申请/专利权人：长沙理工大学;顺祥食品有限公司

申请日：2022-12-16

公开（公告）日：2023-03-28

公开（公告）号：CN115851859A

主分类号：C12P21/06

分类号：C12P21/06;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/16;C07K1/36;C12N1/04;A23B4/06;A23B4/20

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.04.14#实质审查的生效;2023.03.28#公开

摘要：本发明提供了一种鲢鱼小清蛋白抗冻肽的制备方法及其应用，以低值淡水鱼鲢鱼为对象，首先以热处理法分离纯化鲢鱼小清蛋白，再将小清蛋白精准酶解，通过依次超滤、离子交换层析和凝胶过滤层析获得高活性的小清蛋白源抗冻肽。该发明的步骤如下:新鲜鲢鱼→前处理去鳞、头、尾、内脏→绞碎→Tris‑HCl提取→离心→上清液加热除杂→离心→上清液酶解→超滤→离子交换层析→凝胶过滤层析→洗脱液→干燥。本发明方法制备的抗冻肽来源于鲢鱼小清蛋白，具有很高的酵母菌抗冻保护活性，可用作微生物、冷冻鱼糜、冷冻面团等体系的冷冻保护剂，具有广阔的应用前景。

主权项：1.一种鲢鱼小清蛋白抗冻肽的制备方法及其应用，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：1将新鲜鲢鱼宰杀后去头、尾、皮和内脏后采肉，绞碎得到鱼肉糜；2将所述鱼肉糜中加入相当于其质量3～6倍体积的20mmolL的Tris-HCl缓冲液pH8.0，在37℃水浴中搅拌提取50～90min，3500rmin离心15min，上清液于95℃水浴加热30min，冷却后以5000rmin离心20min，得到初步纯化的小清蛋白溶液；3向所述小清蛋白溶液加入蛋白酶进行水解，得到小清蛋白酶解液；4将所述小清蛋白酶解液以截留分子量为3000Da的超滤膜进行超滤，得到分子量小于3000Da的滤过液；5将所述滤过液浓缩至蛋白浓度凯氏定氮法为40～60mgmL后进行离子交换层析，收集第二个洗脱峰的洗脱液；所述离子交换层析为阴离子交换层析，平衡缓冲液为20mmoLLTris-HCL缓冲液pH8.0，洗脱液为含有0-1moLLNaCl线性梯度的相同缓冲液，洗脱流速为1.0～2.0mLmin；6将所述离子交换层析的洗脱液至蛋白浓度凯氏定氮法为30～40mgmL后进行凝胶过滤层析，收集第二个洗脱峰的洗脱液；所述凝胶过滤层析使用SephadexG-50凝胶过滤色谱柱，洗脱液为超纯水，洗脱流速为0.8～1.5mLmin；7将所述凝胶过滤层析的洗脱液进行真空干燥，得到鲢鱼小清蛋白抗冻肽。

全文数据：

权利要求：

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