申请/专利权人：宁夏五丰农业科技有限公司

申请日：2023-09-06

公开（公告）日：2023-12-05

公开（公告）号：CN117165484A

主分类号：C12N1/20

分类号：C12N1/20;C12N1/04;A01C1/06;C12R1/41

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.12.22#实质审查的生效;2023.12.05#公开

摘要：本发明公开了一种超稳定紫云英根瘤菌预接种菌剂制备方法。它包括如下步骤，步骤一：优化培养基；优化的紫云英根瘤菌专用培养基GSG为：丙三醇5～20克L，琥珀酸钠0.1～0.5克L，谷氨酸钠0.1～0.5克L，磷酸二氢钾0.1～0.8克L，磷酸氢二钠0.1～1克L，七水硫酸镁0.1～0.5克L，酵母粉1～2克L，蛋白胨0.1～1克L；步骤二：配制冻干保护剂；步骤三：制备紫云英根瘤菌冻干剂；步骤四：测定紫云英根瘤菌冻干菌粉的活菌数，入库保存。本发明具有将根瘤菌在种子上的存活期延长至3‑6个月，提高固氮效率的优点。本发明还公开了一种超稳定紫云英根瘤菌预接种菌剂的应用方法。

主权项：1.超稳定紫云英根瘤菌预接种菌剂制备方法，其特征在于：包括如下步骤，步骤一：优化培养基；优化的紫云英根瘤菌专用培养基GSG为：丙三醇5～20克L，琥珀酸钠0.1～0.5克L，谷氨酸钠0.1～0.5克L，磷酸二氢钾0.1～0.8克L，磷酸氢二钠0.1～1克L，七水硫酸镁0.1～0.5克L，酵母粉1～2克L，蛋白胨0.1～1克L；步骤二：配制冻干保护剂；步骤三：制备紫云英根瘤菌冻干剂；1紫云英根瘤菌培养：2吨发酵罐装培养基1.4吨GSG紫云英根瘤菌专用培养基，发酵培养条件为：温度28℃、pH值6.8-7.2、溶氧控制在50％-85％之间、搅拌速度150rpm、通气量0.3-1.0vvm，培养时间为68小时；2培养好的紫云英根瘤菌菌液用连续离心机进行浓缩，浓缩比为80∶1，即1.4吨紫云英根瘤菌液浓缩成17.5升紫云英根瘤浓缩菌液；3将一定量的冻干保护剂添加到紫云英根瘤浓缩菌液中；4将紫云英根瘤浓缩混合菌液在-50℃预冷冻4—10小时；5将预冷冻的紫云英根瘤浓缩混合菌液置于冻干机内；冷冻干燥条件为：压力0.02mBar，冷阱温度-50℃；冻干48小时后取出紫云英根瘤菌冻干菌粉；步骤四：测定紫云英根瘤菌冻干菌粉的活菌数，入库保存。

全文数据：

权利要求：

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