申请/专利权人：上海浙江大学高等研究院

申请日：2023-09-18

公开（公告）日：2023-12-08

公开（公告）号：CN117187292A

主分类号：C12N15/82

分类号：C12N15/82;C12N15/60;C12N15/54;A01H6/82;A01H5/12

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.12.26#实质审查的生效;2023.12.08#公开

摘要：本发明公开了一种利用番茄SlDHS2和SlAS基因位点突变提高植物6种必需氨基酸的方法，属于基因工程技术领域。该方法选取番茄SlDHS2基因和SlAS基因负反馈调节的关键位点，进行定点突变；构建包含上述突变的番茄基因的瞬时表达载体；采用瞬时转化法，同时在本氏烟草中表达位点突变的2个表达载体。提取入渗烟草叶片的氨基酸，测定氨基酸含量的变化后发现，本发明通过定点突变植物莽草酸途径中的2个关键基因DHS、AS的关键位点，解除氨基酸负反馈调节作用，能够使植物超量合成2种芳香族必需氨基酸色氨酸、苯丙氨酸，并进一步提高了另外4种必需氨基酸苏氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸的含量，总体上显著提高了6种必需氨基酸的含量。

主权项：1.一种利用番茄SlDHS2和SlAS基因位点突变提高植物6种必需氨基酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：选取番茄SlDHS2基因的4个关键位点和SlAS基因的1个关键位点，其中：所述番茄SlDHS2基因的基因号为Solyc04g074480，将其CDS序列中第761个核苷酸由C突变为T，使编码的第254个氨基酸由丙氨酸突变为缬氨酸；第772个核苷酸由G突变为A，使编码的第258个氨基酸由甘氨酸突变为精氨酸；第775个核苷酸由G突变A，使编码的第259个氨基酸由甘氨酸突变为精氨酸；第781个核苷酸由G突变为A，使编码的第261个氨基酸由丙氨酸突变为苏氨酸；最终设计得到如SEQIDNO.1所示的突变的番茄SlDHS2m序列；所述番茄SlAS基因的基因号为Solyc06g006100，将其CDS序列中第997个核苷酸由G突变为A，使编码的第333个氨基酸由天冬氨酸突变为天冬酰胺，最终设计得到如SEQIDNO.2所示的突变的番茄SlASm序列；S2：基于植物瞬时表达载体pTE，分别结合突变的番茄SlDHS2m序列和突变的番茄SlASm序列，构建番茄SlDHS2和SlAS基因位点突变的烟草瞬时表达载体，并转化大肠杆菌进行测序，得到包含正确位点突变序列的瞬时表达载体质粒pTE-SlDHS2m和pTE-SlASm；S3：采用瞬时转化法，将pTE-SlDHS2m和pTE-SlASm载体质粒转入农杆菌中，同时在本氏烟草中表达pTE-SlDHS2m和pTE-SlASm载体。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 上海浙江大学高等研究院 一种利用番茄SlDHS2和SlAS基因位点突变提高植物6种必需氨基酸的方法

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