申请/专利权人：广东省人民医院

申请日：2020-08-31

公开（公告）日：2023-10-20

公开（公告）号：CN112410303B

主分类号：C12N5/10

分类号：C12N5/10;C12N5/0775;C12N15/867;A61K35/28;A61P1/00

优先权：["20190905 CN 2019108412943"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.10.20#授权;2021.03.16#实质审查的生效;2021.02.26#公开

摘要：本发明提供了一种制备BM－MSCs条件培养基的方法、条件培养基以及应用，方法包括1将PHD2·shRNA构建到慢病毒基因转移载体pGCSIL－GFP上；2在感染复数MOI为10下，用含shPHD2－GFP的慢病毒转染BM－MSCs；3通过检测GFP荧光及PHD2蛋白表达确定稳定转染的BM－MSCs，进行细胞分选富集，然后将其在新的无血清基础培养基中培养48小时，得到含有BM－MSCs高效表达旁分泌物质的基础条件培养基；4将基础条件培养基进行超滤浓缩50倍，控制截留分子量为5kDa，得到浓缩条件培养基，然后将得到的条件培养基在零下20℃进行储存；其中，步骤3中得到的基础条件培养基中，1mL非浓缩条件培养液相当于1.5～2.5×105BM－MSCs分泌量。本发明所制备的条件培养基能够增强骨髓间充质干细胞旁分泌的效果。

主权项：1.一种沉默PHD2制备高效表达旁分泌作用的BM-MSCs条件培养基的方法，其特征在于，所述条件培养基中含有BM-MSCs高效表达的旁分泌物质，其至少含有4000～4500pgml的IGF-1和500～600pgml的TGF-β2；所述方法包括以下步骤：1将PHD2·shRNA构建到慢病毒基因转移载体pGCSIL-GFP上；其中，所采用的PHD2的基因序列为GenBankID：XM_008772679；2在感染复数MOI为10下，用含shPHD2-GFP的慢病毒转染BM-MSCs；3通过检测GFP荧光及PHD2蛋白表达确定稳定转染的BM-MSCs，进行细胞分选富集，然后将其在新的无血清基础培养基中培养48小时，得到含有BM-MSCs高效表达旁分泌物质的基础条件培养基；所述的无血清基础培养基为DMEM-F12培养基；4将基础条件培养基进行超滤浓缩50倍，控制截留分子量为5kDa，得到浓缩条件培养基，然后将得到的条件培养基在零下20℃进行储存；其中，步骤3中得到的基础条件培养基中，1mL非浓缩条件培养液相当于1.5～2.5×105BM-MSCs分泌量。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广东省人民医院 一种制备BM-MSCs条件培养基的方法、条件培养基以及应用

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