申请/专利权人：河南牧业经济学院

申请日：2022-07-27

公开（公告）日：2023-06-02

公开（公告）号：CN116200508A

主分类号：C12Q1/689

分类号：C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11;C12N15/113;C12R1/01

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.06.20#实质审查的生效;2023.06.02#公开

摘要：本发明提供一种基于CRISPRCas12a系统结合环介导等温扩增LAMP快速检测宋内氏志贺氏菌的方法，属于微生物检测领域。本发明利用CRISPR系统Ⅱ类Ⅴ型的Cas12a蛋白对特定核酸DNA切割产生的“附属切割”活性，设计荧光报告探针，实现对宋内氏志贺菌特异致病基因的LAMP扩增产物的快速检测。本发明所述方法仅需要恒温装置和简易的荧光检测装置，即可实现1小时内完成检测，检测结果可通过裸眼判定，简便、灵敏、高效地实现现场检测，所述方法在食品安全、生物检测以及市场监管等领域具有广阔的应用前景。

主权项：1.基于LAMP-CRISPRCas12a系统宋内氏志贺氏菌的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1提取待测样品的基因组DNA；2针对特异致病基因保守序列设计sgRNA，包含sgRNA的PCR引物，采用PCR结合LbCpfl酶切方法筛选得到目标sgRNA；3设计LAMP引物，以步骤1提取的基因组DNA作为模板，进行LAMP扩增；4以步骤1提取的基因组DNA作为模板，步骤2设计的PCR引物，扩增特异致病基因IpaH，构建至pMD-19T克隆载体，构建pMD19T-IpaH质粒；以十倍比例倍比稀释质粒作为LAMP扩增的模板；5荧光可视检测，将LAMP扩增产物、LbCpf1、荧光探针、目标sgRNA、NEBBuffer2.1混匀，孵育10～30min，在蓝光或紫外光下裸眼可视对样品中宋内氏志贺氏菌的定性检测。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 河南牧业经济学院 基于LAMP-CRISPR/Cas12a系统宋内氏志贺氏菌的快速检测方法

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