申请/专利权人：康诺贝林伦瑙有限公司

申请日：2017-11-10

公开（公告）日：2023-08-18

公开（公告）号：CN110381986B

主分类号：A61K38/36

分类号：A61K38/36;A61K38/37;C07K14/755;A61P7/04;A61K36/36;A61K36/37

优先权：["20161111 EP 16198497.6"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.08.18#授权;2019.11.19#实质审查的生效;2019.10.25#公开

摘要：本发明关于一种用于治疗或预防凝血疾病之重组多肽，其包含截短型冯维勒布兰德因子VWF，该治疗或预防包含向患有凝血疾病之个体施予该重组多肽且血管外施予第八凝血因子蛋白质FVIII，其中该重组多肽能够与该FVIII结合，且其中欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比高于50。

主权项：1.包含截短型冯维勒布兰德因子VWF的重组多肽在制备用于治疗或预防凝血疾病的药物中的用途，其中所述重组多肽被皮下、皮内或肌肉内施予患有凝血疾病的个体且施予第八凝血因子蛋白质FVIII，该重组多肽能够与该FVIII结合，其中所述截短型VWF包含与SEQIDNO：4之氨基酸764至1242具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，所述重组多肽包含半寿期延长部分HLEM，该重组多肽以二聚体存在，并且其中欲施予的所述重组多肽对欲施予的FVIII的摩尔比高于50，该二聚体多肽具有FVIII结合亲和性，该FVIII结合亲和性之解离常数KD小于1nM。

全文数据：用于血管外施予以治疗或预防凝血疾病的截短型冯维勒布兰德因子多肽【技术领域】本发明关于改善凝血疾病治疗的产品及方法。【先前技术】有各种由缺乏凝血因子所引起的出血性病症。最常见的病症系分别由缺乏第八凝血因子FVIII及第九凝血因子所造成的A型及B型血友病。另一种已知的出血性病症为冯维勒布兰德病VWD。在血浆中的FVIII主要以与冯维勒布兰德因子vonWillebrandFactor,VWF之非共价复合物存在，且其凝血功能为加速因子IXa依赖性之因子X转换成为因子Xa。典型的血友病或A型血友病为遗传型出血性病症。其系由X染色体连锁之凝血FVIII缺乏所引起，且影响几乎全为男性，发病率为每10,000人中介于一至两人。X染色体缺陷系由本身不是血友病患者的女性带原者遗传。A型血友病之临床表现为增加之出血倾向。在接受预防性治疗之严重的A型血友病患者中，由于FVIII的血浆半衰期短，约12至14小时，所以FVIII必须每周经静脉内i.v.施予约3次。每次i.v.施予都很麻烦，伴随着疼痛且承担感染的风险，尤其当这大多数由经确诊为A型血友病的患者本身或孩童的父母在家里完成时。因此，非常希望能增加FVIII的半衰期，使得必须施予含有此FVIII之医药组成物的频率较低。已进行许多藉由下列者来延长未激活之FVIII的半衰期之尝试：降低其与细胞受体之交互作用WO2003093313A2，WO2002060951A2、将聚合物与FVIII共价连接WO199415625A1，WO199711957A1及US4970300、将FVIII包封WO199955306A1、引入新颖的金属结合位点WO199703193A1、将A2结构域藉由肽链接WO199740145A1及WO2003087355A1或双硫连结WO2002103024A2共价连接至A3结构域、或将A1结构域与A2结构域共价连接WO2006108590A1。另一提高FVIII或VWF的功能性半衰期之方法为藉由FVIII之聚乙二醇化PEGylationWO2007126808A1，WO2006053299A2，WO2004075923A2或藉由VWF之聚乙二醇化WO2006071801A2达成。增加经聚乙二醇化之VWF的半衰期亦可能间接提高存在于血浆中FVIII的半衰期。亦曾说明FVIII之融合蛋白WO2004101740A2、WO2008077616A1及WO2009156137A1。在不同形式的冯维勒布兰德病VWD中缺失、功能上有缺陷或仅少量可用的VWF为存在于哺乳动物血浆中的多聚体黏性糖蛋白，其具有多重生理功能。在初级止血期间，VWF系作为血小板表面上的特定受体与细胞外基质组分诸如胶原蛋白之间的媒介子起作用。而且，VWF适合作为前凝血FVIII之载体及稳定蛋白质。VWF系在内皮细胞及巨核细胞中合成为2813个氨基酸前驱体分子。野生型VWF之氨基酸序列及cDNA序列揭示于Collinsetal.1987,Proc.Natl.Acad.Sci.USA84:4393-4397。前驱体多肽原前-VWF系由N端22个残基信号肽、接着741个残基前肽及在成熟血浆VWF中发现的2050个残基多肽所组成Fischeretal.,FEBSLett.351:345-348,1994。在内质网中的信号肽裂解之后，在VWF的两个单体之间形成C端双硫键。在通过分泌途径进一步运送期间，添加12个N-连结及10个O-连结之碳水化合物侧链。更重要的是VWF二聚体系经由N端双硫键多聚合化且741个氨基酸长度的前肽系以晚期高尔基体Golgiapparatus中的PACE酵素弗林蛋白酶furin裂解。一旦分泌入血浆中，蛋白酶ADAMTS13可裂解在VWF之A1结构域内的高分子量VWF多聚体。血浆VWF因此由从500kDa之单二聚体至由多至20种以上分子量超过10,000kDa之二聚体所组成之多聚体为范围的全范围多聚体所组成。VWF-HMWM由此具有最强的止血活性，其可以瑞斯托菌素ristocetin辅因子活性VWF：RCo测量。VWF：RCoVWF抗原之比越高，则高分子量多聚体之相对量越高。在血浆中，FVIII与VWF以高亲和性结合，其防止FVIII过早消除及因此除了其在初级止血中的角色以外亦在稳定FVIII、调节FVIII之血浆水平扮演关键角色，且因此亦为控制次级止血的中心因子。与VWF结合的未激活之FVIII在血浆中的半衰期为约12至14小时。在其中没有或几乎没有VWF存在的第3型冯维勒布兰德病中，FVIII的半衰期仅约2至6小时，由于降低之FVIII浓度而导致此等患者轻度至中度A型血友病症状。亦曾使用VWF对FVIII之稳定效应来协助FVIII在CHO细胞中的重组表现Kaufmanetal.1989,MolCellBiol9:1233-1242。第2N型vonWillebrand氏病的特征在于VWF突变引起的低FVIII水平，该病影响FVIII与VWF之结合。第2N型VWD病患的FVIII水平范围介于约3IUdL与30IUdL之间，一般低于20IUdL，取决于VWF之特定突变SadlerJ.E.andBlinderM.,VonWillebrandDisease:Diagnosis,Classification,andTreatment；in:HemostasisandThrombosis,eds.Colman,Marder,Clowes,George,Aird,andGoldhaber,LippincottWilliams&Wilkins2006,pp905-921。已说明经VWF衍生之多肽特别为VWF片段于试管内及活体内稳定FVIII。WO2013106787A1指出包含FVIII蛋白及特定的VWF片段之嵌合蛋白。FVIII及VWF片段的该等嵌合杂二聚体具有1：1之VWF对FVIII的固定摩尔比。WO2014198699A2和WO2013083858A2说明VWF片段及其治疗血友病之用途。顷发现FVIII之生体可用率可在与类似的莫耳量之VWF片段经血管外共同施予时显著地改良。超过FVIII之高莫耳过量的VWF据称不为所欲，且在VWF片段与FVIII经s.c.共同施予的实验中发现VWF剂量对FVIII的生体可用率不具有关键性。因此，VWF片段对FVIII之摩尔比以及VWF剂量被认为对FVIII生体可用率不重要。WO2011060242A2揭示包含特定的VWF片段及抗体Fc区之融合多肽，提出VWF片段对FVIII的多至10：1之特定摩尔比。此外，并无呈现关于该等Fc-融合建构体的体内资料。Yeeetal.2014Blood1243:445-452发现经融合至免疫球蛋白G1之Fc部分的含有D’D3结构域之VWF片段在VWF-缺乏之小鼠中足以稳定内源性第八因子。然而，虽然VWFD’D3-Fc融合蛋白在输注FVIII-缺陷小鼠中时展现显著延长的存活期，但是VWFD’D3-Fc融合蛋白不延长共同输注FVIII的存活期。直到今天为止，A型血友病的标准治疗涉及频繁的静脉内输注FVIII，不论是衍生自人类捐赠者血浆之浓缩物形式或是基于重组FVIII的医药制剂形式。虽然这些取代疗法通常有效，例如在接受预防性治疗之严重的A型血友病患者中，但如上述，由于第八凝血因子约12小时之短的FVIII血浆半衰期，所以第八凝血因子必须于每周经静脉内i.v.施予约3次。已知如果达到高于健康非血友病者之FVIII活性的1％，例如藉由升高FVIII水平超过0.01UmL，严重A型血友病转变成中度A型血友病。在预防性疗法中，投药方案系经设计以使FVIII活性的谷底水平不低于健康非血友病者之FVIII活性的2-3％的水平。每次i.v.施予都很麻烦，伴随着疼痛且承担感染的风险，尤其当这大多数由经确诊为A型血友病的患者本身或孩童的父母在家里进行治疗时。此外，频繁的i.v.注射不可避免地导致疤痕形成，干扰未来的输注。由于严重血友病的预防性治疗始于生命早期，在儿童通常小于2岁时，每周要注射FVIII3次到这么小的病患的静脉甚至更为困难。在有限的期间内，植入注射座系统可提供替代方案。尽管可能发生重复感染且注射座可能造成身体运动时的不便，它们一般仍被视为优于静脉内注射。因此这方面仍有高度医疗需求，以消除静脉内输注FVIII的需要。由于FVIII是一种非常大型且不安定的分子，若经由皮下、肌肉内或皮内即血管外给予，其因为吸收不良及严重降解而具有非常低的生体可用率。EP0710114A1揭示浓度超过1000IUmL之B结构域删除FVIII的FVIII配方适合用于皮下施予，导致在s.c.施予猴子后测量活性FVIII：C-时间曲线下面积得到5-10％的生体可用率。EP0772452揭示浓度至少500IUmL的B结构域删除FVIII与有机添加剂的FVIII配方经皮下施予时，可导致FVIII血浆水平达到正常FVIII水平的至少1.5％超过6h。使用水解明胶或大豆油乳液作为有机添加剂及浓度1100IUmL的B结构域删除FVIII且剂量为10000IUkg，在石蟹猕猴中见到以活性FVIII：C-时间曲线下面积测量之超过50％的生体可用率。然而这并不是治疗患有凝血疾病之病患的适当临床情况。WO199711957A1揭示当皮下施予B结构域删除FVIII比活性15000IUmg；剂量2500IUkg时，生体可用率为5.3％，然而FVIII的单甲氧基聚乙二醇化接合物在石蟹猕猴达成22％或19％的生体可用率。根据WO2015185758A2，呈现一种包含第八凝血因子及一或多个冯维勒布兰德因子肽之非共价复合物的组成物，其中冯维勒布兰德因子肽包含至少氨基酸764至1035及1691至1905。FVIII：VWF之分子比例介于1：1至1：20之间。在WO2015185758A2中，A型血友病犬接受s.c.及后续i.v.注射单独的重组B结构域删除FVIII，或与五倍莫耳过剩之经金黄色葡萄球菌V-8蛋白酶消化pdVWF产生之VWF片段组合注射。分析样本的全血凝血时间WBCT及在显色FVIII活性测定中之活性。相较于s.c.单独施予FVIII，皮下施予VWF片段与FVIII之复合物导致超越正常犬之凝血时间所需的时间增加1.4倍。相较于单独施予FVIII，施予VWF片段与FVIII亦导致s.c.及i.v.施予时犬血浆中FVIII活性随时间增加及几乎双倍的曲线下面积AUC值。在WO2008151817A1中，显示VWF经血管外施予后可吸收至血流，无须任何可能带来免疫反应风险增加的稳定性共价修饰，且当与FVIII非静脉内共同施予时，VWF可用来增强FVIII的摄取。使用未经任何半衰期延长修饰之VWF。VWF抗原对FVIII活性比例大于2：1。仅考虑包含全长VWF之多聚体及单体产物。然而藉由使用全长VWF，高比例的VWF对FVIII可能导致血栓形成风险增加。此外，当使用全长VWF时，要增加比例所需的蛋白质量将无法用于施予。进一步，多聚体及单体。有向病患静脉内施予FVIII的替代方案之医疗需求。此外，有当血管外施予时提供第八凝血因子吸收的方法以及适合该等方法之化合物或组成物的持续需求。【发明内容】本发明的第一目标是提供一种改善的基于第八凝血因子FVIII蛋白质之凝血疾病的治疗或预防。根据第二目标，该治疗应允许向有此需要之个体以替代性途径施予FVIII。具体而言，应可经由皮下施予FVIII。根据第三目标，该治疗应至少提供足以治疗凝血疾病个体的该施予之FVIII的药物动力学参数。根据第四目标，该治疗应提供具体而言足够高的FVIII半衰期，以允许可耐受或改善的施予频率。发明人意外发现，第八凝血因子FVIII蛋白质可经由血管外途径成功施予以用于治疗或预防凝血疾病，惟该FVIII系与包含截短型冯维勒布兰德因子VWF之重组多肽共同施予。该重组多肽能够与该共同施予之FVIII结合。欲施予之重组多肽对欲施予之FVIII的摩尔比较佳系高于50。包含截短型VWF之重组多肽较佳地包含半衰期延长部分HLEM。不希望受限于任何理论，一般相信很重要是要达成高度过量的包含截短型VWF之经施予重组多肽，以最小化共同施予之FVIII与内源性VWF之结合，该内源性VWF具有较大的分子结构，相较于截短型VWF可能导致增加的分解代谢。藉由使用本文所述之共同施予之FVIII与该重组多肽，这是第一次指出以血管外途径施予FVIII不仅是有可能的，甚至可在循环中达成临床上重要的FVIII量。本发明进一步显示血管外施予重组多肽提供或增加共同施予之FVIII的生体可用率。此外，重组多肽与FVIII一起皮下施予，允许与FVIII实质吸收至血流有关之血管外施予FVIII导致FVIII活性水平不仅显著超过侦测极限，但更进一步适合治疗应用。与FVIII共同施予之重组多肽不仅具有足够长的半衰期、一旦到达血浆后增加FVIII于此区室中之维持，但亦提供适合治疗应用之FVIII的生体可用率。此外，本发明进一步显示血管外施予重组多肽可允许包含FVIII经由与重组多肽所使用之施予途径不同之途径施予的治疗选项。具体而言，显示因为静脉内施予FVIII与皮下施予重组多肽之组合而来的好处。本发明因此特别关于下列实施方式[1]至[73]：[1]一种用于治疗或预防凝血疾病之重组多肽，其包含截短型冯维勒布兰德因子VWF，该治疗或预防包含向患有凝血疾病之个体施予该重组多肽且血管外施予第八凝血因子蛋白质FVIII，其中该重组多肽能够与该FVIII结合，且其中欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比高于50。[2]一种用于治疗或预防凝血疾病之重组多肽，其包含截短型冯维勒布兰德因子VWF，该治疗或预防包含向患有凝血疾病之个体血管外施予该重组多肽且施予第八凝血因子蛋白质FVIII，其中该重组多肽能够与该FVIII结合，且其中欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比高于50。[3]如实施方式[1]或[2]供使用之重组多肽，其中该多肽包含半衰期延长部分HLEM。[4]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该个体系人类个体。[5]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该截短型VWF系人类截短型VWF。[6]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该多肽系经皮下、皮内或肌肉内施予。[7]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该FVIII系经皮下、皮内或肌肉内施予。较佳地，FVIII与该多肽皆经皮下施予。[8]根据实施方式[2]至[6]供使用之重组多肽，其中FVIII系经由与重组多肽不同的施予途径施予，较佳地FVIII系经静脉内施予；更佳地重组多肽系经皮下施予且FVIII系经静脉内施予。[9]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该截短型VWF包含与SEQIDNO：4之氨基酸776至805具有至少90％序列同一性之氨基酸序列、较佳地包含与SEQIDNO：4之氨基酸764至1242具有至少90％序列同一性之氨基酸序列。[10]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该截短型VWF缺乏SEQIDNO：4之氨基酸1243至2813。[11]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该截短型VWF系由aSEQIDNO：4之氨基酸764至1242、b与SEQIDNO：4之氨基酸764至1242具有至少90％序列同一性之氨基酸序列、或ca或b之片段组成。[12]如实施方式[3]至[11]中任一项供使用之重组多肽，其中该HLEM系与该截短型VWF融合之异源性氨基酸序列。[13]如实施方式[12]供使用之重组多肽，其中该异源性氨基酸序列包含选自由下列所组成之群组的多肽或由选自由下列所组成之群组的多肽所组成：转铁蛋白及其片段、人绒毛膜促性腺激素之C端肽、XTEN序列、同源氨基酸重复HAP、脯胺酸-丙胺酸-丝胺酸重复PAS、白蛋白、艾芙米afamin、α-胎蛋白、维生素D结合蛋白质、在生理条件下能够与白蛋白或免疫球蛋白恒定区结合之多肽、能够与新生儿Fc受体FcRn结合之多肽、特别是免疫球蛋白恒定区及其部分、较佳地免疫球蛋白之Fc部分、及彼等之组合。免疫球蛋白恒定区或其部分较佳地系免疫球蛋白G1之Fc片段、免疫球蛋白G2之Fc片段或免疫球蛋白A之Fc片段。[14]如实施方式[3]至[11]中任一项供使用之重组多肽，其中该HLEM系与该重组多肽接合。[15]如实施方式[14]供使用之重组多肽，其中该HLEM系选自由下列所组成之群组：羟乙基淀粉HES、聚乙二醇PEG、聚唾液酸PSA、类弹性蛋白多肽、肝素前体heparosan聚合物、玻尿酸及白蛋白结合配体，例如脂肪酸链、及彼等之组合。[16]如实施方式[3]至[13]中任一项供使用之重组多肽，其中该重组多肽不包含任何与该重组多肽接合之HLEM。[17]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该多肽系包含N-聚醣之糖蛋白，且其中较佳地至少75％、较佳地至少85％之该N-聚糖包含平均至少一个唾液酸部分。[18]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该重组多肽系以二聚体存在或至少具有高比例的二聚体。[19]如实施方式[18]供使用之重组多肽，其中该重组多肽系较佳地包含二个在本文中揭示实施例之一所定义之多肽之同型二聚体，且形成二聚体之二个单体彼此经由截短型VWF内的半胱胺酸残基所形成的至少一或多个双硫键共价连接。[20]如实施方式[19]供使用之重组多肽，其中形成一或多个双硫键之半胱胺酸残基系选自由Cys-1099、Cys-1142、Cys-1222、Cys-1225、Cys-1227及彼等之组合所组成之群组，较佳地Cys-1099及Cys-1142，其中氨基酸编号系指SEQIDNO：4。[21]如实施方式[18]至[20]中任一项供使用之重组多肽，其中该二聚体对FVIII之亲和性系大于单体多肽对FVIII之亲和性，该单体多肽具有与二聚体多肽之单体次单位相同的氨基酸序列。[22]如实施方式[18]至[21]中任一项供使用之重组多肽，其中本发明之多肽的二聚体：单体比系至少1.5、较佳地至少2、更佳的是至少2.5或至少3。较佳地，本发明之重组多肽不包含多肽的单体及或多聚体形式或至少实质上不含多肽的单体及或多聚体形式。最佳的是本发明之所有多肽皆以二聚体存在。[23]如实施方式[18]至[22]中任一项供使用之重组多肽，其中该二聚体多肽具有FVIII结合亲和性，该FVIII结合亲和性之解离常数KD小于1nM、较佳地小于500pM、小于200pM、小于100pM、小于90pM或小于80pM。[24]如实施方式[23]供使用之重组多肽，其中KD范围自0.1pM至500pM、自0.5pM至200pM、自0.75pM至100pM或最佳地自1pM至80pM。[25]如实施方式[18]至[24]中任一项供使用之重组多肽，其中该多肽具有以解离常数KD为特征之FVIII结合亲和性，且该二聚体多肽的解离常数KD相较于单体多肽的解离常数KD减少，较佳地减少至少10倍、至少100倍、至少500倍或至少1000倍。[26]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该多肽相较于野生型VWF之氨基酸序列包含至少一个氨基酸取代，其中该经修饰多肽对FVIII之结合亲和性较佳地进一步藉由导入该至少一个取代而相较于参考多肽之结合亲和性增加，该参考多肽除了该修饰之外具有相同氨基酸序列。[27]根据实施方式[26]供使用之重组多肽，其中该等在截短型VWF中之取代具有进一步增加共同施予之FVIII在施予后的半衰期的能力。藉此，治疗亦可提供特别是进一步增加之FVIII体内半衰期，以允许可耐受或改善的施予频率。[28]如实施方式[26]或[27]供使用之重组多肽，其中该取代系选自由下列所组成之组合群组：S764GS766Y、S764PS766I、S764PS766M、S764VS766Y、S764ES766Y、S764YS766Y、S764LS766Y、S764PS766W、S766WS806A、S766YP769K、S766YP769N、S766YP769R、S764PS766L及S764ES766YV1083A，氨基酸编号系参照SEQIDNO：4序列。[29]如实施方式[28]供使用之重组多肽，其中该取代系S764ES766Y或S764ES766YV1083A组合。[30]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该施予之FVIII的平均滞留时间MRT系藉由共同施予该重组多肽而增加，较佳地相较于参考治疗增加至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或至少5倍，其中该参考治疗与该治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM、及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比低于根据本发明之摩尔比、及或除了并未施予重组多肽。[31]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中施予FVIII之MRT系至少10h、较佳地至少15h、至少20h或至少25h。[32]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该施予之重组多肽的MRT系增加，较佳地相较于参考治疗增加至少1.5倍、至少2倍或至少3倍，其中该参考治疗与该治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM、及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比低于根据本发明之摩尔比特别是低于50。[33]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该施予之FVIII的终末半衰期系藉由共同施予该重组多肽而增加，较佳地相较于参考治疗增加至少1.2倍、至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍或至少3倍，其中该参考治疗与该治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM、及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比低于根据本发明之摩尔比、及或除了并未施予重组多肽。藉此，治疗可提供特别是够高的FVIII体内半衰期，以允许可耐受或改善的施予频率。[34]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中与具有HLEM之该多肽共同施予之该FVIII达到1％谷底水平之时间期间相较于参考治疗系延长，其中该参考治疗与该治疗完全相同，除了该FVIII系与不具有该HLEM之重组多肽一起施予、及或除了并未施予重组多肽。[35]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中i与该多肽共同施予之该FVIII达到1％谷底水平之时间期间系至少约30h、至少约35h、至少约38h、至少约40h、或至少约50h；或ii与该多肽共同施予之该FVIII达到5％谷底水平之时间期间系至少约20h、至少约22h、至少约29h、至少约34h、或至少约43h；或iii与该多肽共同施予之该FVIII达到10％谷底水平之时间期间系至少约5h、至少约6h、至少约10h、至少约18h、或至少约20h。[36]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该多肽之血浆半衰期相较于内源性VWF之血浆半衰期及或相较于正常人血浆NHP中VWF之血浆半衰期增加，其中该多肽之血浆半衰期系较佳地至少100％、至少200％或较佳地至少400％高于内源性VWF之血浆半衰期及或相较于正常人血浆NHP中VWF之血浆半衰期。[37]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该凝血疾病系A型血友病或类血友病von-Willebrand氏病。[38]如实施方式[37]供使用之重组多肽，其中凝血疾病系A型血友病且系轻度A型血友病，其内源性FVIII活性水平一般系5％至40％的正常人血浆NHP中内源性FVIII活性水平；或中度A型血友病，其内源性FVIII活性水平一般系1％至5％的NHP中内源性FVIII活性水平；或严重A型血友病，其内源性FVIII活性水平一般系低于1％的NHP中内源性FVIII活性。[39]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该多肽系i在有要求时用于治疗及控制出血事件、ii用于例行性预防，特别是减少出血事件的频率或iii用于手术前后的出血管理。[40]如实施方式[39]供使用之重组多肽，其中多肽系用于例行性预防，以减少A型血友病病患的出血事件频率。[41]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中重组多肽与FVIII蛋白质之共同施予系藉由下列达成：-i在包含重组多肽与FVIII蛋白质的单一组成物中一起施予，或-ii施予各自提供于分开组成物中之重组多肽第一化合物与FVIII蛋白质第二化合物，该等分开组成物可选地作为组合疗法的一部分，其中第一化合物系于第二化合物之前、之后或同时施予。当第一化合物系于第二化合物之前或之后施予时，可应用任何合适时间间隔以施予第一化合物及第二化合物。具体而言，对于例行性预防之目的而言，第一化合物之施予与第二化合物之施予可根据独立或配合的投药计划提供。[42]如实施方式[41]供使用之重组多肽，其中以i为例，重组多肽与FVIII蛋白质之共同施予系藉由下列达成：提供包含掺合于单一组成物之重组多肽与FVIII之组合式产品，或提供至少二种分开产品之组合或套组，该二种分开产品预定在施予前混合，藉此第一产品包含重组多肽且第二产品包含FVIII。[43]如实施方式[41]供使用之重组多肽，其中以ii为例，重组多肽与FVIII蛋白质特别是当同时施予时及或特别是当两者皆以血管外施予时系以近距离施予，较佳地注射部位相距不多于50mm、不多于40mm、不多于30mm、特别是不多于20mm。[44]如实施方式[41]或[43]供使用之重组多肽，其中以ii为例，重组多肽与FVIII蛋白质可在1个月内、在三周内、在二周内、在一周内、在一天内、在约一小时内、在30分钟min内、在15min内或在5min内共同施予。[45]如实施方式[41]、[43]或[44]供使用之重组多肽，其中以ii为例，重组多肽与FVIII蛋白质可在不超过1个月、不超过三周、不超过二周、不超过一周、不超过一天、不超过约一小时、较佳地在30min内、更佳地在15min内且最佳地在5min内的时间间隔内共同施予。[46]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中重组多肽不包含FVIII蛋白质及或不包含具有FVIII活性之多肽。[47]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该FVIII系血浆衍生FVIII蛋白质或重组FVIII蛋白质，较佳地人类FVIII蛋白质。[48]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该FVIII系重组FVIII蛋白质。[49]如任何实施方式[48]供使用之重组多肽，其中重组FVIII具有完整的天然B结构域或具有删除、截短型或经修饰的B结构域。可选地，重组FVIII蛋白质可包含至少一个半衰期延长部分HLEM。合适HLEM系在本文中揭示。[50]如实施方式[48]供使用之重组多肽，其中FVIII蛋白质系重组单链第八凝血因子，较佳地包含或由氨基酸序列SEQIDNO：5或其片段组成，前提是该等片段具有FVIII活性。[51]如实施方式[48]供使用之重组多肽，其中重组FVIII具有删除或截短型B结构域，前提是该删除或截短型B结构域包含异源性插入至少一个连接符肽及或半衰期增长多肽。[52]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中当FVIII系经血管外施予时，该施予之FVIII在与重组多肽共同施予后的生体可用率藉由重组多肽增加，此系与参考治疗比较，其中该参考治疗与该治疗完全相同，除了该FVIII之施予系在无施予该重组多肽的情况下进行。藉此，血管外施予重组多肽提供或增加施予之FVIII的生体可用率。较佳地，重组多肽与FVIII一起之皮下共同施予，允许与FVIII实质吸收至血流有关之血管外施予FVIII导致FVIII活性水平不仅显著超过侦测极限，但更进一步适合治疗应用。较佳地，与FVIII共同施予之重组多肽不仅具有足够长的半衰期、一旦到达血浆后增加FVIII于此区室中之维持，但亦提供适合治疗应用之FVIII的生体可用率。[53]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中血管外施予之FVIII之生体可用率在与该重组多肽共同施予之后系至少2％、至少3％、至少5％、较佳地至少7％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％或至少40％。[54]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该重组多肽之生体可用率系至少30％、较佳地至少35％、更较佳地至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％或至少80％。[55]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中共同施予之FVIII蛋白质之剂量不超过2500IUkg、较佳地不超过2000IUkg、不超过1500IUkg、不超过1000IUkg、不超过600IUkg、不超过500IUkg或不超过400IUkg。[56]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中在该重组多肽与FVIII共同施予之后，FVIII之最大浓度Cmax系10mIUmL、至少25mIUmL、至少50mIUmL、至少100mIUmL、至少200mIUmL、至少300mIUmL或至少400mIUmLFVIII活性、较佳地显色FVIII活性。[57]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中在共同施予该重组多肽与FVIII后，该重组多肽之最大浓度Cmax系至少20nmolkg、至少40nmolkg、至少60nmolkg、至少80nmolkg或至少160nmolkg。较佳地，在共同施予该重组多肽与FVIII后，该重组多肽之最大浓度Cmax系至少5μgHLEMmL、至少10μgHLEMmL、至少15μgHLEMmL、或至少20μgHLEMmL，其中该等值系基于HLEM之计算，较佳地，该等值系基于使用HLEM特定测定之定量诸如免疫测定法，较佳地人类白蛋白之特定测定。进一步的一较佳实施例关于如前述实施例中任一项供使用之重组多肽，其中在该重组多肽与FVIII共同施予之后，该重组多肽之最大浓度Cmax高于参考治疗至少3倍，其中该参考治疗与该治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比低于本发明之摩尔比。[58]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中在该重组多肽与FVIII共同施予之后，该共同施予FVIII之t＝0至t＝∞浓度对时间曲线下面积AUC0-inf系至少1,000mIU*hmL、至少2,000mIU*hmL、至少3,000mIU*hmL、至少5,000mIU*hmL、至少10,000mIU*hmL或至少20,000mIU*hmLFVIII活性、较佳地显色FVIII活性。[59]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中在共同施予该重组多肽与FVIII后，该共同施予重组多肽之t＝0至t＝∞浓度对时间曲线下面积AUC0-inf系至少2nmol*hmL、至少3nmol*hmL、至少4nmol*hmL、至少20nmol*hmL、至少40nmol*hmL或至少80nmol*hmL。较佳地，在共同施予该重组多肽与FVIII后，该共同施予重组多肽之t＝0至t＝∞浓度对时间曲线下面积AUC0-inf系至少500μgHLEM*hmL、至少750μgHLEM*hmL、至少1,000μgHLEM*hmL、至少5,000μgHLEM*hmL、或至少10,000μgHLEM*hmL，其中该等值系基于HLEM之计算，较佳地，该等值系基于使用HLEM特定测定之定量诸如免疫测定法，较佳地人类白蛋白之特定测定。进一步的一较佳实施方式关于如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中在该重组多肽与FVIII共同施予之后，该共同施予重组多肽之t＝0至t＝∞浓度对时间曲线下面积AUC0-inf高于参考治疗至少5倍、至少10倍、或至少15倍，其中该参考治疗与该治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比低于本发明之摩尔比。[60]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中在共同施予该重组多肽与FVIII后，该重组多肽之清除CL值系介于1.0至2.5mLkgh、或介于1.1至2.2mLkgh或介于1.2至2.1mLkgh之范围。[61]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中在该重组多肽与FVIII共同施予之后，该重组多肽的清除率CL相较于参考治疗减少至少2倍、至少5倍或至少10倍，其中该参考治疗与该治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比低于本发明之摩尔比。[62]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中在该重组多肽与FVIII共同施予之后，该施予之FVIII的清除率CL相较于参考治疗系减少较佳地至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少5倍、至少7.5倍或至少10倍，其中该参考治疗与该治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比低于本发明之摩尔比。[63]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中在共同施予该重组多肽与FVIII后，该施予FVIII之清除CL值系低于135mLkgh、低于80mLkgh、低于45mLkgh、低于40mLkgh、低于35mLkgh、低于30mLkgh或低于25mLkgh。该施予FVIII的清除CL值系较佳地低于参考治疗之该值，其中该参考治疗与该治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM、及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比低于根据本发明之摩尔比。[64]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中欲施予之该重组多肽对该FVIII之摩尔比系至少75、至少100、至少200、至少300、至少400、至少500或至少1000。[65]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该重组多肽系以至少0.01mgkg、至少0.1mgkg、至少0.2mgkg、至少0.5mgkg、至少1mgkg或至少3mgkg重组多肽之量施予。[66]如前述实施方式中任一项供使用之重组多肽，其中该重组多肽系以不超过20mgkg、不超过15mgkg、不超过10mgkg或不超过5mgkg重组多肽之量施予。[67]一种用于治疗或预防如实施方式[1]至[66]中任一项定义之凝血疾病之医药组成物，该组成物包含i重组多肽，其包含如实施方式[1]至[7]中任一项或实施方式[9]至[66]中任一项之截短型冯维勒布兰德因子VWF，惟该重组多肽与该FVIII欲经由相同施予途径施予，及ii第八凝血因子蛋白质FVIII，其中在该组成物中重组多肽对FVIII的摩尔比系高于50。[68]一种如实施方式[67]供使用之医药组成物，其中该治疗包含血管外施予该组成物至患有凝血疾病之个体，且该医药组成物系调制为适合用于血管外共同施予。较佳地，至少部分的该重组多肽系键合至FVIII。根据该医药组成物之进一步较佳实施方式，该重组多肽系非共价键合至FVIII。较佳地，该医药组成物包含高比例的该多肽之二聚体。进一步较佳的是，该医药组成物不包含多肽的单体及或多聚体形式或至少实质上不含多肽的单体及或多聚体形式。[69]一种医药套组，其包含i包含第八凝血因子蛋白质FVIII之第一组成物及ii包含重组多肽之第二组成物，该重组多肽包含如实施方式[1]至[66]中任一项所使用以用于治疗或预防凝血疾病之截短型冯维勒布兰德因子VWF，该治疗包含较佳地血管外施予该重组多肽及该FVIII蛋白质至患有凝血疾病之个体，其中该FVIII及该重组多肽系提供于该套组中。较佳地，该FVIII与该重组多肽系提供于该套组中，以允许在施予之前至少一部分的该重组多肽与该FVIII结合，且前提是欲施予之重组多肽对欲施予之FVIII的摩尔比系高于50。较佳地，该第二组成物包含高比例的该多肽之二聚体。进一步较佳的是，该第二组成物不包含多肽的单体及或多聚体形式或至少实质上不含多肽的单体及或多聚体形式。[70]一种治疗或预防凝血疾病之方法，该方法包含向患有凝血疾病之个体共同施予有效量的包含截短型冯维勒布兰德因子VWF之重组多肽与第八凝血因子蛋白质FVIII，其中该重组多肽能够与该FVIII结合，且其中欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比高于50。此方法中的重组多肽可较佳地如实施方式[1]至[66]中任一项所提供。该多肽可经皮下、皮内或肌肉内施予。该FVIII亦可经皮下、皮内或肌肉内施予。较佳地，FVIII与该多肽皆经皮下施予。根据该方法之另一变体，FVIII系经由与重组多肽不同的施予途径施予，较佳地FVIII则经静脉内施予，更具体地重组多肽系经皮下施予且FVIII系经静脉内施予。[71]一种治疗或预防凝血疾病之方法，该方法包含经由不同施予途径向患有凝血疾病之个体施予有效量的包含截短型冯维勒布兰德因子VWF之重组多肽及第八凝血因子蛋白质FVIII，其中该重组多肽能够与FVIII结合。此方法中的重组多肽可如实施方式[2]至[66]中任一项所提供。在此实施例中，重组多肽对FVIII之摩尔比不一定要在施予该重组多肽之前决定。较佳地，FVIII系经静脉内施予，更佳地重组多肽系经皮下施予且FVIII系经静脉内施予。[72]如实施方式[1]至[66]中任一项定义之重组多肽用于治疗或预防凝血疾病，该重组多肽包含截短型冯维勒布兰德因子VWF，该治疗或预防包含较佳地血管外施予该多肽及第八凝血因子FVIII蛋白质至个体，其中该重组多肽能够与该FVIII结合。欲施予之重组多肽对欲施予之FVIII的摩尔比较佳系高于50。[73]一种包含截短型冯维勒布兰德因子VWF之重组多肽用于制造用于治疗或预防凝血疾病之药物之用途，该治疗或预防包含向个体较佳地血管外施予该重组多肽及第八凝血因子FVIII蛋白质，其中该重组多肽能够与该FVIII结合，且其中欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比高于50，前提是该重组多肽系如实施方式[1]至[66]中任一项所定义。【图式简单说明】图1显示以皮下或静脉内施予rD’D3-FP或rD’D3-His伴随或不伴随重组FVIII至FVIIIko小鼠后，包含截短型冯维勒布兰德因子VWF之重组多肽以下亦称：重组多肽的水平。rD’D3-FP系经由其白蛋白组分定量，且rD’D3-His数据系计算为等莫耳浓度。资料系以平均值±SD表示，每个数据点的n＝1-4只小鼠。实线代表s.c.且虚线代表i.v.治疗。缩写：s.c.：皮下；i.v.：静脉内；图2显示以皮下施予rD’D3-FP或rD’D3-His伴随或不伴随重组FVIII至FVIIIko小鼠后，重组多肽血浆水平的最大浓度及AUC。rD’D3-FP系经由其白蛋白组分定量，且rD’D3-His数据系计算为等莫耳浓度。资料系以平均值±SD表示，每个数据点的n＝1-4只小鼠。Cmax及AUC0-inf的估计系藉由二室重吸收模型进行；图3显示以皮下施予rD’D3-FP或rD’D3-His伴随或不伴随重组FVIII至FVIIIko小鼠后，rD’D3-FP或rD’D3-His的生体可用率。rD’D3-FP系经由其白蛋白组分定量，且rD’D3-His数据系计算为等莫耳浓度。数据系自每个时间点n＝1-4只小鼠计算的平均AUC0-inf值计算。AUC0-inf的估计系藉由二室重吸收模型进行。生体可用率系计算为在s.c.施予后相较于i.v.施予后之AUC0-inf的百分比，假设rD’D3-FP用于三个不同i.v.组使用不同剂量的rD’D3-FP伴随或不伴随rFVIII；图4显示以皮下或静脉内施予rD’D3-FP或rD’D3-His伴随或不伴随重组FVIII至FVIIIko小鼠后的FVIII活性血浆水平。FVIII系定量为显色FVIII活性。资料系以平均值±SD表示，每个数据点的n＝2-3只小鼠。实线代表s.c.且虚线代表i.v.治疗；缩写：s.c.：皮下；i.v.：静脉内；图5显示在皮下施予rD’D3-FP或rD’D3-His伴随或不伴随重组FVIII至FVIIIko小鼠后的FVIII活性血浆水平最大浓度及AUC。FVIII系定量为显色FVIII活性。资料系以平均值±SD表示，每个数据点的n＝2-3只小鼠。Cmax及AUC0-inf的估计系藉由二室重吸收模型进行；图6显示在皮下施予rD’D3-FP或rD’D3-His伴随重组FVIII至FVIIIko小鼠后的显色FVIII活性之生体可用率。数据系自每个时间点n＝2-3只小鼠计算的平均AUC0-inf值计算。AUC0-inf的估计系藉由二室重吸收模型进行。生体可用率系计算为在s.c.施予后相较于i.v.施予后之AUC0-inf的百分比，假设rD’D3-FP用于二个不同i.v.组使用不同剂量的rD’D3-FP伴随或不伴随rFVIII。FVIII剂量及选定rD’D3-FP剂量系如图中数字给予；图7显示以皮下或静脉内施予rD’D3-FP伴随或不伴随重组FVIII至猪后的重组多肽血浆水平。rD’D3-FP系经由其白蛋白组分定量。资料系以平均值±SD表示，每个数据点的n＝1-3只猪。实线代表s.c.且虚线代表i.v.治疗。缩写：s.c.：皮下；i.v.：静脉内；图8显示以皮下或静脉内施予rD’D3-FP伴随或不伴随重组FVIII至猪后的FVIII活性血浆水平。FVIII系定量为显色FVIII活性。资料系以平均值±SD表示，每个数据点的n＝1-3只猪。实线代表s.c.且虚线代表i.v.治疗；缩写：s.c.：皮下；i.v.：静脉内；图9显示以皮下或静脉内施予rD’D3-FP伴随或不伴随不同重组FVIII或血浆衍生性FVIII至FVIIIko小鼠后的重组多肽血浆水平。rD’D3-FP系经由其白蛋白组分定量。资料系以平均值±SD表示，每个数据点的n＝2-3只小鼠。实线代表s.c.且虚线代表i.v.治疗。缩写：s.c.：皮下；i.v.：静脉内；图10显示以皮下或静脉内施予rD’D3-FP伴随或不伴随不同重组FVIII或血浆衍生性FVIII至FVIIIko小鼠后的FVIII活性血浆水平图8A图8B及图8CReFacto。FVIII系定量为显色FVIII活性。资料系以平均值±SD表示，每个数据点的n＝2-3只小鼠。实线代表s.c.且虚线代表i.v.治疗；缩写：s.c.：皮下；i.v.：静脉内；图11显示以皮下或静脉内施予rD’D3-FPEYA或rD’D3-CTP伴随重组FVIII至FVIIIko小鼠后的重组多肽血浆水平。rD’D3-FPEYA系经由其白蛋白组分定量，且rD’D3-CTP系经由其D’D3组分定量。资料系以平均值±SD表示，每个数据点的n＝3只小鼠。实线代表s.c.且虚线代表i.v.治疗。缩写：s.c.：皮下；i.v.：静脉内；及图12显示以皮下或静脉内施予rD’D3-FPEYA或rD’D3-CTP伴随重组FVIII至FVIIIko小鼠后的FVIII活性血浆水平。FVIII系定量为显色FVIII活性。资料系以平均值±SD表示，每个数据点的n＝3只小鼠。实线代表s.c.且虚线代表i.v.治疗；缩写：s.c.：皮下；i.v.：静脉内。【实施方式】发明详细说明在第一方面中，本发明关于一种用于治疗或预防凝血疾病之重组多肽，其包含截短型冯维勒布兰德因子VWF，该治疗包含向患有凝血疾病之个体施予该重组多肽且血管外施予第八凝血因子FVIII蛋白质，其中该重组多肽能够与该FVIII结合，且其中欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比高于50。在第二方面中，本发明关于一种用于治疗或预防凝血疾病之医药组成物，该组成物包含i本发明之包含截短型冯维勒布兰德因子VWF之重组多肽及ii第八凝血因子蛋白质FVIII，其中在医药组成物中重组多肽对FVIII蛋白质之摩尔比系大于50且其中该重组多肽能够与该FVIII结合，该治疗包含向患有凝血疾病之个体血管外施予医药组成物，且该医药组成物系经调制以用于血管外共同施予。在第三方面中，本发明关于一种医药套组，其包含i包含第八凝血因子FVIII蛋白质之第一组成物及ii包含本发明之重组多肽之第二组成物，本发明之重组多肽包含如本文所述之用于治疗或预防凝血疾病之截短型冯维勒布兰德因子VWF，该治疗包含向个体施予重组多肽且血管外施予FVIII蛋白质，其中该FVIII及该重组多肽系提供于套组中以允许在施予前至少一部分之该重组多肽与该FVIII结合，且前提是欲施予之重组多肽对欲施予之FVIII之摩尔比高于50。根据第四方面，本发明关于一种治疗或预防凝血疾病之方法，该方法包含向个体共同施予有效量的包含截短型冯维勒布兰德因子VWF之本发明之重组多肽且血管外施予第八凝血因子FVIII蛋白质，其中该重组多肽能够与该FVIII结合，且其中欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比高于50。在第五方面中，本发明关于本发明之重组多肽用于治疗或预防凝血疾病之用途，该重组多肽包含截短型冯维勒布兰德因子VWF，该治疗包含向个体施予该多肽且血管外施予第八凝血因子FVIII蛋白质，其中该重组多肽能够与该FVIII结合，且其中欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比高于50。根据进一步方面，本发明关于包含截短型冯维勒布兰德因子VWF之重组多肽用于制造用于治疗或预防凝血疾病之药物之用途，该治疗包含向个体施予该多肽且血管外施予第八凝血因子FVIII蛋白质，其中该重组多肽能够与该FVIII结合，且其中欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比高于50。包含截短型冯维勒布兰德因子VWF之多肽将在本文中称为「本发明之多肽」或「重组多肽」。本发明之多肽较佳地包含半衰期延长部分HELM。比例如以下详细说明，本发明之多肽可为单体、二聚体或其混合物。根据本发明的任何摩尔比系指本发明之多肽不论实际以单体或二聚体存在之单体次单元的莫耳浓度之比。比例系相对共同施予FVIII之莫耳浓度形成。在本申请案中，本发明之多肽相对FVIII的任何比系指欲施予之本发明之多肽其较佳地以二聚体存在中所包含之单体的量以莫耳计除以欲施予之FVIII的量以莫耳计，除非另有其他的指示。举非限制性实例来说，共同施予100μM之本发明之单体多肽与1μM之FVIII意指100的比例。如果50μM之本发明之二聚体多肽与1μM之FVIII共同施予，则可获得相同的100的比例。欲施予之本发明之多肽对欲施予之FVIII的摩尔比系超过50、更佳的是该比例大于60、或至少75、至少100、或大于100、或至少200、最佳的是至少300、或至少400、或至少500、或至少600、或至少700、或至少800、或至少900、或至少1,000、或至少1,100、或至少1,200、或至少1,300、或至少1,400、或至少1,500、或至少1,600、或至少1,700、或至少1,800、或至少1,900、或至少2,000、或至少2,500、或至少3,000或至少5,000、或至少8,000或最高10,000。欲施予之本发明之多肽对欲施予之FVIII的摩尔比根据某些实施例可能不超过10,000之比例、5,000之比例、2,500之比例或2,000之比例。欲施予之本发明多肽对欲施予之FVIII的摩尔比范围可自50以上至10,000、或自50以上至5,000、或自50以上至4,000、或自50以上至3,000、或自50以上至2,000、或自50以上至1,000。较佳地，欲施予之本发明多肽对欲施予之FVIII的摩尔比范围系自60至2,500、或自110至2,000、或自150至1,500、或自200至1,000。正常人类血浆NHP含有定义成1UmL或100％浓度之VWF。这对应于约10μgmL之蛋白质浓度HaberichterS.L.andMontgomeryR.R.,StructureandfunctionofvonWillebrandfactor；in:HemostasisandThrombosis,eds.Marder,Aird,Bennett,SchulmanandWhite,LippincottWilliams&Wilkins2013,pp197-207。基于此VWF在NHP中的浓度及成熟VWF单体包括18-19％糖化约267,500Da之分子量，可计算出NHP中VWF单体单元约37x10-9MolL之莫耳血浆浓度。内源性VWF在人类血浆中的半衰期系约16hLentingPJ,ChristopheOD,DenisCV.vonWillebrandfactorbiosynthesis,secretion,andclearance:connectingthefarends.Blood.2015.12513:2019-28。本发明之治疗的进一步细节系进一步描述于下。截短型VWF在本文中使用之用语「冯维勒布兰德因子vonWillebrandFactor」VWF包括天然发生天然之VWF，但是亦包括至少保留天然发生之VWF的FVIII结合活性的其变体，例如其中插入、删除或取代一或多个残基之序列变体。FVIII结合活性系以FVIII-VWF结合测定法判定，如实例2中所述。根据本发明的较佳VWF系由SEQIDNO：4所示之氨基酸序列代表的人类VWF。编码SEQIDNO：4之cDNA显示于SEQIDNO：3。编码人类天然VWF之基因系转录成9kbmRNA，其转译成具有310，000Da之预估分子量的2813个氨基酸之原前多肽。原前多肽含有N端22个氨基酸信号肽，随后为741个氨基酸前多肽SEQIDNO：4之氨基酸23-763及成熟次单位SEQIDNO：4之氨基酸764-2813。自N端裂解741个氨基酸前多肽产生由2050个氨基酸所组成之成熟VWF。人类天然VWF原前多肽之氨基酸序列显示于SEQIDNO：4。除非以其他方式指示，本申请案中VWF残基的氨基酸编号系指SEQIDNO：4，即使VWF分子特别是截短型VWF不包含SEQIDNO：4的所有残基。天然VWF之前多肽包含多个结构域。不同结构域的批注可在文献中找到见例如Zhouetal.2012Blood1202：449-458。下列VWF之天然原前多肽的结构域批注应用于本申请案中：D1-D2-D′-D3-A1-A2-A3-D4-C1-C2-C3-C4-C5-C6-CK参照SEQIDNO：4，D’结构域系由氨基酸764-865组成；且D3结构域系由氨基酸866-1242组成。本发明之「截短型」特征意指多肽不包含成熟VWF之完整氨基酸序列SEQIDNO：4之氨基酸764-2813。一般而言，截短型VWF不包含SEQIDNO：4之所有氨基酸764-2813，但仅包含其片段。截短型VWF亦可称为VWF片段或复数的VWF片段。一般而言，截短型VWF能够结合第八凝血因子。较佳地，截短型VWF能够结合成熟形式的人类天然第八凝血因子。在另一实施例中，截短型VWF能够结合重组FVIII，较佳地结合如本文中描述之FVIII，另外更佳地结合由氨基酸序列SEQIDNO：5所组成之单链第八凝血因子。截短型VWF与第八凝血因子之结合可由FVIII-VWF结合测定法判定，如实例2中所述。本发明之截短型VWF较佳地包含与SEQIDNO：4之氨基酸776至805具有至少90％序列同一性之氨基酸序列或由该氨基酸序列组成，且能够结合FVIII。在较佳实施例中，截短型VWF包含与SEQIDNO：4之氨基酸776至805具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性之氨基酸序列或由该氨基酸序列组成，且能够结合FVIII。最佳的是，截短型VWF包含SEQIDNO：4之氨基酸776至805或由SEQIDNO：4之氨基酸776至805组成。除非在本文中以其他方式指示，序列同一性系依照参考序列的完整长度判定例如SEQIDNO：4之氨基酸776至805。本发明之截短型VWF较佳地包含与SEQIDNO：4之氨基酸766至864具有至少90％序列同一性之氨基酸序列或由该氨基酸序列组成，且能够结合FVIII。在较佳实施例中，截短型VWF包含与SEQIDNO：4之氨基酸766至864具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性之氨基酸序列或由该氨基酸序列组成，且能够结合FVIII。最佳的是，截短型VWF包含SEQIDNO：4之氨基酸776至805或由SEQIDNO：4之氨基酸766至864组成。在另一较佳实施例中，截短型VWF系由a与SEQIDNO：4之氨基酸764至1242具有至少90％序列同一性之氨基酸序列或b其片段组成，惟该截短型VWF仍能够结合FVIII。更佳的是，截短型VWF系由a与SEQIDNO：4之氨基酸764至1242具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性之氨基酸序列或b其片段组成，惟该截短型VWF仍能够结合FVIII。最佳的是，截短型VWF系由aSEQIDNO：4之氨基酸764至1242或b其片段组成，惟该截短型VWF仍能够结合FVIII。如以下更详细描述的，本发明之多肽可藉由使用细胞之方法制备，该细胞包含编码包含截短型VWF之多肽的核酸。该核酸系藉由本身已知之技术导入至合适宿主细胞之中。在较佳实施例中，在宿主细胞中之核酸编码a与SEQIDNO：4之氨基酸1至1242具有至少90％序列同一性之氨基酸序列或b其片段，惟该截短型成熟VWF仍能够结合FVIII。更佳的是，该核酸编码a与SEQIDNO：4之氨基酸1至1242具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性之氨基酸序列或b其片段，惟该截短型VWF仍能够结合FVIII。最佳的是，该核酸编码aSEQIDNO：4之氨基酸1至1242或b其片段，惟该截短型VWF仍能够结合FVIII。特别是如果根据本发明之多肽系二聚体，则该核酸将包含编码VWF之氨基酸1至763的序列例如SEQIDNO：4，即使在该多肽中截短型VWF不包含VWF的氨基酸1至763例如SEQIDNO：4。根据较佳实施例，本发明之重组多肽之截短型VWF可不包含SEQIDNO：4之VWF的氨基酸序列1至763。根据进一步较佳实施例，截短型VWF包含下列氨基酸序列中之一者或由下列氨基酸序列中之一者组成，各者指的是SEQIDNO：4：776-805；766-805；764-805；776-810；766-810；764-810；776-815；766-815；764-815；776-820；766-820；764-820；776-825；766-825；764-825；776-830；766-830；764-830；776-835；766-835；764-835；776-840；766-840；764-840；776-845；766-845；764-845；776-850；766-850；764-850；776-855；766-855；764-855；776-860；766-860；764-860；776-864；766-864；764-864；776-865；766-865；764-865；776-870；766-870；764-870；776-875；766-875；764-875；776-880；766-880；764-880；776-885；766-885；764-885；776-890；766-890；764-890；776-895；766-895；764-895；776-900；766-900；764-900；776-905；766-905；764-905；776-910；766-910；764-910；776-915；766-915；764-915；776-920；766-920；764-920；776-925；766-925；764-925；776-930；766-930；764-930；776-935；766-935；764-935；776-940；766-940；764-940；776-945；766-945；764-945；776-950；766-950；764-950；776-955；766-955；764-955；776-960；766-960；764-960；776-965；766-965；764-965；776-970；766-970；764-970；776-975；766-975；764-975；776-980；766-980；764-980；776-985；766-985；764-985；776-990；766-990；764-990；776-995；766-995；764-995；776-1000；766-1000；764-1000；776-1005；766-1005；764-1005；776-1010；766-1010；764-1010；776-1015；766-1015；764-1015；776-1020；766-1020；764-1020；776-1025；766-1025；764-1025；776-1030；766-1030；764-1030；776-1035；766-1035；764-1035；776-1040；766-1040；764-1040；776-1045；766-1045；764-1045；776-1050；766-1050；764-1050；776-1055；766-1055；764-1055；776-1060；766-1060；764-1060；776-1065；766-1065；764-1065；776-1070；766-1070；764-1070；776-1075；766-1075；764-1075；776-1080；766-1080；764-1080；776-1085；766-1085；764-1085；776-1090；766-1090；764-1090；776-1095；766-1095；764-1095；776-1100；766-1100；764-1100；776-1105；766-1105；764-1105；776-1110；766-1110；764-1110；776-1115；766-1115；764-1115；776-1120；766-1120；764-1120；776-1125；766-1125；764-1125；776-1130；766-1130；764-1130；776-1135；766-1135；764-1135；776-1140；766-1140；764-1140；776-1145；766-1145；764-1145；776-1150；766-1150；764-1150；776-1155；766-1155；764-1155；776-1160；766-1160；764-1160；776-1165；766-1165；764-1165；776-1170；766-1170；764-1170；776-1175；766-1175；764-1175；776-1180；766-1180；764-1180；776-1185；766-1185；764-1185；776-1190；766-1190；764-1190；776-1195；766-1195；764-1195；776-1200；766-1200；764-1200；776-1205；766-1205；764-1205；776-1210；766-1210；764-1210；776-1215；766-1215；764-1215；776-1220；766-1220；764-1220；776-1225；766-1225；764-1225；776-1230；766-1230；764-1230；776-1235；766-1235；764-1235；776-1240；766-1240；764-1240；776-1242；766-1242；764-1242；764-1464；764-1250；764-1041；764-828；764-865；764-1045；764-1035；764-1128；764-1198；764-1268；764-1261；764-1264；764-1459；764-1463；764-1464；764-1683；764-1873；764-1482；764-1479；764-1672；及764-1874。在某些实施例中，截短型VWF相对于成熟野生型VWF具有内部删除。例如，A1、A2、A3、D4、C1、C2、C3、C4、C5、C6、CK结构域或彼等之组合可被删除，且D’结构域及或D3结构域保留。根据进一步实施例，截短型VWF缺乏结构域A1、A2、A3、D4、C1、C2、C3、C4、C5、C6或CK中之一或多者。根据进一步实施例，截短型VWF缺乏SEQIDNO：4之氨基酸1243至2813，即结构域A1-A2-A3-D4-C1-C2-C3-C4-C5-C6-CK。在进一步实施例中，截短型VWF不包含血小板糖蛋白IbαGPIbα、胶原蛋白及或整合素αIIbβIIIC1结构域中之RGDS序列结合位点。在其他实施例中，截短型VWF不包含ADAMTS13切割位点Tyr1605-Met1606，其系位于VWF的中央A2结构域。在又一实施例中，截短型VWF不包含GPIbα结合位点及或不包含胶原蛋白结合位点及或不包含整合素αIIbβIII结合位点及或其不包含ADAMTS13切割位点Tyr1605-Met1606，其系位于VWF的中央A2结构域。在其他实施例中，截短型VWF包含与前段列举之氨基酸序列中之一者具有至少90％、或至少91％、或至少92％、或至少93％、或至少94％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％序列同一性的氨基酸序列或由该氨基酸序列组成，惟该截短型VWF能够结合FVIII。若本发明之多肽的二个单体系共价连接，则本发明之多肽在本发明中被称为「二聚体」。较佳地，共价键系位于本发明之多肽的截短型VWF部分之中。较佳地，二个单体次单位系经由至少一个双硫键例如一、二、三或四个双硫键共价连接。形成至少一个双硫键的半胱胺酸残基较佳地位于本发明之多肽的截短型VWF部分之中。在一实施例中，这些半胱胺酸残基系Cys-1099、Cys-1142、Cys-1222、Cys-1225或Cys-1227或彼等之组合。较佳地，本发明之二聚体多肽除了位于多肽的截短型VWF部分之中的该共价键之外，不包含任何连接单体的进一步共价键，特别是不包含位于多肽之HLEM或HLEP部分之中的任何进一步共价键。然而根据替代实施例，本发明之二聚体多肽可包含位于多肽之HLEM或HLEP部分之中的连结单体的共价键。二聚体较佳地系同型二聚体，藉此各单体较佳地包含在本文中揭示之HLEM。如果本发明之多肽系二聚体，则截短型VWF较佳地包含二个多肽或由二个多肽组成，该二个多肽之各者的氨基酸序列与SEQIDNO：4的氨基酸764至1099、氨基酸764至1142、氨基酸764至1222、氨基酸764至1225或氨基酸764至1227具有至少90％序列同一性，且能够结合FVIII。在较佳实施例中，截短型VWF包含与SEQIDNO：4之氨基酸764至1099、氨基酸764至1142、氨基酸764至1222、氨基酸764至1225或氨基酸764至1227具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性之氨基酸序列或由该氨基酸序列组成，且能够结合FVIII。最佳的是，截短型VWF包含下列或由下列组成：SEQIDNO：4之氨基酸764至1099、氨基酸764至1142、氨基酸764至1222、氨基酸764至1225、氨基酸764至1227或氨基酸764至1242。截短型VWF可为WO2013106787A1、WO2014198699A2、WO2011060242A2或WO2013093760A2中揭示之VWF片段之任一者，彼等之揭露以引用方式并入本文中。根据进一步较佳实施例，如上揭示之截短型VWF可包含在WO2016000039A1中揭示之氨基酸取代的至少一者。该些经修饰版本的截短型VWF相较于根据SEQIDNO：4之野生型VWF的D’结构域之氨基酸序列，包含至少一个在其D’结构域中之氨基酸取代。经修饰版本的截短型VWF之氨基酸序列相对于各别野生型序列可具有一或多个氨基酸取代。经修饰的截短型VWF之D’结构域的氨基酸序列相对于SEQIDNO：4之D’结构域较佳地具有一或2个氨基酸取代。较佳的是，在SEQIDNO：4之位置764对应SEQIDNO：2之位置1的S系经选自由G、P、V、E、Y、A及L所组成之群组的氨基酸取代。也较佳的是，在SEQIDNO：4之位置766对应SEQIDNO：2之位置3的S系经选自由Y、I、M、V、F、H、R及W所组成之群组的氨基酸取代。较佳的取代组合包括S764GS766Y、S764PS766I、S764PS766M、S764VS766Y、S764ES766Y、S764YS766Y、S764LS766Y、S764PS766W、S766WS806A、S766YP769K、S766YP769N、S766YP769R及S764PS766L所指的是SEQIDNO：4之序列。本发明之多肽对FVIII之结合亲和性可进一步藉由导入该等取代而相较于除了该等修饰之外具有相同氨基酸序列的参考多肽之结合亲和性增加。该等在截短型VWF中之取代可使共同施予之FVIII的半衰期增加。在本文中使用之用语「内源性VWF」系指VWF之单体次单位，与其多聚化程度无关。半衰期延长部分HLEM除了截短型VWF之外，本发明之多肽在某些较佳实施例中可能进一步包含半衰期延长部分。半衰期延长部分可为融合至截短型VWF之异源性氨基酸序列。替代地，半衰期延长部分可藉由与肽键不同之共价键化学接合至包含截短型VWF之多肽。在本发明之某些实施例中，本发明之多肽的半衰期藉由化学修饰延长，例如连接半衰期延长部分诸如聚乙二醇聚乙二醇化、醣化PEG、羟乙基淀粉羟乙基淀粉化HESylation、聚唾液酸、类弹性蛋白多肽、肝素前体heparosan聚合物或玻尿酸。在另一实施例中，本发明之多肽经由化学连接符诸如白蛋白与HLEM接合。此接合技术的原理已由ConjuchemLLC以例示性方式描述见例如美国专利第7,256,253号。在其他实施例中，半衰期延长部分系半衰期增长蛋白质HLEP。较佳地，HLEP系白蛋白或其片段。白蛋白的N端可与截短型VWF的C端融合。可替代地，白蛋白的C端可与截短型VWF的N端融合。一或多个HLEP可与VWF的N端或C端部分融合，惟彼等不干扰或阻碍截短型VWF结合FVIII的能力。重组多肽进一步较佳地包含位于截短型VWF与HLEM之间的化学键或连接符序列。该连接符序列可为由一或多个氨基酸所组成之肽连接符，特别是1至50、1至30、1至20、1至15、1至10、1至5或1至3个例如1、2或3个氨基酸，且可彼此相同或不同。较佳地，连接符序列不存在于野生型VWF的对应位置上。存在于该连接符序列上的较佳氨基酸包括Gly及Ser。连接符序列应不具免疫原性。较佳连接符可包含交替的甘胺酸及丝胺酸残基。合适连接符系描述于例如WO2007090584。在本发明的另一实施例中，在截短型VWF部分与HLEM之间的肽连接符系由作为人类蛋白质中的天然结构域间连接符的肽序列所组成。较佳地，该等肽序列在其天然环境中系位于靠近蛋白质表面且可让免疫系统接近，所以可假设对抗此序列的天然耐受性。实例系于WO2007090584中给出。可裂解的连接符序列描述于例如WO2013120939A1中。在重组多肽的较佳实施例中，介于截短型VWF与HLEM之间的连接符系甘胺酸丝胺酸肽连接符，其具有SEQIDNO：2之氨基酸序列480-510或由SEQIDNO：2之氨基酸序列480-510所组成。在一实施例中，多肽具有下列结构：tVWF-L1-H，[式1]其中tVWF系截短型VWF，L1系化学键或连接符序列且H系HLEM，特别是HLEP。L1可为化学键或由一或多个氨基酸所组成之连接符序列，例如1至50、1至30、1至20、1至15、1至10、1至5或1至3个例如1、2或3个氨基酸，且可彼此相同或不同。通常，连接符序列不存在于野生型VWF的对应位置上。存在于L1上的合适氨基酸之实例包括Gly及Ser。连接符应不具免疫原性且可为不可裂解或可裂解连接符。不可裂解连接符可包含如WO2007090584A1所例示之交替的甘胺酸及丝胺酸残基。在本发明的另一实施例中，在截短型VWF部分与白蛋白部分之间的肽连接符系由作为人类蛋白质中的天然结构域间连接符的肽序列所组成。较佳地，该等肽序列在其天然环境中系位于靠近蛋白质表面且可让免疫系统接近，所以可假设对抗此序列的天然耐受性。实例系于WO2007090584中给出。可裂解的连接符序列描述于例如WO2013120939A1中。较佳的HLEP序列于下文说明。本发明同样地涵盖与各别HLEP之确切「N端氨基酸」或确切「C端氨基酸」的融合，或与各别HLEP之「N端部分」或「C端部分」的融合，其包括HLEP的一或多个氨基酸之N端删除。多肽可包含超过一个HLEP序列，例如二或三个HLEP序列。这些多个HLEP序列可与VWF的C端部分串联融合，例如成为连续性重复。半衰期增长多肽HLEP较佳地，半衰期延长部分系半衰期延长多肽HLEP。更佳的是，HLEP系选自由下列所组成之群组：白蛋白、白蛋白家族成员或其片段、具有大流体动力学体积之溶剂合物无规链例如XTENSchellenbergeretal.2009；NatureBiotechnol.27:1186-1190、同源氨基酸重复HAP或脯胺酸-丙胺酸-丝胺酸重复PAS、艾芙米afamin、α-胎蛋白、维生素D结合蛋白质、转铁蛋白或其变体或片段、人绒毛膜促性腺激素-β次单位之羧基端肽CTP、能够与新生儿Fc受体FcRn结合之多肽、特别是免疫球蛋白恒定区及其部分例如Fc片段、在生理条件下能够与白蛋白、白蛋白家族成员或其片段或免疫球蛋白恒定区或其部分结合之多肽或脂质。免疫球蛋白恒定区或其部分较佳地系免疫球蛋白G1之Fc片段、免疫球蛋白G2之Fc片段或免疫球蛋白A之Fc片段。在本文中使用之半衰期增长多肽可为在本文中描述之全长半衰期增长蛋白质或其能够稳定或延长凝血因子之治疗活性或生物活性特别是增加本发明之多肽体内半衰期之一或多个片段。该等片段可具有10或更多个氨基酸长度或可包括至少约15、至少约20、至少约25、至少约30、至少约50、至少约100或更多个来自HLEP序列之连续氨基酸或可包括各别HLEP之部分或全部的特定结构域，只要这些HLEP片段相较于无HLEP的各别多肽提供功能性半衰期延长至少25％。本发明之多肽的HLEP部分可为野生型HLEP之变体。用语「变体」包括保守性或非保守性的插入、删除及取代，其中该等变化实质上不改变截短型VWF的FVIII结合活性。特别是，本发明所提出的截短型VWFHLEP融合建构体可包括HLEP天然发生的多形性变体及HLEP之片段。HLEP可衍生自任何脊椎动物，特别是任何哺乳动物，例如人类、猴、牛、绵羊或猪。非哺乳动物HLEP包括但不限于母鸡及鲑鱼。根据本揭露之特定实施例，本发明之重组多肽的HLEM特别是HLEP部分可用替代用语「FP」表示。较佳地，用语「FP」代表人类白蛋白。根据特定较佳实施例，重组多肽系融合蛋白质。本发明中的融合蛋白质系由符合读框地联结至少二个编码截短型VWF以及HLEP之DNA序列所产生的蛋白质。技艺人士了解融合蛋白质DNA序列之转译将导致单一蛋白质序列。根据进一步较佳的实施例符合读框地插入编码肽连接符之DNA序列，可获得包含截短型VWF、合适连接符及HELP之融合蛋白质。根据一些实施例，共同施予之FVIII不包含任何在本文中描述之HLEM或HLEP结构。根据某些其他实施例，共同施予之FVIII可包含在本文中描述之HLEM或HLEP结构中之至少一者。作为HLEP之白蛋白用语「人类血清白蛋白」HSA及「人类白蛋白」HA及「白蛋白」ALB在本申请案中可交换使用。用语「白蛋白」及「血清白蛋白」更为广泛，涵盖人类血清白蛋白及其片段及变体以及来自其他物种之白蛋白及其片段及变体。如本文中所使用，「白蛋白」统称具有白蛋白之一或多个功能活性例如生物活性的白蛋白多肽或氨基酸序列或白蛋白片段或变体。具体而言，「白蛋白」系指人类白蛋白或其片段，特别是如在本文中SEQIDNo：6所示之成熟形式的人类白蛋白、或来自其他脊椎动物的白蛋白或其片段、或这些分子或其片段的类似物或变体。根据本揭露之特定实施例，替代用语「FP」系用来表示HLEP，特别是将白蛋白定义为HLEP。特别是，本发明所提出的多肽可包括人类白蛋白之天然发生的多形性变体及人类白蛋白之片段。通常来说，白蛋白片段或变体的长度将为至少10、较佳地至少40、最佳地超过70个氨基酸。本发明之较佳实施例包括作为本发明之多肽的HLEP之白蛋白变体，其对于FcRn受体的结合提高。与野生型白蛋白之截短型VWF融合相比，该等白蛋白变体可导致截短型VWF白蛋白变体融合蛋白更长的血浆半衰期。本发明之多肽的白蛋白部分可包含HA的至少一个子结构域或结构域或其保守性修饰。作为HLEP之免疫球蛋白所属技术领域中已知免疫球蛋白GIgG恒定区Fc增加治疗性蛋白质的半衰期DumontJAetal.2006.BioDrugs20:151-160。IgG重链恒定区系由3个结构域CH1-CH3及绞链区所组成。免疫球蛋白序列可分别源自任何哺乳动物或源自子类别IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。没有抗原结合结构域之IgG和IgG片段亦可用作为HLEP。治疗性多肽部分较佳地经由抗体绞链区或甚至可裂解的肽连接符连接至IgG或IgG片段。许多专利及专利申请案说明治疗性蛋白质与免疫球蛋白恒定区融合以提高治疗性蛋白质的活体内半衰期。US20040087778及WO2005001025说明增加肽的半衰期之Fc结构域或至少部分之免疫球蛋白恒定区与具有生物活性肽的融合蛋白，否则肽会于活体内迅速消除。说明达成提高之生物活性、延长之循环半衰期及更大溶解度的Fc-IFN-β融合蛋白WO2006000448A2。揭示具有延长之血清半衰期及增加之活体内效力的Fc-EPO蛋白WO2005063808A1，以及揭示与G-CSF之Fc融合WO2003076567A2、类升糖素肽-1WO2005000892A2、凝血因子WO2004101740A2及介白素-10美国专利第6,403,077号，全部皆具有半衰期增长性质。可依照本发明使用的各种HLEP详细说明于WO2013120939A1中。本发明之多肽之N-聚醣及唾液酸化本发明之多肽较佳地包含N-聚醣，且至少75％，较佳为至少85％，更佳为至少90％之该N-聚醣包含平均至少一个唾液酸部分。在较佳的实施例中，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％之N-聚醣包含平均至少一个唾液酸部分。发明人发现包含高唾液酸化之VWF片段的多肽不仅本身可具有进一步延长之半衰期，且亦可能能够进一步延长共同施予之FVIII的半衰期。换言之，本发明多肽的施予导致造成共同施予之FVIII的半衰期延长及或清除率降低。本发明之多肽较佳地包含N-聚醣，且糖蛋白之N-聚醣的至少50％之唾液基sialyl为经α-2,6-连结之唾液基。末端唾液基通常可经由α-2,3-或经由α-2,6-键联连接至半乳糖基团。本发明之多肽的N-聚醣通常包含比经α-2,3-连结之唾液基更多的经α-2,6-连结之唾液基。较佳地，至少60％、或至少70％、或至少80％或至少90％之N-聚醣的唾液基为经α-2,6-连结之唾液基。该等实施例可藉由例如在哺乳动物细胞中共同表现人类α-2,6-唾液酸转移酶而获得。产生该等糖蛋白之合适方法描述于待审PCTEP2016061440。因此，在本文中描述一种产生包含唾液酸化增加之N-聚醣的糖蛋白之方法，该方法包含i提供包含编码包含截短型冯维勒布兰德因子VWF之多肽的核酸之细胞及ii在小于36.0℃之温度下培养该细胞。此外，描述一种产生包含截短型冯维勒布兰德因子VWF之糖蛋白的二聚体之方法，或用于增加该糖蛋白之二聚化的方法，该方法包含i提供包含编码糖蛋白之氨基酸序列的核酸之细胞及ii在小于36.0℃之温度下培养该等细胞。进一步地，在本文中描述一种产生包含唾液酸化增加之N-聚醣的糖蛋白之方法，该方法包含i提供细胞，该等细胞包含编码包含截短型冯维勒布兰德因子VWF之多肽的核酸及编码α-2,6-唾液酸转移酶之重组核酸及ii在允许糖蛋白及α-2,6-唾液酸转移酶表现之条件下培养该等细胞。在一实施例中，至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％之本发明之多肽的N-聚醣包含至少一个唾液酸基团。在另一实施例中，至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％之本发明之多肽的N-聚醣包含至少一个唾液酸基团。在另一实施例中，少于15％、少于12％、少于10％、或少于8％、或少于6％、或少于5％、或少于4％、或少于3％、或少于2％或甚至少于1％之本发明之多肽的N-聚醣为无唾液酸asialo-N-聚醣，亦即彼等为缺乏唾液酸基团之N-聚醣。在另一实施例中，少于15％、少于12％、少于10％、或少于8％、或少于6％、或少于5％、或少于4％、或少于3％、或少于2％或甚至少于1％之本发明之多肽的N-聚醣为无唾液酸asialo-N-聚醣，亦即彼等不具有唾液酸基团。本发明之其他实施例包含截短型冯维勒布兰德因子VWF，其中该截短型VWF能够与第八凝血因子FVIII结合，且其中该糖蛋白包含N-聚醣，其中小于35％、较佳地小于34％、较佳地小于33％、较佳地小于32％、较佳地小于31％、较佳地小于30％、较佳地小于29％、较佳地小于28％、较佳地小于27％、较佳地小于26％、较佳地小于25％、较佳地小于24％、较佳地小于23％、较佳地小于22％、较佳地小于21％、较佳地小于20％、较佳地小于19％、较佳地小于18％、较佳地小于17％、较佳地小于16％、较佳地小于15％、较佳地小于14％、较佳地小于13％、较佳地小于12％、较佳地小于11％、较佳地小于10％、较佳地小于9％、较佳地小于8％、较佳地小于7％、较佳地小于6％及较佳地小于5％的该N-聚醣包含平均二或更多个末端及非唾液酸化半乳糖残基。本发明之仍其他实施例包含截短型冯维勒布兰德因子VWF，其中该截短型VWF能够与第八凝血因子FVIII结合，且其中该截短型VWF包含N-聚醣，其中小于6％、较佳地小于5％、较佳地小于4％、较佳地小于3％、较佳地小于2％及较佳地小于1％的该N-聚醣包含平均三或更多个末端及非唾液酸化半乳糖残基。上述实施例可彼此组合。应了解上述N-聚醣之任何百分比或唾液酸化程度的任何指示为平均百分比或程度，亦即彼等系指分子群，不是单一分子。无疑的是糖蛋白群内的个别糖蛋白分子之糖化或唾液酸化将显示一些异质性。二聚体本发明之多肽具有高比例的二聚体。本发明之多肽因此较佳地以二聚体存在。在一实施例中，至少50％、或至少60％、或至少70％、或至少80％、或至少90％、或至少95％或约100％之多肽系以二聚体存在。在另一实施例中，本发明之多肽的二聚体：单体比系至少1.5、较佳地至少2、更佳的是至少2.5或至少3。最佳的是本发明之所有多肽皆以二聚体存在。进一步较佳的是本发明之多肽不包含多聚体形式。使用二聚体是有利的，因为与单体相比，二聚体对第八凝血因子具有改良的亲和性。本发明之多肽的二聚体含量及二聚体对单体之比可如实例2中所述方式判定。在一实施例中，本发明之多肽对第八凝血因子之亲和性大于人类天然VWF对相同的第八凝血因子分子之亲和性。多肽对第八凝血因子之亲和性可指人类天然不论是血浆衍生或重组第八凝血因子，特别是具有截短型或删除B结构域之重组第八凝血因子分子，较佳地第八凝血因子分子可由SEQIDNO：5表征。已发现具有高比例二聚体之本发明多肽的制剂对第八凝血因子确实具有增加之亲和性。此增加之对第八凝血因子的亲和性确实导致本发明之多肽稳定第八凝血因子之作用提高。作为二聚体比例增加之替代方案或与增加之二聚体比例组合之下，本发明之多肽在第八凝血因子结合结构域内具有突变其确实增加对第八凝血因子之亲和性为本发明较佳的实施例。适合的突变揭示于例如WO2013120939A1中。多肽之制备编码本发明之多肽之核酸可根据该领域已知之方法制备。基于人类天然VWF原前形式之cDNA序列SEQIDNO：3，可设计及产生编码上述截短型VWF建构体或本发明之多肽的重组DNA。即使由宿主细胞分泌之多肽不包含人类天然VWF原前形式之氨基酸1至763，但较佳的是编码多肽之细胞内前驱体的核酸例如DNA包含编码与SEQIDNO：4之氨基酸23至763或较佳地氨基酸1至763具有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的氨基酸序列之核苷酸序列。最佳的是，编码多肽之细胞内前驱体的核酸例如DNA包含编码SEQIDNO：4之氨基酸23至763或SEQIDNO：4之氨基酸1至763的核苷酸序列。建构体中的DNA若含有以正确方向插入表现质体中的完整开放阅读框，则可用于蛋白质表现。典型表现载体含有引导大量对应质体携带细胞中所插入之核酸的mRNA合成之启动子。彼等亦可包括容许彼等在宿主生物体内自主复制的复制起点序列及增加合成之mRNA转译的效率之序列。稳定的长期载体可藉由使用例如病毒的调节组件例如来自EB病毒基因组之OriP序列而维持成自由复制的实体。亦可产生整合载体至基因组DNA中的细胞系，且以此方式连续地产生基因产品。欲提供之细胞通常系藉由引入编码本发明多肽之核酸至哺乳动物宿主细胞中而获得。任何易于细胞培养及表现糖蛋白之宿主细胞可依照本发明加以利用。在某些实施方式中，宿主细胞系哺乳动物细胞。可根据本发明使用的哺乳动物细胞之非限制性实例包括BALBc小鼠骨髓瘤细胞系NSO1，ECACCNo：85110503；人类视网膜胚细胞PER.C6CruCell,Leiden,TheNetherlands；经SV40转形之猴肾CV1细胞系COS-7,ATCCCRL1651；人胚胎肾细胞系293细胞或经次选殖以于悬浮培养中生长之293细胞，Grahametal.,J.GenVirol.,36:59,1977；幼仓鼠肾细胞BHK,ATCCCCL10；中国仓鼠卵巢细胞+-DHFRCHO,UrlaubandChasin,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4216,1980；鼠赛托利sertoli细胞TM4,Mather,Biol.Reprod.,23:243251,1980；猴肾细胞CV1ATCCCCL70；非洲绿猴肾细胞VERO-76,ATCCCRL-1587；人子宫颈癌细胞HeLa,ATCCCCL2；犬肾细胞MDCK,ATCCCCL34；水牛鼠肝细胞BRL3A,ATCCCRL1442；人肺细胞W138,ATCCCCL75；人肝细胞HepG2,HB8065；鼠乳房肿瘤MMT060562,ATCCCCL51；TRI细胞Matheretal.,AnnalsNY.Acad.Sci.,383:44-68,1982；MRC5细胞；PS4细胞；人类羊水细胞CAP；及人肝肿瘤细胞系HepG2。较佳地，细胞系为囓齿类细胞系，尤其为仓鼠细胞系，诸如CHO或BHK。适合引入足以达成关注之糖蛋白表现之核酸至哺乳动物宿主细胞之方法为本技术中已知。见例如Gethingetal.,Nature,293:620-625,1981；Manteietal.,Nature,281:40-46,1979；Levinsonetal.EP117,060；及EP117,058。用于哺乳动物细胞之引入基因物质至哺乳动物细胞之常见方法包括Graham和vanderErb之磷酸钙沉淀方法Virology,52:456-457,1978或Hawley-Nelson之lipofectamineTMGibcoBRL方法Focus15:73,1993。哺乳动物细胞宿主系统转形的通用方面已由Axel于美国专利第4,399,216号中说明。关于引入基因物质至哺乳动物细胞的各种技术，见Keownetal.,MethodsinEnzymology,185:527-537,1990、及Mansouretal.,Nature,336:348-352,1988。细胞系在允许多肽表现的条件下培养。多肽可使用熟习本技术领域者已知的方法回收及纯化。最大浓度、时间-浓度曲线下面积、终末半衰期、MRT、清除率及生体可用率本发明之另一方面系包含本文上述定义之截短型VWF之多肽血管外施予后提供或增加FVIII之生体可用率之用途。此外，本发明之方面系其相较于与该治疗完全相同之参考治疗用于增加第八凝血因子之Cmax、AUC、终末半衰期及或平均滞留时间MRT及或减少清除率之用途，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM、及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比低于根据本发明之摩尔比，特别是低于50、低于60、低于75、低于100、低于200、低于300、低于400或低于1000之摩尔比。为了评药物动力学数据，采用二室模型双相药物动力学特性。最大浓度Cmax系该模型给出之最高血浆浓度值。在共同施予该重组多肽与FVIII之后，FVIII之最大浓度Cmax可为至少10mIUmL、至少25mIUmL、至少50mIUmL、至少100mIUmL、至少200mIUmL、至少300mIUmL或至少400mIUmLFVIII活性，较佳为显色FVIII活性。在共同施予重组多肽与FVIII后，该重组多肽之最大浓度Cmax根据某些实施例系至少20nmolkg、至少40nmolkg、至少60nmolkg、至少80nmolkg或至少160nmolkg。较佳地，在共同施予该重组多肽与FVIII后，该重组多肽之最大浓度Cmax系至少5μgHLEMmL、10μgHLEMmL、至少15μgHLEMmL、或至少20μgHLEMmL，其中该等值系基于HLEM之计算，较佳地，该等值系基于使用HLEM特定测定之定量诸如免疫测定法，较佳地人类白蛋白之特定测定。重组多肽的最大浓度Cmax相较于参考治疗可高出至少3倍，其中该参考治疗与本发明之治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM、及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的比低于根据本发明之摩尔比。AUC0-inf系自零至无限血浆浓度-时间曲线下面积。在重组多肽与FVIII共同施予之后，该共同施予FVIII之t＝0至t＝∞浓度对时间曲线下面积AUC0-inf可为至少1000mIU*hmL、至少2000mIU*hmL、至少3000mIU*hmL、至少5000mIU*hmL、至少10000mIU*hmL或至少20000mIU*hmLFVIII活性、较佳地显色FVIII活性。在共同施予重组多肽与FVIII后，该共同施予重组多肽之t＝0至t＝∞浓度对时间曲线下面积AUC0-inf系至少2nmol*hmL、至少3nmol*hmL、至少4nmol*hmL、至少20nmol*hmL、至少40nmol*hmL或至少80nmol*hmL。较佳地，在共同施予重组多肽与FVIII后，该共同施予重组多肽之t＝0至t＝∞浓度对时间曲线下面积AUC0-inf可为至少500μgHLEM*hmL、至少750μgHLEM*hmL、至少1000μgHLEM*hmL、至少5000μgHLEM*hmL、或至少10000μgHLEM*hmL，其中该等值系基于HLEM之计算，较佳地，该等值系基于使用HLEM特定测定之定量诸如免疫测定法，较佳地人类白蛋白之特定测定。在重组多肽与FVIII共同施予之后，该共同施予重组多肽之t＝0至t＝∞浓度对时间曲线下面积AUC0-inf可高于参考治疗至少5倍、至少10倍、或至少15倍，其中该参考治疗与本发明之治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的比低于本发明之摩尔比。在特定时间t的「半衰期」T12t为使在时间t呈现的血浆浓度Ct变一半所需的时间。「终末半衰期」之后简写为t12系当t趋向无限时，T12t的极限。计算方式为将2的天然对数除以终末消除常数。施予之FVIII的终末半衰期可藉由共同施予该重组多肽而增加，较佳地相较于参考治疗增加至少1.2倍、至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍或至少3倍，其中该参考治疗与本发明之治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM、及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的比低于根据本发明之摩尔比。较佳地，共同施予之FVIII的终末半衰期相较于参考治疗增加，其中该参考治疗与本发明之治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM、及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的比低于根据本发明之摩尔比。在共同施予重组多肽后，该施予之FVIII的终末半衰期可为至少5h、至少6h、至少7h、至少9h、至少10h或至少15h。本发明之多肽的血浆半衰期相较于内源性VWF可增加，其中多肽之血浆半衰期较佳地高出内源性VWF至少100％、至少200％或较佳至少400％。在与FVIII共同施予后重组多肽的终末半衰期可为至少10h、至少15h、至少20h、至少25h、至少30h或至少35h。重组多肽之终末半衰期相较于参考治疗可增加，其中该参考治疗与本发明之治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM、及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的比低于根据本发明之摩尔比。如本文中所使用之用语「MRT」意指药物分子例如本发明之多肽或FVIII滞留于体内的平均时间。在具有固定清除率之药物动力学系统中，MRT可以第一时刻曲线下的面积AUMC0-inf除以AUC0-inf来计算。第一时刻曲线系时间乘以该时间的血浆浓度。AUMC0-inf的计算类似AUC0-inf。施予之FVIII的平均滞留时间MRT藉由共同施予该重组多肽而增加，较佳地相较于参考治疗增加至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或至少5倍，其中该参考治疗与本发明之治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM、及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的比低于根据本发明之摩尔比。该施予之FVIII的MRT可为至少10h、较佳地至少15h、至少20h或至少25h。施予之重组多肽的MRT可较佳地相较于参考治疗增加至少1.5倍、至少2倍或至少3倍，其中该参考治疗与本发明之治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM、及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的比低于根据本发明之摩尔比。如本文中所使用之用语「清除率」系指血浆药物清除的速率。特定言之，其为药物现行的消除速率除以其现行的血浆浓度。在单一静脉内施予之后的药物动力学系统中，清除率可以剂量对AUC0-inf之比来计算，先决条件为清除率是固定的。清除率越低，血浆药物清除所花的时间就越长。在重组多肽与FVIII共同施予之后，该施予之FVIII的清除率CL相较于参考治疗系减少较佳地至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少5倍、至少7.5倍或至少10倍，其中该参考治疗与本发明之治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的比低于本发明之摩尔比。较佳地，在共同施予重组多肽与FVIII后，该施予FVIII之清除CL值系低于135mLkgh、低于80mLkgh、低于45mLkgh、低于40mLkgh、低于35mLkgh、低于30mLkgh或低于25mLkgh。该施予FVIII的清除CL值系较佳地低于参考治疗之该值，其中该参考治疗与该治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM、及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比低于根据本发明之摩尔比。在共同施予重组多肽与FVIII后，该重组多肽之清除CL值可介于1.0至2.5mLkgh、或介于1.1至2.2mLkgh或介于1.2至2.1mLkgh之范围。在该重组多肽与FVIII共同施予之后，该重组多肽的清除率CL相较于参考治疗减少至少2倍、至少5倍或至少10倍，其中该参考治疗与本发明之治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比低于本发明之摩尔比。如本文中所使用之用语生体可用率系定义为相对于本发明之多肽例如rD’D3-FP在i.v.施予后的AUC0-inf，本发明之多肽例如rD’D3-FP在s.c.施予后的AUC0-inf之百分比。本发明进一步关于使用本文上述例如但不限于上述实施例[1]至[66]定义之多肽使FVIII能够皮下施予。本发明具体而言进一步关于使用本文上述定义之多肽以提供或增加FVIII之生体可用率。在与重组多肽共同施予后，施予之FVIII的生体可用率相较于参考治疗可增加至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍或至少10倍，其中该参考治疗与本发明之治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM、及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比低于根据本发明之摩尔比。在与重组多肽共同施予后，施予之FVIII的生体可用率较佳地系至少2％、至少3％、至少5％、较佳地至少7％、至少10％、至少15％、至少30％、至少35％或至少40％。在与重组多肽共同施予后，施予之FVIII的生体可用率的进一步较佳范围系5-80％、5-70％、5-60％、5-50％、5-40％、5-30％、5-25％、10-25％、10-15％或5-15％。在与FVIII共同施予后，重组多肽的生体可用率系至少30％、较佳地至少35％、更佳地至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％或至少80％。本发明之进一步方面系一种治疗凝血疾病之方法，该方法包含向有需要之病患施予有效量的如上定义之多肽。进一步方面为使用如上文所定义之多肽例如但不限于以上实施例[1]至[66]中之任一项以减少A型血友病治疗中施予FVIII之频率。皮下施予FVIII之频率可减至每周二次。替代地，皮下施予FVIII之频率可减少至每周一次，或甚至降低至例如每10天一次或每14天一次。FVIII可以每周两次、每5天一次、每周一次、每10天一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次或每月一次，或在前述各值中任两个值之间的任何范围施予，例如从每四天一次至每月一次、从每10天一次至每两周一次等。在本文中用语「谷底水平」用于定义在预防性治疗中将应用下一次FVIII剂量时之血浆FVIII浓度。目前，严重A型血友病患者的建议谷底水平即体内存在之凝血因子的最低水平设定为1％。至1、5及10％谷底水平的时间系藉由设定等于0.01、0.05或0.1IUmL之模型方程式并解出时间计算。较佳地，与具有HLEM之多肽一起共同施予之FVIII达到1％、5％或10％谷底水平的时间期间相较于参考治疗延长，其中该参考治疗与本发明之治疗完全相同，除了该FVIII系与不具有该HLEM之重组多肽一起施予。与多肽一起共同施予之FVIII达到1％谷底水平的时间期间系至少约30h、至少约35h、至少约38h、至少约40h或至少约50h；或与该多肽一起共同施予之FVIII达到5％谷底水平的时间期间系至少约20h、至少约22h、至少约29h、至少约34h或至少约43h；或与该多肽一起共同施予之FVIII达到10％谷底水平的时间期间系至少约5h、至少约6h、至少约10h、至少约18h或至少约20h。治疗凝血病症本发明之多肽可用于治疗凝血疾病包括A型血友病及类血友病von-Willebrand氏病。用语「A型血友病」系指缺乏功能性凝血FVIII，期通常为遗传而来。根据一些较佳实施例，类血友病von-Willebrand氏病系选自由第2N型类血友病von-Willebrand氏病、第3型类血友病von-Willebrand氏病及第1型类血友病von-Willebrand氏病所组成之群组。在一实施例中，凝血疾病系中度A型血友病。中度A型血友病较佳地系以内源性FVIII活性水平为特征，其系NHP中内源性FVIII活性水平的约1％至约5％。一般而言，具有中度A型血友病的个体之内源性FVIII活性水平系血浆0.01至0.05IUmL。在另一实施例中，凝血疾病系轻度A型血友病。轻度A型血友病较佳地系以内源性FVIII活性水平为特征，其系NHP中内源性FVIII活性水平的约5％至约40％。一般而言，具有轻度A型血友病的个体之内源性FVIII活性水平系血浆0.05至0.4IUmL。在另一实施例中，凝血疾病系严重A型血友病，较佳地与低于NHP中内源性FVIII活性水平的1％之内源性FVIII活性水平有关。在另一实施例中，凝血疾病系第2N型类血友病von-Willebrand氏病。第2N型类血友病von-Willebrand氏病较佳地系以内源性FVIII活性水平为特征，其系自约3IUdL至约30IUdLFVIII活性水平，对应NHP中内源性FVIII活性水平的3％至约30％。大部分病患具有低于20IUdL的内源性FVIII活性水平，即低于NHP中内源性FVIII活性水平的20％之水平。因此，第2N型类血友病von-Willebrand氏病个体具有自0.03IUmL至0.3IUmL的血浆内源性FVIII活性水平，一般低于0.2IUmL。在另一实施例中，凝血疾病系第3型类血友病von-Willebrand氏病，其较佳地系以治疗前的内源性FVIII活性水平为特征，其范围通常系约1IUdL与约20IUdLFVIII活性水平之间，对应NHP中内源性FVIII活性水平的约1％至约20％之间。大部分病患具有低于10IUdL的内源性FVIII活性水平，即低于NHP中内源性FVIII活性水平的10％之水平。根据另一实施例中，该凝血疾病系第1型类血友病von-Willebrand氏病，其特征为治疗前的内源性FVIII活性水平相较于NHP中内源性FVIII活性水平为低。疾病之治疗涵盖治疗已诊断为具有任何临床阶段或表现的任何疾病形式的病患；延迟疾病症状或征候的发作或进展或加重或恶化；及或预防及或减少疾病的严重性。以本发明之多肽施予之「个体」或「病患」较佳为人类。在某些方面中，人类系小儿病患。在其他方面中，人类系成年病患。在本文中描述包含本发明之多肽及可选地FVIII之组成物。组成物通常以包括医药上可接受之载剂的无菌医药组成物之一部分来供应。此组成物可呈任何适合的形式取决于所欲施予给病患的方法。用语「第八凝血因子」及「FVIII」或「第八凝血因子蛋白质」在本文中可互换使用且涵盖源自血浆的FVIII及重组FVIII二者。重组FVIII涵盖但不限于全长FVIII、以及双链B-结构域删除或截短型变体、以及单链B-结构域删除或截短型变体，例如那些在WO2004067566A1中所述者，及在B-结构域外部突变但仍具有FVIII之生物活性的其他FVIII变体。本发明之多肽可以各种血管外路径施予病患，诸如皮下、皮内或肌肉内。在任何提出的例子中，最适合的施予路径将取决于特定多肽、个体、疾病的本质和严重性、及个体的身体状况而定。较佳地，本发明之多肽将经皮下施予。多肽及FVIII较佳地系经皮下共同施予。以本发明之多肽及FVIII治疗之剂量总次数及治疗长度的决定完全在那些熟习本技术领域者的能力范围内。欲施予之本发明之多肽以及FVIII的剂量可取决于欲施予之FVIII的浓度、欲治疗之病患体内的内源性内源性VWF之浓度或二者而定。基于本申请案之发明人所定义之比例的有效剂量可由技艺人士考虑本发明之多肽之分子量以及欲施予之FVIII之分子量来决定。也会考虑凝血疾病的严重程度，以判定本发明之多肽以及欲施予之FVIII的适当剂量。FVIII的典型剂量范围可自约20IUkg体重至约1000IUkg体重、较佳自约20IUkg体重至约500IUkg体重、进一步较佳自约20IUkg体重至约400IUkg体重、更佳自约20IUkg体重至约300IUkg体重。根据本发明，经本发明之多肽治疗的病患亦经第八凝血因子治疗。本发明之多肽及第八凝血因子可较佳地同时即一起施予，虽然原则上亦可以顺序方式施予，这二种施予模式皆涵盖于用语「组合疗法」及「共同施予」之中。本发明之多肽及第八凝血因子可以混合物即在相同组成物中施予或分开即作为不同的组成物施予。重组多肽与FVIII蛋白质之共同施予较佳地系藉由以包含重组多肽与FVIII蛋白质之单一组成物一起施予达成。根据进一步较佳实施例，重组多肽与FVIII蛋白质之共同施予系藉由下列达成：提供包含掺合于单一组成物之重组多肽与FVIII之组合式产品，或提供至少二种分开产品之组合或套组，该二种分开产品预定在施予前混合，藉此第一产品包含重组多肽且第二产品包含FVIII。具体而言，当重组多肽与FVIII蛋白质系提供于在共同施予前需混合之分开的组成物或产物中时，混合物在施予前可经处理，该处理之方式允许至少一部分的该重组多肽与该FVIII在施予前结合。例如，混合物可经孵养一段时间。该孵养可在室温下、或适当的升高温度然而较佳系在低于40℃的温度下进行小于1min、或小于5min。该快速孵养步骤在重构包含掺合于单一组成物之重组多肽与FVIII之组合式产品期间亦可能适当。在所使用之组成物中的第八凝血因子浓度通常在10至10,000IUmL之范围内。在不同的实施例中，在本发明之组成物中的FVIII浓度可在10-8,000IUmL、或10-5,000IUmL、或20-3,000IUmL、或50-1,500IUmL、或3,000IUmL、或2,500IUmL、或2,000IUmL、或1,500IUmL、或1,200IUmL、或1,000IUmL、或800IUmL、或750IUmL、或600IUmL、或500IUmL、或400IUmL、或300IUmL、或250IUmL、或200IUmL、或150IUmL、或125IUmL、或100IUmL、或62.5IUmL、或50IUmL之范围内，先决条件为满足关于如本文所定义之本发明的VWF多肽之比有关的要求。「国际单位」或「IU」是FVIII的凝血活性效力之测量单位，测量方式为FVIII活性分析法诸如单阶段凝血分析法或显色受质FVIII活性分析法，该等方法使用以「IU」计经国际标准制剂校准的标准品。一阶段凝血测定系所属技术领域已知，诸如在NLee,MartinL,etal.,AnEffectofPredilutiononPotencyAssaysofFVIIIConcentrates,ThrombosisResearchPergamonPressLtd.30,5115191983中所述。一阶段测定的原理为：测试系以活化部分凝血活酶时间aPTT-测定的改良版本进行：以磷脂质及表面激活剂孵养血浆导致内因性凝血系统之因子的活化。添加钙离子触发凝血级联。判定至形成可测量纤维蛋白血块的时间。该测定系在第八凝血因子缺乏血浆存在下进行。缺乏血浆的凝血能力系藉由欲测试样本中所包括的第八凝血因子而恢复。凝血时间的缩短系与样本中存在的第八凝血因子之量成正比。第八凝血因子的活性系藉由与具有以国际单位计之第八凝血因子已知活性的标准制剂直接比较而定量。另一标准分析法为显色受质分析法。显色受质分析可自市场上购得，诸如FVIII测试套组Chromogenix-InstrumentationLaboratorySpAV.leMonza338-20128Milano,Italy。显色分析法的原理为：第X因子系在钙及磷脂的存在下以第IXa因子激活成第Xa因子。此反应系以第VIIIa因子作为辅因子刺激。FVIIIa系藉由反应混合物中少量凝血酶作用，自欲测量之样品中的FVIII所形成。当使用最适化浓度的Ca2+、磷脂和第IXa因子及过量的第X因子时，第X因子之激活系与第八因子之效力成比例。激活之第X因子系自显色受质S-2765释出发色基pNA。在405nm测量的释出之pNA因此与所形成的FXa量成比例且因此亦与样品的第八因子活性成比例。医药组成物适合于本文所述之方法的本发明多肽之治疗性配方可藉由如下述而制备成用于贮存的冻干配方或水溶液：将具有所欲纯度的多肽与通常于本技术中使用之随意的医药上可接受之载剂、赋形剂或稳定剂混合所有该等在本文皆称为「载剂」，亦即缓冲剂、稳定剂、保存剂、等张剂、非离子型清洁剂、抗氧化剂和其他的杂项添加剂。见Remington’sPharmaceuticalSciences,16theditionOsol,ed.1980。此等添加剂在所使用的剂量及浓度下必须对接受者无毒。缓冲剂帮助维持pH值在接近生理条件的范围内。其可以从约2mM至约50mM为范围之浓度存在。适合的缓冲剂包括有机酸及无机酸二者及其盐，诸如柠檬酸盐缓冲剂例如柠檬酸单钠-柠檬酸二钠混合物、柠檬酸-柠檬酸三钠混合物、柠檬酸-柠檬酸单钠混合物等、琥珀酸盐缓冲剂例如琥珀酸-琥珀酸单钠混合物、琥珀酸-氢氧化钠混合物、琥珀酸-琥珀酸二钠混合物等、酒石酸盐缓冲剂例如酒石酸-酒石酸钠混合物、酒石酸-酒石酸钾混合物、酒石酸-氢氧化钠混合物等、反丁烯二酸盐缓冲剂例如反丁烯二酸-反丁烯二酸单钠混合物、反丁烯二酸-反丁烯二酸二钠混合物、反丁烯二酸单钠-反丁烯二酸二钠混合物等、葡糖酸盐缓冲剂例如葡糖酸-葡糖酸钠混合物、葡萄糖酸-氢氧化钠混合物、葡萄糖酸-葡萄糖酸钾混合物等、草酸盐缓冲剂例如草酸-草酸钠混合物、草酸-氢氧化钠混合物、草酸-草酸钾混合物等、乳酸盐缓冲剂例如乳酸-乳酸钠混合物、乳酸-氢氧化钠混合物、乳酸-乳酸钾混合物等及乙酸盐缓冲剂例如乙酸-乙酸钠混合物、乙酸-氢氧化钠混合物等。此外，可使用磷酸盐缓冲剂、组胺酸缓冲剂和三甲基胺盐，诸如Tris。可添加保存剂以阻止微生物生长且可以0.2％-1％wv为范围之量添加。适合的保存剂包括苯酚、苯甲醇、间-甲苯酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯化十八烷基二甲基苯甲基铵、卤化苯甲烃铵例如氯化苯甲烃铵、溴化苯甲烃铵及碘化苯甲烃铵、氯化六烃季铵hexamethoniumchloride及对羟基苯甲酸烷酯诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、儿茶酚、间苯二酚、环己醇及3-戊醇。可添加有时称为「稳定剂」的等张剂以确保液体组成物的等张性且包括多元糖醇，较佳为三元或更高级糖醇，诸如甘油、赤藻糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、山梨糖醇及甘露糖醇。稳定剂系指广泛类别的赋形剂，其功能可从增积剂至使治疗剂溶解或帮助防止变性或黏附至容器壁之添加剂。典型的稳定剂可为多元糖醇上文所列举；氨基酸，诸如精胺酸、离胺酸、甘胺酸、麸酰胺酸、天冬酰胺、组胺酸、丙胺酸、鸟胺酸、L-白胺酸、2-苯丙胺酸、麸胺酸、苏胺酸等；有机糖或糖醇，诸如乳糖、海藻糖、水苏糖、甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、核糖醇、肌醇、半乳糖醇、甘油及类似者，包括环醇，诸如环己六醇；聚乙二醇；氨基酸聚合物；含硫还原剂，诸如尿素、麸胱甘肽、硫辛酸、氢硫乙酸钠、硫甘油、α-单硫甘油和硫代硫酸钠；低分子量多肽例如10个或更少残基的肽；蛋白质，诸如人类血清白蛋白、牛血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，诸如聚乙烯吡咯啶酮；单醣，诸如木糖、甘露糖、果糖、葡萄糖；双醣，诸如乳糖、麦芽糖、蔗糖；及三醣，诸如棉籽糖；及多醣，诸如聚葡萄糖。稳定剂可以每重量份活性蛋白质计0.1至10,000重量份之范围存在。可添加非离子型界面活性剂或清洁剂亦称为「润湿剂」以帮助溶解治疗剂以及保护治疗蛋白质免于搅拌诱发之聚集，其亦允许配方暴露于承受剪切表面应力而不引起蛋白质变性。适合非离子型界面活性剂包括聚山梨醇酯20、80等、泊洛沙姆polyoxamer184、188等、氧化异丙烯多元醇Pluronicpolyol、聚氧化乙烯脱水山梨糖醇单醚-20、-80等。非离子型界面活性剂可以约0.05mgml至约1.0mgml之范围或0.07mgml至约0.2mgml之范围存在。额外的杂项赋形剂包括增积剂例如淀粉、螯合剂例如EDTA、抗氧化剂例如抗坏血酸、甲硫胺酸、维生素E及共溶剂。除了本发明之多肽以外，本文中之配方亦可含有第二治疗剂。适合的第二治疗剂的实例于下文提供。给药时程可从每月一次至每天一次之间变化，其系取决于许多临床因素而定，包括疾病类型、疾病严重性和患者对本发明多肽的敏感性。在特定实施例中，本发明之多肽系以每周两次、每5天一次、每周一次、每10天一次、每两周一次、每三周一次、每四周一次或每月一次，或在前述各值中任两个值之间的任何范围施予，例如从每四周一次至每月一次、从每10天一次至每两周一次等。欲施予之本发明多肽的剂量将根据特别的多肽、个体、疾病的本质和严重性、个体的身体状况、治疗方案例如是否使用第二治疗剂及所选择之施予路径而改变；适当的剂量可由熟习本技术领欲者轻易地决定。熟习本技术领域者应了解本发明多肽的个别剂量之最适量及间隔将由欲治疗之病况的本质和程度；施予形式、路径和部位；及欲治疗之特定个体的年龄和病况来决定，且最后由医师决定欲使用之适当剂量。此剂量可视需要经常重复。若发展出副作用，则可依照常规临床实践来改变或降低剂量的量及或频率。医药组成物较佳地调制成经血管外施予、较佳地调制成经皮下施予。该领域之技艺人士将了解此处所描述之本发明易于进行除了特别说明者外之变化及修饰。应了解本发明包括落于本发明之精神与范围内的所有该等变化及修饰。本发明亦包括在本说明书中独立或总体提及或指示之所有特征、组成物、步骤及化合物，及该等特征、组成物、步骤及化合物之任二者或更多者的任何及所有组合。序列表中显示之核苷酸及氨基酸序列摘列于表1。表1:本发明之某些实施例现将参照下列实例描述，该等实例之目的仅作为说明之用，并无意限制前述一般性之范畴。实例材料及方法产制D’D3白蛋白融合蛋白质D’D3-FP：由编码VWF氨基酸1至1242之cDNA、甘胺酸丝胺酸连接符及人类白蛋白之cDNA所组成的D’D3-FP之表现卡匣系由客制化基因合成制备EurofinsGenomics,Ebersberg,Germany。透过侧接限制位点EcoRI,NotI，表现卡匣自供应的选殖载体切除并插入经EcoRI及NotI线性化之pIRESneo3载体BDBiosciences,FranklinLakes,NJ,USA中。所得表现质体含有在CMV启动子控制下编码VWF前肽、D’及D3SEQIDNO：4之VWF氨基酸1至1242之核苷酸序列经由短连接符编码序列融合至白蛋白编码序列。编码序列之核苷酸序列显示为SEQIDNO：1，成熟D’D3-FP之氨基酸序列显示为SEQIDNO：2。在表现期间D1D2VWF前肽741个氨基酸的存在对于合成多肽的二聚化至关重要。使用类似方式产制经His-标签化的D’D3蛋白质以甘胺酸丝胺酸连接符连接之D’D3及His8及亦经由甘胺酸丝胺酸连接符连接至人绒毛膜促性腺激素-β次单位之C端肽且在融合蛋白质的C端以8个组胺酸标签化之D’D3融合蛋白质的表现质体。成熟D’D3-His之氨基酸序列显示为SEQIDNO：7，成熟D’D3-CTP之氨基酸序列显示为SEQIDNO：8。如上述之表现质体在XL10GoldAgilentTechnologies中生长且使用标准程序Qiagen,Hilden,Germany纯化。CHOK1细胞系使用Lipofectamine2000试剂Invitrogen转染并于无血清介质CD-CHO,Invitrogen中在500至1000μgml遗传霉素Geneticin存在下生长。如WO2007144173A1中所述之编码PACE弗林蛋白酶furinpFu-797之表现质体系经共转染以最大化前肽裂解效率。使源自单细胞之选殖株生长并根据彼等藉由白蛋白特异性酶免疫测定见下文所定量之D’D3-FP表现产率选择。最终选用于D’D3-FP发酵之细胞系称为T2050-CL3。D’D3-FP之生产系在采用灌流模式之发酵程序的生物反应器中进行。用于生产含D’D3多肽之发酵程序始于将细胞系T2050-CL3解冻，随后使细胞在振荡烧瓶中扩增且最终使用SartoriusBioStatB-DCU5L生物反应器及BioStatSTR50L单次使用生物反应器的灌流模式发酵程序。分别使用BioSeps10L或200LApplikon作为细胞滞留装置。细胞培养基为含8mML-麸酰胺酸及1μMCuSO4之PowerCHO3LonzaBESP1204或含10mML-麸酰胺酸及1μMCuSO4之ProCHO5LonzaBESP1072。在振荡烧瓶中之种子列车seedtrain系在37℃、7.5％CO2下以振荡速度160rpm执行。将5L生物反应器以2.5x105个细胞mL之目标VCD接种。使细胞于含8mML-麸酰胺酸及1μMCuSO4之PowerCHO3中在+37.0℃之温度、pH7.00及30％氧饱和度下培养。在自生物反应器在+37℃下运行进行初始收集之后，将温度切换至+34.0℃评估范围+31℃至+35℃。pH的控制使用CO2喷气作为酸及NaHCO3作为碱。覆盖空气流速设定为0.5Lmin。使用环喷气器作为喷气单元。搅动速率为150rpm，使用2倍螺距叶片叶轮的下拉模式。将50L生物反应器以3.0×105个细胞mL之目标VCD接种。使细胞于含10mML-麸酰胺酸及1μMCuSO4之ProCHO5介质中在+37.0℃之温度、pH6.90及30％氧饱和度下培养。在初始一或二次收集之后，将温度切换至+34.0℃。PH控制如上所述，覆盖空气流速设定为2Lmin。使用微喷气器作为喷气单元。搅动速率为90rpm，使用2倍螺距叶片叶轮的下拉模式。当生物反应器中之VCD≥1.0×106个细胞mL时，灌流启动。灌流速率设定为1.0体积体积天。BioSep系以510分钟运行时间及10秒回冲之回冲模式操作，功率输入为730W括号中的数字系指50L生物反应器。将灌流液及流出液线内过滤并在+2至+8℃下收集至袋中48小时。使用浊度探针藉由主动排出控制VCD，使用葡萄糖消耗量作为参数，目标为2gL葡萄糖。将收集物及流出液在线内过滤，由抛弃式过滤器及抛弃式袋组成之收集系统每二天更换一次。为了制备用于下文所述之PK分析之材料，将D’D3白蛋白融合蛋白质收集物藉由亲和性及粒径排阻层析法纯化。简言之，将来自生物反应器之无细胞收集物使用具有30kD膜例如PallCentramateOS030T12之TFF系统例如PallCentramate500S浓缩30倍。在该浓缩物中加入NaCl及EDTA至最终浓度0.75MNaCl及5mMEDTA，并经整夜装载至CaptureSelect人类白蛋白管柱LifeTechnologies上，管柱系经20mMTris缓冲剂pH7.4预平衡。在用平衡缓冲剂洗涤管柱后，将D’D3-FP用洗提缓冲剂20mMTris,2MMgCl2,pH7.4洗提。接着将洗出液10倍浓缩，并使用具有30kD截留之超离心过滤器例如Amicon.UFC903024以50mMTris,150mMNaCl,pH7.4透析。为了分离D’D3-FP二聚体与单体部分，将该材料装载至经50mMTris,150mMNaCl,pH7.4预平衡之Superdex200pg管柱GEHealthcare代码：17-1069-01并将含有D’D3-FP二聚体之尖峰流份汇集。使用二聚体及单体尖峰流份之曲线下面积计算二聚体对单体比例。该D’D3白蛋白融合蛋白质之二聚体制剂系用于药物动力学实验中。若无另行指示，该等二聚体制剂在下文中称为D’D3-FP。rD’D3-FPEYA变体藉由等效方法步骤产制。经His-标签化之D’D3蛋白质系以Ni-螯合物亲和性及粒径排阻层析法纯化。简言之，将经TFF浓缩之无细胞生物反应器收获物参见上文的详述经隔夜装载于预平衡20mM磷酸钠500mMNaCl，pH7.4之Ni-Sepharose管柱上HisTrapTM,GEHealthcare。在以20mM磷酸钠500mMNaCl30mM咪唑，pH7.4洗涤管柱之后，将蛋白质以20mM磷酸钠+500mMNaCl+500mM咪唑，pH7.4洗提。接着将洗出液浓缩，且使用Amicon超离心过滤器透析TBS,pH7.4参见上文。接着将最终产物装载于SEC管柱上参见上文，汇集含有二聚体之尖峰流份且浓缩至约7mgmLOD280-320。经His-标签化之D’D3蛋白质之二聚体制剂系用于药物动力学实验中。若无另行指示，该等二聚体制剂在下文中称为rD’D3-His。实例1：重组FVIII在rD’D3-FP或其变体存在下之皮下生体可用率要评估血管外注射是否为改善FVIII疗法的选项，选择典型的代表性血管外疗法即皮下s.c.注射。我们的目标是要表征包含截短型VWF之重组多肽在不同方式中对于FVIII之皮下生体可用率的影响：.实例1.1：在A型血友病模型中，即在FVIIIko小鼠中，皮下给予rD’D3-FP及rVIII-单链两者之探讨。.实例1.2：在生理内源性FVIII之模型中，即在猪中，皮下给予rD’D3-FP及rVIII-单链两者之探讨。.实例1.3：在A型血友病模型中，即在FVIIIko小鼠中，rD’D3-FP对不同FVIII产品各以皮下给予之之影响探讨。.实例1.4：在小鼠A型血友病模型中，即在FVIIIko小鼠中，rD’D3-FP亲和性变体具有非白蛋白HELP之rD’D3分子与rVIII-单链两者皆皮下给予之作用探讨。因此，我们探讨包含VWF之D’及D3结构域经由连接符肽融合至白蛋白之重组多肽经由皮下与重组FVIII共同施予时的影响。在实例中，使用包含截短型VWF之多肽，该多肽具有如SEQIDNO：2所定义之氨基酸序列。此特定融合蛋白质系由下列组成：N端氨基酸序列1至479代表VWFD’D3区域人类天然VWF之氨基酸764至1242、随后31个氨基酸甘胺酸丝胺酸连接符肽及C端人类白蛋白氨基酸序列511至1095。此具有如SEQIDNO：2所定义之序列的融合蛋白质，在以下被称为rD’D3-FP或rD’D3-FPWT。就实例之目的而言，使用具有如SEQIDNO：5定义之氨基酸序列的重组B结构域删除单链FVIII，即rVIII-单链。在实例1.3中，不同的重组FVIII产品系经测试。进一步地，我们探讨不同的rD’D3-FP对rVIII-单链之比例的影响。白蛋白融合作为皮下可用率的潜在调节剂之影响系藉由比较rD’D3-FP与His-标签化之rD’D3rD’D3-His的生体可用率来探讨。成熟D’D3-His之氨基酸序列显示于SEQIDNO：7，藉此D’D3与His8藉由甘胺酸丝胺酸连接符连接在一起。除了使用白蛋白作为半衰期延长多肽HLEP，在一些实例中，使用具有经由甘胺酸丝胺酸连接符融合至rD’D3之CTP人绒毛膜促性腺激素-β次单位之C端肽而非白蛋白之rD’D3-FP变体，此变体在以下称为rD’D3-CTP。融合蛋白质rD’D3-CTP具有如SEQIDNO：8所定义之序列。在某些实例中，使用rD’D3-FP之高亲和性变体。此特定变体融合蛋白质系由下列组成：N端氨基酸序列1至479代表VWFD’D3区域人类天然VWF之氨基酸764至1242、随后31个氨基酸甘胺酸丝胺酸连接符肽及C端人类白蛋白氨基酸序列511至1095，惟在该多肽之D’D3结构域中存在三个氨基酸取代，即S764E、S766Y及V1083A。此融合蛋白质系由如SEQIDNO：2所定义且在D’D3区域中具有该三个取代S764E、S766Y及V1083A之序列组成。该变体在以下称为rD’D3-FPEYA。材料及方法背景信息为了计算不同rD’D3-FP：rVIII-单链组合的比例，做出下列假设：.药物在施予之后经每kg体重40mL血浆稀释.本发明使用之多肽的分子量：rD’D3-FP单体次单位分子量包括醣化：127,000DaHLEM＝人类白蛋白；使用单体重量计算比例.rD’D3-His的分子量：rD’D3-His单体次单位分子量包括醣化：64,000Da；使用单体重量计算比例.rD’D3-FPEYA变体的分子量：rD’D3-FP单体次单位分子量包括醣化：127,000Da；使用单体重量计算比例.rD’D3-CTP的分子量：rD’D3-CTP单体次单位分子量包括醣化：69,800Da；使用单体重量计算比例.所使用之FVIII的分子量：rVIII-单链分子量具有醣化：180,000Da及比活性：11,000IUmg.所使用之其他FVIII产品的分子量：○分子量：285,000Da及比活性：5,000IUmg○分子量：280,000Da及比活性：7,000IUmg○分子量：170,000Da及比活性：10,700IUmg系CSLBehring公司的血浆衍生性人类FVIII产品。系购自BaxterAG,Vienna,Austria且系重组全长第八凝血因子制剂。ReFacto系购自PfizerLimited,Kent,UnitedKingdom且系具有删除B结构域的重组第八凝血因子制剂。分析rD’D3-FP野生型以及EYA变体的施用剂量水平系由人类白蛋白ELISA定量，藉此测量蛋白质的白蛋白部分。此rD’D3-FPELISA也用于血浆样本。人类白蛋白ELISA使用来自BethylLaboratories,Inc.Montgomery,USA之多株山羊抗人类白蛋白捕捉抗体。侦测溶液系由多株过氧化酶标记抗人类白蛋白侦测抗体制剂BethylLaboratoriesInc.,Montgomery,USA组成。显色读出物即来自SiemensHealthcareEschborn,Germany之TMB系用于微量板读取仪中以450650nmELx808,BioTek,USA在停止后直接定量。使用含有rD’D3-FP之药物配方作为标准物。rD’D3-FP的量系表示为白蛋白的mg数，即不针对分子的D’D3部分进行调整。rD’D3-His及rD’D3-CTP建构体的剂量水平系于OD280测量，且rD’D3-His蛋白质的量系调整至与rD’D3-FP的量等莫耳的浓度。藉此，rD’D3-His的单位与rD’D3-FP相同，即在图上以理论性白蛋白mg表示。rD’D3-CTP系以和rD’D3-FPEYA变体类似之摩尔比投药且单位不转换成白蛋白，而是如同rD’D3-CTP给予。含有rD’D3-His及rD’D3-CTP之PK血浆样本系以抗D’D3ELISA测量。此D’D3ELISA使用单株抗人类D’D3捕捉抗体公司内部研究制备。侦测溶液系由另一经单株过氧化酶标记之抗人类D’D3侦测抗体组成公司内部研究制备。显色读出物即来自SiemensHealthcareEschborn,Germany之TMB系用于微量板读取仪中以450650nmELx808,BioTek,Vermont,USA在停止后直接定量。以标准品而言，使用含有rD’D3-His及rD’D3-CTP之药物配方，且如同先前将rD’D3-His计算为相较于rD’D3-FP之等莫耳浓度，即其量再次以理论性白蛋白mg表示。rD’D3-CTP的量以rD’D3-CTP的浓度表示。FVIII显色活性血浆水平系藉由FVIII测定FVIII：C显色测定，Chromogenix,InstrumentationLaboratorySpA,Milan,Italy根据厂商的测试说明手册侦测。FVIII显色活性缩写为FVIII：C。人类FVIII：Ag血浆水平系使用来自Stago,S.A.S.,France之FVIIIAsserachromELISA测试套组根据测试说明手册判定。Asserachrom测试套组含有除了停止溶液以外的所有试剂，停止溶液系获自SiemensHealthcareEschborn,Germany。使用含有rVIII-单链之药物配方作为标准物。动物FVIIIko小鼠选择FVIII基因剔除ko小鼠代表A型血友病表型，因为牠们缺乏FVIII基因的外显子16及17，因此不具有血浆第八凝血因子活性BiL.etal,Naturegenetics,1995,Vol101,119-121；BiL.etal,Blood,1996,Vol889,3446-3450。此允许在FVIII治疗后藉由定量这些小鼠血浆中的FVIII活性，进行FVIII活性水平分析。体重介于17至35g之雄性及雌性FVIIIko小鼠系由CharlesRiverLaboratoriesSulzfeld,Germany繁殖。在公司内部，动物饲养于标准饲养条件下，即在20至24℃之12h12h光-暗循环下。动物得以任意采食标准大鼠饲料Ssniff-Soest,Germany。供应自来水供任意采食。动物饲养管理及研究程序遵从德国动物福利法及欧盟规定。组别大小为n＝12，分成3或4个研究世代。因此，使用每个时间点n＝3-4只动物。猪选择猪是因为猪在预测人类皮下给药之生体可用率方面是良好模型。体重介于23至27kg的公猪系由SchlosserSchwalmtal,Germany繁殖。在公司内部，动物饲养于18至21℃下之铺稻草猪舍。以碎谷物喂饲动物。供应自来水供任意采食。动物饲养管理及研究程序遵从德国动物福利法及欧盟规定。组别大小为2静脉内i.v.或3皮下s.c.。实例1.1：在A型血友病模型中，即在FVIIIko小鼠中，皮下给予rD’D3-FP及rVIII-单链两者之探讨。实验细节测试制品系以总体积5mLkg单次注射经s.c.施予至颈部或经i.v.施予至侧尾静脉。施予剂量水平及途径在表2中给予。表2：治疗组rD’D3-FP系以基于人类白蛋白值之0.3至10mgkg的剂量范围应用，rVIII-单链剂量范围自50至400IUkg显色FVIII活性。rVIII-单链以注射用水重构，且rD’D3-FP以及rD’D3-His在水浴中解冻。为了共同施予，将化合物在+37℃下一起孵养大约30分钟。每例中施予5mLkg的剂量体积，如有需要使用FVIII的稀释缓冲剂以解离化合物。血液样本在短期麻醉下使用替代取样方案自眼后采集。s.c.组的时间点为3、8、16、24、48、72及96hp.a.400IUkgrVIII-单链及10mgkgrD’D3-FP+400IUkgrVIII-单链组为例外，且i.v.组为5min、3、8、24、48、72及96hp.a.。PK特性系得自每组3或4个小鼠研究世代，且每个时间点n＝3-4只动物。血液样本使用柠檬酸钠抗凝血1份柠檬酸钠3.13％+9份血液、经处理成血浆并储存在-70℃下以用于判定FVIII活性、FVIII抗原、白蛋白及或rD’D3-His。rD’D3-FP暴露系藉由使用人类白蛋白ELISA测量建构体之白蛋白部分判定。另外，测量FVIII显色活性及选定组别中的人类FVIII抗原。生物统计学最大浓度Cmax、t＝0至t＝∞浓度对时间曲线下面积AUC0-inf、平均滞留时间MRT、廓清CL及终末半衰期t12的估计系藉由i.v.计算中的二室模型及藉由s.c.计算的二室-重吸收模型进行。参数估计方面，采用加权最小平方成本函数。生体可用率系计算为s.c.施予后相较于i.v.施予之AUC0-inf的百分比。至1、5及10％谷底水平的时间系藉由设定等于0.01、0.05或0.1IUmL之模型方程式并解出时间计算。结果评估D’D3数据两种D’D3rD’D3-FP及rD’D3-His，分别含有及不含白蛋白融合的建构体在s.c.施予后吸收。rD’D3-FP可在整个96h的观察期之中定量，即使0.3mgkg的最低剂量；即其维持在23.4ngmL的侦测极限之上图1。然而，rD’D3-FP相较于rD’D3-His可侦测到显著较高水平，特别是在较晚的时间点。需要提起的是，一些曲线在最后二个测量点显示高类似性，导致终末期的血浆浓度曲线「平坦化」。藉此清除率、MRT、t12及AUC0-inf的估计值包括最后点时，预计将会非常长。第二种计算不包括最后时间点，以避免高估生体可用率；表3提供数据的比较且显示不包括最后时间点的数据与其他数据有良好一致性。因此，在表格与图式中图1除外，使用不包括96h数据点的第二数据组，其可能低估rD’D3-FP的生体可用率。Cmax及AUC0-inf显示0.3-10mgkgrD’D3-FP及0-400IUkgrVIII-单链测试范围的剂量依赖性，与添加的rFVIII无关表3，图2。与降低暴露有关，rD’D3-His的Cmax以及AUC0-inf两者皆相关地低于可相比的rD’D3-FP剂量。详细地说，s.c.施予的Cmax降低3倍且AUC0-inf降低16倍。rD’D3-FP的清除率、MRT及t12不显示剂量依赖性。s.c.估计值中的高度变异性易发生难以替平坦的暴露-时间曲线适配正确曲线。在s.c.后清除值的范围为1.2-2.1mLkgh，i.v.施予后的值稍微较低0.8-0.9mLkgh。与此一致的是，s.c.的MRTt12范围为41-117h15-90h，且i.v.施予为55-83h39-69h。相对地，rD’D3-His的消除快速许多，即s.c.后的清除率为34.8mLkgh且i.v.施予后为11.8mLkgh13倍差异，s.c.后的MRT为11h且i.v.施予后为5h3倍差异，s.c.后的t12为7h且i.v.施予后为6h2倍差异。重要的是，rD’D3-FP在皮下施予后的生体可用率范围为40-79％，实验中的不同组别之间再次具有相当高的差异性表4，图3。然而，此生体可用率与本实验中所使用之rVIII-单链或rD’D3-FP的剂量无关。rD’D3-His显示较低的生体可用率34％。表3:在s.c.或i.v.施予rD’D3-FP或rD’D3-His及rVIII-单链至FVIIIko小鼠后的rD’D3-FP或rD’D3-His的药物动力学参数*最后二个测量点的高度类似性导致终末期血浆浓度曲线的人工「平坦化」；藉此清除率、MRT、t12及AUC0-inf的估计值包括最后时间点时，预计会非常长。因此，进行不包括最后时间点的额外计算，以避免高估生物可用率。表4:rD’D3-FP或rD’D3-His在s.c.施予FVIIIko小鼠后相对于i.v.参照治疗计算的生物可用率n.a.＝不适用；*＝s.c.数据的AUC估计值具有较低信赖水平见上§相同治疗的参考组以粗体表示评估FVIII数据不伴随本发明之任何多肽施予之rVIII-单链即不伴随任何D’D3-FP建构体当经s.c.施予时并无实质吸收，至少无法测量到侦测极限以上的FVIII活性。然而令人意外的是，当与二种D’D3建构体rD’D3-FP及rD’D3-His，分别具有及不具有白蛋白融合中之任一者共同s.c.施予时，FVIII即可吸收；且FVIII活性持续整个吸收过程图3。需要提起的是对于FVIII活性来说，一个曲线在最后二个测量点也显示高类似性，导致终末期的血浆浓度曲线「平坦化」。藉此清除率、MRT、t12及AUC0-inf的估计值包括最后点时，预计将会非常长。第二种计算不包括最后时间点，以避免高估生体可用率；表5提供数据的比较。因此，在表格与图式中图4除外，使用不包括最后数据点的第二数据组，其可能低估rD’D3-His的生体可用率。取决于FVIII剂量，FVIII活性系于至少32h1mgkgrD’D3-FP及50IUkgrVIII-单链及最高96h的最后时间点例如任何400IUkgrVIII-单链及1-10mgkgrD’D3-FP的剂量定量；即其维持在3或10mIUmL的侦测极限之上图4。举例来说，图4代表在s.c.或i.v.施予1或3mgkgrD’D3-FP伴随100IUkgrVIII-单链后的FVIII血浆暴露，相较于施予3mgkgrD’D3-His伴随200IUkgrVIII-单链施予较高剂量以使暴露得以监测。当未施予D’D3建构体时，rVIII-单链维持在侦测极限以下，即使使用400IUkg的s.c.剂量数据未显示。Cmax及AUC0-inf显示0.3-10mgkgrD’D3-FP及0-400IUkgrVIII-单链测试范围的剂量依赖性，与共同施予之rD’D3-FP无关，然而当给予rD’D3-His时暴露量远远较低表5，图5。当rD’D3-FP与rVIII-单链以50之摩尔比给予时，rVIII-单链之CL范围为7.5-23.7mLkgh，且系低于0.3mgkgrD’D3-FP及200IUkgrVIII-单链s.c.比例45或rD’D3-His共同施予。与此一致的是，rD’D3-FP及rVIII-单链以50之比例给予时，rVIII-单链之MRT及t12相较于rD’D3-His为高，50IUkg之非常低剂量的rVIII-单链除外MRT范围：24-37h，t12范围：8-20h。就比较而言，rVIII-单链i.v.施予不包括rD’D3-FP在FVIIIko小鼠显示约2-3mLkgh的CL、18h的MRT及15h的t12，在人类显示约2-3mLkgh的CL、约20h的MRT及约14h的t12数据未显示于本文中。因此，s.c.施予后的药物动力学参数各不相同，但粗略来说与i.v.施予后相当。综上所述，rVIII-单链之生体可用率范围当给予剂量≥3mgkgrD’D3-FP时为11-25％，当给予剂量1mgkgrD’D3-FP时介于6-14％，且当给予剂量0.3mgkgrD’D3-FP时≤4％表6，图6。此生体可用率对于rVIII-单链剂量的依赖在于观察到最高测试剂量400IUkg时的潜在饱和，其可能与可得吸收面积有关。另外，rD’D3-FP剂量限制rVIII-单链的可用性，即rD’D3-FP剂量越高，rVIII-单链可用性越佳。此可转换为重要的rD’D3-FP对rVIII-单链测试比例为至少447≥3mgkgrD’D3-FP；排除饱和的400IUkgrVIII-单链剂量、测试范围中可接受的比例为74-5961mgkgrD’D3-FP及不利的测试比例为450.3mgkgrD’D3-FP。因此结论是CSLBehringRecombinantFacilityAG用于血管外施予以治疗或预防凝血疾病的截短型冯维勒布兰德因子多肽2016_L004_A267EP16198497.62016-11-118PatentInversion3.515616DNA人工序列编码构建体VWF片段-GS连接子-白蛋白的DNAmisc_feature1..6EcoRI限制性酶切位点misc_feature32..3757VWF氨基酸1到1242的编码序列misc_feature3758..3850甘氨酸丝氨酸连接子的编码序列misc_feature3851..5608人白蛋白的编码序列misc_feature5609..5616NotI限制性酶切位点1gaattcccgcagccctcatttgcaggggaagatgattcctgccagatttgccggggtgct60gcttgctctggccctcattttgccagggaccctttgtgcagaaggaactcgcggcaggtc120atccacggcccgatgcagccttttcggaagtgacttcgtcaacacctttgatgggagcat180gtacagctttgcgggatactgcagttacctcctggcagggggctgccagaaacgctcctt240ctcgattattggggacttccagaatggcaagagagtgagcctctccgtgtatcttgggga300attttttgacatccatttgtttgtcaatggtaccgtgacacagggggaccaaagagtctc360catgccctatgcctccaaagggctgtatctagaaactgaggctgggtactacaagctgtc420cggtgaggcctatggctttgtggccaggatcgatggcagcggcaactttcaagtcctgct480gtcagacagatacttcaacaagacctgcgggctgtgtggcaactttaacatctttgctga540agatgactttatgacccaagaagggaccttgacctcggacccttatgactttgccaactc600atgggctctgagcagtggagaacagtggtgtgaacgggcatctcctcccagcagctcatg660caacatctcctctggggaaatgcagaagggcctgtgggagcagtgccagcttctgaagag720cacctcggtgtttgcccgctgccaccctctggtggaccccgagccttttgtggccctgtg780tgagaagactttgtgtgagtgtgctggggggctggagtgcgcctgccctgccctcctgga840gtacgcccggacctgtgcccaggagggaatggtgctgtacggctggaccgaccacagcgc900gtgcagcccagtgtgccctgctggtatggagtataggcagtgtgtgtccccttgcgccag960gacctgccagagcctgcacatcaatgaaatgtgtcaggagcgatgcgtggatggctgcag1020ctgccctgagggacagctcctggatgaaggcctctgcgtggagagcaccgagtgtccctg1080cgtgcattccggaaagcgctaccctcccggcacctccctctctcgagactgcaacacctg1140catttgccgaaacagccagtggatctgcagcaatgaagaatgtccaggggagtgccttgt1200cacaggtcaatcacacttcaagagctttgacaacagatacttcaccttcagtgggatctg1260ccagtacctgctggcccgggattgccaggaccactccttctccattgtcattgagactgt1320ccagtgtgctgatgaccgcgacgctgtgtgcacccgctccgtcaccgtccggctgcctgg1380cctgcacaacagccttgtgaaactgaagcatggggcaggagttgccatggatggccagga1440cgtccagctccccctcctgaaaggtgacctccgcatccagcatacagtgacggcctccgt1500gcgcctcagctacggggaggacctgcagatggactgggatggccgcgggaggctgctggt1560gaagctgtcccccgtctatgccgggaagacctgcggcctgtgtgggaattacaatggcaa1620ccagggcgacgacttccttaccccctctgggctggcggagccccgggtggaggacttcgg1680gaacgcctggaagctgcacggggactgccaggacctgcagaagcagcacagcgatccctg1740cgccctcaacccgcgcatgaccaggttctccgaggaggcgtgcgcggtcctgacgtcccc1800cacattcgaggcctgccatcgtgccgtcagcccgctgccctacctgcggaactgccgcta1860cgacgtgtgctcctgctcggacggccgcgagtgcctgtgcggcgccctggccagctatgc1920cgcggcctgcgcggggagaggcgtgcgcgtcgcgtggcgcgagccaggccgctgtgagct1980gaactgcccgaaaggccaggtgtacctgcagtgcgggaccccctgcaacctgacctgccg2040ctctctctcttacccggatgaggaatgcaatgaggcctgcctggagggctgcttctgccc2100cccagggctctacatggatgagaggggggactgcgtgcccaaggcccagtgcccctgtta2160ctatgacggtgagatcttccagccagaagacatcttctcagaccatcacaccatgtgcta2220ctgtgaggatggcttcatgcactgtaccatgagtggagtccccggaagcttgctgcctga2280cgctgtcctcagcagtcccctgtctcatcgcagcaaaaggagcctatcctgtcggccccc2340catggtcaagctggtgtgtcccgctgacaacctgcgggctgaagggctcgagtgtaccaa2400aacgtgccagaactatgacctggagtgcatgagcatgggctgtgtctctggctgcctctg2460ccccccgggcatggtccggcatgagaacagatgtgtggccctggaaaggtgtccctgctt2520ccatcagggcaaggagtatgcccctggagaaacagtgaagattggctgcaacacttgtgt2580ctgtcgggaccggaagtggaactgcacagaccatgtgtgtgatgccacgtgctccacgat2640cggcatggcccactacctcaccttcgacgggctcaaatacctgttccccggggagtgcca2700gtacgttctggtgcaggattactgcggcagtaaccctgggacctttcggatcctagtggg2760gaataagggatgcagccacccctcagtgaaatgcaagaaacgggtcaccatcctggtgga2820gggaggagagattgagctgtttgacggggaggtgaatgtgaagaggcccatgaaggatga2880gactcactttgaggtggtggagtctggccggtacatcattctgctgctgggcaaagccct2940ctccgtggtctgggaccgccacctgagcatctccgtggtcctgaagcagacataccagga3000gaaagtgtgtggcctgtgtgggaattttgatggcatccagaacaatgacctcaccagcag3060caacctccaagtggaggaagaccctgtggactttgggaactcctggaaagtgagctcgca3120gtgtgctgacaccagaaaagtgcctctggactcatcccctgccacctgccataacaacat3180catgaagcagacgatggtggattcctcctgtagaatccttaccagtgacgtcttccagga3240ctgcaacaagctggtggaccccgagccatatctggatgtctgcatttacgacacctgctc3300ctgtgagtccattggggactgcgcctgcttctgcgacaccattgctgcctatgcccacgt3360gtgtgcccagcatggcaaggtggtgacctggaggacggccacattgtgcccccagagctg3420cgaggagaggaatctccgggagaacgggtatgagtgtgagtggcgctataacagctgtgc3480acctgcctgtcaagtcacgtgtcagcaccctgagccactggcctgccctgtgcagtgtgt3540ggagggctgccatgcccactgccctccagggaaaatcctggatgagcttttgcagacctg3600cgttgaccctgaagactgtccagtgtgtgaggtggctggccggcgttttgcctcaggaaa3660gaaagtcaccttgaatcccagtgaccctgagcactgccagatttgccactgtgatgttgt3720caacctcacctgtgaagcctgccaggagccgggaggctcgagcgggggatctggcgggtc3780tggaggctctggagggtcgggaggctctggaggctctgggggatctggcgggtctggagg3840gtcgggatccgatgcacacaagagtgaggttgctcatcggtttaaagatttgggagaaga3900aaatttcaaagccttggtgttgattgcctttgctcagtatcttcagcagtgtccatttga3960agatcatgtaaaattagtgaatgaagtaactgaatttgcaaaaacatgtgttgctgatga4020gtcagctgaaaattgtgacaaatcacttcataccctttttggagacaaattatgcacagt4080tgcaactcttcgtgaaacctatggtgaaatggctgactgctgtgcaaaacaagaacctga4140gagaaatgaatgcttcttgcaacacaaagatgacaacccaaacctcccccgattggtgag4200accagaggttgatgtgatgtgcactgcttttcatgacaatgaagagacatttttgaaaaa4260atacttatatgaaattgccagaagacatccttacttttatgccccggaactccttttctt4320tgctaaaaggtataaagctgcttttacagaatgttgccaagctgctgataaagctgcctg4380cctgttgccaaagctcgatgaacttcgggatgaagggaaggcttcgtctgccaaacagag4440actcaagtgtgccagtctccaaaaatttggagaaagagctttcaaagcatgggcagtagc4500tcgcctgagccagagatttcccaaagctgagtttgcagaagtttccaagttagtgacaga4560tcttaccaaagtccacacggaatgctgccatggagatctgcttgaatgtgctgatgacag4620ggcggaccttgccaagtatatctgtgaaaatcaagattcgatctccagtaaactgaagga4680atgctgtgaaaaacctctgttggaaaaatcccactgcattgccgaagtggaaaatgatga4740gatgcctgctgacttgccttcattagctgctgattttgttgaaagtaaggatgtttgcaa4800aaactatgctgaggcaaaggatgtcttcctgggcatgtttttgtatgaatatgcaagaag4860gcatcctgattactctgtcgtgctgctgctgagacttgccaagacatatgaaaccactct4920agagaagtgctgtgccgctgcagatcctcatgaatgctatgccaaagtgttcgatgaatt4980taaacctcttgtggaagagcctcagaatttaatcaaacaaaattgtgagctttttgagca5040gcttggagagtacaaattccagaatgcgctattagttcgttacaccaagaaagtacccca5100agtgtcaactccaactcttgtagaggtctcaagaaacctaggaaaagtgggcagcaaatg5160ttgtaaacatcctgaagcaaaaagaatgccctgtgcagaagactatctatccgtggtcct5220gaaccagttatgtgtgttgcatgagaaaacgccagtaagtgacagagtcaccaaatgctg5280cacagaatccttggtgaacaggcgaccatgcttttcagctctggaagtcgatgaaacata5340cgttcccaaagagtttaatgctgaaacattcaccttccatgcagatatatgcacactttc5400tgagaaggagagacaaatcaagaaacaaactgcacttgttgagctcgtgaaacacaagcc5460caaggcaacaaaagagcaactgaaagctgttatggatgatttcgcagcttttgtagagaa5520gtgctgcaaggctgacgataaggagacctgctttgccgaggagggtaaaaaacttgttgc5580tgcaagtcaagctgccttaggcttataggcggccgc561621095PRT人工序列SEQIDNO:1编码的多肽MISC_FEATURE1..479VWFD'D3区域VWF氨基酸764-1242MISC_FEATURE480..510甘氨酸丝氨酸连接子MISC_FEATURE511..1095人白蛋白2SerLeuSerCysArgProProMetValLysLeuValCysProAlaAsp151015AsnLeuArgAlaGluGlyLeuGluCysThrLysThrCysGlnAsnTyr202530AspLeuGluCysMetSerMetGlyCysValSerGlyCysLeuCysPro354045ProGlyMetValArgHisGluAsnArgCysValAlaLeuGluArgCys505560ProCysPheHisGlnGlyLysGluTyrAlaProGlyGluThrValLys65707580IleGlyCysAsnThrCysValCysArgAspArgLysTrpAsnCysThr859095AspHisValCysAspAlaThrCysSerThrIleGlyMetAlaHisTyr100105110LeuThrPheAspGlyLeuLysTyrLeuPheProGlyGluCysGlnTyr115120125ValLeuValGlnAspTyrCysGlySerAsnProGlyThrPheArgIle130135140LeuValGlyAsnLysGlyCysSerHisProSerValLysCysLysLys145150155160ArgValThrIleLeuValGluGlyGlyGluIleGluLeuPheAspGly165170175GluValAsnValLysArgProMetLysAspGluThrHisPheGluVal180185190ValGluSerGlyArgTyrIleIleLeuLeuLeuGlyLysAlaLeuSer195200205ValValTrpAspArgHisLeuSerIleSerValValLeuLysGlnThr210215220TyrGlnGluLysValCysGlyLeuCysGlyAsnPheAspGlyIleGln225230235240AsnAsnAspLeuThrSerSerAsnLeuGlnValGluGluAspProVal245250255AspPheGlyAsnSerTrpLysValSerSerGlnCysAlaAspThrArg260265270LysValProLeuAspSerSerProAlaThrCysHisAsnAsnIleMet275280285LysGlnThrMetValAspSerSerCysArgIleLeuThrSerAspVal290295300PheGlnAspCysAsnLysLeuValAspProGluProTyrLeuAspVal305310315320CysIleTyrAspThrCysSerCysGluSerIleGlyAspCysAlaCys325330335PheCysAspThrIleAlaAlaTyrAlaHisValCysAlaGlnHisGly340345350LysValValThrTrpArgThrAlaThrLeuCysProGlnSerCysGlu355360365GluArgAsnLeuArgGluAsnGlyTyrGluCysGluTrpArgTyrAsn370375380SerCysAlaProAlaCysGlnValThrCysGlnHisProGluProLeu385390395400AlaCysProValGlnCysValGluGlyCysHisAlaHisCysProPro405410415GlyLysIleLeuAspGluLeuLeuGlnThrCysValAspProGluAsp420425430CysProValCysGluValAlaGlyArgArgPheAlaSerGlyLysLys435440445ValThrLeuAsnProSerAspProGluHisCysGlnIleCysHisCys450455460AspValValAsnLeuThrCysGluAlaCysGlnGluProGlyGlySer465470475480SerGlyGlySerGlyGlySerGlyGlySerGlyGlySerGlyGlySer485490495GlyGlySerGlyGlySerGlyGlySerGlyGlySerGlySerAspAla500505510HisLysSerGluValAlaHisArgPheLysAspLeuGlyGluGluAsn515520525PheLysAlaLeuValLeuIleAlaPheAlaGlnTyrLeuGlnGlnCys530535540ProPheGluAspHisValLysLeuValAsnGluValThrGluPheAla545550555560LysThrCysValAlaAspGluSerAlaGluAsnCysAspLysSerLeu565570575HisThrLeuPheGlyAspLysLeuCysThrValAlaThrLeuArgGlu580585590ThrTyrGlyGluMetAlaAspCysCysAlaLysGlnGluProGluArg595600605AsnGluCysPheLeuGlnHisLysAspAspAsnProAsnLeuProArg610615620LeuValArgProGluValAspValMetCysThrAlaPheHisAspAsn625630635640GluGluThrPheLeuLysLysTyrLeuTyrGluIleAlaArgArgHis645650655ProTyrPheTyrAlaProGluLeuLeuPhePheAlaLysArgTyrLys660665670AlaAlaPheThrGluCysCysGlnAlaAlaAspLysAlaAlaCysLeu675680685LeuProLysLeuAspGluLeuArgAspGluGlyLysAlaSerSerAla690695700LysGlnArgLeuLysCysAlaSerLeuGlnLysPheGlyGluArgAla705710715720PheLysAlaTrpAlaValAlaArgLeuSerGlnArgPheProLysAla725730735GluPheAlaGluValSerLysLeuValThrAspLeuThrLysValHis740745750ThrGluCysCysHisGlyAspLeuLeuGluCysAlaAspAspArgAla755760765AspLeuAlaLysTyrIleCysGluAsnGlnAspSerIleSerSerLys770775780LeuLysGluCysCysGluLysProLeuLeuGluLysSerHisCysIle785790795800AlaGluValGluAsnAspGluMetProAlaAspLeuProSerLeuAla805810815AlaAspPheValGluSerLysAspValCysLysAsnTyrAlaGluAla820825830LysAspValPheLeuGlyMetPheLeuTyrGluTyrAlaArgArgHis835840845ProAspTyrSerValValLeuLeuLeuArgLeuAlaLysThrTyrGlu850855860ThrThrLeuGluLysCysCysAlaAlaAlaAspProHisGluCysTyr865870875880AlaLysValPheAspGluPheLysProLeuValGluGluProGlnAsn885890895LeuIleLysGlnAsnCysGluLeuPheGluGlnLeuGlyGluTyrLys900905910PheGlnAsnAlaLeuLeuValArgTyrThrLysLysValProGlnVal915920925SerThrProThrLeuValGluValSerArgAsnLeuGlyLysValGly930935940SerLysCysCysLysHisProGluAlaLysArgMetProCysAlaGlu945950955960AspTyrLeuSerValValLeuAsnGlnLeuCysValLeuHisGluLys965970975ThrProValSerAspArgValThrLysCysCysThrGluSerLeuVal980985990AsnArgArgProCysPheSerAlaLeuGluValAspGluThrTyrVal99510001005ProLysGluPheAsnAlaGluThrPheThrPheHisAlaAspIle101010151020CysThrLeuSerGluLysGluArgGlnIleLysLysGlnThrAla102510301035LeuValGluLeuValLysHisLysProLysAlaThrLysGluGln104010451050LeuLysAlaValMetAspAspPheAlaAlaPheValGluLysCys105510601065CysLysAlaAspAspLysGluThrCysPheAlaGluGluGlyLys107010751080LysLeuValAlaAlaSerGlnAlaAlaLeuGlyLeu10851090109538442DNA人CDS1..84423atgattcctgccagatttgccggggtgctgcttgctctggccctcatt48MetIleProAlaArgPheAlaGlyValLeuLeuAlaLeuAlaLeuIle151015ttgccagggaccctttgtgcagaaggaactcgcggcaggtcatccacg96LeuProGlyThrLeuCysAlaGluGlyThrArgGlyArgSerSerThr202530gcccgatgcagccttttcggaagtgacttcgtcaacacctttgatggg144AlaArgCysSerLeuPheGlySerAspPheValAsnThrPheAspGly354045agcatgtacagctttgcgggatactgcagttacctcctggcagggggc192SerMetTyrSerPheAlaGlyTyrCysSerTyrLeuLeuAlaGlyGly505560tgccagaaacgctccttctcgattattggggacttccagaatggcaag240CysGlnLysArgSerPheSerIleIleGlyAspPheGlnAsnGlyLys65707580agagtgagcctctccgtgtatcttggggaattttttgacatccatttg288ArgValSerLeuSerValTyrLeuGlyGluPhePheAspIleHisLeu859095tttgtcaatggtaccgtgacacagggggaccaaagagtctccatgccc336PheValAsnGlyThrValThrGlnGlyAspGlnArgValSerMetPro100105110tatgcctccaaagggctgtatctagaaactgaggctgggtactacaag384TyrAlaSerLysGlyLeuTyrLeuGluThrGluAlaGlyTyrTyrLys115120125ctgtccggtgaggcctatggctttgtggccaggatcgatggcagcggc432LeuSerGlyGluAlaTyrGlyPheValAlaArgIleAspGlySerGly130135140aactttcaagtcctgctgtcagacagatacttcaacaagacctgcggg480AsnPheGlnValLeuLeuSerAspArgTyrPheAsnLysThrCysGly145150155160ctgtgtggcaactttaacatctttgctgaagatgactttatgacccaa528LeuCysGlyAsnPheAsnIlePheAlaGluAspAspPheMetThrGln165170175gaagggaccttgacctcggacccttatgactttgccaactcatgggct576GluGlyThrLeuThrSerAspProTyrAspPheAlaAsnSerTrpAla180185190ctgagcagtggagaacagtggtgtgaacgggcatctcctcccagcagc624LeuSerSerGlyGluGlnTrpCysGluArgAlaSerProProSerSer195200205tcatgcaacatctcctctggggaaatgcagaagggcctgtgggagcag672SerCysAsnIleSerSerGlyGluMetGlnLysGlyLeuTrpGluGln210215220tgccagcttctgaagagcacctcggtgtttgcccgctgccaccctctg720CysGlnLeuLeuLysSerThrSerValPheAlaArgCysHisProLeu225230235240gtggaccccgagccttttgtggccctgtgtgagaagactttgtgtgag768ValAspProGluProPheValAlaLeuCysGluLysThrLeuCysGlu245250255tgtgctggggggctggagtgcgcctgccctgccctcctggagtacgcc816CysAlaGlyGlyLeuGluCysAlaCysProAlaLeuLeuGluTyrAla260265270cggacctgtgcccaggagggaatggtgctgtacggctggaccgaccac864ArgThrCysAlaGlnGluGlyMetValLeuTyrGlyTrpThrAspHis275280285agcgcgtgcagcccagtgtgccctgctggtatggagtataggcagtgt912SerAlaCysSerProValCysProAlaGlyMetGluTyrArgGlnCys290295300gtgtccccttgcgccaggacctgccagagcctgcacatcaatgaaatg960ValSerProCysAlaArgThrCysGlnSerLeuHisIleAsnGluMet305310315320tgtcaggagcgatgcgtggatggctgcagctgccctgagggacagctc1008CysGlnGluArgCysValAspGlyCysSerCysProGluGlyGlnLeu325330335ctggatgaaggcctctgcgtggagagcaccgagtgtccctgcgtgcat1056LeuAspGluGlyLeuCysValGluSerThrGluCysProCysValHis340345350tccggaaagcgctaccctcccggcacctccctctctcgagactgcaac1104SerGlyLysArgTyrProProGlyThrSerLeuSerArgAspCysAsn355360365acctgcatttgccgaaacagccagtggatctgcagcaatgaagaatgt1152ThrCysIleCysArgAsnSerGlnTrpIleCysSerAsnGluGluCys370375380ccaggggagtgccttgtcacaggtcaatcacacttcaagagctttgac1200ProGlyGluCysLeuValThrGlyGlnSerHisPheLysSerPheAsp385390395400aacagatacttcaccttcagtgggatctgccagtacctgctggcccgg1248AsnArgTyrPheThrPheSerGlyIleCysGlnTyrLeuLeuAlaArg405410415gattgccaggaccactccttctccattgtcattgagactgtccagtgt1296AspCysGlnAspHisSerPheSerIleValIleGluThrValGlnCys420425430gctgatgaccgcgacgctgtgtgcacccgctccgtcaccgtccggctg1344AlaAspAspArgAspAlaValCysThrArgSerValThrValArgLeu435440445cctggcctgcacaacagccttgtgaaactgaagcatggggcaggagtt1392ProGlyLeuHisAsnSerLeuValLysLeuLysHisGlyAlaGlyVal450455460gccatggatggccaggacgtccagctccccctcctgaaaggtgacctc1440AlaMetAspGlyGlnAspValGlnLeuProLeuLeuLysGlyAspLeu465470475480cgcatccagcatacagtgacggcctccgtgcgcctcagctacggggag1488ArgIleGlnHisThrValThrAlaSerValArgLeuSerTyrGlyGlu485490495gacctgcagatggactgggatggccgcgggaggctgctggtgaagctg1536AspLeuGlnMetAspTrpAspGlyArgGlyArgLeuLeuValLysLeu500505510tcccccgtctatgccgggaagacctgcggcctgtgtgggaattacaat1584SerProValTyrAlaGlyLysThrCysGlyLeuCysGlyAsnTyrAsn515520525ggcaaccagggcgacgacttccttaccccctctgggctggcggagccc1632GlyAsnGlnGlyAspAspPheLeuThrProSerGlyLeuAlaGluPro530535540cgggtggaggacttcgggaacgcctggaagctgcacggggactgccag1680ArgValGluAspPheGlyAsnAlaTrpLysLeuHisGlyAspCysGln545550555560gacctgcagaagcagcacagcgatccctgcgccctcaacccgcgcatg1728AspLeuGlnLysGlnHisSerAspProCysAlaLeuAsnProArgMet565570575accaggttctccgaggaggcgtgcgcggtcctgacgtcccccacattc1776ThrArgPheSerGluGluAlaCysAlaValLeuThrSerProThrPhe580585590gaggcctgccatcgtgccgtcagcccgctgccctacctgcggaactgc1824GluAlaCysHisArgAlaValSerProLeuProTyrLeuArgAsnCys595600605cgctacgacgtgtgctcctgctcggacggccgcgagtgcctgtgcggc1872ArgTyrAspValCysSerCysSerAspGlyArgGluCysLeuCysGly610615620gccctggccagctatgccgcggcctgcgcggggagaggcgtgcgcgtc1920AlaLeuAlaSerTyrAlaAlaAlaCysAlaGlyArgGlyValArgVal625630635640gcgtggcgcgagccaggccgctgtgagctgaactgcccgaaaggccag1968AlaTrpArgGluProGlyArgCysGluLeuAsnCysProLysGlyGln645650655gtgtacctgcagtgcgggaccccctgcaacctgacctgccgctctctc2016ValTyrLeuGlnCysGlyThrProCysAsnLeuThrCysArgSerLeu660665670tcttacccggatgaggaatgcaatgaggcctgcctggagggctgcttc2064SerTyrProAspGluGluCysAsnGluAlaCysLeuGluGlyCysPhe675680685tgccccccagggctctacatggatgagaggggggactgcgtgcccaag2112CysProProGlyLeuTyrMetAspGluArgGlyAspCysValProLys690695700gcccagtgcccctgttactatgacggtgagatcttccagccagaagac2160AlaGlnCysProCysTyrTyrAspGlyGluIlePheGlnProGluAsp705710715720atcttctcagaccatcacaccatgtgctactgtgaggatggcttcatg2208IlePheSerAspHisHisThrMetCysTyrCysGluAspGlyPheMet725730735cactgtaccatgagtggagtccccggaagcttgctgcctgacgctgtc2256HisCysThrMetSerGlyValProGlySerLeuLeuProAspAlaVal740745750ctcagcagtcccctgtctcatcgcagcaaaaggagcctatcctgtcgg2304LeuSerSerProLeuSerHisArgSerLysArgSerLeuSerCysArg755760765ccccccatggtcaagctggtgtgtcccgctgacaacctgcgggctgaa2352ProProMetValLysLeuValCysProAlaAspAsnLeuArgAlaGlu770775780gggctcgagtgtaccaaaacgtgccagaactatgacctggagtgcatg2400GlyLeuGluCysThrLysThrCysGlnAsnTyrAspLeuGluCysMet785790795800agcatgggctgtgtctctggctgcctctgccccccgggcatggtccgg2448SerMetGlyCysValSerGlyCysLeuCysProProGlyMetValArg805810815catgagaacagatgtgtggccctggaaaggtgtccctgcttccatcag2496HisGluAsnArgCysValAlaLeuGluArgCysProCysPheHisGln820825830ggcaaggagtatgcccctggagaaacagtgaagattggctgcaacact2544GlyLysGluTyrAlaProGlyGluThrValLysIleGlyCysAsnThr835840845tgtgtctgtcgggaccggaagtggaactgcacagaccatgtgtgtgat2592CysValCysArgAspArgLysTrpAsnCysThrAspHisValCysAsp850855860gccacgtgctccacgatcggcatggcccactacctcaccttcgacggg2640AlaThrCysSerThrIleGlyMetAlaHisTyrLeuThrPheAspGly865870875880ctcaaatacctgttccccggggagtgccagtacgttctggtgcaggat2688LeuLysTyrLeuPheProGlyGluCysGlnTyrValLeuValGlnAsp885890895tactgcggcagtaaccctgggacctttcggatcctagtggggaataag2736TyrCysGlySerAsnProGlyThrPheArgIleLeuValGlyAsnLys900905910ggatgcagccacccctcagtgaaatgcaagaaacgggtcaccatcctg2784GlyCysSerHisProSerValLysCysLysLysArgValThrIleLeu915920925gtggagggaggagagattgagctgtttgacggggaggtgaatgtgaag2832ValGluGlyGlyGluIleGluLeuPheAspGlyGluValAsnValLys930935940aggcccatgaaggatgagactcactttgaggtggtggagtctggccgg2880ArgProMetLysAspGluThrHisPheGluValValGluSerGlyArg945950955960tacatcattctgctgctgggcaaagccctctccgtggtctgggaccgc2928TyrIleIleLeuLeuLeuGlyLysAlaLeuSerValValTrpAspArg965970975cacctgagcatctccgtggtcctgaagcagacataccaggagaaagtg2976HisLeuSerIleSerValValLeuLysGlnThrTyrGlnGluLysVal980985990tgtggcctgtgtgggaattttgatggcatccagaacaatgacctcacc3024CysGlyLeuCysGlyAsnPheAspGlyIleGlnAsnAsnAspLeuThr99510001005agcagcaacctccaagtggaggaagaccctgtggactttgggaac3069SerSerAsnLeuGlnValGluGluAspProValAspPheGlyAsn101010151020tcctggaaagtgagctcgcagtgtgctgacaccagaaaagtgcct3114SerTrpLysValSerSerGlnCysAlaAspThrArgLysValPro102510301035ctggactcatcccctgccacctgccataacaacatcatgaagcag3159LeuAspSerSerProAlaThrCysHisAsnAsnIleMetLysGln104010451050acgatggtggattcctcctgtagaatccttaccagtgacgtcttc3204ThrMetValAspSerSerCysArgIleLeuThrSerAspValPhe105510601065caggactgcaacaagctggtggaccccgagccatatctggatgtc3249GlnAspCysAsnLysLeuValAspProGluProTyrLeuAspVal107010751080tgcatttacgacacctgctcctgtgagtccattggggactgcgcc3294CysIleTyrAspThrCysSerCysGluSerIleGlyAspCysAla108510901095tgcttctgcgacaccattgctgcctatgcccacgtgtgtgcccag3339CysPheCysAspThrIleAlaAlaTyrAlaHisValCysAlaGln110011051110catggcaaggtggtgacctggaggacggccacattgtgcccccag3384HisGlyLysValValThrTrpArgThrAlaThrLeuCysProGln111511201125agctgcgaggagaggaatctccgggagaacgggtatgagtgtgag3429SerCysGluGluArgAsnLeuArgGluAsnGlyTyrGluCysGlu113011351140tggcgctataacagctgtgcacctgcctgtcaagtcacgtgtcag3474TrpArgTyrAsnSerCysAlaProAlaCysGlnValThrCysGln114511501155caccctgagccactggcctgccctgtgcagtgtgtggagggctgc3519HisProGluProLeuAlaCysProValGlnCysValGluGlyCys116011651170catgcccactgccctccagggaaaatcctggatgagcttttgcag3564HisAlaHisCysProProGlyLysIleLeuAspGluLeuLeuGln117511801185acctgcgttgaccctgaagactgtccagtgtgtgaggtggctggc3609ThrCysValAspProGluAspCysProValCysGluValAlaGly119011951200cggcgttttgcctcaggaaagaaagtcaccttgaatcccagtgac3654ArgArgPheAlaSerGlyLysLysValThrLeuAsnProSerAsp120512101215cctgagcactgccagatttgccactgtgatgttgtcaacctcacc3699ProGluHisCysGlnIleCysHisCysAspValValAsnLeuThr122012251230tgtgaagcctgccaggagccgggaggcctggtggtgcctcccaca3744CysGluAlaCysGlnGluProGlyGlyLeuValValProProThr123512401245gatgccccggtgagccccaccactctgtatgtggaggacatctcg3789AspAlaProValSerProThrThrLeuTyrValGluAspIleSer125012551260gaaccgccgttgcacgatttctactgcagcaggctactggacctg3834GluProProLeuHisAspPheTyrCysSerArgLeuLeuAspLeu126512701275gtcttcctgctggatggctcctccaggctgtccgaggctgagttt3879ValPheLeuLeuAspGlySerSerArgLeuSerGluAlaGluPhe128012851290gaagtgctgaaggcctttgtggtggacatgatggagcggctgcgc3924GluValLeuLysAlaPheValValAspMetMetGluArgLeuArg129513001305atctcccagaagtgggtccgcgtggccgtggtggagtaccacgac3969IleSerGlnLysTrpValArgValAlaValValGluTyrHisAsp131013151320ggctcccacgcctacatcgggctcaaggaccggaagcgaccgtca4014GlySerHisAlaTyrIleGlyLeuLysAspArgLysArgProSer132513301335gagctgcggcgcattgccagccaggtgaagtatgcgggcagccag4059GluLeuArgArgIleAlaSerGlnValLysTyrAlaGlySerGln134013451350gtggcctccaccagcgaggtcttgaaatacacactgttccaaatc4104ValAlaSerThrSerGluValLeuLysTyrThrLeuPheGlnIle135513601365ttcagcaagatcgaccgccctgaagcctcccgcatcgccctgctc4149PheSerLysIleAspArgProGluAlaSerArgIleAlaLeuLeu137013751380ctgatggccagccaggagccccaacggatgtcccggaactttgtc4194LeuMetAlaSerGlnGluProGlnArgMetSerArgAsnPheVal138513901395cgctacgtccagggcctgaagaagaagaaggtcattgtgatcccg4239ArgTyrValGlnGlyLeuLysLysLysLysValIleValIlePro140014051410gtgggcattgggccccatgccaacctcaagcagatccgcctcatc4284ValGlyIleGlyProHisAlaAsnLeuLysGlnIleArgLeuIle141514201425gagaagcaggcccctgagaacaaggccttcgtgctgagcagtgtg4329GluLysGlnAlaProGluAsnLysAlaPheValLeuSerSerVal143014351440gatgagctggagcagcaaagggacgagatcgttagctacctctgt4374AspGluLeuGluGlnGlnArgAspGluIleValSerTyrLeuCys144514501455gaccttgcccctgaagcccctcctcctactctgcccccccacatg4419AspLeuAlaProGluAlaProProProThrLeuProProHisMet146014651470gcacaagtcactgtgggcccggggctcttgggggtttcgaccctg4464AlaGlnValThrValGlyProGlyLeuLeuGlyValSerThrLeu147514801485gggcccaagaggaactccatggttctggatgtggcgttcgtcctg4509GlyProLysArgAsnSerMetValLeuAspValAlaPheValLeu149014951500gaaggatcggacaaaattggtgaagccgacttcaacaggagcaag4554GluGlySerAspLysIleGlyGluAlaAspPheAsnArgSerLys150515101515gagttcatggaggaggtgattcagcggatggatgtgggccaggac4599GluPheMetGluGluValIleGlnArgMetAspValGlyGlnAsp152015251530agcatccacgtcacggtgctgcagtactcctacatggtgaccgtg4644SerIleHisValThrValLeuGlnTyrSerTyrMetValThrVal153515401545gagtaccccttcagcgaggcacagtccaaaggggacatcctgcag4689GluTyrProPheSerGluAlaGlnSerLysGlyAspIleLeuGln155015551560cgggtgcgagagatccgctaccagggcggcaacaggaccaacact4734ArgValArgGluIleArgTyrGlnGlyGlyAsnArgThrAsnThr156515701575gggctggccctgcggtacctctctgaccacagcttcttggtcagc4779GlyLeuAlaLeuArgTyrLeuSerAspHisSerPheLeuValSer158015851590cagggtgaccgggagcaggcgcccaacctggtctacatggtcacc4824GlnGlyAspArgGluGlnAlaProAsnLeuValTyrMetValThr159516001605ggaaatcctgcctctgatgagatcaagaggctgcctggagacatc4869GlyAsnProAlaSerAspGluIleLysArgLeuProGlyAspIle161016151620caggtggtgcccattggagtgggccctaatgccaacgtgcaggag4914GlnValValProIleGlyValGlyProAsnAlaAsnValGlnGlu162516301635ctggagaggattggctggcccaatgcccctatcctcatccaggac4959LeuGluArgIleGlyTrpProAsnAlaProIleLeuIleGlnAsp164016451650tttgagacgctcccccgagaggctcctgacctggtgctgcagagg5004PheGluThrLeuProArgGluAlaProAspLeuValLeuGlnArg165516601665tgctgctccggagaggggctgcagatccccaccctctcccctgca5049CysCysSerGlyGluGlyLeuGlnIleProThrLeuSerProAla167016751680cctgactgcagccagcccctggacgtgatccttctcctggatggc5094ProAspCysSerGlnProLeuAspValIleLeuLeuLeuAspGly168516901695tcctccagtttcccagcttcttattttgatgaaatgaagagtttc5139SerSerSerPheProAlaSerTyrPheAspGluMetLysSerPhe170017051710gccaaggctttcatttcaaaagccaatatagggcctcgtctcact5184AlaLysAlaPheIleSerLysAlaAsnIleGlyProArgLeuThr171517201725caggtgtcagtgctgcagtatggaagcatcaccaccattgacgtg5229GlnValSerValLeuGlnTyrGlySerIleThrThrIleAspVal173017351740ccatggaacgtggtcccggagaaagcccatttgctgagccttgtg5274ProTrpAsnValValProGluLysAlaHisLeuLeuSerLeuVal174517501755gacgtcatgcagcgggagggaggccccagccaaatcggggatgcc5319AspValMetGlnArgGluGlyGlyProSerGlnIleGlyAspAla176017651770ttgggctttgctgtgcgatacttgacttcagaaatgcatggggcg5364LeuGlyPheAlaValArgTyrLeuThrSerGluMetHisGlyAla177517801785cgcccgggagcctcaaaggcggtggtcatcctggtcacggacgtc5409ArgProGlyAlaSerLysAlaValValIleLeuValThrAspVal179017951800tctgtggattcagtggatgcagcagctgatgccgccaggtccaac5454SerValAspSerValAspAlaAlaAlaAspAlaAlaArgSerAsn180518101815agagtgacagtgttccctattggaattggagatcgctacgatgca5499ArgValThrValPheProIleGlyIleGlyAspArgTyrAspAla182018251830gcccagctacggatcttggcaggcccagcaggcgactccaacgtg5544AlaGlnLeuArgIleLeuAlaGlyProAlaGlyAspSerAsnVal183518401845gtgaagctccagcgaatcgaagacctccctaccatggtcaccttg5589ValLysLeuGlnArgIleGluAspLeuProThrMetValThrLeu185018551860ggcaattccttcctccacaaactgtgctctggatttgttaggatt5634GlyAsnSerPheLeuHisLysLeuCysSerGlyPheValArgIle186518701875tgcatggatgaggatgggaatgagaagaggcccggggacgtctgg5679CysMetAspGluAspGlyAsnGluLysArgProGlyAspValTrp188018851890accttgccagaccagtgccacaccgtgacttgccagccagatggc5724ThrLeuProAspGlnCysHisThrValThrCysGlnProAspGly189519001905cagaccttgctgaagagtcatcgggtcaactgtgaccgggggctg5769GlnThrLeuLeuLysSerHisArgValAsnCysAspArgGlyLeu191019151920aggccttcgtgccctaacagccagtcccctgttaaagtggaagag5814ArgProSerCysProAsnSerGlnSerProValLysValGluGlu192519301935acctgtggctgccgctggacctgcccctgcgtgtgcacaggcagc5859ThrCysGlyCysArgTrpThrCysProCysValCysThrGlySer194019451950tccactcggcacatcgtgacctttgatgggcagaatttcaagctg5904SerThrArgHisIleValThrPheAspGlyGlnAsnPheLysLeu195519601965actggcagctgttcttatgtcctatttcaaaacaaggagcaggac5949ThrGlySerCysSerTyrValLeuPheGlnAsnLysGluGlnAsp197019751980ctggaggtgattctccataatggtgcctgcagccctggagcaagg5994LeuGluValIleLeuHisAsnGlyAlaCysSerProGlyAlaArg198519901995cagggctgcatgaaatccatcgaggtgaagcacagtgccctctcc6039GlnGlyCysMetLysSerIleGluValLysHisSerAlaLeuSer200020052010gtcgagctgcacagtgacatggaggtgacggtgaatgggagactg6084ValGluLeuHisSerAspMetGluValThrValAsnGlyArgLeu201520202025gtctctgttccttacgtgggtgggaacatggaagtcaacgtttat6129ValSerValProTyrValGlyGlyAsnMetGluValAsnValTyr203020352040ggtgccatcatgcatgaggtcagattcaatcaccttggtcacatc6174GlyAlaIleMetHisGluValArgPheAsnHisLeuGlyHisIle204520502055ttcacattcactccacaaaacaatgagttccaactgcagctcagc6219PheThrPheThrProGlnAsnAsnGluPheGlnLeuGlnLeuSer206020652070cccaagacttttgcttcaaagacgtatggtctgtgtgggatctgt6264ProLysThrPheAlaSerLysThrTyrGlyLeuCysGlyIleCys207520802085gatgagaacggagccaatgacttcatgctgagggatggcacagtc6309AspGluAsnGlyAlaAsnAspPheMetLeuArgAspGlyThrVal209020952100accacagactggaaaacacttgttcaggaatggactgtgcagcgg6354ThrThrAspTrpLysThrLeuValGlnGluTrpThrValGlnArg210521102115ccagggcagacgtgccagcccatcctggaggagcagtgtcttgtc6399ProGlyGlnThrCysGlnProIleLeuGluGluGlnCysLeuVal212021252130cccgacagctcccactgccaggtcctcctcttaccactgtttgct6444ProAspSerSerHisCysGlnValLeuLeuLeuProLeuPheAla213521402145gaatgccacaaggtcctggctccagccacattctatgccatctgc6489GluCysHisLysValLeuAlaProAlaThrPheTyrAlaIleCys215021552160cagcaggacagttgccaccaggagcaagtgtgtgaggtgatcgcc6534GlnGlnAspSerCysHisGlnGluGlnValCysGluValIleAla216521702175tcttatgcccacctctgtcggaccaacggggtctgcgttgactgg6579SerTyrAlaHisLeuCysArgThrAsnGlyValCysValAspTrp218021852190aggacacctgatttctgtgctatgtcatgcccaccatctctggtt6624ArgThrProAspPheCysAlaMetSerCysProProSerLeuVal219522002205tataaccactgtgagcatggctgtccccggcactgtgatggcaac6669TyrAsnHisCysGluHisGlyCysProArgHisCysAspGlyAsn221022152220gtgagctcctgtggggaccatccctccgaaggctgtttctgccct6714ValSerSerCysGlyAspHisProSerGluGlyCysPheCysPro222522302235ccagataaagtcatgttggaaggcagctgtgtccctgaagaggcc6759ProAspLysValMetLeuGluGlySerCysValProGluGluAla224022452250tgcactcagtgcattggtgaggatggagtccagcaccagttcctg6804CysThrGlnCysIleGlyGluAspGlyValGlnHisGlnPheLeu225522602265gaagcctgggtcccggaccaccagccctgtcagatctgcacatgc6849GluAlaTrpValProAspHisGlnProCysGlnIleCysThrCys227022752280ctcagcgggcggaaggtcaactgcacaacgcagccctgccccacg6894LeuSerGlyArgLysValAsnCysThrThrGlnProCysProThr228522902295gccaaagctcccacgtgtggcctgtgtgaagtagcccgcctccgc6939AlaLysAlaProThrCysGlyLeuCysGluValAlaArgLeuArg230023052310cagaatgcagaccagtgctgccccgagtatgagtgtgtgtgtgac6984GlnAsnAlaAspGlnCysCysProGluTyrGluCysValCysAsp231523202325ccagtgagctgtgacctgcccccagtgcctcactgtgaacgtggc7029ProValSerCysAspLeuProProValProHisCysGluArgGly233023352340ctccagcccacactgaccaaccctggcgagtgcagacccaacttc7074LeuGlnProThrLeuThrAsnProGlyGluCysArgProAsnPhe234523502355acctgcgcctgcaggaaggaggagtgcaaaagagtgtccccaccc7119ThrCysAlaCysArgLysGluGluCysLysArgValSerProPro236023652370tcctgccccccgcaccgtttgcccacccttcggaagacccagtgc7164SerCysProProHisArgLeuProThrLeuArgLysThrGlnCys237523802385tgtgatgagtatgagtgtgcctgcaactgtgtcaactccacagtg7209CysAspGluTyrGluCysAlaCysAsnCysValAsnSerThrVal239023952400agctgtccccttgggtacttggcctcaaccgccaccaatgactgt7254SerCysProLeuGlyTyrLeuAlaSerThrAlaThrAsnAspCys240524102415ggctgtaccacaaccacctgccttcccgacaaggtgtgtgtccac7299GlyCysThrThrThrThrCysLeuProAspLysValCysValHis242024252430cgaagcaccatctaccctgtgggccagttctgggaggagggctgc7344ArgSerThrIleTyrProValGlyGlnPheTrpGluGluGlyCys243524402445gatgtgtgcacctgcaccgacatggaggatgccgtgatgggcctc7389AspValCysThrCysThrAspMetGluAspAlaValMetGlyLeu245024552460cgcgtggcccagtgctcccagaagccctgtgaggacagctgtcgg7434ArgValAlaGlnCysSerGlnLysProCysGluAspSerCysArg246524702475tcgggcttcacttacgttctgcatgaaggcgagtgctgtggaagg7479SerGlyPheThrTyrValLeuHisGluGlyGluCysCysGlyArg248024852490tgcctgccatctgcctgtgaggtggtgactggctcaccgcggggg7524CysLeuProSerAlaCysGluValValThrGlySerProArgGly249525002505gactcccagtcttcctggaagagtgtcggctcccagtgggcctcc7569AspSerGlnSerSerTrpLysSerValGlySerGlnTrpAlaSer251025152520ccggagaacccctgcctcatcaatgagtgtgtccgagtgaaggag7614ProGluAsnProCysLeuIleAsnGluCysValArgValLysGlu252525302535gaggtctttatacaacaaaggaacgtctcctgcccccagctggag7659GluValPheIleGlnGlnArgAsnValSerCysProGlnLeuGlu254025452550gtccctgtctgcccctcgggctttcagctgagctgtaagacctca7704ValProValCysProSerGlyPheGlnLeuSerCysLysThrSer255525602565gcgtgctgcccaagctgtcgctgtgagcgcatggaggcctgcatg7749AlaCysCysProSerCysArgCysGluArgMetGluAlaCysMet257025752580ctcaatggcactgtcattgggcccgggaagactgtgatgatcgat7794LeuAsnGlyThrValIleGlyProGlyLysThrValMetIleAsp258525902595gtgtgcacgacctgccgctgcatggtgcaggtgggggtcatctct7839ValCysThrThrCysArgCysMetValGlnValGlyValIleSer260026052610ggattcaagctggagtgcaggaagaccacctgcaacccctgcccc7884GlyPheLysLeuGluCysArgLysThrThrCysAsnProCysPro261526202625ctgggttacaaggaagaaaataacacaggtgaatgttgtgggaga7929LeuGlyTyrLysGluGluAsnAsnThrGlyGluCysCysGlyArg263026352640tgtttgcctacggcttgcaccattcagctaagaggaggacagatc7974CysLeuProThrAlaCysThrIleGlnLeuArgGlyGlyGlnIle264526502655atgacactgaagcgtgatgagacgctccaggatggctgtgatact8019MetThrLeuLysArgAspGluThrLeuGlnAspGlyCysAspThr266026652670cacttctgcaaggtcaatgagagaggagagtacttctgggagaag8064HisPheCysLysValAsnGluArgGlyGluTyrPheTrpGluLys267526802685agggtcacaggctgcccaccctttgatgaacacaagtgtctggct8109ArgValThrGlyCysProProPheAspGluHisLysCysLeuAla269026952700gagggaggtaaaattatgaaaattccaggcacctgctgtgacaca8154GluGlyGlyLysIleMetLysIleProGlyThrCysCysAspThr270527102715tgtgaggagcctgagtgcaacgacatcactgccaggctgcagtat8199CysGluGluProGluCysAsnAspIleThrAlaArgLeuGlnTyr272027252730gtcaaggtgggaagctgtaagtctgaagtagaggtggatatccac8244ValLysValGlySerCysLysSerGluValGluValAspIleHis273527402745tactgccagggcaaatgtgccagcaaagccatgtactccattgac8289TyrCysGlnGlyLysCysAlaSerLysAlaMetTyrSerIleAsp275027552760atcaacgatgtgcaggaccagtgctcctgctgctctccgacacgg8334IleAsnAspValGlnAspGlnCysSerCysCysSerProThrArg276527702775acggagcccatgcaggtggccctgcactgcaccaatggctctgtt8379ThrGluProMetGlnValAlaLeuHisCysThrAsnGlySerVal278027852790gtgtaccatgaggttctcaatgccatggagtgcaaatgctccccc8424ValTyrHisGluValLeuAsnAlaMetGluCysLysCysSerPro279528002805aggaagtgcagcaagtga8442ArgLysCysSerLys281042813PRT人4MetIleProAlaArgPheAlaGlyValLeuLeuAlaLeuAlaLeuIle151015LeuProGlyThrLeuCysAlaGluGlyThrArgGlyArgSerSerThr202530AlaArgCysSerLeuPheGlySerAspPheValAsnThrPheAspGly354045SerMetTyrSerPheAlaGlyTyrCysSerTyrLeuLeuAlaGlyGly505560CysGlnLysArgSerPheSerIleIleGlyAspPheGlnAsnGlyLys65707580ArgValSerLeuSerValTyrLeuGlyGluPhePheAspIleHisLeu859095PheValAsnGlyThrValThrGlnGlyAspGlnArgValSerMetPro100105110TyrAlaSerLysGlyLeuTyrLeuGluThrGluAlaGlyTyrTyrLys115120125LeuSerGlyGluAlaTyrGlyPheValAlaArgIleAspGlySerGly130135140AsnPheGlnValLeuLeuSerAspArgTyrPheAsnLysThrCysGly145150155160LeuCysGlyAsnPheAsnIlePheAlaGluAspAspPheMetThrGln165170175GluGlyThrLeuThrSerAspProTyrAspPheAlaAsnSerTrpAla180185190LeuSerSerGlyGluGlnTrpCysGluArgAlaSerProProSerSer195200205SerCysAsnIleSerSerGlyGluMetGlnLysGlyLeuTrpGluGln210215220CysGlnLeuLeuLysSerThrSerValPheAlaArgCysHisProLeu225230235240ValAspProGluProPheValAlaLeuCysGluLysThrLeuCysGlu245250255CysAlaGlyGlyLeuGluCysAlaCysProAlaLeuLeuGluTyrAla260265270ArgThrCysAlaGlnGluGlyMetValLeuTyrGlyTrpThrAspHis275280285SerAlaCysSerProValCysProAlaGlyMetGluTyrArgGlnCys290295300ValSerProCysAlaArgThrCysGlnSerLeuHisIleAsnGluMet305310315320CysGlnGluArgCysValAspGlyCysSerCysProGluGlyGlnLeu325330335LeuAspGluGlyLeuCysValGluSerThrGluCysProCysValHis340345350SerGlyLysArgTyrProProGlyThrSerLeuSerArgAspCysAsn355360365ThrCysIleCysArgAsnSerGlnTrpIleCysSerAsnGluGluCys370375380ProGlyGluCysLeuValThrGlyGlnSerHisPheLysSerPheAsp385390395400AsnArgTyrPheThrPheSerGlyIleCysGlnTyrLeuLeuAlaArg405410415AspCysGlnAspHisSerPheSerIleValIleGluThrValGlnCys420425430AlaAspAspArgAspAlaValCysThrArgSerValThrValArgLeu435440445ProGlyLeuHisAsnSerLeuValLysLeuLysHisGlyAlaGlyVal450455460AlaMetAspGlyGlnAspValGlnLeuProLeuLeuLysGlyAspLeu465470475480ArgIleGlnHisThrValThrAlaSerValArgLeuSerTyrGlyGlu485490495AspLeuGlnMetAspTrpAspGlyArgGlyArgLeuLeuValLysLeu500505510SerProValTyrAlaGlyLysThrCysGlyLeuCysGlyAsnTyrAsn515520525GlyAsnGlnGlyAspAspPheLeuThrProSerGlyLeuAlaGluPro530535540ArgValGluAspPheGlyAsnAlaTrpLysLeuHisGlyAspCysGln545550555560AspLeuGlnLysGlnHisSerAspProCysAlaLeuAsnProArgMet565570575ThrArgPheSerGluGluAlaCysAlaValLeuThrSerProThrPhe580585590GluAlaCysHisArgAlaValSerProLeuProTyrLeuArgAsnCys595600605ArgTyrAspValCysSerCysSerAspGlyArgGluCysLeuCysGly610615620AlaLeuAlaSerTyrAlaAlaAlaCysAlaGlyArgGlyValArgVal625630635640AlaTrpArgGluProGlyArgCysGluLeuAsnCysProLysGlyGln645650655ValTyrLeuGlnCysGlyThrProCysAsnLeuThrCysArgSerLeu660665670SerTyrProAspGluGluCysAsnGluAlaCysLeuGluGlyCysPhe675680685CysProProGlyLeuTyrMetAspGluArgGlyAspCysValProLys690695700AlaGlnCysProCysTyrTyrAspGlyGluIlePheGlnProGluAsp705710715720IlePheSerAspHisHisThrMetCysTyrCysGluAspGlyPheMet725730735HisCysThrMetSerGlyValProGlySerLeuLeuProAspAlaVal740745750LeuSerSerProLeuSerHisArgSerLysArgSerLeuSerCysArg755760765ProProMetValLysLeuValCysProAlaAspAsnLeuArgAlaGlu770775780GlyLeuGluCysThrLysThrCysGlnAsnTyrAspLeuGluCysMet785790795800SerMetGlyCysValSerGlyCysLeuCysProProGlyMetValArg805810815HisGluAsnArgCysValAlaLeuGluArgCysProCysPheHisGln820825830GlyLysGluTyrAlaProGlyGluThrValLysIleGlyCysAsnThr835840845CysValCysArgAspArgLysTrpAsnCysThrAspHisValCysAsp850855860AlaThrCysSerThrIleGlyMetAlaHisTyrLeuThrPheAspGly865870875880LeuLysTyrLeuPheProGlyGluCysGlnTyrValLeuValGlnAsp885890895TyrCysGlySerAsnProGlyThrPheArgIleLeuValGlyAsnLys900905910GlyCysSerHisProSerValLysCysLysLysArgValThrIleLeu915920925ValGluGlyGlyGluIleGluLeuPheAspGlyGluValAsnValLys930935940ArgProMetLysAspGluThrHisPheGluValValGluSerGlyArg945950955960TyrIleIleLeuLeuLeuGlyLysAlaLeuSerValValTrpAspArg965970975HisLeuSerIleSerValValLeuLysGlnThrTyrGlnGluLysVal980985990CysGlyLeuCysGlyAsnPheAspGlyIleGlnAsnAsnAspLeuThr99510001005SerSerAsnLeuGlnValGluGluAspProValAspPheGlyAsn101010151020SerTrpLysValSerSerGlnCysAlaAspThrArgLysValPro102510301035LeuAspSerSerProAlaThrCysHisAsnAsnIleMetLysGln104010451050ThrMetValAspSerSerCysArgIleLeuThrSerAspValPhe105510601065GlnAspCysAsnLysLeuValAspProGluProTyrLeuAspVal107010751080CysIleTyrAspThrCysSerCysGluSerIleGlyAspCysAla108510901095CysPheCysAspThrIleAlaAlaTyrAlaHisValCysAlaGln110011051110HisGlyLysValValThrTrpArgThrAlaThrLeuCysProGln111511201125SerCysGluGluArgAsnLeuArgGluAsnGlyTyrGluCysGlu113011351140TrpArgTyrAsnSerCysAlaProAlaCysGlnValThrCysGln114511501155HisProGluProLeuAlaCysProValGlnCysValGluGlyCys116011651170HisAlaHisCysProProGlyLysIleLeuAspGluLeuLeuGln117511801185ThrCysValAspProGluAspCysProValCysGluValAlaGly119011951200ArgArgPheAlaSerGlyLysLysValThrLeuAsnProSerAsp120512101215ProGluHisCysGlnIleCysHisCysAspValValAsnLeuThr122012251230CysGluAlaCysGlnGluProGlyGlyLeuValValProProThr123512401245AspAlaProValSerProThrThrLeuTyrValGluAspIleSer125012551260GluProProLeuHisAspPheTyrCysSerArgLeuLeuAspLeu126512701275ValPheLeuLeuAspGlySerSerArgLeuSerGluAlaGluPhe128012851290GluValLeuLysAlaPheValValAspMetMetGluArgLeuArg129513001305IleSerGlnLysTrpValArgValAlaValValGluTyrHisAsp131013151320GlySerHisAlaTyrIleGlyLeuLysAspArgLysArgProSer132513301335GluLeuArgArgIleAlaSerGlnValLysTyrAlaGlySerGln134013451350ValAlaSerThrSerGluValLeuLysTyrThrLeuPheGlnIle135513601365PheSerLysIleAspArgProGluAlaSerArgIleAlaLeuLeu137013751380LeuMetAlaSerGlnGluProGlnArgMetSerArgAsnPheVal138513901395ArgTyrValGlnGlyLeuLysLysLysLysValIleValIlePro140014051410ValGlyIleGlyProHisAlaAsnLeuLysGlnIleArgLeuIle141514201425GluLysGlnAlaProGluAsnLysAlaPheValLeuSerSerVal143014351440AspGluLeuGluGlnGlnArgAspGluIleValSerTyrLeuCys144514501455AspLeuAlaProGluAlaProProProThrLeuProProHisMet146014651470AlaGlnValThrValGlyProGlyLeuLeuGlyValSerThrLeu147514801485GlyProLysArgAsnSerMetValLeuAspValAlaPheValLeu149014951500GluGlySerAspLysIleGlyGluAlaAspPheAsnArgSerLys150515101515GluPheMetGluGluValIleGlnArgMetAspValGlyGlnAsp152015251530SerIleHisValThrValLeuGlnTyrSerTyrMetValThrVal153515401545GluTyrProPheSerGluAlaGlnSerLysGlyAspIleLeuGln155015551560ArgValArgGluIleArgTyrGlnGlyGlyAsnArgThrAsnThr156515701575GlyLeuAlaLeuArgTyrLeuSerAspHisSerPheLeuValSer158015851590GlnGlyAspArgGluGlnAlaProAsnLeuValTyrMetValThr159516001605GlyAsnProAlaSerAspGluIleLysArgLeuProGlyAspIle161016151620GlnValValProIleGlyValGlyProAsnAlaAsnValGlnGlu162516301635LeuGluArgIleGlyTrpProAsnAlaProIleLeuIleGlnAsp164016451650PheGluThrLeuProArgGluAlaProAspLeuValLeuGlnArg165516601665CysCysSerGlyGluGlyLeuGlnIleProThrLeuSerProAla167016751680ProAspCysSerGlnProLeuAspValIleLeuLeuLeuAspGly168516901695SerSerSerPheProAlaSerTyrPheAspGluMetLysSerPhe170017051710AlaLysAlaPheIleSerLysAlaAsnIleGlyProArgLeuThr171517201725GlnValSerValLeuGlnTyrGlySerIleThrThrIleAspVal173017351740ProTrpAsnValValProGluLysAlaHisLeuLeuSerLeuVal174517501755AspValMetGlnArgGluGlyGlyProSerGlnIleGlyAspAla176017651770LeuGlyPheAlaValArgTyrLeuThrSerGluMetHisGlyAla177517801785ArgProGlyAlaSerLysAlaValValIleLeuValThrAspVal179017951800SerValAspSerValAspAlaAlaAlaAspAlaAlaArgSerAsn180518101815ArgValThrValPheProIleGlyIleGlyAspArgTyrAspAla182018251830AlaGlnLeuArgIleLeuAlaGlyProAlaGlyAspSerAsnVal183518401845ValLysLeuGlnArgIleGluAspLeuProThrMetValThrLeu185018551860GlyAsnSerPheLeuHisLysLeuCysSerGlyPheValArgIle186518701875CysMetAspGluAspGlyAsnGluLysArgProGlyAspValTrp188018851890ThrLeuProAspGlnCysHisThrValThrCysGlnProAspGly189519001905GlnThrLeuLeuLysSerHisArgValAsnCysAspArgGlyLeu191019151920ArgProSerCysProAsnSerGlnSerProValLysValGluGlu192519301935ThrCysGlyCysArgTrpThrCysProCysValCysThrGlySer194019451950SerThrArgHisIleValThrPheAspGlyGlnAsnPheLysLeu195519601965ThrGlySerCysSerTyrValLeuPheGlnAsnLysGluGlnAsp197019751980LeuGluValIleLeuHisAsnGlyAlaCysSerProGlyAlaArg198519901995GlnGlyCysMetLysSerIleGluValLysHisSerAlaLeuSer200020052010ValGluLeuHisSerAspMetGluValThrValAsnGlyArgLeu201520202025ValSerValProTyrValGlyGlyAsnMetGluValAsnValTyr203020352040GlyAlaIleMetHisGluValArgPheAsnHisLeuGlyHisIle204520502055PheThrPheThrProGlnAsnAsnGluPheGlnLeuGlnLeuSer206020652070ProLysThrPheAlaSerLysThrTyrGlyLeuCysGlyIleCys207520802085AspGluAsnGlyAlaAsnAspPheMetLeuArgAspGlyThrVal209020952100ThrThrAspTrpLysThrLeuValGlnGluTrpThrValGlnArg210521102115ProGlyGlnThrCysGlnProIleLeuGluGluGlnCysLeuVal212021252130ProAspSerSerHisCysGlnValLeuLeuLeuProLeuPheAla213521402145GluCysHisLysValLeuAlaProAlaThrPheTyrAlaIleCys215021552160GlnGlnAspSerCysHisGlnGluGlnValCysGluValIleAla216521702175SerTyrAlaHisLeuCysArgThrAsnGlyValCysValAspTrp218021852190ArgThrProAspPheCysAlaMetSerCysProProSerLeuVal219522002205TyrAsnHisCysGluHisGlyCysProArgHisCysAspGlyAsn221022152220ValSerSerCysGlyAspHisProSerGluGlyCysPheCysPro222522302235ProAspLysValMetLeuGluGlySerCysValProGluGluAla224022452250CysThrGlnCysIleGlyGluAspGlyValGlnHisGlnPheLeu225522602265GluAlaTrpValProAspHisGlnProCysGlnIleCysThrCys227022752280LeuSerGlyArgLysValAsnCysThrThrGlnProCysProThr228522902295AlaLysAlaProThrCysGlyLeuCysGluValAlaArgLeuArg230023052310GlnAsnAlaAspGlnCysCysProGluTyrGluCysValCysAsp231523202325ProValSerCysAspLeuProProValProHisCysGluArgGly233023352340LeuGlnProThrLeuThrAsnProGlyGluCysArgProAsnPhe234523502355ThrCysAlaCysArgLysGluGluCysLysArgValSerProPro236023652370SerCysProProHisArgLeuProThrLeuArgLysThrGlnCys237523802385CysAspGluTyrGluCysAlaCysAsnCysValAsnSerThrVal239023952400SerCysProLeuGlyTyrLeuAlaSerThrAlaThrAsnAspCys240524102415GlyCysThrThrThrThrCysLeuProAspLysValCysValHis242024252430ArgSerThrIleTyrProValGlyGlnPheTrpGluGluGlyCys243524402445AspValCysThrCysThrAspMetGluAspAlaValMetGlyLeu245024552460ArgValAlaGlnCysSerGlnLysProCysGluAspSerCysArg246524702475SerGlyPheThrTyrValLeuHisGluGlyGluCysCysGlyArg248024852490CysLeuProSerAlaCysGluValValThrGlySerProArgGly249525002505AspSerGlnSerSerTrpLysSerValGlySerGlnTrpAlaSer251025152520ProGluAsnProCysLeuIleAsnGluCysValArgValLysGlu252525302535GluValPheIleGlnGlnArgAsnValSerCysProGlnLeuGlu254025452550ValProValCysProSerGlyPheGlnLeuSerCysLysThrSer255525602565AlaCysCysProSerCysArgCysGluArgMetGluAlaCysMet257025752580LeuAsnGlyThrValIleGlyProGlyLysThrValMetIleAsp258525902595ValCysThrThrCysArgCysMetValGlnValGlyValIleSer260026052610GlyPheLysLeuGluCysArgLysThrThrCysAsnProCysPro261526202625LeuGlyTyrLysGluGluAsnAsnThrGlyGluCysCysGlyArg263026352640CysLeuProThrAlaCysThrIleGlnLeuArgGlyGlyGlnIle264526502655MetThrLeuLysArgAspGluThrLeuGlnAspGlyCysAspThr266026652670HisPheCysLysValAsnGluArgGlyGluTyrPheTrpGluLys267526802685ArgValThrGlyCysProProPheAspGluHisLysCysLeuAla269026952700GluGlyGlyLysIleMetLysIleProGlyThrCysCysAspThr270527102715CysGluGluProGluCysAsnAspIleThrAlaArgLeuGlnTyr272027252730ValLysValGlySerCysLysSerGluValGluValAspIleHis273527402745TyrCysGlnGlyLysCysAlaSerLysAlaMetTyrSerIleAsp275027552760IleAsnAspValGlnAspGlnCysSerCysCysSerProThrArg276527702775ThrGluProMetGlnValAlaLeuHisCysThrAsnGlySerVal278027852790ValTyrHisGluValLeuAsnAlaMetGluCysLysCysSerPro279528002805ArgLysCysSerLys281051444PRT人工序列单链因子viii分子的氨基酸序列5AlaThrArgArgTyrTyrLeuGlyAlaValGluLeuSerTrpAspTyr151015MetGlnSerAspLeuGlyGluLeuProValAspAlaArgPheProPro202530ArgValProLysSerPheProPheAsnThrSerValValTyrLysLys354045ThrLeuPheValGluPheThrAspHisLeuPheAsnIleAlaLysPro505560ArgProProTrpMetGlyLeuLeuGlyProThrIleGlnAlaGluVal65707580TyrAspThrValValIleThrLeuLysAsnMetAlaSerHisProVal859095SerLeuHisAlaValGlyValSerTyrTrpLysAlaSerGluGlyAla100105110GluTyrAspAspGlnThrSerGlnArgGluLysGluAspAspLysVal115120125PheProGlyGlySerHisThrTyrValTrpGlnValLeuLysGluAsn130135140GlyProMetAlaSerAspProLeuCysLeuThrTyrSerTyrLeuSer145150155160HisValAspLeuValLysAspLeuAsnSerGlyLeuIleGlyAlaLeu165170175LeuValCysArgGluGlySerLeuAlaLysGluLysThrGlnThrLeu180185190HisLysPheIleLeuLeuPheAlaValPheAspGluGlyLysSerTrp195200205HisSerGluThrLysAsnSerLeuMetGlnAspArgAspAlaAlaSer210215220AlaArgAlaTrpProLysMetHisThrValAsnGlyTyrValAsnArg225230235240SerLeuProGlyLeuIleGlyCysHisArgLysSerValTyrTrpHis245250255ValIleGlyMetGlyThrThrProGluValHisSerIlePheLeuGlu260265270GlyHisThrPheLeuValArgAsnHisArgGlnAlaSerLeuGluIle275280285SerProIleThrPheLeuThrAlaGlnThrLeuLeuMetAspLeuGly290295300GlnPheLeuLeuPheCysHisIleSerSerHisGlnHisAspGlyMet305310315320GluAlaTyrValLysValAspSerCysProGluGluProGlnLeuArg325330335MetLysAsnAsnGluGluAlaGluAspTyrAspAspAspLeuThrAsp340345350SerGluMetAspValValArgPheAspAspAspAsnSerProSerPhe355360365IleGlnIleArgSerValAlaLysLysHisProLysThrTrpValHis370375380TyrIleAlaAlaGluGluGluAspTrpAspTyrAlaProLeuValLeu385390395400AlaProAspAspArgSerTyrLysSerGlnTyrLeuAsnAsnGlyPro405410415GlnArgIleGlyArgLysTyrLysLysValArgPheMetAlaTyrThr420425430AspGluThrPheLysThrArgGluAlaIleGlnHisGluSerGlyIle435440445LeuGlyProLeuLeuTyrGlyGluValGlyAspThrLeuLeuIleIle450455460PheLysAsnGlnAlaSerArgProTyrAsnIleTyrProHisGlyIle465470475480ThrAspValArgProLeuTyrSerArgArgLeuProLysGlyValLys485490495HisLeuLysAspPheProIleLeuProGlyGluIlePheLysTyrLys500505510TrpThrValThrValGluAspGlyProThrLysSerAspProArgCys515520525LeuThrArgTyrTyrSerSerPheValAsnMetGluArgAspLeuAla530535540SerGlyLeuIleGlyProLeuLeuIleCysTyrLysGluSerValAsp545550555560GlnArgGlyAsnGlnIleMetSerAspLysArgAsnValIleLeuPhe565570575SerValPheAspGluAsnArgSerTrpTyrLeuThrGluAsnIleGln580585590ArgPheLeuProAsnProAlaGlyValGlnLeuGluAspProGluPhe595600605GlnAlaSerAsnIleMetHisSerIleAsnGlyTyrValPheAspSer610615620LeuGlnLeuSerValCysLeuHisGluValAlaTyrTrpTyrIleLeu625630635640SerIleGlyAlaGlnThrAspPheLeuSerValPhePheSerGlyTyr645650655ThrPheLysHisLysMetValTyrGluAspThrLeuThrLeuPhePro660665670PheSerGlyGluThrValPheMetSerMetGluAsnProGlyLeuTrp675680685IleLeuGlyCysHisAsnSerAspPheArgAsnArgGlyMetThrAla690695700LeuLeuLysValSerSerCysAspLysAsnThrGlyAspTyrTyrGlu705710715720AspSerTyrGluAspIleSerAlaTyrLeuLeuSerLysAsnAsnAla725730735IleGluProArgSerPheSerGlnAsnSerArgHisProSerThrArg740745750GlnLysGlnPheAsnAlaThrThrIleProGluAsnThrThrLeuGln755760765SerAspGlnGluGluIleAspTyrAspAspThrIleSerValGluMet770775780LysLysGluAspPheAspIleTyrAspGluAspGluAsnGlnSerPro785790795800ArgSerPheGlnLysLysThrArgHisTyrPheIleAlaAlaValGlu805810815ArgLeuTrpAspTyrGlyMetSerSerSerProHisValLeuArgAsn820825830ArgAlaGlnSerGlySerValProGlnPheLysLysValValPheGln835840845GluPheThrAspGlySerPheThrGlnProLeuTyrArgGlyGluLeu850855860AsnGluHisLeuGlyLeuLeuGlyProTyrIleArgAlaGluValGlu865870875880AspAsnIleMetValThrPheArgAsnGlnAlaSerArgProTyrSer885890895PheTyrSerSerLeuIleSerTyrGluGluAspGlnArgGlnGlyAla900905910GluProArgLysAsnPheValLysProAsnGluThrLysThrTyrPhe915920925TrpLysValGlnHisHisMetAlaProThrLysAspGluPheAspCys930935940LysAlaTrpAlaTyrPheSerAspValAspLeuGluLysAspValHis945950955960SerGlyLeuIleGlyProLeuLeuValCysHisThrAsnThrLeuAsn965970975ProAlaHisGlyArgGlnValThrValGlnGluPheAlaLeuPhePhe980985990ThrIlePheAspGluThrLysSerTrpTyrPheThrGluAsnMetGlu99510001005ArgAsnCysArgAlaProCysAsnIleGlnMetGluAspProThr101010151020PheLysGluAsnTyrArgPheHisAlaIleAsnGlyTyrIleMet102510301035AspThrLeuProGlyLeuValMetAlaGlnAspGlnArgIleArg104010451050TrpTyrLeuLeuSerMetGlySerAsnGluAsnIleHisSerIle105510601065HisPheSerGlyHisValPheThrValArgLysLysGluGluTyr107010751080LysMetAlaLeuTyrAsnLeuTyrProGlyValPheGluThrVal108510901095GluMetLeuProSerLysAlaGlyIleTrpArgValGluCysLeu110011051110IleGlyGluHisLeuHisAlaGlyMetSerThrLeuPheLeuVal111511201125TyrSerAsnLysCysGlnThrProLeuGlyMetAlaSerGlyHis113011351140IleArgAspPheGlnIleThrAlaSerGlyGlnTyrGlyGlnTrp114511501155AlaProLysLeuAlaArgLeuHisTyrSerGlySerIleAsnAla116011651170TrpSerThrLysGluProPheSerTrpIleLysValAspLeuLeu117511801185AlaProMetIleIleHisGlyIleLysThrGlnGlyAlaArgGln119011951200LysPheSerSerLeuTyrIleSerGlnPheIleIleMetTyrSer120512101215LeuAspGlyLysLysTrpGlnThrTyrArgGlyAsnSerThrGly122012251230ThrLeuMetValPhePheGlyAsnValAspSerSerGlyIleLys123512401245HisAsnIlePheAsnProProIleIleAlaArgTyrIleArgLeu125012551260HisProThrHisTyrSerIleArgSerThrLeuArgMetGluLeu126512701275MetGlyCysAspLeuAsnSerCysSerMetProLeuGlyMetGlu128012851290SerLysAlaIleSerAspAlaGlnIleThrAlaSerSerTyrPhe129513001305ThrAsnMetPheAlaThrTrpSerProSerLysAlaArgLeuHis131013151320LeuGlnGlyArgSerAsnAlaTrpArgProGlnValAsnAsnPro132513301335LysGluTrpLeuGlnValAspPheGlnLysThrMetLysValThr134013451350GlyValThrThrGlnGlyValLysSerLeuLeuThrSerMetTyr135513601365ValLysGluPheLeuIleSerSerSerGlnAspGlyHisGlnTrp137013751380ThrLeuPhePheGlnAsnGlyLysValLysValPheGlnGlyAsn138513901395GlnAspSerPheThrProValValAsnSerLeuAspProProLeu140014051410LeuThrArgTyrLeuArgIleHisProGlnSerTrpValHisGln141514201425IleAlaLeuArgMetGluValLeuGlyCysGluAlaGlnAspLeu143014351440Tyr6585PRT人6AspAlaHisLysSerGluValAlaHisArgPheLysAspLeuGlyGlu151015GluAsnPheLysAlaLeuValLeuIleAlaPheAlaGlnTyrLeuGln202530GlnCysProPheGluAspHisValLysLeuValAsnGluValThrGlu354045PheAlaLysThrCysValAlaAspGluSerAlaGluAsnCysAspLys505560SerLeuHisThrLeuPheGlyAspLysLeuCysThrValAlaThrLeu65707580ArgGluThrTyrGlyGluMetAlaAspCysCysAlaLysGlnGluPro859095GluArgAsnGluCysPheLeuGlnHisLysAspAspAsnProAsnLeu100105110ProArgLeuValArgProGluValAspValMetCysThrAlaPheHis115120125AspAsnGluGluThrPheLeuLysLysTyrLeuTyrGluIleAlaArg130135140ArgHisProTyrPheTyrAlaProGluLeuLeuPhePheAlaLysArg145150155160TyrLysAlaAlaPheThrGluCysCysGlnAlaAlaAspLysAlaAla165170175CysLeuLeuProLysLeuAspGluLeuArgAspGluGlyLysAlaSer180185190SerAlaLysGlnArgLeuLysCysAlaSerLeuGlnLysPheGlyGlu195200205ArgAlaPheLysAlaTrpAlaValAlaArgLeuSerGlnArgPhePro210215220LysAlaGluPheAlaGluValSerLysLeuValThrAspLeuThrLys225230235240ValHisThrGluCysCysHisGlyAspLeuLeuGluCysAlaAspAsp245250255ArgAlaAspLeuAlaLysTyrIleCysGluAsnGlnAspSerIleSer260265270SerLysLeuLysGluCysCysGluLysProLeuLeuGluLysSerHis275280285CysIleAlaGluValGluAsnAspGluMetProAlaAspLeuProSer290295300LeuAlaAlaAspPheValGluSerLysAspValCysLysAsnTyrAla305310315320GluAlaLysAspValPheLeuGlyMetPheLeuTyrGluTyrAlaArg325330335ArgHisProAspTyrSerValValLeuLeuLeuArgLeuAlaLysThr340345350TyrGluThrThrLeuGluLysCysCysAlaAlaAlaAspProHisGlu355360365CysTyrAlaLysValPheAspGluPheLysProLeuValGluGluPro370375380GlnAsnLeuIleLysGlnAsnCysGluLeuPheGluGlnLeuGlyGlu385390395400TyrLysPheGlnAsnAlaLeuLeuValArgTyrThrLysLysValPro405410415GlnValSerThrProThrLeuValGluValSerArgAsnLeuGlyLys420425430ValGlySerLysCysCysLysHisProGluAlaLysArgMetProCys435440445AlaGluAspTyrLeuSerValValLeuAsnGlnLeuCysValLeuHis450455460GluLysThrProValSerAspArgValThrLysCysCysThrGluSer465470475480LeuValAsnArgArgProCysPheSerAlaLeuGluValAspGluThr485490495TyrValProLysGluPheAsnAlaGluThrPheThrPheHisAlaAsp500505510IleCysThrLeuSerGluLysGluArgGlnIleLysLysGlnThrAla515520525LeuValGluLeuValLysHisLysProLysAlaThrLysGluGlnLeu530535540LysAlaValMetAspAspPheAlaAlaPheValGluLysCysCysLys545550555560AlaAspAspLysGluThrCysPheAlaGluGluGlyLysLysLeuVal565570575AlaAlaSerGlnAlaAlaLeuGlyLeu5805857519PRT人工序列His-标签化的D'D3MISC_FEATURE1..479D'D3-His8的氨基酸序列MISC_FEATURE1..479VWFD'D3区域VWF氨基酸764-1242MISC_FEATURE480..511甘氨酸丝氨酸连接子MISC_FEATURE512..519多组氨酸标签7SerLeuSerCysArgProProMetValLysLeuValCysProAlaAsp151015AsnLeuArgAlaGluGlyLeuGluCysThrLysThrCysGlnAsnTyr202530AspLeuGluCysMetSerMetGlyCysValSerGlyCysLeuCysPro354045ProGlyMetValArgHisGluAsnArgCysValAlaLeuGluArgCys505560ProCysPheHisGlnGlyLysGluTyrAlaProGlyGluThrValLys65707580IleGlyCysAsnThrCysValCysArgAspArgLysTrpAsnCysThr859095AspHisValCysAspAlaThrCysSerThrIleGlyMetAlaHisTyr100105110LeuThrPheAspGlyLeuLysTyrLeuPheProGlyGluCysGlnTyr115120125ValLeuValGlnAspTyrCysGlySerAsnProGlyThrPheArgIle130135140LeuValGlyAsnLysGlyCysSerHisProSerValLysCysLysLys145150155160ArgValThrIleLeuValGluGlyGlyGluIleGluLeuPheAspGly165170175GluValAsnValLysArgProMetLysAspGluThrHisPheGluVal180185190ValGluSerGlyArgTyrIleIleLeuLeuLeuGlyLysAlaLeuSer195200205ValValTrpAspArgHisLeuSerIleSerValValLeuLysGlnThr210215220TyrGlnGluLysValCysGlyLeuCysGlyAsnPheAspGlyIleGln225230235240AsnAsnAspLeuThrSerSerAsnLeuGlnValGluGluAspProVal245250255AspPheGlyAsnSerTrpLysValSerSerGlnCysAlaAspThrArg260265270LysValProLeuAspSerSerProAlaThrCysHisAsnAsnIleMet275280285LysGlnThrMetValAspSerSerCysArgIleLeuThrSerAspVal290295300PheGlnAspCysAsnLysLeuValAspProGluProTyrLeuAspVal305310315320CysIleTyrAspThrCysSerCysGluSerIleGlyAspCysAlaCys325330335PheCysAspThrIleAlaAlaTyrAlaHisValCysAlaGlnHisGly340345350LysValValThrTrpArgThrAlaThrLeuCysProGlnSerCysGlu355360365GluArgAsnLeuArgGluAsnGlyTyrGluCysGluTrpArgTyrAsn370375380SerCysAlaProAlaCysGlnValThrCysGlnHisProGluProLeu385390395400AlaCysProValGlnCysValGluGlyCysHisAlaHisCysProPro405410415GlyLysIleLeuAspGluLeuLeuGlnThrCysValAspProGluAsp420425430CysProValCysGluValAlaGlyArgArgPheAlaSerGlyLysLys435440445ValThrLeuAsnProSerAspProGluHisCysGlnIleCysHisCys450455460AspValValAsnLeuThrCysGluAlaCysGlnGluProGlyGlySer465470475480SerGlyGlySerGlyGlySerGlyGlySerGlyGlySerGlyGlySer485490495GlyGlySerGlyGlySerGlyGlySerGlyGlySerGlyGlySerHis500505510HisHisHisHisHisHisHis5158584PRT人工序列His-标签化的CTP融合蛋白MISC_FEATURE1..479VWFD'D3区域VWF氨基酸764-1242MISC_FEATURE480..511甘氨酸丝氨酸连接子MISC_FEATURE512..576人绒毛膜促性腺激素beta亚基的C-末端肽MISC_FEATURE577..584多组氨酸标签8SerLeuSerCysArgProProMetValLysLeuValCysProAlaAsp151015AsnLeuArgAlaGluGlyLeuGluCysThrLysThrCysGlnAsnTyr202530AspLeuGluCysMetSerMetGlyCysValSerGlyCysLeuCysPro354045ProGlyMetValArgHisGluAsnArgCysValAlaLeuGluArgCys505560ProCysPheHisGlnGlyLysGluTyrAlaProGlyGluThrValLys65707580IleGlyCysAsnThrCysValCysArgAspArgLysTrpAsnCysThr859095AspHisValCysAspAlaThrCysSerThrIleGlyMetAlaHisTyr100105110LeuThrPheAspGlyLeuLysTyrLeuPheProGlyGluCysGlnTyr115120125ValLeuValGlnAspTyrCysGlySerAsnProGlyThrPheArgIle130135140LeuValGlyAsnLysGlyCysSerHisProSerValLysCysLysLys145150155160ArgValThrIleLeuValGluGlyGlyGluIleGluLeuPheAspGly165170175GluValAsnValLysArgProMetLysAspGluThrHisPheGluVal180185190ValGluSerGlyArgTyrIleIleLeuLeuLeuGlyLysAlaLeuSer195200205ValValTrpAspArgHisLeuSerIleSerValValLeuLysGlnThr210215220TyrGlnGluLysValCysGlyLeuCysGlyAsnPheAspGlyIleGln225230235240AsnAsnAspLeuThrSerSerAsnLeuGlnValGluGluAspProVal245250255AspPheGlyAsnSerTrpLysValSerSerGlnCysAlaAspThrArg260265270LysValProLeuAspSerSerProAlaThrCysHisAsnAsnIleMet275280285LysGlnThrMetValAspSerSerCysArgIleLeuThrSerAspVal290295300PheGlnAspCysAsnLysLeuValAspProGluProTyrLeuAspVal305310315320CysIleTyrAspThrCysSerCysGluSerIleGlyAspCysAlaCys325330335PheCysAspThrIleAlaAlaTyrAlaHisValCysAlaGlnHisGly340345350LysValValThrTrpArgThrAlaThrLeuCysProGlnSerCysGlu355360365GluArgAsnLeuArgGluAsnGlyTyrGluCysGluTrpArgTyrAsn370375380SerCysAlaProAlaCysGlnValThrCysGlnHisProGluProLeu385390395400AlaCysProValGlnCysValGluGlyCysHisAlaHisCysProPro405410415GlyLysIleLeuAspGluLeuLeuGlnThrCysValAspProGluAsp420425430CysProValCysGluValAlaGlyArgArgPheAlaSerGlyLysLys435440445ValThrLeuAsnProSerAspProGluHisCysGlnIleCysHisCys450455460AspValValAsnLeuThrCysGluAlaCysGlnGluProGlyGlySer465470475480GlyGlySerGlyGlySerGlyGlySerGlyGlySerGlyGlySerGly485490495GlySerGlyGlySerGlyGlyGlySerGlyGlySerGlySerSerAla500505510SerSerSerSerLysAlaProProProSerLeuProSerProSerArg515520525LeuProGlyProSerAspThrProIleLeuProGlnAlaSerSerSer530535540SerLysAlaProProProSerLeuProSerProSerArgLeuProGly545550555560ProSerAspThrProIleLeuProGlnAlaGlyGlySerGlyGlySer565570575HisHisHisHisHisHisHisHis580

权利要求：1.一种用于治疗或预防凝血疾病之重组多肽，其包含截短型冯维勒布兰德因子VonWillebrandFactor,VWF，该治疗或预防包含向患有凝血疾病之个体施予该重组多肽且血管外施予第八凝血因子蛋白质FVIII，其中该重组多肽能够与该FVIII结合，且其中欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比高于50。2.一种用于治疗或预防凝血疾病之重组多肽，其包含截短型冯维勒布兰德因子VWF，该治疗或预防包含向患有凝血疾病之个体血管外施予该重组多肽且施予第八凝血因子蛋白质FVIII，其中该重组多肽能够与该FVIII结合，且其中欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比高于50。3.如权利要求1或2供使用之重组多肽，其中该多肽包含半衰期延长部分HLEM。4.如前述权利要求中任一项供使用之重组多肽，其中该个体系人类个体。5.如前述权利要求中任一项供使用之重组多肽，其中该多肽系以二聚体存在或至少含有高比例的二聚体。6.如权利要求5供使用之重组多肽，其中该二聚体多肽具有FVIII结合亲和性，该FVIII结合亲和性之解离常数KD小于1nM、较佳地小于500pM、小于200pM、小于100pM、小于90pM或小于80pM。7.如前述权利要求中任一项供使用之重组多肽，其中该多肽系经皮下、皮内或肌肉内施予。8.如前述权利要求中任一项供使用之重组多肽，其中该截短型VWF包含与SEQIDNO：4之氨基酸776至805具有至少90％序列同一性之氨基酸序列，较佳地包含与SEQIDNO：4之氨基酸764至1242具有至少90％序列同一性之氨基酸序列。9.如权利要求1至7中任一项供使用之重组多肽，其中该截短型VWF系由aSEQIDNO：4之氨基酸764至1242、b与SEQIDNO：4之氨基酸764至1242具有至少90％序列同一性之氨基酸序列、或ca或b之片段组成。10.如权利要求3至9中任一项供使用之重组多肽，其中该HLEM系与该截短型VWF融合之异源性氨基酸序列。11.如权利要求10供使用之重组多肽，其中该异源性氨基酸序列包含选自由下列所组成之群组的多肽或由选自由下列所组成之群组的多肽所组成：白蛋白或其片段、转铁蛋白或其片段、人绒毛膜促性腺激素之C端肽、XTEN序列、同源氨基酸重复HAP、脯胺酸-丙胺酸-丝胺酸重复PAS、艾芙米afamin、α-胎蛋白、维生素D结合蛋白质、在生理条件下能够与白蛋白或与免疫球蛋白恒定区结合之多肽、能够与新生儿Fc受体FcRn结合之多肽、特别是免疫球蛋白恒定区及其部分、较佳地免疫球蛋白之Fc部分、及彼等之组合。12.如权利要求3至9中任一项供使用之重组多肽，其中该HLEM系与该重组多肽接合。13.如权利要求12供使用之重组多肽，其中该HLEM系选自由下列所组成之群组：羟乙基淀粉HES、聚乙二醇PEG、聚唾液酸PSA、类弹性蛋白多肽、肝素前体heparosan聚合物、玻尿酸及白蛋白结合配体，例如脂肪酸链、及彼等之组合。14.如权利要求3至13中任一项供使用之重组多肽，其中该施予之FVIII的平均滞留时间MRT系藉由共同施予该重组多肽而增加，较佳地相较于参考治疗增加至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍或至少5倍，其中该参考治疗与该治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比低于50。15.如权利要求3至14中任一项供使用之重组多肽，其中该施予之重组多肽的平均滞留时间MRT系增加，较佳地相较于参考治疗增加至少1.5倍、至少2倍或至少3倍，其中该参考治疗与该治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比低于50。16.如权利要求3至15中任一项供使用之重组多肽，其中该施予之FVIII的终末半衰期系藉由共同施予该重组多肽而增加，较佳地相较于参考治疗增加至少1.2倍、至少1.5倍、至少2倍、至少2.5倍或至少3倍，其中该参考治疗与该治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比低于50。17.如权利要求3至16中任一项供使用之重组多肽，其中与具有HLEM之该多肽共同施予之该FVIII达到1％谷底水平之时间期间相较于参考治疗系延长，其中该参考治疗与该治疗完全相同，除了该FVIII系与不具有该HLEM之重组多肽一起施予。18.如前述权利要求中任一项供使用之重组多肽，其中该多肽之血浆半衰期相较于内源性VWF之血浆半衰期及或相较于正常人血浆NHP中VWF之血浆半衰期增加，其中该多肽之血浆半衰期系较佳地至少100％、至少200％或较佳地至少400％高于内源性VWF之血浆半衰期及或相较于正常人血浆NHP中VWF之血浆半衰期。19.如前述权利要求中任一项供使用之重组多肽，其中该凝血疾病系A型血友病或类血友病von-Willebrand氏病。20.如前述权利要求中任一项之供使用之重组多肽，其中共同施予该重组多肽及该FVIII蛋白质系藉由下列任一者达成：i在包含该重组多肽及该FVIII蛋白质之单一组成物中一起施予、或ii施予各自以分开组成物提供之该重组多肽第一化合物及该FVIII蛋白质第二化合物，其中该第一化合物系在该第二化合物之前、之后或同时施予。21.如前述权利要求中任一项供使用之重组多肽，其中该FVIII系血浆衍生蛋白质或重组FVIII蛋白质。22.如前述权利要求中任一项供使用之重组多肽，其中FVIII系血管外施予且其中该施予之FVIII之生体可用率在与该重组多肽共同施予之后系至少2％、至少3％、至少5％、较佳地至少7％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％或至少40％。23.如前述权利要求中任一项供使用之重组多肽，其中该重组多肽之生体可用率系至少30％、较佳地至少35％、更较佳地至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％或至少80％。24.如前述权利要求中任一项供使用之重组多肽，其中共同施予之FVIII蛋白质之剂量不超过2500IUkg、1500IUkg、1000IUkg、600IUkg、500IUkg或400IUkg。25.如前述权利要求中任一项供使用之重组多肽，其中在该重组多肽与FVIII共同施予之后，FVIII之最大浓度Cmax系至少10mIUmL、至少25mIUmL、至少50mIUmL、至少100mIUmL、至少200mIUmL、至少300mIUmL或至少400mIUmLFVIII活性、较佳地显色FVIII活性。26.如权利要求3至25中任一项供使用之重组多肽，其中在该重组多肽与FVIII共同施予之后，该重组多肽的清除率CL值相较于参考治疗减少至少2倍、至少5倍或至少10倍，其中该参考治疗与该治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比低于50。27.如权利要求3至26中任一项供使用之重组多肽，其中在该重组多肽与FVIII共同施予之后，该施予之FVIII的清除率CL值相较于参考治疗系减少较佳地至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少5倍、至少7.5倍或至少10倍，其中该参考治疗与该治疗完全相同，除了欲施予之该重组多肽不包含HLEM及或除了欲施予之该重组多肽对欲施予之该FVIII的摩尔比低于50。28.如前述权利要求中任一项供使用之重组多肽，其中欲施予之该重组多肽对该FVIII之摩尔比系至少75、至少100、至少200、至少300、至少400、至少500或至少1000。29.一种用于治疗或预防如权利要求1至28中任一项定义之凝血疾病之医药组成物，该组成物包含i重组多肽，其包含如权利要求1至28中任一项之截短型冯维勒布兰德因子VWF，及ii第八凝血因子蛋白质FVIII；其中在该医药组成物中该重组多肽对该FVIII蛋白质之摩尔比系大于50且其中该重组多肽能够与该FVIII结合，该治疗包含向患有凝血疾病之个体血管外施予该医药组成物，且该医药组成物系经调制以用于血管外共同施予。30.一种医药套组，其包含i包含第八凝血因子FVIII蛋白质之第一组成物及ii包含重组多肽之第二组成物，该重组多肽包含如权利要求1至28中任一项供使用而提供之用于治疗或预防凝血疾病之截短型冯维勒布兰德因子VWF。

百度查询： 康诺贝林伦瑙有限公司 用于血管外施予以治疗或预防凝血疾病的截短型冯维勒布兰德因子多肽

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD