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申请/专利权人：湖南工程学院
申请日：2023-12-04
公开（公告）日：2024-01-12
公开（公告）号：CN117385009A
主分类号：C12Q1/6844
分类号：C12Q1/6844;C12Q1/6888;C12N15/11
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.01.30#实质审查的生效;2024.01.12#公开
摘要：本发明提供了一种基于滚环转录和CRISPR‑Cas13a级联剪切检测piRNA的探针组及方法，属于生物分析检测技术领域，利用T7RNA聚合酶介导滚环转录扩增技术获得串联式引导链RNA序列，在此基础上通过CRISPR‑Cas13a的顺式切割和反式切割的级联剪切机制，切割荧光探针产生相关靶标的荧光报告信号，其中滚环DNA序列中各部分的组成及设计是构建高效CRISPR‑Cas13a串联式激活信号扩增体系的关键，可以替换不同男性不育高度相关piRNA序列实现多种piRNA的同时检测，以解决常规技术中多重检测反应体系复杂的问题，建立一种新型多重快速核酸检测平台技术。
主权项：1.一种基于滚环转录和CRISPR-Cas13a级联剪切检测piRNA的探针组，其特征在于，包括环状双链DNA模板、T7RNA聚合酶、LbuCas13a酶和RNA荧光探针；所述环状双链DNA模板由线性单链DNA、T7启动子混合孵育形成双链DNA、再加入DNA连接酶反应形成，所述LbuCas13a酶被靶标piRNA激活顺式切割和反式切割活性实现对靶标piRNA的检测；所述线性单链DNA的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述T7启动子的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述靶标piRNA的基因序列如SEQIDNO.3所示；所述DNA连接酶为T4DNA连接酶。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 湖南工程学院 基于滚环转录和CRISPR-Cas13a级联剪切检测piRNA的探针组及方法
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