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申请/专利权人:东莞市滨海湾中心医院(东莞市太平人民医院、东莞市第五人民医院)
摘要:本发明公开了一种Pdgfrβ基因特异性敲除小鼠模型及其构建方法与应用,属于转基因技术领域。本发明的Pdgfrβ基因特异性敲除小鼠模型的构建方法包括以下步骤:基于CRISPRCas9技术设计靶向Pdgfrβ基因的sgRNA;对Pdgfrβ基因进行flox修饰,构建同源重组载体;将Cas9蛋白、sgRNA和同源重组载体共注射至小鼠的受精卵中;将受精卵移植至假孕母鼠体内,产出F0代,对F0代进行基因型鉴定,筛选阳性F0小鼠;将阳性F0小鼠与野生型小鼠交配并进行基因型鉴定,获得F1代杂合子;将F1代杂合子与两个不同的特异性工具鼠配繁,筛选获得所述Pdgfrβ基因神经组织以及全身组织特异性敲除的两个小鼠模型。本发明的Pdgfrβ基因特异性敲除小鼠模型的构建方法步骤简单,方法易行,周期短并且得到阳性小鼠的概率高。
主权项:1.一种Pdgfrβ基因特异性敲除小鼠模型的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:1基于CRISPRCas9技术设计靶向Pdgfrβ基因的sgRNA;2对Pdgfrβ基因进行flox修饰,构建同源重组载体;3将Cas9蛋白、sgRNA和同源重组载体共注射至小鼠的受精卵中;4将步骤3的受精卵移植至假孕母鼠体内,产出F0代,对F0代进行基因型鉴定,筛选阳性F0小鼠;5将阳性F0小鼠与野生型小鼠交配并进行基因型鉴定,获得F1代杂合子;6将F1代杂合子与特异性工具鼠配繁,筛选获得所述Pdgfrβ基因特异性敲除小鼠模型。
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