申请/专利权人：通用生物(安徽)股份有限公司

申请日：2023-08-22

公开（公告）日：2023-10-20

公开（公告）号：CN116904560A

主分类号：C12Q1/6851

分类号：C12Q1/6851;C12Q1/6806;C12Q1/689;C12N15/11;C12R1/19

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.11.07#实质审查的生效;2023.10.20#公开

摘要：本发明公开了一种质粒当中宿主DNA残留测定方法，属于生物制品质量控制中残留杂质检测技术领域；测定方法包括如下步骤：第一步、将大肠杆菌基因组DNA溶液稀释，进行Qubit4检测，测定基因组dsDNA含量；第二步、染料法荧光定量PCR：步骤A1、使用TE溶液稀释Qubit4检测后的标准品，作为扩增模板制作标准曲线；质粒样品稀释后同标准品一同进行荧光定量PCR反应；步骤A2、荧光定量PCR扩增；步骤A3、计算样品的DNA浓度。本发明中的自制染料法与商业化探针法都能有效测定质粒产品中大肠杆菌宿主DNA含量，但是探针法试剂盒较昂贵，而本发明中染料法使用成本相对较低。

主权项：1.一种质粒当中宿主DNA残留测定方法，其特征在于，包括如下步骤：第一步、将大肠杆菌基因组DNA溶液稀释，进行Qubit4检测，使用Qubit4荧光光度计定量测定基因组dsDNA含量，作为标准品保存；第二步、染料法荧光定量PCR：步骤A1、使用TE溶液稀释Qubit4检测后的标准品，稀释后的浓度分别为1.1ngμL，0.11ngμL，0.011ngμL，0.0011ngμL，0.00011ngμL，作为扩增模板制作标准曲线；质粒样品分别稀释成50ngμL，10ngμL，2ngμL，同标准品一同进行荧光定量PCR反应；步骤A2、荧光定量PCR扩增：F引物序列：DF1GGTTAAGCTACCTACTTCTTTTGCA；R引物序列：DR1AGAGCAAGCGGACCTCATAAAG；步骤A3、将样品CT值代入标准曲线方程中，计算样品的DNA浓度。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 通用生物(安徽)股份有限公司 一种质粒当中宿主DNA残留测定方法

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