申请/专利权人：上海黄海制药有限责任公司

申请日：2020-12-29

公开（公告）日：2023-02-10

公开（公告）号：CN113341000B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/04;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72

优先权：["20191231 CN 2019114215463"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.02.10#授权;2021.09.21#实质审查的生效;2021.09.03#公开

摘要：本发明公开了一种HPLC‑MSMS法测定犬血浆中SodiumDanshensu和Prunasin的浓度的方法，HPLC‑MSMS分析测定过程的工作条件包括HPLC和色谱条件，通过色谱柱、溶解液、流动相、保留时间等工艺条件的优化，使得整个测试过程更加可行，测量结果增加准确，减少了残留，提高了准确度以及回收率高，减小了基质效应以及干扰性。

主权项：1.一种HPLC-MSMS法测定犬血浆中丹参素钠和野黑樱苷的浓度的方法，其特征在于，HPLC-MSMS分析测定过程的工作条件1、HPLC条件：色谱柱：InertSustainAQ-C18,2.1mmx50mm,5.0μm,SHIMADZU；柱温：35℃；流动相A：0.1％乙酸-水溶液；流动相B：体积比7:3的甲醇-乙腈溶液；储备液的配置：对丹参素钠、野黑樱苷和柳胺酚各取1.00mgmL，并且分别溶于甲醇中，配置得到丹参素钠储备液、野黑樱苷储备液和柳胺酚储备液，≤-15℃密闭，遮光保存，其中柳胺酚作为内标；泵梯度： 进样体积：3.00μL；运行时间：4.80min；保留时间：丹参素钠，大约1.68min；野黑樱苷，大约1.82min；柳胺酚，大约2.04min；2、质谱条件：质谱仪：ABSCIEXAPI5000LCMSMSsystem；离子源：ESI电喷雾电离；离子化模式：负离子模式；涡旋离子喷雾温度：550℃；包括如下步骤：1对丹参素钠、野黑樱苷和柳胺酚各取1.00mgmL，并且分别溶于甲醇中，配置得到丹参素钠储备液、野黑樱苷储备液和柳胺酚储备液，≤-15℃密闭，遮光保存，其中柳胺酚作为内标；将所述丹参素钠储备液和所述野黑樱苷储备液分别用甲醇溶液稀释成浓度为2*105、1.6*105ngmL的校正标示样品工作液；将所述丹参素钠和所述野黑樱苷等浓度混合，再用甲醇溶液稀释成浓度为4*104、1.6*104、1600、400、200ngmL的校正标示样品工作液；将所述丹参素钠储备液和所述野黑樱苷储备液分别用甲醇溶液稀释成浓度为1.5*105、1.0*105ngmL的质控工作液；将所述丹参素钠和所述野黑樱苷混合再用甲醇溶液稀释成浓度为6*104、600、200ngmL的质控工作液；将所述柳胺酚储备液用甲醇溶液稀释成浓度为1*104、50ngmL的内标工作液；将所述校正标示样品工作液用空白基质稀释成浓度为1*104、8000、2000、800、80、20、10ngmL的所述校正标示样，所述空白基质为不含分析物与内标的犬血浆；将所述质控工作液用所述空白基质稀释成浓度为7500、5000、300、30、10ngmL的质控样品；2样品处理：取等体积的所述校正标示样和所述质控样品，分别加入270μL的50ngmL所述内标工作液，封板后涡旋混匀离心，离心后取上清液150μL至96孔板中，并加入100μL的甲醇溶液；然后再密封孔板，进行低速涡旋混匀，取3.0μL在高效液相质谱联用仪上进样分析；3标准曲线的制作：以Y＝aX+b制作标准曲线，X为分析物浓度，Y为色谱峰面积比；4定量分析：根据步骤2对待测样品进行处理，并按照步骤3所得所述标准曲线计算得到所述待测样品中的丹参素钠、野黑樱苷的浓度。

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权利要求：

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