申请/专利权人:深圳赫兹生命科学技术有限公司
申请日:2020-12-15
公开(公告)日:2023-12-19
公开(公告)号:CN112724204B
主分类号:C07K14/08
分类号:C07K14/08;C12N15/70;C12R1/19
优先权:
专利状态码:有效-授权
法律状态:2023.12.19#授权;2021.05.21#实质审查的生效;2021.04.30#公开
摘要:本发明公开了一种用于生产VLP重组疫苗的CMV病毒样颗粒及其制备方法,该CMV病毒样颗粒将C端G4SLPETG修饰的植物病毒黄瓜花叶病毒CMV衣壳基因克隆入原核表达载体得到重组表达载体,将所述重组表达载体转染大肠杆菌BL21DE3,经所述重组大肠杆菌BL21DE3表达获得;所述C端G4SLPETG修饰的CMV的氨基酸序列为SEQIDNO.1。试验证明,本发明构建的重组菌株对外源蛋白表达稳定。使用本发明表达的重组蛋白制备病毒样颗粒进行抗原偶联,偶联效率高,抗原纯度高,安全性好,且对小鼠等动物没有致病性,容易通过安全性评价。
主权项:1.一种用于生产VLP重组疫苗的CMV病毒样颗粒,其特征在于,该CMV病毒样颗粒将C端G4SLPETG修饰的植物病毒黄瓜花叶病毒CMV衣壳基因克隆入原核表达载体得到重组表达载体,将所述重组表达载体转染大肠杆菌BL21DE3,经所述重组大肠杆菌BL21DE3表达获得;所述C端G4SLPETG修饰的CMV的氨基酸序列为SEQIDNO.1;所述CMV病毒样颗粒的制备方法,包括如下步骤:1将his-CMV-G4SLPETG基因合成片段克隆入pET28a原核表达载体中获得阳性重组质粒his-CMV-G4SLPETG-pET28a;2将步骤1中经序列测定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21DE3,得到重组表达菌株his-CMV-G4SLPETG-pET28a-BL21;3培养所述重组表达菌株his-CMV-G4SLPETG-pET28a-BL21,加入IPTG进行诱导表达,获得CMV病毒样颗粒;所述阳性重组质粒his-CMV-G4SLPETG-pET28a将SEQIDNO.2所示的核苷酸通过同源重组方法克隆入原核表达载体pET28a的NdeI位点和BamhI位点所得;所述重组表达菌株his-CMV-G4SLPETG-pET28a-BL21含有所述阳性重组质粒his-CMV-G4SLPETG-pET28a;所述的重组表达菌株his-CMV-G4SLPETG-pET28a-BL21培养至OD600达0.6-0.8时加入终浓度为1mM的IPTG进行诱导表达。
全文数据:
权利要求:
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