤三、载体构建;步骤四、表达纯化,本发明涉及分子病毒学技术领域。该SFTSV膜蛋白杆状病毒表达系统载体构建方法,通过将含有抗原决定簇的膜蛋白优化后亚克隆到昆虫杆状病毒表达载体pFastBacDUAL中,利用昆虫杆状病毒表达载体pFastBacDUAL的双表达载体特性,实现Gn蛋白和Gc蛋白的同时表达,构建同时表达Gn蛋白和Gc蛋白的pFastBacDUAL‑GnGc,获得针对病毒膜蛋白的重组基因工程疫苗,为病毒防控提供思路,并且通过设计不同标签的方式,方便后期对两个蛋白分别进行纯化,为后续评估两个蛋白的功能提供了便利。
主权项:1.SFTSV膜蛋白杆状病毒表达系统载体构建方法,其特征在于:具体包括以下步骤:步骤一、资料研究:对发热伴血小板减少综合征病毒SFTSV的基因序列进行资料查询和分析,发现发热伴血小板减少综合征病毒SFTSV的基因序列的膜蛋白中存在跨膜结构域,并且跨膜结构域中含有决定病毒与宿主细胞间相互作用的抗原决定簇;步骤二、优化截取:对步骤一中发现的发热伴血小板减少综合征病毒SFTSV的基因序列进行密码子优化后进行基因合成,随后截取合成后基因序列中的膜蛋白序列,作为目的片段;步骤三、载体构建:将步骤二中截取的目的片段亚克隆到pFastBacDUAL载体中,其中Gn蛋白插入到BamHINotI位点,Gc蛋白插入到NcoINheI位点,转至步骤四;步骤四、表达纯化:利用昆虫系统对完成步骤三Gn蛋白和Gc蛋白插入后的pFastBacDUAL载体进行目的蛋白表达,随后进行表达纯化测试。
全文数据:
权利要求:
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